Tạp chí Khoa học 2011:17b 158-166 Trường Đại học Cần Thơ NGHIÊN CỨU QUI TRÌNH ĐIỀU CHẾ BỘT ENZYME PAPAIN THÔ TỪ NHỰA ĐU ĐỦ Nguyễn Phú Thọ Dương Thị Hương Giang1 ABSTRACT This research aimed at studying the preparation procedure of crude papain powder from fresh papaya latex Suitable conditions for drying of the fresh papaya latex were spraydrying at 65oC within 10 hours, and the dried papaya latex obtained could be preserved for a period of months at 5oC Water was the best solvent for the extraction of enzyme papain from the dried latex with a ratio of 20ml water per gram dried latex Different solutions such as 5% Sorbitol, 5% sucrose, 3% manitol, 3% or 4% maltodextrin could be used for the protection of papain activity during freezed-drying In spray-drying the papain enzyme activity remained unchanged at the temperature of 100oC in the presence of 4% maltodextrin The obtained crude papain enzyme powder could be preserved for a period of months at 5oC Keywords: papaya latex, papain, maltodextrin, freezed drying, sprayed-drying Title: Studying the preparation procedure of crude papain powder from papaya latex TÓM TẮT Đề tài nhằm nghiên cứu qui trình điều chế bột papain thô từ nhựa đu đủ Kết nghiên cứu cho thấy sấy phun nhựa đu đủ tươi nhiệt độ 65oC 10 Nhựa đu đủ khơ bảo quản 5oC tháng Nước cất dung mơi thích hợp để trích ly enzyme papain thô từ nhựa đu đủ khô với tỉ lệ 20ml nước 1g nhựa khô Các dung dịch 5% sorbitol, 5% sucrose, 3% manitol hay 4% maltodextrin bảo vệ enzyme khơng hoạt tính q trình đơng khơ Trong điều kiện sấy phun enzyme papain bền mặt hoạt tính nhiệt độ 100°C với diện maltodextrin 4% (w/v) Bột enzyme papain thơ thành phẩm bảo quản khoảng thời gian tháng 5°C Từ khóa: nhựa đu đủ, papain, maltodextrin, đông khô, sấy phun GIỚI THIỆU Papain (EC 3.4.22.2) enzyme cystein protease li trích từ nhựa đu đủ Papain ứng dụng nhiều lĩnh vực khác như: Công nghiệp thực phẩm, dược phẩm, cơng nghệ hóa chất, Trong cơng nghiệp thực phẩm, papain sử dụng để làm mềm thịt, cá trước đóng hộp, làm tăng giá trị cảm quan thực phẩm Theo Nielsen Olsen (2002) papain có khả làm mềm thịt tốt protease từ vi sinh vật Trong sản xuất bia, papain sử dụng để ngăn chặn tượng vẩn đục bia giai đoạn ổn định sản phẩm So với phương pháp xử lý cặn khác việc sử dụng papain đơn giản, dễ thực có giá thành thấp Ngồi ra, sử dụng papain vào trình sản xuất nước mắm để rút ngắn thời gian lên men Papain ứng dụng làm đông tụ sữa giảm độc tố (Đỗ Tất Lợi, 1986) Viện NC & PTCNSH, Trường Đại học Cần Thơ 158 Tạp chí Khoa học 2011:17b 158-166 Trường Đại học Cần Thơ Trong dược phẩm, người ta sử dụng papain chất trợ tiêu hóa, thuốc tẩy giun, điều trị bệnh bỏng mắt, đục thủy tinh thể (Albert Philippe, 1998) Trong công nghiệp mỹ phẩm, nhờ khả thủy phân tế bào chết mà papain sử dụng chất làm trắng da, chất làm liền sẹo sinh học (Nguyễn An Tường, 2003) Trong công nghiệp sản xuất chất tẩy rửa, kem đánh răng, papain sử dụng chất bổ sung để làm chất bẩn có nguồn gốc protein Theo Helmut (1998) quốc gia sản xuất nhiều papain Ấn Độ, Srilanka, Zaire, Uranda Sản lượng papain thô hàng năm khoảng 500 trị giá 15 triệu USD Ở Việt Nam, đặc biệt vùng Đồng Sông Cửu Long, đu đủ trồng nhiều chủ yếu để lấy chín làm dưa Việc sử dụng đu đủ nguồn enzyme hạn chế Hiện thị trường có chế phẩm papain thương mại cơng ty lớn nước ngồi sản xuất Merk, Sigma giá thành cao Vì đề tài nhằm mục đích xây dựng qui trình đơn giản, tốn để sản xuất chế phẩm papain dạng bột, nhằm đáp ứng nhu cầu sử dụng enzyme nước, đồng thời làm tăng giá trị kinh tế từ đu đủ NGUYÊN VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Nguyên liệu + Nhựa đu đủ Nhựa thu từ giống đu đủ (Carica papaya L.) trồng huyện Chợ Mới, An Giang Nhựa đu đủ lấy xanh khoảng 10 tuần tuổi Thu nhựa vào lúc sáng sớm Dùng dao inox có đầu nhọn rạch dọc theo chỗ đường kính to nhất, lát cắt cách 3-5cm, không sâu 2cm Hứng lấy nhựa chảy cốc thủy tinh, sau lấy nhựa xong đậy kín bảo quản lạnh nhiệt độ -20oC + Hóa chất Coomasie Brillant Blue (CBB) G250 (Merck), Cystein (Sigma), Casein (Sigma), Trichloroacetic acid (TCA) (Prolabo), EDTA, Glucose (Trung Quốc), Sorbitol (Công nghiệp), Manitol (Merck), Sucrose (Biên Hòa), Maltodextrin (Cơng nghiệp), NaH2PO4 Na2HPO4 (Merck) 2.2 Phương pháp 2.2.1 Xác định hàm lượng protein Hàm lượng protein xác định theo phương pháp Bradfrod (1996) 2.2.2 Xác định hoạt tính papain Hoạt tính enzyme papain xác định dựa theo phương pháp Kunitz (1947) cải tiến, sử dụng casein làm chất thủy phân điều chỉnh để thực ống eppendorf Cho vào ống eppendorf 600 µl 1% (w/v) casein + 40 µl Cystein 20mM + 140µl đệm phosphate (pH = 7,5) + 20µl enzyme Ống đối chứng enzyme sử dụng enzyme bất hoạt Ủ lắc 10 phút, 37oC Ly tâm 13.000rpm, 159 Tạp chí Khoa học 2011:17b 158-166 Trường Đại học Cần Thơ 10 phút Ức chế phản ứng 600µl TCA% Dung dịch đo độ hấp thụ ánh sáng bước sóng 275nm quang phổ kế U-1500 (Hitachi, Japan) Đơn vị hoạt tính papain: Một đơn vị hoạt tính papain (Tyrosin Unit (TU)) lượng enzyme cần thiết để thủy phân casein cho 1µg tyrosine phút 37oC, pH =7,5 Hoạt tính riêng: số đơn vị hoạt tính enzyme mg protein (U/mg) 2.2.3 Xác định ẩm độ Xác định ẩm độ theo phương pháp sấy đến khối lượng không đổi Phần trăm độ ẩm X tính cơng thức: X=100*(G1-G2)/(G1-G) Trong đó: G1 khối lượng mẫu cốc trước sấy G2 khối lượng mẫu cốc sau sấy G khối lượng cốc 2.2.4 Sấy khô bảo quản nhựa đu đủ Nhựa đu đủ trải mỏng khay nhựa Khối lượng nhựa khay 1kg Tiến hành sấy nhiệt độ 35, 45, 55, 65, 75 85ºC Hoạt tính papain nhựa xác định thời điểm sấy 0, 2, 6, 10, 14, 18, 22, 26 Nhựa đu đủ sau sấy điều kiện thích hợp bố trí bảo quản bọc nilon tránh ánh sáng nhiệt độ 27oC, 5ºC -20ºC Xác định hoạt tính enzyme nhựa khơ thời gian từ 1-9 tháng bảo quản 2.2.5 Trích ly papain từ nhựa đu đủ khô Enzyme papain nhựa đu đủ sấy khơ ly trích nước cất đệm phostphate 50mM, pH=7,0 Nước cất đệm cho vào cốc chứa 1g nhựa khô với thể tích khác 10, 20, 30, 40, 50 60ml Khuấy máy khuấy từ 30 phút Sau ly tâm 13.000vòng/phút, 10 phút, 4oC Bỏ cặn, lấy dịch enzyme bên để xác định hoạt tính papain 2.2.6 Ảnh hưởng chất bảo quản lên hoạt tính papain q trình đơng khơ Papain trích ly từ nhựa khơ nước cất với tỷ lệ nhựa khơ: nước thích hợp cốc, cốc chứa 20ml dung dịch enzyme, bổ sung chất bảo vệ khác sorbitol 5%, sucrose 5%, manitol 3% maltodextrin 4% (w/v), cốc đối chứng khơng có chất bảo vệ Sau dung dịch papain sấy đơng khơ Kiểm tra hoạt tính enzyme sau sấy 2.2.7 Ảnh hưởng nhiệt độ lên hoạt tính papain q trình sấy phun bảo quản bột papain Nhựa khơ ly trích nước cất với tỷ lệ nhựa khơ: nước thích hợp Dung dịch sau trích ly bổ sung chất bảo vệ maltodextrin với nồng độ 4% (w/v) Mẫu đối chứng khơng có chất bảo vệ Tiến hành sấy phun nhiệt độ từ 100ºC đến 170ºC Kiểm tra hoạt tính enzyme sau sấy 160 Tạp chí Khoa học 2011:17b 158-166 Trường Đại học Cần Thơ Bột papain sau sấy phun 100ºC bố trí bảo quản bọc nilon tránh ánh sáng nhiệt độ 27oC, 5ºC -20ºC Ghi nhận thay đổi hoạt tính enzyme theo thời gian bảo quản KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1 Ảnh hưởng nhiệt độ thời gian lên q trình sấy khơ nhựa đu đủ 18 17 16 15 14 13 12 11 35°C 100 35°C 45°C 80 45°C 55°C 65°C 75°C 85°C 10 14 18 22 26 Thời gian sấy (giờ) Hình 1: Ảnh hưởng nhiệt độ lên hoạt tính riêng papain nhựa đu đủ tươi theo thời gian sấy Độ ẩm (%) Hoạt tính riêng (TU/mg) Nhiệt độ thời gian sấy hai nhân tố định chất lượng nhựa khơ Nhiệt độ cao gây biến tính làm hoạt tính enzyme Ngược lại sấy nhiệt độ thấp ẩm độ nhựa cao, khó bảo quản enzyme bị giảm hoạt tính q trình tự thủy phân nhựa ẩm theo thời gian Kết khảo sát hoạt tính riêng papain theo nhiệt độ thời gian sấy (Hình 1) cho thấy hoạt tính papain ổn định 65-75oC khoảng 10 sấy Ở nhiệt độ cao hay thấp hoạt tính papain giảm mạnh theo thời gian Khảo sát biến đổi ẩm độ nhựa theo nhiệt độ thời gian (Hình 2) cho thấy ẩm độ nhựa đạt 10% nhiệt độ 65 oC; 75oC thời gian sấy 10giờ Như kết hợp hai nhân tố ẩm độ hoạt tính papain nhựa khơ thấy điều kiện để sấy nhựa đu đủ nhiệt độ khoảng 65-75°C, thời gian sấy 10 tốt để độ ẩm nhựa thô 10% hoạt tính enzyme ổn định (chỉ giảm 3% so với ban đầu) Kết tương tự với nghiên cứu Krishnaiah et al (2002), có khác phương pháp sấy, theo tác giả nhựa đu đủ sấy chân khơng khoảng nhiệt độ 65°C-80°C 55°C 60 65°C 40 75°C 20 85°C 10 14 18 22 26 Thời gian sấy (giờ) Hình 2: Biến đổi ẩm độ nhựa đu đủ tươi theo thời gian sấy 161 Tạp chí Khoa học 2011:17b 158-166 Trường Đại học Cần Thơ 3.2 Điều kiện tồn trữ nhựa khô 18 17 16 15 14 13 12 11 10 27°C 5°C -20°C Hàm lượng protein (mg/ml) Hoạt tính riêng (TU/mg) Theo kết Hình hoạt tính papain nhựa khô giảm nhanh (11%) sau tháng bảo quản nhiệt độ 27oC Với nhiệt độ 5°C –20°C hoạt tính papain 2.2 5°C 1.8 -20°C 1.6 1.4 1.2 10 12 14 Thời gian bảo quản (tháng) Hình 3: Biến đổi hoạt tính riêng papain nhựa khô theo thời gian bảo quản 27°C 2 10 12 14 Thời gian bảo quản (tháng) Hình 4: Biến đổi hàm lượng protein nhựa khô theo thời gian bảo quản nhựa giảm chậm sau tháng bảo quản bắt đầu giảm nhanh tháng thứ 10 Về hàm lượng protein, kết khảo sát (Hình 4) cho thấy lượng protein nhựa khô giảm nhanh bảo quản nhiệt độ 27oC 5°C Ở -20°C hàm lượng protein giảm chậm Có thể thấy nhiệt độ phòng 5oC enzyme protease hoạt động tác động lên protein/enzyme có nhựa Nhiệt độ -20oC kìm hãm hoạt động protease tốt Như nhựa đu đủ khơ bảo quản nhiệt độ 27oC hai tháng, nhiệt độ thấp 5oC hay -20oC thời gian tồn trữ kéo dài (9 tháng) Tương tự, theo Krishnaiah et al (2002), sản phẩm nhựa đu đủ khơ sau sấy chân khơng bảo quản 5°C khoảng 6-12 tháng 3.3 Trích ly papain từ nhựa đu đủ sấy khơ Hoạt tính riêng (TU/mg) Enzyme thơ papain tách từ nhựa khơ dung dịch đệm thích hợp Nhằm mục đích tìm biện pháp đơn giản với dung mơi trích ly khơng độc hại tốn kém, papain từ nhựa đu đủ khơ trích ly nước cất dung dịch đệm phosphate 50mM, pH 7,0 Kết phân tích Anova (Hình 5) cho thấy hoạt tính papain khơng khác biệt có ý nghĩa mức độ thống kê 5% trích ly từ nhựa sấy 20 16 12 Đệm Nước 1/10 1/201/30 1/40 1/50 1/60 Tỷ lệ nhựa khơ: dung mơi trích ly (g/ml) Hình 5: Biến đổi hoạt tính riêng papain theo tỉ lệ dung mơi trích ly 162 Tạp chí Khoa học 2011:17b 158-166 Trường Đại học Cần Thơ khô dung dịch đệm hay nước tỉ lệ trích ly khác Tuy nhiên, thực nghiệm cho thấy tỉ lệ nhựa khô: dung dịch trích ly tương ứng 1g:20ml thích hợp Ở tỉ lệ trích ly thấp dung dịch huyền phù đậm đặc, có độ nhớt cao, hiệu suất enzyme thu hồi thấp Ở tỉ lệ trích ly cao dung dịch enzyme nhận với thể tích lớn thời gian sấy khô kéo dài 3.4 Ảnh hưởng chất bảo vệ lên hoạt tính papain q trình đơng khơ Trong q trình đơng khơ enzyme hoạt tính bền với thời gian Hoạt tính riêng (TU/mg) 18 16 Sorbitol Glucose Sucrose Manitol Maltodextrin 14 12 10 2 Nồng độ chất bảo vệ ( ) Hình 6: Ảnh hưởng chất bảo quản khác nồng độ chúng lên hoạt tính riêng papain q trình đơng khơ Một số nghiên cứu cho thấy hợp chất polyol có khả bảo vệ tốt đông khô hợp chất sinh học protein, enzyme hay tế bào vi sinh vật (Zhao Zhang, 2005) Khảo sát ảnh hưởng chất bảo vệ sorbitol, glucose, sucrose, manitol maltodextrin với nồng độ khác cho thấy sản phẩm papain thô nhận dạng bột khô không bị hút ẩm trở lại, trừ glucose Kết (Hình 6) cho thấy khơng có khác biệt có ý nghĩa mức độ thống kê 5% chất bảo vệ khác nồng độ khác Hoạt tính riêng papain 17,16 TU/mg với sorbitol 5%, 17,48 TU/mg với sucrose 5%, 17,45 TU/mg với manitol 3% 16,49 TU/mg với maltodextrin 4%, khơng có chất bảo vệ hoạt tính riêng 14,45 TU/mg Như hoạt tính papain ổn định tốt q trình đơng khơ có chất bảo vệ Có khả hợp chất polyol liên kết với enzyme thông qua tương tác hydro thay cho lớp áo nước bên phân tử enzyme, giúp ổn định cấu trúc, phân tử enzyme khơng bị biến tính nước q trình sấy khơ So với kết nghiên cứu Trần Anh Dũng (2006) mannitol 5% giúp ổn định hoạt tính tốt cho bromelain trích ty từ khóm (protease nhóm với papain) Và theo Zhao Zhang (2005) chất trehalose, lactose, sucrose, mantose, sorbitol, manitol có khả ổn định tốt hoạt tính enzyme Tuy nhiên hợp chất polyol bảo vệ nói thuộc nhóm đường phân tử nhỏ (mono- hay disaccharide), dễ bị nóng chảy bị caramel hóa xử lý nhiệt độ cao, thêm vào giá thành lại cao so với maltodextrin Do 163 Tạp chí Khoa học 2011:17b 158-166 Trường Đại học Cần Thơ maltodextrin xem chất bảo vệ an tồn có nhiều ưu điểm giá thành thấp, khơng bị caramel hóa, chất phụ gia thường dùng công nghệ chế biến thực phẩm có khả bảo vệ papain tốt q trình đơng khơ 3.5 Ảnh hưởng nhiệt độ lên hoạt tính papain trình sấy phun 12 17 10 16 Độ ẩm (%) Hoạt tính riêng (TU/mg) 18 15 14 13 12 100 110 120 130 140 150 160 170 180 100 110 120 130 140 150 160 170 180 o Nhiệt độ sấy (oC) Nhiệt độ sấy ( C) Hình 7: Thay đổi hoạt tính đặc hiệu papain theo nhiệt độ trình sấy phun Hình 8: Thay đổi độ ẩm sản phẩm theo nhiệt độ trình sấy phun Sấy phun biện pháp để bảo quản sản phẩm thời gian lâu, so với đông khô sấy phun nhanh chi phí thấp Khảo sát hoạt tính papain với chất bảo vệ maltodextrin 4% nhiệt độ sấy phun khác (Hình 7) cho thấy hoạt tính enzyme ổn định (16,82 TU/mg) nhiệt độ 100°C (tương ứng với nhiệt độ đầu 80°C) Nhiệt độ phù hợp với báo cáo Piggott (2002) Theo tác giả sấy phun với nhiệt độ đầu 80°C áp dụng để sấy khô số enzyme chịu nhiệt Ở nhiệt độ sấy cao 100°C hoạt tính giảm mạnh bột chuyển màu sậm Xác định ẩm độ bột papain sau sấy cho thấy nhiệt độ sấy 100oC hàm ẩm bột đáp ứng yêu cầu bảo quản khoảng 8% (Hình 8) 3.6 Điều kiện bảo quản bột papain sấy phun thành phẩm Hoạt tính riêng (TU/mg) Bột papain sấy phun thành phẩm bảo quản nhiệt độ 27oC, 5oC -20oC Kết xác định hoạt tính riêng (Hình 9) bột cho thấy nhiệt độ 27oC hoạt tính papain giảm nhanh (giảm 15%) tháng đầu tồn trữ Ở 5oC 18 °C 17 °C 16 - °C 15 14 Thời gian bảo quản (tháng) Hình 9: Biến đổi hoạt tính đặc hiệu papain bột thành phẩm theo thiệt độ thời gian 164 Tạp chí Khoa học 2011:17b 158-166 Trường Đại học Cần Thơ -20oC hoạt tính ổn định, khơng có khác biệt ý nghĩa mặt thống kê hai nhiệt độ Khảo sát hoạt tính bột papain thành phẩm cho thấy (Bảng 1) hoạt tính riêng papain thành phẩm khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê mức độ 5% so với chế phẩm papain thương mại Merck Tuy nhiên, số đơn vị hoạt tính papain 1mg bột thành phẩm lại cao lần so với bột papain thương mại Như sử dụng lượng bột papain bột papain thành phẩm cho hiệu thủy phân cao gấp lần so với bột papain thương mại Merck Bảng 1: So sánh hoạt tính bột papain thành phẩm với papain thương mại Bột papain Hoạt tính* (TU/mg bột) Hoạt tính riêng* (TU/mg protein) Papain thành phẩm 15,83 16,82a Papain thương mại (Merck) 3,78 17,38a * Trung bình ba lần lặp lại Các ký tự giống cột khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê mức 5% KẾT LUẬN Đề tài bước đầu xây dựng qui trình thu nhận bột enzyme papain thơ từ nhựa đu đủ sấy khô Do nhựa đu đủ tươi dễ bị hoạt tính enzyme papain nhiệt độ phòng, cần thiết phải sấy khơ nhựa bảo quản lạnh (5oC) để sử dụng thời gian lâu Enzyme papain thơ trích ly từ nhựa đu đủ sấy khơ đơn giản nước cất với tỉ lệ 20ml nước 1g nhựa khơ Có thể sấy phun sấy đơng khơ dịch trích enzyme thơ với chất đường bảo quản khác Tuy nhiên mặt kinh tế sấy phun dịch trích ly enzyme papain nhiệt độ 100oC với chất bảo vệ 4% maltodextrin tối ưu cho sản phẩm, thời gian sấy phun ngắn chi phí thấp Về mặt chất lượng bột enzyme papain thô thành phẩm không thua bột thô papain thương mại Merck thị trường Bột enzyme thành phẩm cần bảo quản nhiệt độ lạnh (khoảng 5oC) Trong tương lai cần nghiên cứu thêm việc ứng dụng sản phẩm lĩnh vực khác thực phẩm chức (trợ tiêu hóa cho người già trẻ con), mỹ phẩm (kem tẩy tế bào chết), lên men bia (chống cặn lắng), chế biến thịt thủy hải sản (làm mềm thịt), hay lên men nước mắm ngắn ngày… TÀI LIỆU THAM KHẢO Albert, L and D M Philippe, 1998 The cystein proteases from the of carica papaya Latex Drugs and the pharmaceutical Sciences Vol 84, chapter 6, 107 - 129 pharmaceutical Enzymes University of Ghent Belgium Arnon, R., 1970 Papain Methods in Enzymology Vol 19,G Perlmann and L Lorand, Academic Press, NY, 226 Balls, A and H Lineweaver, 1939 Isolation and Properties of Crystalline Papain J Biol Chem 130, 669 Barrett, A and D Buttle, 1985 Names and Numbers of Papaya Proteinases Biochem J 228 165 Tạp chí Khoa học 2011:17b 158-166 Trường Đại học Cần Thơ Bradford, M.M., 1976 A rapid and sensitive mocrogram quantities of protein utilizing the principle of protein dye biding Anal Biochem 72, 248-254 Đỗ Tất Lợi, 1986 Những thuốc vị thuốc Việt Nam Hà Nội: Nhà xuất Khoa học kỹ thuật Helmut, U., 1998 Industrial enzymes and their applications John Wiley & Sons, Inc.147-150 Krishnaiah D., B Awang, S Rosalam and A Buhri, 2002 Commercialisation of papain enzyme from papaya Omar, R., Ali Rahman, Z., Latif, M.T., Lihan, T and Adam J.H (Eds.): 244-250 Proceedings of the Regional Symposium on Environment and Natural Resources (Vol 1) 10-11th April 2002, Hotel Renaissance Kuala Lumpur, Malaysia Kunitz M.,1947 Determination of proteolytic activity by the casein digestion method J Gen Physiol 30, 291 Nguyễn An Tường, 2003 Rau củ với sức khỏe sắc đẹp Khoa học phổ thông số 671, Trang 32 Nielsen, P M and H S Olsen, 2002 Emzymic modification of food protein In Enzymes in food technology Whitehurst, R J, Ed UK: Sheffield Academic Press Ltd Piggott, R., 2002 Commercial emzyme production and genetic modification of source organisms In Enzymes in food technology.Whitehurst, R J, Ed UK: Sheffield Academic Press Ltd Trần Anh Dũng, 2006 Nghiên cứu sản xuất bột bromelain tinh từ phụ phẩm vỏ khóm Luận văn tốt nghiệp ngành Công nghệ Sinh học Đại học Cần Thơ Zhao, G And G Zhang, 2005 Effect of protective agent, freezing temperature rehydration media on viability of malolactic bacteria subjected to freezing-drying 166 ... chất bảo vệ Tiến hành sấy phun nhiệt độ từ 100ºC đến 170ºC Kiểm tra hoạt tính enzyme sau sấy 160 Tạp chí Khoa học 2011:17b 158- 166 Trường Đại học Cần Thơ Bột papain sau sấy phun 100ºC bố trí bảo... papain theo nhiệt độ trình sấy phun Hình 8: Thay đổi độ ẩm sản phẩm theo nhiệt độ trình sấy phun Sấy phun biện pháp để bảo quản sản phẩm thời gian lâu, so với đông khô sấy phun nhanh chi phí thấp Khảo... 669 Barrett, A and D Buttle, 198 5 Names and Numbers of Papaya Proteinases Biochem J 228 165 Tạp chí Khoa học 2011:17b 158- 166 Trường Đại học Cần Thơ Bradford, M.M., 197 6 A rapid and sensitive mocrogram