Nghiên cứu so sánh khả năng hấp thụ thuốc diclofenac natri của vật liệu cellulose tạo ra từ gluconacetobacter xylinus nuôi cấy trong một số môi trường

TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM HÀ NỘI 2KHOA: SINH - KTNN

TRẦN MỸ LINH

NGHIÊN CỨU SO SÁNH KHẢ NĂNG HẤP THỤ THUỐCDICLOFENAC NATRI CỦA VẬT LIỆU CELLULOSE TẠO

RA TỪ GLUCONACETOBACTER XYLINUS NUÔI CẤY

TRONG MỘT SỐ MÔI TRƯỜNG

KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC

Chuyên ngành: Sinh lý học người và động vật

Hà Nội, năm 2019

TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM HÀ NỘI 2KHOA: SINH - KTNN

TRẦN MỸ LINH

NGHIÊN CỨU SO SÁNH KHẢ NĂNG HẤP THỤ THUỐCDICLOFENAC NATRI CỦA VẬT LIỆU CELLULOSE TẠO

RA TỪ GLUCONACETOBACTER XYLINUS NUÔI CẤY

TRONG MỘT SỐ MÔI TRƯỜNG

KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC

Chuyên ngành: Sinh lý học người và động vậtNgười hướng dẫn: Th.S Phạm Thị Kim Dung

Hà Nội, năm 2019

Tiếp sau nữa tôi xin gửi lời cảm ơn đến các thầy cô làm việc tại khoa Sinh –KTNN nói chung và các thầy cô ở Viện Nghiên cứu Khoa học và Ứng dụng trườngĐại học Sư phạm Hà Nội 2 nói riêng đã nhiệt tình giúp đỡ cũng như tạo điều kiệngiúp tôi hoàn thành khóa luận tốt nghiệp của mình.

Sau cùng tôi xin gửi lời cảm ơn đến gia đình, bạn bè đã luôn động viên, giúpđỡ tôi trong quá trình làm khóa luận.

Xin chân thành cảm ơn!

Hà Nội,ngày 20 tháng 5 năm 2019

Sinh viên

Trần Mỹ Linh

LỜI CAM ĐOAN

Tôi xin cam đoan đây là công trình nghiên cứu của riêng tôi dưới sự hướngdẫn của Th.S Phạm Thị Kim Dung Các thông số, số liệu trong bài đều được lấy từthực nghiệm và được xử lý thống kê bằng các phần mềm Mọi thông tin trích dẫnđược sử dụng trong bài khóa luận đều được nêu rõ nguồn gốc.

Hà Nội,ngày 20 tháng 5 năm 2019

Sinh viên

Trần Mỹ Linh

MỤC LỤC

MỞ ĐẦU 1

1 Lý do chọn đề tài 1

2 Mục đích 1

3 Nội dung nghiên cứu 2

4 Ý nghĩa khoa học và ý nghĩa thực tiễn 2

CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 3

1.1 Đặc điểm của Gluconacetobacter Xylinus 3

1.1.1 Phân loại Gluconacetobacter xylinus 3

1.1.2 Hình thái của Gluconacetobacter Xylinus 3

1.1.3 Đặc điểm sinh lí sinh hóa của Gluconacetobacter 3

1.2 Cellulose vi khuẩn 3

1.2.1 Đặc điểm cấu trúc của cellulose vi khuẩn 3

Hình 1.1: Cấu trúc hóa học của cellulose vi khuẩn 4

1.2.2 Các tính chất đặc biệt 4

1.2.3 Quá trình tạo màng cellulose vi khuẩn từ vi khuẩn Gluconacetobacter 4

1.2.4 Ứng dụng của màng cellulose vi khuẩn 4

1.3 Lịch sử nghiên cứu 4

1.3.1 Trên thế giới 4

1.3.2 Tại Việt Nam 5

1.4 Thuốc Diclofenac Natri 5

1.4.1 Tính chất 6

1.4.2 Tác dụng dược lí và cơ chế tác dụng 6

1.4.3 Chỉ định 6

1.4.4 Chống chỉ định 6

1.4.5 Tác dụng không mong muốn của thuốc 6

CHƯƠNG 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 8

2.1 Nguyên vật liệu dùng trong nghiên cứu 8

2.2.2 Phương pháp nghiên cứu 9

CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 13

3.1 Kết quả tạo màng cellulose từ vi khuẩn Gluconacetobacter Xylinus 13

3.1.1 Kết quả tạo chủng vi khuẩn Gluconacetobacter từ dịch trà 13

3.1.2 Kết quả tạo màng cellulose vi khuẩn từ 3 môi trường 13

3.2 Kết quả thu màng thô từ 3 môi trường 14

3.3 Kết quả xử lý màng trước khi hấp thụ 14

3.4 Kết quả quét phổ hấp thụ thuốc diclofenac 15

3.5 Kết quả dựng đường chuẩn thuốc diclofenac 16

3.6 Kết quả khảo sát khả năng hấp thụ thuốc của màng 17

KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 23

I KẾT LUẬN 23

II KIẾN NGHỊ 23

TÀI LIỆU THAM KHẢO 24

* Tài liệu nước ngoài 25

Hình 3.9 Thu mẫu đo OD sau thời gian hấp thụ 17

Hình 3.10 Biểu đồ so sánh khả năng hấp thụ thuốc của màng không ép nước trong 3môi trường 21

Hình 3.11 Biểu đồ so sánh hiệu suất hấp thụ của màng ép nước trong 3 môi trường 21

Hình 3.12 Biểu đồ so sánh hiệu suất hấp thụ của màng có độ dày 0,5cm ở 3 môi trường khác nhau 22

Hình 3.13 Biểu đồ so sánh hiệu suất hấp thụ thuốc của màng 1cm trong 3 môitrường khác nhau 22

DANH MỤC BẢNGBảng 2.1 Danh sách vật liệu sử dụng trong nghiên cứu 8

Bảng 2.2 Danh sách các thiết bị dùng trong nghiên cứu 8

Bảng 2.3 Thành phần của môi trường lên men tạo màng 9

Bảng 3.1 Nồng độ diclofenac và giá trị OD tương ứng (n = 3) 16

Bảng 3.2 Giá trị OD hấp thụ thuốc của màng 18

Bảng 3.3 Lượng thuốc hấp thụ vào màng sau thời gian 2 giờ 19

Bảng 3.4 Hiệu suất thuốc hấp thụ vào các loại màng trong 2 giờ 20

Diclofenac – dạng thuốc chống viêm không steroid dùng chủ yếu dưới dạng muốiNatri, dẫn chất của acid phenylacetic có thể chống viêm, giảm sốt và giảm đau.[2]Diclofenac ức chế mạnh hoạt tính của COX (cyclooxygenase), do đó làm giảm sựtạo thành các chất trung gian của quá trình tiêu viêm như: prostaglandin,prostacyclin và thromboxan[2].

Cũng như một số loại thuốc chống viêm không steroid hiện nay, diclofenac natricó ảnh hưởng không tốt đến đường tiêu hóa vì chúng giảm khả năng tổng hợpprostaglandin dẫn đến tạo mucin có thể gây một vài chứng bệnh về thận như viêmthận kẽ hay viêm cầu thận ngoài ra có thể gây hoại tử nhú và một số bệnh liên quankhác[2]

Cellulose vi khuẩn được tạo thành từ các chuỗi không phân nhánh, gồm nhiều sợisiêu nhỏ kết hợp với nhau tạo thành bó có bản chất là hemicellulose được gọi làchuỗi polimer β – 1,4 glucopyranose khác cellulose thực vật về cấu trúc đại thể.Cellulose vi khuẩn có các tính chất như độ bền cao, bị phân hủy sinh học, đàn hồitốt, không độc, đặc biệt là có khả năng ngăn cản vi khuẩn tốt Vì có những đặc tínhưu việt như vậy mà cellulose vi khuẩn được ứng dụng nhiều trong các ngành côngnghiệp đời sống như thực phẩm, công nghiệp, mĩ phẩm và đặc biệt là y học[7,12,21].

Với mục đích nhằm khảo sát các đặc tính của vật liệu cellulose trước khi cho hấpthụ và sau khi cho hấp thụ thuốc Diclofenac natri ở các môi trường khác nhau và sosánh khả năng hấp thụ thuốc Diclofenac natri của vật liệu cellulose được tạo ra từ

Gluconacetobacter xylinus trong một số môi trường nuôi cấy chúng tôi thực hiện đề

tài: “ Nghiên cứu so sánh khả năng hấp thụ thuốc Diclofenac Natri của vật liệuCellulose tạo ra từ Gluconacetobacter xylinus nuôi cấy trong một số môi trường”.

2 Mục đích

- Tạo ra vật liệu cellulose từ Gluconacetobacter Xylinus trong 3 loại môi trường

khác nhau.

- So sánh sự hấp thụ thuốc thuốc Diclofenac Natri từ 3 môi trường khác nhau: môitrường chuẩn,môi trường nước dừa, môi trường nước vo gạo từ đó tìm ra môi trườngnào có khả năng hấp thụ được nhiều hơn.

3 Nội dung nghiên cứu

- Chế tạo màng cellulose vi khuẩn từ Gluconacetobacter Xylinus được nuôi dưỡng

và lên men trong 3 môi trường: môi trường chuẩn, môi trường nước dừa và môitrường nước vo gạo.

- Tiến hành hấp thụ thuốc Diclofenac Natri vào màng cellulose vi khuẩn trong cáckhoảng thời gian cố định,xác định được màng đã hấp thụ được bao một lượng thuốclà bao nhiêu và hiệu suất hấp thu của màng ở các môi trường đó là bao nhiêu.

- So sánh lượng thuốc được màng hấp thụ và hiệu suất mà màng hấp thụ được ở cảba môi trường.

4 Ý nghĩa khoa học và ý nghĩa thực tiễn

4.1 Ý nghĩa khoa học

- Cung cấp thêm nhiều kiến thức về màng cellulose vi khuẩn và ứng dụng của nótrong đời sống.

- Tăng nhận thức về vi khuẩn Gluconacetobacter Xylinus trong việc tạo màng

cellulose và từ đó tìm ra môi trường có khả năng hấp thu thuốc tốt hơn.

- Ứng dụng kiến thức về Gluconacetobacter Xylinus để tạo màng cellulose vi khuẩn

ứng dụng vào trong các nghiên cứu để khắc phục điểm hạn chế của một số loại thuốchiện nay.

CHƯƠNG 1 TỔNG QUAN TÀI LIỆU

1.1 Đặc điểm của Gluconacetobacter Xylinus1.1.1 Phân loại Gluconacetobacter xylinusTên: Gluconacetobacter Xylinus

Chi: GluconacetobacterHọ: Acetobacteraceaea

1.1.2 Hình thái của Gluconacetobacter Xylinus.

Gluconacetobacter là chủng vi khuẩn không thể di chuyển có cấu tạo tế bào

dạng hình que, thường đứng riêng lẻ hoặc có đôi lúc thành chuỗi, có tế bào dạngthẳng hoặc cong, kích thước khoảng 2 µm, không sinh bào tử Chúng là vi khuẩngram âm hóa dị dưỡng và hiếu khí.Khi nồng độ acid vượt quá giới hạn thì vi khuẩnsẽ bị ức chế hoạt động [7].

Khi được nuôi cấy trong môi trường lỏng thì vi khuẩn Gluconacetobacter hìnhthành một lớp màng phía trên bề mặt môi trường Còn nếu nuôi ở môi trường lắc thìsẽ tạo thành các hạt nhỏ kích thước không đồng đều và phân tán khắp mọi nơi [7].

Gluconacetobacter xylinus có thể sản xuất cellulose khi được phát triển trong

điều kiện hiếu khí Cellulose do sinh vật này sản xuất rất tinh khiết và có tiềm năngsử dụng trong ngành y sinh

1.1.3 Đặc điểm sinh lí sinh hóa của Gluconacetobacter Xylinus

Ngưỡng nhiệt thuận lợi cho sự phát triển của Gluconacetobacter từ 25 -35 độ C.Có khả năng chịu được pH ở nồng độ thấp [9]

1.2 Cellulose vi khuẩn

1.2.1 Đặc điểm cấu trúc của cellulose vi khuẩn

A.J.Brown đã trình bày sự tổng hợp cellulose của vi khuẩn Gluconacetobacter

vào năm 1886 Nhưng cellulose vi khuẩn thật sự được quan tâm và được nghiên cứunhiều là vào những năm đầu của thế kỉ XX [17].

Màng cellulose vi khuẩn có thể được tạo ra bởi một số chi vi khuẩn phổ biến:

Achromobacter,Agrobacterium,Azotobacter,Sarcina,Zoogloea, Gluconacetobacter.Hiện nay họ Acetobacteriaceae có 10 chi, trong đó Gluconacetobacter là chi duy

nhất có khả thể tổng hợp được cellulose [17].

Cellulose vi khuẩn được cấu tạo bởi chuỗi β – 1,4 glucopyranose, mạchthẳng, có đường kính nhỏ hơn 100Ao[17], có khả năng thấm hút cao, sự kết tinh cao(60%), độ polymer hóa lớn, độ bền cơ học cao, [17].

Hình 1.1 Cấu trúc hóa học của cellulose vi khuẩn

1.2.3 Quá trình tạo màng cellulose vi khuẩn từ vi khuẩn Gluconacetobacter

Vi khuẩn Gluconacetobacter hấp thụ chất dinh dưỡng từ môi trường bên ngoài

vào bên trong cơ thể để trao đổi chất Điều này chỉ xảy ra trong môi trường nhiềuchất dinh dưỡng như carbonhydrate, các loại vitamin như B1, B12, B2, và các chấtkích thích sinh trưởng Một phần tổng hợp cellulose thải ra môi trường bên ngoài tạothành màng [7]

Gluconacetobacter Xylinus sẽ thực hiện trao đổi chất bằng việc hấp thụ đường và

các acid béo trong môi trường lỏng để tạo thành tiền chất tiết ra ngoài nhờ hệ thốnglỗ nằm ở trên màng tế bào cùng với một enzyme.

1.2.4 Ứng dụng của màng cellulose vi khuẩn

Màng cellulose vi khuẩn được ứng dụng nhiều trong các lĩnh vực của cuộc sốngvà đặc biệt là y học khi màng cellulose vi khuẩn có thể dùng để che phủ vết thương,chế tạo màng trị bỏng vào năm 2012 có tẩm dung dịch Becberin clorid 0,1%, khônggây đau, dị ứng hay kích ứng da.[1,7,11 - 13,15 - 17,21- 23]

1.3 Lịch sử nghiên cứu

1.3.1 Trên thế giới

Công trình nghiên cứu tạo màng cellulose vi khuẩn được tổng hợp từ

Gluconacetobacter Xylinus được quan tâm đến từ khá sớm trên thế giới Tuy nhiên

phải đến thế kỉ thứ XX thì vấn đề này mới được quan tâm một cách rõ nét hơn nhờvào các công trình nghiên cứu nổi trội ở thời điểm đó Một trong những công trình

nghiên cứu đó không thể không kể đến công trình nghiên cứu khả năng tổng hợp

cellulose của vi khuẩn Gluconacetobacter Xylinus của Hestrin et al vào năm 1954.

Đây được coi là viên gạch đầu tiên đặt nền móng cho những nghiên cứu sau này về

sự lên men tạo màng của vi khuẩn Gluconacetobacter Xylinus [26]

Tiếp theo công trình nghiên cứu của Hestrin vào năm 1957, Next và Colvin đãđưa ra được minh chứng cho việc trong môi trường có ATP và đường thì

Gluconacetobacter Xylinus có thể tự tổng hợp được Ngoài ra việc nghiên cứu sử

dụng màng để kiểm soát in vitro của thuốc Becberine được Huang et al nghiên cứuvà cho ra kết quả rằng thuốc đã được giải phóng chậm hơn, thí nghiệm này của ôngcòn được thực hiện ở trên dạ dày và ruôt cũng cho kết quả tương tự [3]

1.3.2 Tại Việt Nam

Việc nghiên cứu và ứng dụng màng cellulose trong các nghành công nghiệp, y tếở Việt Nam hiện nay vẫn còn khá mới lạ và mới thu hút được sự quan tâm của cácnhà nghiên cứu trong vài năm trở lại đây Các nghiên và đề tài này vẫn còn khá ítchủ yếu là nghiên cứu dừng lại ở việc tạo màng trị bỏng, hay liên quan đến ngànhthực phẩm.[7][11]

1.4 Thuốc Diclofenac Natri

Diclofanac là một dẫn xuất của acid 2 – amino benzen acetic, có sinh khả dụngthấp do kém tan Vì vậy, dạng được dùng thường là muối của nó có độ tan lớn hơn,ổn định hơn như muối: Na+, K+, diethylamin, N- ( 2- hydroxy ethyl) pyrrolidin.Trong đó muối Natri Diclofenac được sử dụng nhiều hơn cả [2]

Hình 1.2 Công thức hóa học

- Công thức phân tử: C14H10Cl2NNaO2

- Loại chống viêm không steroid

- Tồn tại ở nhiều loại khác nhau như viên nén, thuốc tiêm, thuốc đạn, gel bôi, [2]

Diclofenac gây hại cho đường tiêu hóa, ức chế sự tổng hợp prostaglandin do đócó thể gây nên những bệnh liên quan đến thận như viêm thận, thận hư hay một sốcăn bệnh khác như hoại tử nhú, suy tim thận [2]

Diclofenac hấp thụ qua đường tiêu hóa và hấp thụ nhanh vào lúc đói.Sau 2 giờkhi uống nồng độ đạt tối đa ở huyết tương, sau 4-6 giờ nồng độ trong bao hoạt dịchđạt mức cao nhất Tác dụng của thuốc xuất hiện sau tiêm bắp từ 20- 30 phút, sau khicho thuốc vào trực tràng từ 30-60 phút, sau khi uống từ 60-120 phút [2][4].

- Viêm loét dạ dày

- Bệnh nhân bị hen suyễn, co thắt phế quản, chảy máu, bệnh tim,ứ máu, suy gan suythận và những bệnh nhân mẫn cảm với các thành phần khác như aspirin hay cácthuốc chống viên không steroid khác.

- Người đang dùng thuốc chống đông Coumarin [2], [4]

1.4.5 Tác dụng không mong muốn của thuốc

- Tác dụng phụ thường gặp:

+ Đau nhức đầu, trong người cảm giác bồn chồn khó chịu.

+ Đau bụng trên, mất cảm giác muốn ăn, tiêu chảy, muốn nôn và nôn, khótiêu, đầy bụng,

+ Tăng các transaminase ở gan- Tác dụng phụ ít gặp:

+ Đau bụng , đi ngoài ra máu, kích ứng tại chỗ, chảy máu đường tiêu hóa, + Dị ứng, nổi mề đay, choàng, huyết áp giảm đột ngột, viêm mũi,

+ Trầm cảm, muốn ngủ, hay ngủ gật, lo lắng vô cứ, dễ kích động, người cảmthấy khó chịu bất an,

+ Nổi mề đay+ Co thắt phế quản+ Thị lực giảm sút.+ Ù tai

+ Rối loạn các chức năng của gan.

+ Suy giảm một số chức năng của thận [4].

CHƯƠNG 2 ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU2.1 Nguyên vật liệu dùng trong nghiên cứu

2.1.1 Chủng vi sinh vật

Vi khuẩn được tạo ra từ lên men dịch trà xanh nuôi cấy tại phòng thí nghiệmcủa viện Nghiên cứu Khoa học và Ứng dụng, Trường ĐHSP Hà Nội 2.

2.1.2 Vật liệu nghiên cứu

Bảng 2.1 Danh sách vật liệu sử dụng trong nghiên cứuS

T1 Tên Nu

.Th Tru2.Aci Việ3.D- Tru4.Am Tru5.Dis Tru6.Aci Tru7.Ca Mỹ8.Pe Eur9.Nat Việ10Nư Việ11Met Tru12Nư Việ13Nư Việ

Dụng cụ nghiên cứu: Bình định mức, pipet, micropipet, erlen, thiết bị lên men tạo

màng kích thước 1,5cmx0,5cm và 1,5cmx1cm, buồng nuôi cấy, bình tam giác, ốngnghiệm, becher,…

2.2 Phương pháp nghiên cứu

2.2.1 Bố trí thí nghiệm

- Thí nghiệm 1: Tạo màng cellulose từ ba môi trường: môi trường chuẩn, môitrường nước dừa và môi trường nước gạo.

- Thí nghiệm 2: Xử lý màng và kiểm tra độ sạch của màng.

- Thí nghiệm 3: Tính toán xác định phổ hấp thụ của thuốc Diclofenac.- Thí nghiệm 4: Dựng đường chuẩn thuốc Diclofenac.

- Thí nghiệm 5: Cho màng nạp thuốc trong 2 giờ.

- Thí nghiệm 6: So sánh khả năng hấp thụ thuốc ở 3 loại màng.

2.2.2 Phương pháp nghiên cứu

2.2.2.1 Chế tạo hệ mạng lưới cellulose vi khuẩn

Bước 1: Chuẩn bị môi trường [5,6,8,13,20]

Bảng 2.3 Thành phần của môi trường lên men tạo màng

T MT MT(

M (M (MG

lu 20 20 20 P

e 5 g 10 10 D

in2,7 Aci 1,1Ca 5 gNư 10D

ia 0,3 0,3 A

m 0,5 0,5 N

Bước 5: Chuyển dịch sang dụng cụ nuôi cấy, bịt kín miệng bằng gạc đã được khử

trùng, đặt trong nơi tĩnh khoảng 7 – 14 ngày trong nhiệt độ 28⁰C.

Bước 6: Thu hoạch màng, xử lý màng.

2.2.2.2 Xử lý màng trước khi hấp thụ và đánh giá độ sạch của màng

Mục đích:Loại bỏ các chất bẩn, độc hại có trong môi trường nuôi cấy Phương pháp: Vi khuẩn lên men tạo màng trên bề mặt môi trường nuôi cấy.+ Để giải phóng các độc tố và phá vỡ tế bào vi khuẩn đem màng đi hấp trong NaOH3% trong thời gian 15 phút.

+ Vớt màng đã ngâm NaOH đặt dưới vòi nước chảy đến khi màng trắng trong Thửquỳ tìm đến khi đạt trung tính ta thu được màng sạch [13,6]

2.2.2.2.2 Đánh giá độ sạch của màng

Mục đích: Đảm bảo có thể loại bỏ vi khuẩn có hại

* Tìm sự hiện diện của protein trong màng tinh chế

Nguyên tắc: Xác định lượng protein còn lại trong màng bằng cách tạo kết tủaTiến hành: Cắt nhỏ màng sạch bỏ vào 50ml nước cất và rung trong máy rung siêu âm 10 phút Acid triclor acetic 1% sẽ phát hiện sự có mặt của protein trong dịchchiết Mẫu dương ở đây là pepton còn mẫu âm là nước cất 2 lần Phản ứng dương sẽcho kết tủa đục So sánh với mẫu âm không chứa protein [24,11].

Màng cellulose vi khuẩn đã được làm sạch dùng để tạo màng hấp thụ thuốcphải đạt được những tính chất:

+ Mềm, dẻo, áp sát vào da và có độ che phủ tốt.

+ Có khả năng hút nước và dịch mô, độ ẩm thích hợp [18]

2.2.2.3 Tìm phổ hấp thụ của thuốc diclofenac

Nguyên lí: Để tìm bước sóng mà thuốc diclofenac natri hấp thụ tối đa ta dùngmáy đo UV – 2450.

Thực hiện: Cân 0,025g thuốc diclofenac rồi pha trong 90ml dung dịch đệmMethanol Methanol chính là dung dịch mẫu trắng dùng để hòa tan thuốc Giới hạnbước sóng ở khoảng 200 – 800nm, tiến hành đo 3 lần để có kết quả có độ tin cậy.

2.2.2.4 Cách dựng đường chuẩn diclofenac

Nguyên lí:Đo quang phổ hấp thụ của thuốc diclofenac ở các nồng độ khácnhau bằng máy đo UV -2450 với bước sóng có phổ hấp thụ cao nhất.

Thực hiện: Chuẩn bị mẫu diclofenac ở các nồng độ: 10%, 20%, 40%, 60%,80%, 100% trong dung dịch Methanol Mẫu trắng là Methanol Dựng đường chuẩnvà lập phương trình đường chuẩn của diclofenac bằng phần mềm Excel 2010 [10].Để có độ tin cậy cao ta lặp lại 3 lần.

2.2.2.5 Lượng thuốc mà màng hấp thụ được Tính hiệu suất.

Để xác định được lượng thuốc mà màng hấp thụ ta tiến hành trên 4 loại màngcellulose vi khuẩn ở 3 loại môi trường khác nhau Môi trường chuẩn, nước dừa vàgạo.

- Mẫu 1: Màng dày 0,5 cm.

- Mẫu 2: Màng dày 0,5 cm ép nước 50%- Mẫu 3: Màng dày 1 cm

- Mẫu 4: Màng dày 1cm ép nước 50%

Chuẩn bị 12 bình tam giác nhỏ trong đó có chứa 12 màng và 25 mg thuốc phatrong 100ml dung dịch Methanol Lắc các bình chứa màng trong máy lắc với tốc độ150 vòng/ phút lần lượt trong các mốc thời gian: 0,5h ; 1h; 1,5h; 2h Để xác địnhđược lượng thuốc còn lại trong dung dịch tại mốc thời gian lấy mẫu ta đem mẫu điđo quang phổ bằng máy đo UV- 2450 Từ việc xác định được lượng thuốc còn lại taxác định được lượng thuốc hấp thụ vào màng Lặp lại thí nghiệm 3 lần để lấy giá trịtrung bình và tính toán.

Thay giá trị của OD đã đo được vào phương trình đường chuẩn đã được tínhtoán từ trước ta được nồng độ diclofenac trong dung dịch, từ đó sẽ cho ra kết quảkhối lượng diclofenac trong dung :

� (� � )� � �

C% ( ) = x 100% (1)

� � � � (� � )

Công thức tính khối lượng diclofenac được màng hấp thụ:Mht = mtr – ms (2)

Trong đó:

mht: khối lượng diclofenac được màng hấp thụ (mg)

mtr: khối lượng diclofenac ban đầu có mặt trong dung dịch (mg)ms: khối lượng diclofenac còn lại sau khi đã được hấp thụ vào màng

Tỉ lệ phần trăm diclofenac được hấp thụ vào màng cellulose vi khuẩn đượctính theo: