Trừ một vài ngoại lệ thì mọi tế bào sống trong cơ thể chưa hệ gen đồng nhất và bộ nhiễm sắc thể đầy đủ. Chỉ một phần nhỏ những gen này được bật, tuy nhiên nó biểu thị tính đặc trưng của mỗi loại tế bào. Sự biểu hiện gen là một quá trình chặt chẽ và phưc tạp cho phép tế bào trả lời những kích thích của môi trường và những nhu cầu thay đổi của chính mình.
HOC VIÊN NÔNG NGHIÊP VIÊT NAM KHOA CÔNG NGHÊ THƯC PHÂM TIÊU LUÂN MÔN CÔNG NGHÊ SINH HOC THƯC PHÂM ĐỀ TÀI: MICRO-ARRAYS GVHD: Nguyễn Thị Lâm Đoàn MICROARRAYS (BẢN MẪU DÒ) DANH SÁCH THÀNH VIÊN NHÓM: 08 STT Họ và tên Lớp MSV Nguyễn Thị Quỳnh K62CNTPC 621000 Nguyễn Thúy Quỳnh K63CNTPA 636166 Văn Thị Mai Sang K63CNTPA 636170 Vũ Xuân Sơn K63CNTPB 636271 Mai Thị Thanh K62CNTPC 621005 Nguyễn Thị Thu Thảo K62CNTPC 621007 Nguyễn Thị Thu Thảo K63CNTPB 636275 Trần Thị Thanh Thảo K63CNTPA 636174 Bùi Đức Thịnh K63CNTPB 636278 10 Đoàn Thị Thu Thủy K62CNTPA 620871 MICROARRAY (BẢN MẪU DÒ) GIƠI THIÊU LICH SƯ RA ĐƠI KHÁI NIÊM CẤU TẠO VÀ PHÂN LOẠI NGUYÊN LY QUÁ TRINH THƯC HIÊN ỨNG DỤNG VÀ TRIỂN VONG GIƠI THIÊU LICH SƯ RA ĐƠI - Ra đời năm 1990, phát triển mạnh mẽ từ năm 1995 và bùng nổ thời gian gần - Ky thuât này là sư kêt hơp của các phát minh vê: DNA, FISH, blot, blot ngươc, đánh dâu huỳnh quang đa màu, giá thể không thâm, tổng hơp mẫu dò insitu, robot GIƠI THIÊU LICH SƯ RA ĐƠI Quá trinh phát triển của ky thuât di truyên KHÁI NIÊM - Microarrays là môt giá thể răn, găn các mẫu dò (vi có thể găn tới hàng chục ngàn mẫu dò vài cm vuông nên gọi là micro), sau đó người ta lai các trinh tư đích đã đánh dâu với mảng này (giá thể + mẫu dò) và xác định tn hiêu lai - Cho phep xác định đươc trinh tư nhiêu gen môt thí nghiêm đơn giản, hi quả Microarrays CẤU TẠO VÀ PHÂN LOẠI CẤU TẠO ( DNA Microarray) - DNA Microarray hay DNA chip, đươc chê tạo măt thủy tnh hoăc silicone băng ky thuât tư đ ông cao, gôm vô số các probe (đoạn dò) đã biêt trước trinh tư - Probe găn mảng cần đươc lưa chọn theo mục đích sử dụng, có thể là oligonucleotde ngăn, oligonucleotde dài hoăc cDNA DNA Microarray PHÂN LOẠI Theo mât mâu • • • Mât đô cao Trung binh Thâp Theo loại mâu • • • • • Cell array Glycan array DNA array RNA array Protein array NGUYÊN LY - Dưa phep lai giưa DNA-DNA/DNA-RNA, giưa các mẫu DNA đã đươc đánh dâu găn bê măt cứng qua các liên kêt hóa học - Phương pháp này cho kêt quả định tnh (sư biểu hiên của gen) hay định lương mức đ ô biểu hi ên và có thể thưc hiên môt lần với hàng nghin gen QUÁ TRINH THƯC HIÊN MICROARRAY Sơ đô thưc hiên ky thuât microarray QUÁ TRINH THƯC HIÊN MICROARRAY • Qua trinh thưc hiên DNA Microarray gôm hai bươc chinh CHẾ TẠO MẢNG TIẾN HÀNH THI NGHIÊM Chê tạo mảng Cơ chât • • • Găn ổn định với mẫu dò Tín hiêu nên gây nhiễu thâp Tính chât hóa học bê măt đông nhât và chât lương dư liêu cao => Môt sô chât đap ưng đươc điêu kiên này và thường đươc sử dụng: thủy tinh, polypropylene, silicon Mẫu dò • • • - Mẫu dò để găn mảng cần đươc lưa chọn theo mục đích sử dụng Oligonucleotde ngăn, oligonucleotde dài, cDNA Sau chọn mẫu dò, găn chúng lên bê măt mảng băng cách: cDNA Tổng hơp in situ Tiên hành thí nghiêm CHUÂN BI MẪU TIẾN HÀNH LAI XÁC ĐINH TIN HIÊU VÀ CHUÂN HÓA DƯ LIÊU Tiên hành thí nghiêm a) -) -) -) Chuẩn bị mâu Hiêu quả phân tch băng microarray phụ thuôc đáng kể vào khâu chuân bị mẫu Mẫu để lai là DNA hoăc RNA đươc đánh dâu nhăm phát hiên trưc têp sau lai Các phương pháp đánh dâu: ° Găn trưc têp chât đánh dâu vào đích băng phản ứng của các nhóm hoạt đông hóa học, PCR với môi đánh dâu ° Dùng enzyme biên đổi trưc têp trinh tư đích - Các chât chi thị phát hiên có thể là chât phát huỳnh quang (Cy3/Cy5), chât phóng xạ (32P, 33P, 35S) Trong đó Cy3/Cy5 đươc sử dụng rông rãi nhât Sơ đồ đánh dấu màu dùng Cy3/CY5 Tiên hành thí nghiêm b) Tiến hành lai - Tiên hành lai mảng sau đánh dâu - Hiêu quả lai có thể tăng lên nêu dung dịch lai trạng thái đ ông so với bê măt mảng Phương pháp microarray dễ tên hành các phương pháp blot sử dụng chât mảng răn Trong quá trinh lai, cho dung dịch đã đánh dâu qua màng Ơ đó, mẫu dò băt căp bổ sung (nêu có) với đích Các điêu kiên lai (như nông đô mẫu, lưc ion, nhiêt đô) phụ thuôc lớn vào kích thước mẫu dò mảng và phải xác định cho từng thí nghiêm Tiên hành thí nghiêm c) Xac định và phân tch tn hiêu lai - Sau lai, tên hành rửa => loại bo đích không băt căp hoăc băt căp không đăc hiêu với dò - Lương dư liêu cần phân tch thí nghiêm microarray rât lớn, tương ứng với nó là hàng chục ngàn tn hi êu, đó có tn hiêu nhiễu Xác định tn hiêu lai chât đánh dâu đích phát băng thiêt bị ảnh Cường đ ô tn hi cho phep đánh giá tương đối hiêu quả băt căp giưa đích và dò => Sử dụng phân mêm chuyên dụng đê chuẩn hoa dư liêu, đơn gian hoa qua trinh phân tch nhăm đưa kết luân nhanh và chinh xac ỨNG DỤNG VÀ TRIỂN VONG d g n Ư g n u Quản lý môi trường Y khoa Công nghê sinh học Nông nghiêp Công nghê thưc phâm ỨNG DỤNG VÀ TRIỂN VONG - Quan lý môi trường ° xác định vi sinh vât ° đánh giá phân bố chức gen môi trường tư nhiên - Y khoa ° chân đoán bênh ° khám phá gen - Công nghê sinh hoc ° xác định xem gen có biểu hiên môt mẫu mô nào đó không ° Xac định trinh tư gen hoăc đôt biến - Nông nghiêp ° phát hiên bênh, theo doi sức khoe cá, tôm - Công nghiêp thưc phẩm ° phát hiên vi khuân gây đôc bảo quản ỨNG DỤNG VÀ TRIỂN VONG n ê i Tr g n vọ ° Tim kiêm loại thuốc trị bênh ° Xác định sư hoạt đông của gen ° Tim vi trùng gây hại ° Chuân đoán ung thư vú Tài liêu tham khao - Giao trinh Công nghê sinh hoc thưc phẩm - https://text.123doc.org/document/3084098-ky-thuat-di-truyen-ky-thuat-microarray.htm ... với hàng nghin gen QUÁ TRINH THƯC HIÊN MICROARRAY Sơ đô thưc hiên ky thuât microarray QUÁ TRINH THƯC HIÊN MICROARRAY • Qua trinh thưc hiên DNA Microarray gôm hai bươc chinh CHẾ TẠO MẢNG... đươc trinh tư nhiêu gen môt thí nghiêm đơn giản, hi quả Microarrays CẤU TẠO VÀ PHÂN LOẠI CẤU TẠO ( DNA Microarray) - DNA Microarray hay DNA chip, đươc chê tạo măt thủy tnh hoăc silicone... insitu, robot GIƠI THIÊU LICH SƯ RA ĐƠI Quá trinh phát triển của ky thuât di truyên KHÁI NIÊM - Microarrays là môt giá thể răn, găn các mẫu dò (vi có thể găn tới hàng chục ngàn mẫu