1. Định lượng bằng đo quang (máy sinh hóa) ĐL glucose ĐL Ure Xác định hoạt độ enzyme GOT ĐL Bilirubin toàn phần Phương pháp Đo điểm cuối Đo 2 điểm Kinetic Nguyên lý (1) (2) (3) Bilirubin toàn phần với sự có mặt của chất hòa tan Caffein (hoặc DMSO) kết hợp với ion Diazo trong môi trường acid tạo azobillirubin có màu hồng. Đậm độ màu tỷ lệ thuận với nồng độ Bilirubin toàn phần, đo ở bước sóng 546nm. (4) Chuẩn bị Thuốc thử Thuốc thử RGT Glucose Dung dịch chuẩn nồng độ 5,55mmolL = 100mgdl Bệnh phẩm Huyết thanh hoặc huyết tương (Cần tách huyết tương, huyết thanh ra khỏi cục máu đông) hoặc cho chất quản bảo Natriflorua. Điều kiện phản ứng Bước sóng: 546nm Nhiệt độ: 370C Ống trắng: Thuốc thử Cóng đo: 1cm Thuốc thử Enyzm (ENZ): 8x 40 ml Cơ chất (SUB: 8 x10 ml Dung dịch chuẩn (STD): 1 x 3ml Urea có nồng độ chuẩn: 80 mgdl = 13.3 mmlol Bệnh phẩm Huyết thanh, huyết tương (Dùng các loại chất chống đông trừ amonium heparinate) Điều kiện đo phản ứng Bước sóng: 340 nm (334 – 365 nm) Ống trắng: nước cất Thuốc thử R1 (40ml ): + Tris ( đệm ) pH 7,8 (80 mmoll ) + L . Aspartat (240 mmoll) + MDH > 1200 Ul R2 (10ml): + Cetoglutarat (15 mmoll ) + NADH (0.18 mmoll) Dung dịch làm việc: thuốc thử R1 và R2 được pha theo tỷ lệ 4 : 1 Bệnh phẩm: Huyết thanh Huyết tương chống đông bằng EDTA hoặc Heparin Chú ý: Không được vỡ hồng cầu. Điều kiện xét nghiệm: Bước sóng: 340 nm Nhiệt độ 370C Ống trắng: nước cất Tiến hành Ống trắng: thuốc thử (1000μl) Ống chuẩn: dd chuẩn glucose (10 μl) + Thuốc thử Ống thử: Bệnh phẩm (10 μl) + Thuốc thử Các ống đều được lắc đều, ủ 370C trong vòng 10 15 phút ở nhiệt độ phòng. Sau đó đọc trên máy ở bước sóng 546 nm ( hoặc 500nm). Ống trắng: nước cất (1000μl) Ống chuẩn: dd ure chuẩn (10μl) + Enzym (1000μl) + Cơ chất (250μl) Ống thử: Bệnh phẩm (10μl) + Enzym (1000μl) + Cơ chất (250μl) Trước khi cơ chất thì các ống phải được lắc đều, ủ trong 1 phút, sau khi thêm thì lắc đều đo ngay sau 30 s, 60s theo phương pháp đo 2 điểm Nếu ko dùng enzyme và cơ chất thì có thể dùng dd làm việc (WR) 1000 μl để thay thế Dung dịch phản ứng: 1000 μl ủ nhiệt độ 370C trong 5 phút + Huyết thanh hoặc huyết tương: 100 μl Lắc đều, đo mật độ quang ở bước sóng 340 nm sau 1,2, 3 phút. Tính kết quả Cglucose (gL) = (Ethử Etrắng) x Cdd chuẩn (Echuẩn Etrắng) Cure = (Ethử (t1) Ethử(t0) Etrắng) x Cdd chuẩn (Echuẩn (t1) – Echuẩn (t0) Etrắng) Theo chuẩn Theo hệ số F Nhận định kết quả Lúc đói chỉ số đường huyết bt là 70 mgdL (3.9 mmolL) 92 mgdL (5.0 mmolL). Sau ăn: đường huyết bt là < 120 mgdL (6.6 mmolL), được đo trong vòng 1 – 2 giờ sau ăn. Chỉ số bình thường của urê là khoảng 2.5 7.5 mmoll. Bình thường: + Nam < 38 Ul ở 370C + Nữ < 32 Ul ở 370C Bệnh lý: gặp trong trường hợp hủy hoạt tb gan, tim Người lớn: 0,2 – 1,0 mgdL (3,4 – 17,1 μmolL). + Bilirubin trực tiếp: 0,0 – 0,4 mgdL (0 7 μmolL) + Bilirubin gián tiếp: 0,1 – 1 mgdL (1 17 μmolL). (1) (2) (3) (4) Bilirubin còn gọi là sắc tố mật, là sản phẩm thoái hoá của nhân porphyrin trong Hemoglobin của hồng cầu. Đời sống trung bình của 1 tế bào hồng cầu là khoảng 120 ngày. Khi hồng cầu chết đi, một lượng hemoglobin được giải phóng. Hemoglobin tiếp tục thoái hoá tạo thành bilirubin tự do. Bilirubin tự do (bilirubin gián tiếp) có đặc điểm là độc, không hoà tan trong nước nên không có mặt trong nước tiểu. Khi Bilirubin tự do ở trong máu được albumin vận chuyển tới gan, bilirubin tự do kết hợp với acid glucoronic ở trong gan để tạo thành bilirubin liên hợp (bilirubin trực tiếp). Bilirubin liên hợp có đặc điểm là không độc, tan trong nước nên có mặt trong nước tiểu. Bilirubin toàn phần trong máu bao gồm bilirubin tự do (bilirubin gián tiếp) và bilirubin liên hợp (bilirubin trực tiếp).
1 Định lượng đo quang (máy sinh hóa) Đo điểm cuối Đo điểm Xác định hoạt độ enzyme GOT Kinetic (1) (2) (3) ĐL glucose Phươn g pháp ĐL Ure Nguyên lý Chuẩn Thuốc thử bị - Thuốc thử RGT Glucose -Dung dịch chuẩn nồng độ 5,55mmol/L = 100mg/dl Bệnh phẩm Huyết huyết tương (Cần tách huyết tương, huyết khỏi cục máu đông) cho chất quản bảo Natriflorua Điều kiện phản ứng - Bước sóng: 546nm - Nhiệt độ: 370C - Ống trắng: Thuốc Thuốc thử Thuốc thử - Enyzm (ENZ): 8x - R1 (40ml ): 40 ml + Tris ( đệm ) pH - Cơ chất (SUB: x10 7,8 (80 mmol/l ) ml + L Aspartat (240 - Dung dịch chuẩn mmol/l) (STD): x 3ml + MDH > 1200 U/l - Urea có nồng độ - R2 (10ml): chuẩn: 80 mg/dl = 13.3 + Cetoglutarat (15 mmlo/l mmol/l ) Bệnh phẩm + NADH (0.18 mmol/l) - Huyết thanh, huyết - Dung dịch làm việc: tương (Dùng loại thuốc thử R1 R2 chất chống đông trừ pha theo tỷ lệ amonium heparinate) 4:1 Điều kiện đo phản Bệnh phẩm: ứng - Bước sóng: 340 nm - Huyết (334 – 365 nm) - Huyết tương chống - Ống trắng: nước cất đơng EDTA ĐL Bilirubin tồn phần Bilirubin tồn phần với có mặt chất hòa tan Caffein (hoặc DMSO) kết hợp với ion Diazo môi trường acid tạo azobillirubin có màu hồng Đậm độ màu tỷ lệ thuận với nồng độ Bilirubin toàn phần, đo bước sóng 546nm (4) thử - Cóng đo: 1cm Heparin Chú ý: Không vỡ hồng cầu Điều kiện xét nghiệm: - Bước sóng: 340 nm - Nhiệt độ 370C - Ống trắng: nước cất - Dung dịch phản ứng: 1000 μl ủ nhiệt độ 370C phút + Huyết huyết tương: 100 μl - Lắc đều, đo mật độ quang bước sóng 340 nm sau 1,2, phút - Ống trắng: thuốc - Ống trắng: nước cất thử (1000μl) (1000μl) - Ống chuẩn: dd - Ống chuẩn: dd ure chuẩn glucose (10 chuẩn (10μl) + μl) + Thuốc thử Enzym (1000μl) + - Ống thử: Bệnh Cơ chất (250μl) phẩm (10 μl) + - Ống thử: Bệnh phẩm Thuốc thử (10μl) + Enzym Các ống (1000μl) + Cơ chất (250μl) lắc đều, ủ 370C vòng 10 - 15 Trước chất Tiến phút nhiệt độ ống phải hành phòng Sau đọc lắc đều, ủ máy bước phút, sau thêm sóng 546 nm lắc đo ( 500nm) sau 30 s, 60s theo phương pháp đo điểm - Nếu ko dùng enzyme chất dùng dd làm việc (WR) 1000 μl để thay - Theo chuẩn Cglucose (g/L) = Cure = [(Ethử (t1) - Theo hệ số F [(Ethử -Etrắng) x Cdd Ethử(t0) - Etrắng) x Cdd Tính kết chuẩn]/ (Echuẩn -Etrắng) chuẩn] / (Echuẩn (t1) – Echuẩn (t0) - Etrắng) Nhận - Lúc đói số - Chỉ số bình thường - Bình thường: định đường huyết bt 70 urê khoảng 2.5 + Nam < 38 U/l kết mg/dL (3.9 mmol/L)- 7.5 mmol/l 370C 92 mg/dL (5.0 + Nữ < 32 U/l mmol/L) 370C - Sau ăn: đường - Bệnh lý: gặp -Người lớn: 0,2 – 1,0 mg/dL (3,4 – 17,1 μmol/L) + Bilirubin trực tiếp: 0,0 – 0,4 mg/dL (0 - μmol/L) huyết bt < 120 mg/dL (6.6 mmol/L), đo vòng – sau ăn trường hợp hủy hoạt + Bilirubin gián tb gan, tim tiếp: 0,1 – mg/dL (1- 17 μmol/L) (1) (2) (3) (4) Bilirubin gọi sắc tố mật, sản phẩm thoái hoá nhân porphyrin Hemoglobin hồng cầu Đời sống trung bình tế bào hồng cầu khoảng 120 ngày Khi hồng cầu chết đi, lượng hemoglobin giải phóng Hemoglobin tiếp tục thoái hoá tạo thành bilirubin tự Bilirubin tự (bilirubin gián tiếp) có đặc điểm độc, khơng hồ tan nước nên khơng có mặt nước tiểu Khi Bilirubin tự máu albumin vận chuyển tới gan, bilirubin tự kết hợp với acid glucoronic gan để tạo thành bilirubin liên hợp (bilirubin trực tiếp) Bilirubin liên hợp có đặc điểm khơng độc, tan nước nên có mặt nước tiểu Bilirubin toàn phần máu bao gồm bilirubin tự (bilirubin gián tiếp) bilirubin liên hợp (bilirubin trực tiếp) ... - Dung dịch phản ứng: 1000 μl ủ nhiệt độ 370C phút + Huyết huyết tương: 100 μl - Lắc đều, đo mật độ quang bước sóng 340 nm sau 1,2, phút - Ống trắng: thuốc - Ống trắng: nước cất thử (1000μl)... phải hành phòng Sau đọc lắc đều, ủ máy bước phút, sau thêm sóng 546 nm lắc đo ( 500nm) sau 30 s, 60s theo phương pháp đo điểm - Nếu ko dùng enzyme chất dùng dd làm việc (WR) 1000 μl để thay -...thử - Cóng đo: 1cm Heparin Chú ý: Khơng vỡ hồng cầu Điều kiện xét nghiệm: - Bước sóng: 340 nm - Nhiệt độ