1 BÁO CÁO THỰC HÀNH TÁCH CHIẾT DNA TỪ LÁ LIM XANH MƠN: Cơng nghệ Gen Lớp: K61-CNSH Họ tên: Trần Nhật Trường MSSV: 165420201014 Đối tượng: Lá Lim xanh Quy trình tách chiết DNA Tiến hành thu mẫu lá, cân khoảng 0.2g lá, cắt nhỏ cho vào cối, thêm 700µl CTAB 4% dùng chày nghiền nát đến thấy hỗn hợp nhuyễn thật nhuyễn dừng Lấy ống eppendorf 2ml, ghi tên nhóm (nhóm 3) Sau cho hỗn hợp hay gọi dd đệm vào ống đem bể ủ nhiệt với nhiệt độ 65°C khoảng 20-30 phút, trình ủ tiến hành đảo nhẹ 20 phút/ lần Sau đem bỏ vào tủ hút Thêm 800µl dung dịch chloroform:isoamylalcohol (24:1), lắc nhẹ Tiến hành ly tâm 15 phút, tốc độ 13000 vòng/phút 4°C Sau ly tâm, đem dd cho vào tủ hút, dùng pipet hút khoảng 300µl pha cho vào ống eppendorf 2ml khác Tủa DNA isopropanol theo tỉ lệ 1:1 với mẫu, lắc 5-7 phút cho ống vào tủ lạnh (tầm 15°C), để qua đêm Lấy dd khỏi tủ, đem ly tâm 13000 vòng/phút 15 phút để thu tủa Sau ly tâm rửa tủa cồn 70% với 500µl Tiếp tục đem ly tâm với 13000 vòng/phút 10 phút 4°C Sau đem đổ cồn cũ ống đi, lại tiếp tục rửa tủa bằn cồn 70% với 500µl Tiếp tục đem ly tâm với 13000 vòng/phút 10 phút 4°C Tiến hành loại bỏ dịch lỏng, thu lấy tủa DNA Đem vào tủ hút để hong khô thật khô tủa DNA khoảng 30 phút Kỹ thuật điện di: Mẫu DNA sau hong khô pha nước deion vào để hòa tan Pha môi trường điện di: Lấy 0,4g Agarose pha với 50ml dd TAE 1X Đun sơi lò vi sóng Lưu ý: đun bình chịu nhiệt có nắp khơng đậy kín Sau đun xong để nguội khoảng 60°C tiến hành đổ gel Bổ sung 5µl dung dịch nhuộm vào dung dịch agarose lắc bình nhẹ nhàng để trộn dung dịch tránh hình thành bọt khí Trước đổ gel cần lau giá đỗ sau cài lược Lược tạo giếng đặt phía cực âm điện di, tiến hành cân mặt phẳng giá bể giọt nước giá Sau dd gel nguội khoảng 60°C tiến hành đổ gel vào giá bể, đồ từ từ để mặt gel cân đợi khoảng tháo lược Sau đặt gel vào bể điện di Lấy mảnh giấy, dùng pipet hút 2µl thuốc nhuộm Mỗi chấm mặt giấy 2µl Dùng lấy 5µl ống mẫu DNA Sau chỉnh pipet lên 7µl đưa đầu pipet vào chấm tròn thuốc nhuộm đó, hút lên xuống 2-3 lần để dd mẫu DNA thuốc nhuộm trộn với Cho cẩn thận 7µl vào giếng điện di, ghi chép thứ tự nhóm Khi tra mẫu vào giếng, tay tì lên thành giá điện di làm điểm tựa, tay đưa pipet vào cho đầu côn vừa sát miệng giếng từ từ bơm Lưu ý: không cẩn thận làm tràn giếng vỡ miệng giếng Đặt gel vào cho chạy điện di điện 100V vòng 30-35 phút Sau chạy điện di xong, lấy từ từ gel đưa lên máy soi gel Lúc máy soi gel kết nối với máy tính Kết quan sát nhận xét Kết quan sát: DNA tổng số DNA bị đứt gãy rRNA Nhận xét: Tách chiết DNA tổng số tương đối thành công, chấp nhận được, có DNA bị đứt gãy q trình nghiền mẫu , nhiên lượng DNA thu nên vạch khơng sáng rõ, mờ, ngồi tạp chất protein, bị lẫn RNA nhiều Hầu hết mẫu có DNA, mẫu 13 15 tách thành công, mẫu 2, 3, DNA không q trình thao tác làm DNA tra mẫu điện di ... xong, lấy từ từ gel đưa lên máy soi gel Lúc máy soi gel kết nối với máy tính Kết quan sát nhận xét Kết quan sát: DNA tổng số DNA bị đứt gãy rRNA Nhận xét: Tách chiết DNA tổng số tương đối thành cơng,... được, có DNA bị đứt gãy trình nghiền mẫu , nhiên lượng DNA thu nên vạch khơng sáng rõ, mờ, ngồi tạp chất protein, bị lẫn RNA nhiều Hầu hết mẫu có DNA, mẫu 13 15 tách thành công, mẫu 2, 3, DNA khơng... Lược tạo giếng đặt phía cực âm điện di, tiến hành cân mặt phẳng giá bể giọt nước giá Sau dd gel nguội khoảng 60°C tiến hành đổ gel vào giá bể, đồ từ từ để mặt gel cân đợi khoảng tháo lược Sau đặt