XÁC ĐỊNH áp SUẤT THẨM THẤU DỊCH SINH vật

BÀI 4:XÁC ĐỊNH ÁP SUẤT THẨM THẤU DỊCH SINH VẬT BẰNG PHƯƠNG PHÁP BAGIERAST I Mục đích : Sinh viên hiểu phương pháp Bagierast cách xác dịnh áp suất thẩm thấu áp dụng vào việc xác định áp suất thẩm thấu dịch sinh vật II Nguyên tắc : Áp suất thẩm thấu dung dịch áp suất hạt chất hòa tan dung dịch gây hạt trạng thái bình thường chiếm thể tích giống thể tích dung dịch Đối với dung dịch loãng, áp suất thẩm thấu tỉ lệ thuận với nồng độ chất tan nhiệt độ tuyệt đối P = C.R.T (1) đó: P áp suất thẩm thấu dung dịch C nồng độ dung dịch (mol/l) R số khí 0,082 l.atm/K T nhiệt độ tuyệt đối Kelvin Phương trình (1) Van’t – Hoff đưa áp dụng với dung dịch khơng phân ly, dung dịch phân ly hồn tồn áp suất thẩm thấu tinh theo cơng thức: P = n.C.R.T (2) n số ion phân tử chất tan phân ly Nếu độ phân ly chất điện phân α áp suất thẩm thấu dung dịch tính bằng: P = α.n.C.R.T (3) Xác định áp suất thẩm thấu môi trường lỏng dịch sinh vật tiến hành rộng rãi nghiên cứu sinh vật Sự không thay đổi thông số môi trường bên (máu, lympho) bảo đảm tồn chế điều hòa thần kinh thể dịch phức tạp quan tiết phức tạp đặc biệt Để xác định áp suất thẩm thấu dung dịch sinh vật thường sử dụng phương pháp gián tiếp: dựa phu thuộc lực đàn hồi dung dịch vào nồng độ dung dịch Sự giảm lực đàn hồi dung dịch so với dung môi giống áp suất thẩm thấu dựa giảm lực đàn hồi dung dịch so với dung môi Phương pháp đo thể tích lỗng nhỏ nhiệt độ bình thường khơng làm thay đổi tính chất keo sinh vật Cơ sở phương pháp áp suất thẩm thấu dung dịch nghiên cứu so sánh với áp suất thẩm thấu dung dịch chuẩn III Dụng cụ :  Kính hiển vi có trắc vi thị kính  50ml Huyết ngun chất Hình 5.1 Kính hiển vi quang học Hình 5.2 Huyết tương (plasma, phần màu vàng)  Đĩa đồng hồ, mao quản, lamen  Đèn cồn, 50g parafin  10 Ống nghiệm loại 5-10ml, giá ống nghiệm  Giá pipet, pipet loại 5ml ,50 mao quản dài 5-7cm  250ml Nước cất  250ml Dung dịch NaCl 1%  Lam kính IV Tiến hành : - Dung dịch kiểm tra Chuẩn bị số mao quản đường kính 1mm dài 6-7 cm Pha dung dịch chuẩn NaCl đĩa đồng hồ với nồng độ: 0,1%; 0.3%; 0,5%; 0.7%; 1% - Chuẩn bị tiêu soi kính hiền vi: Rót huyết vào đồng hồ Nghiêng mao quản nhúng đầu vào huyết Cho mao dẫn huyết dâng lên đến mao quản, lấy mao quản dốc xuống cho huyết chảy tiếp đầu kín mao quản Khi mép dung dịch huyết cách đầu mao quản 2mm nhúng đầu mao quản vào dung dịch NaCl với nồng độ khác Do mao dẫn, dung dịch NaCl chuẩn đẩy dịch huyết vị trí cũ tao nên mao quản bọt khí phân cách dịch huyết dung dịch muối chuẩn Đặt mao quản lên lam kính Dùng que thủy tinh hơ nóng cồn sáp vào cục parafin cho parafin nhỏ xuống dính kín đầu mao quản - Quan sát chuyển động bọt khí : Đặt lam kính có gắn mao quản lên kính hiển vi có gắn trắc vi thị kính cho mép dung dịch trùng với điểm giao đường chéo trắc vi thị kính theo dõi chuyển động mép dung dịch Ghi lại kết hướng dẫn Tương tự với dung dịch khảo sát khác vòng cung bọt khí đứng n, khơng dịch chuyển khỏi vị trí ban đầu Vòng cung chuyển dịch từ phía dung dịch có áp suất lớn (tương ứng có lực đan hồi lớn hơn) sang phia dung dịch có áp suất thẩm thấu bé (tương ứng với lực đàn hồi bé hơn) Cụ thể thể tich dung dịch có áp suất thẩm thấu bé giảm đi, dung dịch có áp xuất thẩm thấu lớn tăng lên (do có tượng phân tử nước bay từ dung dịch có nồng độ chất tan sang dung dịch có nồng độ chất tan nhiều) Trong quan sát thấy vòng cung chuyển động phía khác t kết luận nồng độ dung dịch nghiên cứu nằm nồng độ dung dịch chuẩn - Khi tiếp tục pha dung dịch NaCl chuẩn theo dõi hướng chuyển động vòng cung Cuối ta tìm dung dịch NaCl chuẩn có nồng độ phần trăm dung dịch huyết thanh, với kết bọt khí đứng yên V Kết : [C] Dung dịch chuẩn NaCl(%) 0.1 0.3 0.5 0.7 - Ở dung dịch Ở dung dịch Ở dung dịch Ở dung dịch Dung dịch nghiên cứu Hướng chuyển động Huyết Huyết Huyết Huyết Huyết NaCl 0,3%: bọt khí di chuyển sang huyết tương NaCl 0,5%: bọt khí di chuyển sang huyết tương NaCl 0,7%: bọt khí khơng di chuyển NaCl 1%: bọt khí di chuyển sang NaCl Nồng độ đo bọt khí cân C% = 0,7% Chuyển đổi 0.7% dung dịch NaCl nồng độ mol: Phân tử NaCl phân ly thành ion Do đó: Giá trị áp suất thẩm thấu : P =nCRT= x x 0.082 x (273 + 25) = 5.887 (atm) Nhận xét: - Dung dịch nhiên cứu nằm nồng độ khoảng 0.7% - Sự dịch chuyển bọt khí chênh lệch nồng dộ dung dịch bọt khí di chuyển theo chiều từ nơi có nồng độ cao đến nơi có nồng độ thấp  ... chuyển dịch từ phía dung dịch có áp suất lớn (tương ứng có lực đan hồi lớn hơn) sang phia dung dịch có áp suất thẩm thấu bé (tương ứng với lực đàn hồi bé hơn) Cụ thể thể tich dung dịch có áp suất thẩm. . .dịch so với dung mơi Phương pháp đo thể tích lỗng nhỏ nhiệt độ bình thường khơng làm thay đổi tính chất keo sinh vật Cơ sở phương pháp áp suất thẩm thấu dung dịch nghiên cứu so sánh với áp suất. .. tich dung dịch có áp suất thẩm thấu bé giảm đi, dung dịch có áp xuất thẩm thấu lớn tăng lên (do có tượng phân tử nước bay từ dung dịch có nồng độ chất tan sang dung dịch có nồng độ chất tan nhiều)