Chọn tạo các dòng đậu xanh (Vigna radiata L.) bằng đột biến EMS trên hai giống ĐX208 và Taichung

1.1 Tính cấp thiết của đề tài Đậu xanh [Vigna radiata (L.) Wilczek] là cây họ đậu quan trọng, chiếm gần 10 diện tích và 5 sản lượng các loài họ đậu ăn hạt ở các nước nhiệt đới và á nhiệt đới. Đậu xanh chứa rất ít hàm lượng oligosaccharides – loại đường gây chứng đầy hơi, nhưng rất giàu đạm, khoáng chất, vitamin và là nguồn sắt chất lượng cao, đặc biệt tốt đối với phụ nữ và trẻ em thiếu máu, (Kim et al., 2015). Với thành phần dinh dưỡng như trên, đậu xanh đã trở thành một loại thực phẩm linh hoạt trong khẩu phần ăn của con người, là nguồn dược liệu được ưa chuộng (Myers, 2000). Ngoài ra, đậu xanh còn là nguồn thức ăn gia súc tốt để sản xuất thịt và sữa chất lượng cao (Boelt et al., 2014). Thêm vào đó, cây đậu xanh rất thích hợp cho việc xen canh và luân canh với nhiều loại cây trồng khác do có chu kỳ sinh trưởng ngắn, kỹ thuật canh tác đơn giản, thích ứng rộng với môi trường. Hơn nữa, với khả năng cố định đạm ở nốt rễ khi kết hợp với vi khuẩn Rhizobium trong đất cho phép đậu xanh phát triển mạnh trong đất thiếu đạm và có thể cải tạo được kết cấu đất (War et al., 2017). Trước tình hình biến đổi khí hậu hiện nay, hạn mặn đang là vấn đề nghiêm trọng, với khả năng chịu hạn khá, đậu xanh được xem như một cây trồng có tiềm năng đáp ứng được nhu cầu cấp thiết này (Rao, 2016). Ở Việt Nam, đậu xanh được trồng nhiều ở vùng Duyên hải Nam Trung Bộ và Tây nguyên. Hiện nay, chưa có một thống kê chính thức về cây trồng này, tuy nhiên theo số liệu thu thập được thì đậu xanh có năng suất bình quân khoảng 0,7 tấn/ha, và biến động lớn giữa các vùng miền (Nguyễn Văn Chương và ctv., 2014). Nguyên nhân cơ bản dẫn đến năng suất đậu xanh thấp có thể là do đậu xanh thường được trồng trên đất xấu, nông dân sử dụng giống cũ của địa phương không được chọn lọc, kiểu trái chín không đồng loạt. Nghiên cứu cho thấy chỉ có khoảng 65 trái đậu xanh được thu hoạch trong vòng 70-75 ngày sau khi gieo (NSKG), 18% trong lần thu hoạch thứ hai 75-80 NSKG và 17% trong lần thu hoạch thứ ba 90-95 NSKG (Rahman, 1991). Để rút ngắn thời gian và giảm chi phí thu hoạch thì việc chọn tạo giống đậu xanh mới năng suất cao, mang kiểu gen trái chín đồng loạt là tiêu chí quan trọng trong công tác chọn tạo và cải thiện giống đậu xanh hiện nay. Trong những năm gần đây, đột biến cảm ứng đã được chứng minh là một công nghệ khả thi, bền vững, hiệu quả cao, được chấp nhận về mặt môi trường, linh hoạt và chi phí thấp để tăng cường cải thiện giống cây trồng. Đột biến cảm ứng cho phép thoát được bế tắc của tính bất thụ bằng cách tạo các biến dị hữu ích và đem lại bước tiến đáng kể cho công tác chọn giống đậu xanh (Lagoda, 2009). Hóa chất Ethyl Methane Sulphonate (EMS) là tác nhân gây đột biến hiệu quả về phổ biểu hiện và được sử dụng phổ biến (Auti and Apparao, 2009). Trên thế giới, EMS đã được sử dụng thành công trong việc tạo ra giống mới có năng suất cao, chất lượng tốt, có khả năng kháng sâu, bệnh, chống chịu được các điều kiện bất lợi của ngoại cảnh trên một số giống cây trồng như: lúa (Singh et al., 1998; Talebi et al., 2012), đậu trắng (Girija and Dhanavel, 2009), đậu nành (Song et al., 2010; Satpute and Fultambkar, 2012), đậu xanh (Sandhu et al., 2003; Roychowdhury et al., 2012; Mishra and Singh, 2014). Ở Việt Nam, các công trình nghiên cứu tạo giống đột biến bằng hóa chất EMS rất ít, số lượng của những nghiên cứu này còn giới hạn, hầu hết các giống đột biến đã được công bố đều sử dụng tác nhân vật lý để gây đột biến. Hiện nay, phân tích kiểu gen bằng các kỹ thuật sinh học phân tử DNA đã và đang được phát triển mạnh, là một trong những kỹ thuật giúp cho phương pháp chọn giống đột biến cảm ứng trở nên nhanh chóng và có hiệu quả hơn. Việc phối hợp giữa phương pháp chọn giống bằng đột biến cảm ứng và kỹ thuật sinh học phân tử sẽ rút ngắn thời gian chọn tạo từ 3-4 thế hệ so với phương pháp chọn giống truyền thống (Điêu Thị Mai Hoa, 2006), đồng thời định hướng nhanh kiểu gen mong muốn và gia tăng hiệu quả của các giống đột biến. Xuất phát từ yêu cầu thực tế sản xuất đậu xanh và nhằm cung cấp thêm cơ sở khoa học, vật liệu cho công tác chọn tạo giống cũng như giống đậu xanh mới luận án “Chọn tạo các dòng đậu xanh (Vigna radiata L.) bằng đột biến EMS trên hai giống ĐX208 và Taichung” đã được thực hiện.

TRƢỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA NÔNG NGHIỆP TRẦN THỊ THANH THỦY CHỌN TẠO CÁC DÒNG ĐẬU XANH (Vigna radiata L.) BẰNG ĐỘT BIẾN EMS TRÊN HAI GIỐNG ĐX208 VÀ TAICHUNG LUẬN ÁN TỐT NGHIỆP TIẾN SĨ NGÀNH KHOA HỌC CÂY TRỒNG Mà NGÀNH 9620110 2019 MỤC LỤC Lời cảm tạ i Tóm tắt ii Abstract iii Mục lục v Danh sách bảng x Danh sách hình xiii Danh mục từ viết tắt xv Chƣơng 1: Giới thiệu 1.1 Tính cấp thiết đề tài 1.2 Mục tiêu phạm vi nghiên cứu 1.2.1 Mục tiêu 1.2.2 Đối tượng phạm vi nghiên cứu 1.3 Nội dung nghiên cứu 1.4 Thời gian thực 1.5 Ý nghĩa khoa học thực tiễn luận án 1.5.1 Ý nghĩa khoa học 1.5.2 Ý nghĩa thực tiễn 1.6 Những điểm luận án Chƣơng 2: Tổng quan tài liệu 2.1 Nguồn gốc, phân loại gen đậu xanh 2.1.1 Nguồn gốc 2.1.2 Phân loại thực vật 2.1.3 Bộ gen đậu xanh 2.2 Đặc điểm nông học đậu xanh 2.2.1 Hệ rễ 2.2.2 Thân cành 2.2.3 Lá v 2.2.4 Hoa 2.2.5 Trái 2.2.6 Hạt 2.3 Sâu bệnh gây hại đậu xanh 2.4 Thời gian sinh trưởng mùa vụ canh tác 10 2.4.1 Thời gian sinh trưởng 10 2.4.2 Mùa vụ canh tác 11 2.5 Tình hình sản xuất nghiên cứu chọn tạo giống đậu xanh 11 2.5.1 Vai trò giống việc cải thiện giống 11 2.5.2 Trên giới 11 2.5.3 Ở Việt Nam 13 2.6 Ý nghĩa đột biến cảm ứng chọn tạo giống trồng 15 2.7 Cơ sở khoa học vai trò chọn giống đột biến cảm ứng 16 2.7.1 Cơ sở khoa học chọn giống đột biến cảm ứng 16 2.7.2 Vai trò đột biến cảm ứng 16 2.7.3 Mục tiêu phương pháp chọn giống đột biến cảm ứng 17 2.8 Cơ sở di truyền đột biến 18 2.9 Các tác nhân gây đột biến 19 2.9.1 Cơ chế gây đột biến tác nhân phóng xạ 20 2.9.2 Cơ chế gây đột biến tác nhân hóa học 21 2.9.3 Cơ chế tác động Ethyl Methane Sulphonate 22 2.10 Sự biểu kiểu đột biến 24 2.10.1 Các loại đột biến 24 2.10.2 Những biểu đột biến 24 2.11 Quá trình phát sinh đột biến cách nghiên cứu chúng 24 2.11.1 Chuẩn bị vật liệu sinh sản hạt 24 2.11.2 Chọn tác nhân gây đột biến liều lượng xử lý 25 2.11.3 Theo dõi chọn lọc đột biến 26 2.12 Các biểu hình thái đột biến 32 vi 2.12.1 Đột biến liên quan đến diệp lục 32 2.12.2 Đột biến hình dạng kích thước 35 2.12.3 Đột biến hoa 35 2.12.4 Đột biến dạng trái 36 2.12.5 Đột biến đặc tính trổ hoa sớm trổ hoa muộn 37 2.12.6 Đột biến đặc tính chín sớm chín muộn 37 2.13 Tình hình phát triển giống trồng đột biến 38 2.14 Hệ số di truyền hệ số phương sai 40 2.15 So sánh kiểu gen dòng đột biến giống gốc 42 2.16 Các nghiên cứu tạo giống trồng xử lý EMS 42 2.16.1 Trên giới 42 2.16.2 Ở Việt Nam 44 2.17 Giải trình tự DNA kỹ thuật SSR 45 2.17.1 Giải trình tự DNA 45 2.17.2 Kỹ thuật SSR 45 Chƣơng 3: Vật liệu, nội dung phƣơng pháp nghiên cứu 47 3.1 Thời gian địa điểm 47 3.2 Vật liệu nghiên cứu 47 3.2.1 Vật liệu 47 3.2.2 Thiết bị vật tư hóa chất 48 3.3 Nội dung phương pháp nghiên cứu 51 3.3.1 Gây tạo đột biến hóa chất EMS 51 3.3.2 Nghiên cứu quần thể đậu xanh đột biến hệ M1 51 3.3.3 Khảo sát quần thể đậu xanh đột biến hệ M2 M3 52 3.3.4 Khảo nghiệm dòng đậu xanh đột biến từ M4 đến M5 53 3.3.5 Khảo nghiệm dòng đậu xanh đột biến hệ M6 53 3.3.6 Kỹ thuật canh tác 54 3.3.7 Phương pháp thu thập tiêu đồng 54 3.3.8 Phương pháp ước lược thông số biến dị di truyền 58 vii 3.3.9 Đánh giá mức độ nhiễm sâu bệnh đổ ngã 60 3.3.10 Phương pháp dấu phân tử hệ M6 61 3.3.11 Phương pháp đánh giá độ 65 3.3.12 Phân tích khoảng cách di truyền 66 3.3.13 Phương pháp tính số Pi số Theta 66 3.4 Phương pháp xử lý số liệu 67 Chƣơng 4: Kết thảo luận 68 4.1 Ghi nhận tổng quát 68 4.2 Sức sống quần thể đậu xanh M1, vụ Thu Đông 2013 69 4.2.1 Tỉ lệ sống quần thể đậu xanh thời điểm 15 NSKG 70 4.2.2 Tỉ lệ sống lúc trổ 70 4.2.3 Tỉ lệ gây chết so với đối chứng 71 4.3 Hiệu hiệu suất đột biến 72 4.3.1 Tần số đột biến 72 4.3.2 Hiệu đột biến (Mutagenic Effectiveness) 72 4.3.3 Hiệu suất đột biến (Mutagenic Efficiency) 73 4.4 Kết nghiên cứu quần thể đậu xanh từ M1 đến M3 73 4.4.1 Đặc tính sinh trưởng quần thể đậu xanh từ M1 đến M3 73 4.4.2 Biến dị hình thái quần thể đậu xanh đột biến từ M1-M3 75 4.4.3 Đặc tính nơng học quần thể đậu xanh M1, M2 M3 81 4.5 Nhận xét kết nghiên cứu quần thể đậu xanh M1, M2 M3 89 4.6 Ước lược thông số di truyền quần thể đậu xanh M3 89 4.7 Kết khảo sát đặc tính sinh trưởng, hình thái nơng học dòng đột biến M4, M5 M6 93 4.7.1 Đặc tính sinh trưởng giống/dòng đậu xanh M4 – M6 94 4.7.2 Đặc tính hình thái giống/dòng đậu xanh M4 – M6 99 4.7.3 Đặc tính nơng học giống/dòng đậu xanh từ M4 đến M6 101 4.7.4 Thành phần suất suất giống/dòng đậu xanh từ hệ M4 đến M6 112 viii 4.8 Phân tích kiểu gen dấu SSR 120 4.8.1 Kết ly trích kiểm tra DNA từ đậu xanh 120 4.8.2 Kết kiểm tra kiểu gen dòng đậu xanh đột biến 124 4.8.3 Mối quan hệ di truyền giống/dòng đậu xanh dựa phân tích SSR 126 4.9 Kết giải trình tự gen liên quan đến khối lượng 1.000 hạt 130 4.9.1 Kết khuếch đại gen 131 4.9.2 Kết giải trình tự gen 131 Chƣơng Kết luận đề xuất 136 5.1 Kết luận 136 5.2 Đề xuất 136 Danh mục liệt kê báo công bố 138 Tài liệu tham khảo 139 Phụ chƣơng 148 ix DANH SÁCH BẢNG Bảng Tên bảng Trang 2.1 Diện tích suất đậu xanh Việt Nam từ 2012-2015 13 2.2 Liều lượng nồng độ tác nhân gây đột biến sử dụng cho số trồng 26 2.3 Sơ đồ chọn giống đột biến hạt trồng tự thụ phấn 32 2.4 Số giống trồng tạo phương pháp đột biến số quốc gia tính đến năm 2007 40 3.1 Trình tự 17 đoạn mồi SSR, kích thước (KT) nhóm liên kết (NLK) sử dụng thí nghiệm 50 3.2 Các nghiệm thức thí nghiệm thí nghiệm 52 3.3 Bảng phân tích phương sai 58 3.4 Thành phần phản ứng nhân gen khối lượng 1.000 hạt 65 4.1 Sức sống quần thể đậu xanh đột biến giai đoạn 15 NSKG trổ hoa vụ Thu Đông 2013 70 4.2 Tần số đột biến, hiệu hiệu suất đột biến quần thể đậu xanh đột biến hệ M1, vụ Thu Đơng 2013 72 4.3 Đặc tính sinh trưởng quần thể đậu xanh M1, M2 M3 74 4.4 Tỉ lệ dạng biến dị quần thể ĐX208 đột biến M1, M2 M3 76 4.5 Tỉ lệ dạng biến dị quần thể Taichung đột biến M1, M2 M3 76 4.6 Chiều cao lúc chín (cm) số trái quần thể đậu xanh thí nghiệm M1, M2 M3, vụ Thu Đông 2013, Đông Xuân 2013-2014 Xuân Hè 2014 82 4.7 Chiều dài trái số hạt trái quần thể đậu xanh thí nghiệm M1, M2 M3, vụ Thu Đông 2013, Đông Xuân 2013-2014 Xuân Hè 2014 84 4.8 Khối lượng 1.000 hạt suất hạt (g/cây) quần thể đậu xanh thí nghiệm M1, M2 M3, vụ Thu 86 x Đông 2013, Đông Xuân 2013-2014 Xuân Hè 2014 4.9 Tỉ lệ cá thể cho trái chín đồng loạt không đồng loạt quần thể đậu xanh đột biến hệ M3 vụ Xuân Hè 2014 87 4.10 Danh sách 32 cá thể đậu xanh đột biến tuyển chọn M3 88 4.11 Thông số di truyền tính trạng số lượng quần thể ĐX208 quần thể ĐX208 (ĐC) 90 4.12 Thông số di truyền tính trạng số lượng quần thể Taichung đột biến quần thể Taichung (ĐC) 91 4.13 Đặc tính sinh trưởng dòng đậu xanh đột biến M4 giống đối chứng (ĐX208 Taichung) vụ Thu Đông 2014 95 4.14 Đặc tính sinh trưởng dòng đậu xanh đột biến M5 giống đối chứng (ĐX208 Taichung) vụ Thu Đơng 2015 96 4.15 Đặc tính sinh trưởng dòng đậu xanh đột biến M6 giống đối chứng ĐX208 vụ Đông Xuân 2016 97 4.16 Chiều cao lúc chín, số lóng số cành giống/dòng đậu xanh hệ M4 vụ Thu Đơng 2014 102 4.17 Chiều cao lúc chín, số lóng số cành giống/dòng đậu xanh hệ M5 vụ Thu Đông 2015 103 4.18 Chiều cao lúc chín, số lóng số cành giống/dòng đậu xanh hệ M6 vụ Đông Xuân 2015-2016 104 4.19 Số trái/cây, chiều dài trái, số hạt/trái giống/dòng đậu xanh hệ M4 vụ Thu Đông 2014 108 4.20 Số trái/cây, chiều dài trái, số hạt/trái giống/dòng đậu xanh hệ M5 vụ Thu Đông 2015 110 4.21 Số trái/cây, chiều dài trái, số hạt/trái giống/dòng đậu xanh hệ M6 vụ Đông Xuân 2015-2016 111 4.22 Thành phần suất suất giống/dòng đậu xanh hệ M4 vụ Thu Đơng 2014 114 4.23 Thành phần suất suất giống/dòng đậu xanh hệ M5 vụ Thu Đông 2015 115 4.24 Thành phần suất suất giống/dòng đậu xanh hệ M6 vụ Đông Xuân 2015-2016 116 4.25 Danh sách dòng đậu xanh đột biến ưu tú M6 tuyển 119 xi chọn vụ Đông Xuân 2015-2016 4.26 Danh sách 35 giống/dòng đậu xanh sử dụng để phân tích kiểu gen 121 4.27 Kết đo nồng độ độ tinh 35 giống/dòng đậu xanh 123 4.28 Danh sách dòng đậu xanh đột biến M6 giống gốc (ĐX208 Taichung) sử dụng để giải trình tự gen 130 4.29 Sự sai khác trình tự nucleotide đoạn gen từ vị trí 461500 nucleotide dòng ĐX208 đột biến giống ĐX208 134 4.30 Sự sai khác trình tự nucleotide đoạn gen từ vị trí 461500 nucleotide dòng Taichung đột biến giống Taichung 135 xii DANH SÁCH HÌNH Hình Tên hình Trang 2.1 Tỉ lệ đóng góp tác nhân đột biến tạo giống trồng Nhật năm 2008 20 2.2 Hiện tượng alkyl hóa Guanine gây đồng hốn GC →AT 22 2.3 Hiện tượng alkyl hóa Thymine gây đồng hoán TA → CG 23 2.4 Số lượng giống trồng đột biến giới năm 19692014 39 2.5 Tỉ lệ giống đột biến châu lục năm 2008 39 3.1 Vật liệu dùng để gây đột biến 48 4.1 Đột biến dạng Xantha (A) Albina (B) 77 4.2 Các kiểu đột biến dạng Maculata 78 4.3 Các kiểu đột biến dạng Viridis 78 4.4 Các kiểu đột biến dạng Alboviridis 78 4.5 Đột biến hình dạng hệ M3 79 4.6 Biến dị số lượng đơn quần thể ĐX208 đột biến 80 4.7 Các dạng đột biến số lượng chét 80 4.8 Đột biến màu sắc trục hạ diệp M5 100 4.9 Màu vỏ trái, dạng trái, màu hoa, màu vỏ hạt dạng hạt dòng ĐX8-1-28-8A dòng ĐX4-6-1-1 101 4.10 Kiểu chín đồng loạt dòng TC8-4-3-5B (A) kiểu chín đồng loạt phần giống Taichung (ĐC) (B) 119 4.11 Màu sắc hạt cỡ hạt 11 dòng đậu xanh đột biến triển vọng M6 tuyển chọn vụ Đông Xuân 2015-2016 120 4.12 Kết điện di kiểm tra DNA dòng ĐX208 đột biến giống ĐX208 (ĐC) 121 4.13 Kết điện di kiểm tra DNA dòng Taichung đột biến giống Taichung (ĐC) 122 4.14 Kết điện di sản phẩm PCR 13 dòng ĐX208 đột biến giống gốc (ĐX208) với cặp mồi MBSSR039 124 xiii Phụ chƣơng 111: Giá trị trung bình thành phần phương sai tính trạng số lượng quần thể đậu xanh ĐX208 đột biến hệ M3 giống ĐX208 (ĐC) Tính trạng Nghiệm thức Cao lúc chín (cm) Số trái/cây (trái) Khối lượng 100 hạt (g) Năng suất hạt/cây (g) TB±SD PSMT PSKG PSKH ĐX208 (ĐC) 64,78±5,67 32,18 46,47 78,65 0,2% EMS 63,61±2,24 5,01 55,74 60,75 0,4% EMS 66,42±1,65 2,72 69,79 72,51 0,6% EMS 64,26±2,24 5,02 59,55 64,57 0,8% EMS 66,78±1,58 2,51 66,94 69,44 ĐX208 (ĐC) 18,58±2,44 5,97 28,52 34,50 0,2% EMS 25,25±2,69 7,26 97,30 104,56 0,4% EMS 25,19±4,13 17,03 99,95 116,97 0,6% EMS 25,29±2,59 6,69 103,62 110,31 0,8% EMS 23,51±1,74 3,02 55,37 58,39 ĐX208 (ĐC) 7,96±0,61 0,37 0,19 0,56 0,2% EMS 7,85±0,32 0,10 0,42 0,52 0,4% EMS 7,65±0,08 0,01 0,30 0,31 0,6% EMS 7,86±0,13 0,02 0,45 0,46 0,8% EMS 8,12±0,21 0,04 0,43 0,48 ĐX208 (ĐC) 14,47±1,99 3,95 23,96 27,91 0,2% EMS 18,94±2,50 6,24 62,87 69,11 0,4% EMS 18,22±3,92 15,36 62,08 77,45 0,6% EMS 18,86±1,78 3,17 70,57 73,73 0,8% EMS 18,70±1,42 2,01 48,20 50,21 Ghi chú: TB±SD: Trung bình±độ lệch chuẩn; PSMT: Phương sai môi trường; PSKG: Phương sai kiểu gen; PSKH: Phương sai kiểu hình 177 Phụ chƣơng 112: Giá trị trung bình thành phần phương sai tính trạng số lượng quần thể đậu xanh Taichung đột biến hệ M3 giống Taichung Tính trạng Nghiệm thức TB±SD PSMT PSKG PSKH Taichung (ĐC) 66,76±4,15 17,19 18,50 35,68 0,2% EMS 61,00±4,43 19,59 53,94 73,53 0,4% EMS 61,64±4,08 16,68 91,77 108,45 0,6% EMS 55,44±4,58 20,94 53,96 74,90 0,8% EMS 63,05±5,03 25,31 77,39 102,70 Taichung (ĐC) 11,32±3,52 12,36 5,87 18,23 0,2% EMS 21,19±3,85 14,81 39,81 54,62 0,4% EMS 23,01±3,90 15,23 57,34 72,57 0,6% EMS 20,44±3,84 14,73 51,10 65,83 0,8% EMS 23,05±2,48 6,14 35,23 41,37 6,35±0,38 0,15 0,30 0,44 0,2% EMS Khối lượng 100 0,4% EMS hạt (g) 0,6% EMS 5,98±0,34 0,11 0,53 0,65 6,15±0,28 0,08 0,43 0,51 6,31±0,52 0,27 0,54 0,81 0,8% EMS 5,82±0,39 0,15 0,55 0,70 Taichung (ĐC) 8,98±0,98 0,97 3,66 4,62 0,2% EMS 13,70±3,36 11,31 20,58 31,88 0,4% EMS 15,90±2,38 5,65 32,96 38,61 0,6% EMS 14,02±2,73 7,45 25,07 32,52 0,8% EMS 13,98±1,89 3,57 17,94 21,51 Cao lúc chín (cm) Số trái/cây (trái) Taichung (ĐC) Năng suất hạt/cây (g) Ghi chú: TB±SD: Trung bình±độ lệch chuẩn; PSMT: Phương sai môi trường; PSKG: Phương sai kiểu gen; PSKH: Phương sai kiểu hình 178 Phụ chƣơng 113: Bảng hệ số tƣơng đồng di truyền 13 dòng đậu xanh ĐX208 đột biến giống ĐX208 31 32 33 34 35 36 37 1,00 0,76 0,65 0,74 0,68 0,62 0,53 0,72 0,72 0,63 0,63 0,72 0,65 0,72 31 32 33 34 35 36 37 1,00 0,79 0,79 0,71 0,65 0,59 0,72 0,72 0,60 0,54 0,66 0,65 0,66 1,00 0,79 0,59 0,59 0,71 0,63 0,72 0,60 0,51 0,63 0,59 0,60 1,00 0,71 0,71 0,65 0,69 0,69 0,60 0,57 0,60 0,62 0,63 1,00 0,82 0,65 0,69 0,60 0,60 0,57 0,60 0,62 0,63 1,00 0,71 0,66 0,54 0,57 0,54 0,57 0,62 0,60 1,00 0,51 0,57 0,57 0,51 0,51 0,59 0,51 1,00 0,79 0,74 0,71 0,70 0,57 0,74 1,00 0,76 0,71 0,61 0,60 0,68 1,00 0,85 0,63 0,69 0,74 1,00 0,66 0,72 0,76 1,00 0,70 0,73 1,00 0,69 1,00 Ghi chú:7: giống ĐX208; 1: ĐX4A-3-3-1; 2: ĐX4-6-1-1; 3: ĐX6-5-1-10; 4: ĐX6-6-28-14; 5: ĐX8A-5-18-2; 6: ĐX8-1-28-8B ; 31: ĐX2A-6-3-1; 32: ĐX2-1-26-5; 33: ĐX2-126-6; 34: ĐX4A-3-32-1; 35: ĐX4A-3-5-6; 36: ĐX8-1-28-8A; 37: ĐX8-5-1-3 179 Phụ chƣơng 114: Bảng hệ số tƣơng đồng di truyền 20 dòng đậu xanh Taichung đột biến giống Taichung 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 10 1,00 0,77 0,75 0,76 0,76 0,78 0,77 0,81 0,79 0,79 0,75 0,73 0,71 0,78 0,73 0,75 0,75 0,67 0,73 0,73 0,75 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 1,00 0,83 0,78 0,68 0,74 0,75 0,75 0,81 0,81 0,77 0,73 0,75 0,74 0,79 0,79 0,75 0,75 0,73 0,71 0,75 1,00 0,80 0,74 0,76 0,71 0,75 0,79 0,77 0,71 0,73 0,73 0,72 0,75 0,75 0,73 0,73 0,75 0,71 0,73 1,00 0,83 0,81 0,82 0,82 0,78 0,78 0,68 0,76 0,72 0,71 0,72 0,72 0,72 0,70 0,70 0,68 0,70 1,00 0,90 0,86 0,80 0,72 0,72 0,66 0,76 0,72 0,75 0,66 0,72 0,68 0,68 0,72 0,70 0,70 1,00 0,86 0,84 0,74 0,74 0,68 0,72 0,72 0,75 0,70 0,74 0,72 0,68 0,72 0,70 0,70 1,00 0,81 0,79 0,81 0,73 0,77 0,73 0,76 0,69 0,75 0,71 0,71 0,75 0,71 0,71 1,00 0,81 0,81 0,73 0,67 0,69 0,72 0,69 0,73 0,69 0,67 0,71 0,71 0,73 1,00 0,94 0,83 0,69 0,73 0,78 0,77 0,77 0,73 0,73 0,75 0,71 0,73 1,00 0,85 0,69 0,71 0,76 0,75 0,79 0,73 0,71 0,73 0,73 0,77 1,00 0,69 0,73 0,76 0,73 0,77 0,68 0,71 0,73 0,71 0,73 1,00 0,85 0,82 0,81 0,77 0.77 0,75 0,77 0,69 0,71 1,00 0,89 0,79 0,77 0,77 0,81 0,73 0,73 0,69 1,00 0,84 0,80 0,76 0,76 0,76 0,74 0,72 1,00 0,81 0,81 0,77 0,75 0,69 0,73 1,00 0,85 0,77 0,81 0,73 0,79 1,00 0,81 0,75 0,69 0,69 1,00 0,81 0,73 0,71 1,00 0,75 0,77 1,00 0,79 1,00 Ghi chú: 10: Taichung (ĐC); 11: TC6-6-15-8; 12: TC6-3-13-8; 13: TC8-1-17-2; 14: TC8-1-20-3; 15: TC6-6-24-4 ; 16: TC2-1-33-11 ; 17: TC4-6-10-1; 18: TC8-3-16-9; 19: TC8-4-3-5A; 20: TC8-4-3-5B; 21: TC2A-2-10-11; 22: TC2A-3-24-8 ; 23: TC2A-5-9-5; 24: TC4-1-4-11 ; 25: TC8-2-8-4; 26: TC2A-4-33-4; 27: TC2-6-16-12; 28: TC2-5-3-5; 29: TC4-1-6-3; 30: TC4-1-12-10 180 Phụ chƣơng 115: Kết đa hình đƣợc ghi nhận thị phân tử STT Tên mồi SSR Số alen thể (1) (2) CEDAAG002 CEDG014 CEDG026 CEDG030 3 CEDG037 6 CEDG088 3 CEDG198 8 CEDG232 DMBSSR160 10 DMBSSR167 10 11 MSBSSR039 12 MBSSR087 13 VM37 14 VRSSR035 5 15 VR095 3 16 VR293 17 VR304 67 95 Tổng Trung bình Ghi chú: (1): Kết đa hình 13 dòng ĐX208 đột biến giống ĐX208 (2): Kết đa hình 20 dòng Taichung đột biến giống Taichung 181 Phụ chƣơng 116: Kết SSR-PCR 33 dòng đột biến giống gốc (ĐX208 Taichung) với cặp mồi VRSSR035 Ghi chú: (M): kb plus ladder; (7): giống ĐX208; (1): ĐX4A-3-3-1; (2): ĐX4-6-1-1; (3): ĐX6-5-110;(4): ĐX6-6-28-14; (5): ĐX8A-5-18-2; (6): ĐX8-1-28-8; (31): ĐX2A-6-3-1; (32): ĐX2-1-26-5; (33): ĐX2-1-26-6; (34): ĐX4A-3-32-1A; (35): ĐX4A-3-5-6; (36): ĐX8-1-28-8A ; (37): ĐX8-5-1-3; (10): giống Taichung; (11): TC6-6-15-8; (12): TC6-3-13-8; (13): TC8-1-17-2; (14): TC8-1-20-3; (15): TC6-6-24-4; (16): TC2-1-33-1; (17): TC4-6-10-1; (18): TC8-3-16-9; (19): TC8-4-3-5A; (20): TC8-4-3-5B; (21): TC2A-2-10-11; (22): TC2A-3-24-8; (23): TC2A-5-9-5;( 24): TC4-1-4-11; (25): TC8-2-8-4; (26): TC2A-4-33-4; (27): TC2-6-16-12; (28): TC2-5-3-5; (29): TC4-1-6-3; (30): TC4-112-10 182 Phụ chƣơng 117: Kết SSR-PCR 33 dòng đột biến giống gốc (ĐX208 Taichung) với cặp mồi DMBSSR167 Ghi chú: (M): kb plus ladder; (7): giống ĐX208; (1): ĐX4A-3-3-1; (2): ĐX4-6-1-1; (3): ĐX6-5-110;(4): ĐX6-6-28-14; (5): ĐX8A-5-18-2; (6): ĐX8-1-28-8; (31): ĐX2A-6-3-1; (32): ĐX2-1-26-5; (33): ĐX2-1-26-6; (34): ĐX4A-3-32-1A; (35): ĐX4A-3-5-6; (36): ĐX8-1-28-8A ; (37): ĐX8-5-1-3; (10): giống Taichung; (11): TC6-6-15-8; (12): TC6-3-13-8; (13): TC8-1-17-2; (14): TC8-1-20-3; (15): TC6-6-24-4; (16): TC2-1-33-1; (17): TC4-6-10-1; (18): TC8-3-16-9; (19): TC8-4-3-5A; (20): TC8-4-3-5B; (21): TC2A-2-10-11; (22): TC2A-3-24-8; (23): TC2A-5-9-5;( 24): TC4-1-4-11; (25): TC8-2-8-4; (26): TC2A-4-33-4; (27): TC2-6-16-12; (28): TC2-5-3-5; (29): TC4-1-6-3; (30): TC4-112-10 183 Phụ chƣơng 118: Kết SSR-PCR 33 dòng đột biến giống gốc (ĐX208 Taichung) với cặp mồi CEDG026 Ghi chú: (M): kb plus ladder; (7): giống ĐX208; (1): ĐX4A-3-3-1; (2): ĐX4-6-1-1; (3): ĐX6-5-110;(4): ĐX6-6-28-14; (5): ĐX8A-5-18-2; (6): ĐX8-1-28-8; (31): ĐX2A-6-3-1; (32): ĐX2-1-26-5; (33): ĐX2-1-26-6; (34): ĐX4A-3-32-1A; (35): ĐX4A-3-5-6; (36): ĐX8-1-28-8A ; (37): ĐX8-5-1-3; (10): giống Taichung; (11): TC6-6-15-8; (12): TC6-3-13-8; (13): TC8-1-17-2; (14): TC8-1-20-3; (15): TC6-6-24-4; (16): TC2-1-33-1; (17): TC4-6-10-1; (18): TC8-3-16-9; (19): TC8-4-3-5A; (20): TC8-4-3-5B; (21): TC2A-2-10-11; (22): TC2A-3-24-8; (23): TC2A-5-9-5;( 24): TC4-1-4-11; (25): TC8-2-8-4; (26): TC2A-4-33-4; (27): TC2-6-16-12; (28): TC2-5-3-5; (29): TC4-1-6-3; (30): TC4-112-10 184 Phụ chƣơng 119: So sánh trình tự gen liên quan đến tính trạng khối lượng 1.000 hạt dòng ĐX208 đột biến giống ĐX208 185 186 187 Phụ chƣơng 120: So sánh trình tự gen liên quan đến tính trạng khối lượng 1.000 hạt dòng Taichung đột biến giống Taichung 188 189 190 Phụ chƣơng 121: Giải thích cách đặt tên dòng đột biến Ví dụ 1: ĐX6-5-1-10 - ĐX: Từ viết tắt tên giống gốc (ĐX208) - Số thứ nhất: biểu thị cho nồng độ EMS (số nghĩa dòng xử lý EMS nồng độ 0,6 ) - Mỗi gạch (-) tượng trưng cho hệ: (-) thứ hệ thứ - Các số theo sau (-) biểu thị số thứ tự đột biến chọn hệ tương ứng - Như dòng ĐX6-5-1-10 giải thích sau: Đây dòng tạo từ giống ĐX208 xử lý đột biến nồng độ 0,6 EMS, hệ đột biến thứ (M1) chọn số thu hạt Trồng số thành dòng, thu hạt số (M2) từ dòng số Trồng số thành dòng thu hạt số 10 (M3) từ dòng số - A B thứ tự phân dòng mới, sau đặt tên dòng mà quần thể phân ly 191 ... công tác chọn tạo giống giống đậu xanh luận án Chọn tạo dòng đậu xanh (Vigna radiata L.) đột biến EMS hai giống ĐX208 Taichung thực 1.2 Mục tiêu phạm vi nghiên cứu 1.2.1 Mục tiêu - Tạo nguồn... nucleotide dòng đậu xanh Taichung đột biến so với giống gốc Taichung 132 4.22 Mức độ biến dị vị trí nucleotide dòng ĐX208 đột biến (A) dòng Taichung đột biến (B) so với giống gốc ĐX208 Taichung. .. Gây tạo đột biến hóa chất EMS 51 3.3.2 Nghiên cứu quần thể đậu xanh đột biến hệ M1 51 3.3.3 Khảo sát quần thể đậu xanh đột biến hệ M2 M3 52 3.3.4 Khảo nghiệm dòng đậu xanh đột biến