Khảo sát điều kiện trồng nấm hoàng kim (pleurotus citrinopilratus) trên giá thể vỏ mía

Thí nghiệm 4: Khảo sát ảnh hưởng của nồng độ nước vôi ngâm đến mật độ của tơ nấm Hoàng kim trên giá thể vỏ mía.. Thí nghiệm 5: Khảo sát ảnh hưởng của một số nguyên tố khoáng vi lượng đến

ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP

( Pleurotus citrinopileatus ) TRÊN GIÁ TH Ể VỎ MÍA

Ngành: CÔNG NGH Ệ SINH HỌC

Chuyên ngành: CÔNG NGH Ệ SINH HỌC

Giảng viên hướng dẫn: ThS TRẦN THỊ TƯỞNG AN

Sinh viên thực hiện: PHẠM NHƯ NGỌC MSSV: 1311101020 Lớp: 13DSH04

TP Hồ Chí Minh, Năm 2017

hướng dẫn khoa học của ThS Trần Thị Tưởng An Các nội dung nghiên cứu, kết

quả trong đề tài này là trung thực và chưa công bố dưới bất kỳ hình thức nào trước đây Những số liệu trong các bảng biểu phục vụ cho việc phân tích, nhận xét, đánh giá được tôi thu thập từ các nguồn khác nhau có ghi rõ trong phần tài liệu tham

khảo

Ngoài ra, trong khóa luận còn sử dụng một số nhận xét, đánh giá cũng như

số liệu của các tác giả khác, cơ quan tổ chức khác đều có trích dẫn và chú thích nguồn gốc

Nếu phát hiện có bất kỳ sự gian lận nào tôi xin hoàn toàn chịu trách nhiệm

về nội dung khóa luận của mình

TP H ồ Chí Minh, ngày 01 tháng 05 năm 2017

Người cam đoan

Ph ạm Như Ngọc

trợ về mọi mặt từ rất nhiều người nên lời đầu tiên, tôi xin bày tỏ lòng biết ơn của mình tới tất cả mọi người

Trước hết tôi xin được gửi lời cám ơn chân thành đến ThS Trần Thị Tưởng

An người đã trực tiếp hướng dẫn tôi thực hiện toàn bộ đề tài này

Xin cám ơn các thầy cô, các anh chị và các bạn ở phòng thí nghiệm Nhiên

Liệu Sinh Học và Biomass trường Đại học Bách Khoa thành phố Hồ Chí Minh đã

hỗ trợ kinh phí và máy móc, trang thiết bị và nhiệt tình giúp đỡ tôi trong thời gian

thực hiện đề tài này

Xin cám ơn Nước mía Nhật Huy đã cung cấp cho tôi nguyên liệu vỏ mía trong suốt quá trình thực hiện đề tài

Xin gửi lời cám ơn đến Ban Giám Hiệu trường Đại Học Công Nghệ thành

phố Hồ Chí Minh cùng tất cả các thầy cô của khoa Công Nghệ Sinh Học – Thực

Phẩm – Môi Trường đã tận tình giảng dạy, cung cấp cho tôi những kiến thức quý báu cũng như kỹ năng cần thiết trong suốt 4 năm qua để tôi có thể hoàn thành tốt

đề tài khóa luận của mình

Xin gửi lời cảm ơn đến tập thể lớp 13DSH04 đã luôn sát cánh bên tôi, giúp

đỡ tôi trong suốt khoảng thời gian học tập tại trường

Cuối cùng xin cho tôi gửi lời cám ơn sâu sắc nhất đến gia đình, hậu phương vững chắc của tôi đã luôn bên tôi, ủng hộ, động viên và tạo mọi điều kiện

tốt nhất cho tôi vững bước trên con đường học tập

TP H ồ Chí Minh, ngày 01 tháng 05 năm 2017

Xin viên th ực hiện

Ph ạm Như Ngọc

MỤC LỤC

MỤC LỤC i

DANH MỤC CÁC BẢNG iv

DANH MỤC HÌNH ẢNH v

DANH MỤC SƠ ĐỒ vii

MỞ ĐẦU 1

1 Lý do chọn đề tài 1

2 Mục đích nghiên cứu 2

3 Nhiệm vụ nghiên cứu 2

4 Đối tượng và phạm vi nghiên cứu 2

CHƯƠNG 1 TỔNG QUAN TÀI LIỆU 3

1.1 Giới thiệu nguyên liệu vỏ mía 3

1.1.1 Vỏ mía 3

1.1.2 Thành phần của vỏ mía 3

1.2 Tổng quan về nấm hoàng kim 6

1.2.1 Giới thiệu về nấm hoàng kim 6

1.2.2 Vị trí và phân loại 7

1.2.3 Đặc điểm sinh học của nấm hoàng kim 7

1.2.4 Đặc điểm sinh trưởng của nấm hoàng kim 10

1.2.5 Một số điểm lưu ý trong quá trình trồng nấm hoàng kim 10

1.2.6 Giá trị dinh dưỡng của nấm hoàng kim 12

1.2.7 Giá trị dược liệu của nấm hoàng kim 15

1.2.8 Thực trạng việc trồng nấm hoàng kim ở Việt Nam và trên thế giới 15

1.2.9 Tiềm năng phát triển của nấm Hoàng kim tại Việt Nam 17

CHƯƠNG 2 VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 18

2.1 Vật liệu và thiết bị 18

2.1.2 Thiết bị và dụng cụ thí nghiệm 29

2.2 Phương pháp nghiên cứu 21

2.2.1 Thí nghiệm 1: Khảo sát đặc điểm của nấm hoàng kim trên môi trường thạch (giống cấp 1) 21

2.2.2 Thí nghiệm 2: Khảo sát đặc điểm của nấm hoàng kim trên môi trường hạt thóc (giống cấp 2) 23

2.2.3 Thí nghiệm 3: Khảo sát ảnh hưởng của thời gian ngâm nước vôi đến tốc độ lan tơ nấm hoàng kim 25

2.2.4 Thí nghiệm 4: Khảo sát ảnh hưởng của nồng độ nước vôi ngâm đến mật độ của tơ nấm Hoàng kim trên giá thể vỏ mía 31

2.4.5 Thí nghiệm 5: Khảo sát ảnh hưởng của một số nguyên tố khoáng vi lượng đến tốc độ lan tơ nấm hoàng kim trên giá thể vỏ mía 32

2.5 Phương pháp thu nhận kết quả 34

2.6 Xử lý số liệu 34

CHƯƠNG 3 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 35

3.1 Thí nghiệm 1: Khảo sát đặc điểm của hoàng kim trên môi trường thạch (giống cấp 1) 35

3.2 Thí nghiệm 2: Khảo đặc điểm của nấm hoàng kim trên môi trường hạt thóc (giống cấp 2) 38

3.3 Thí nghiệm 3: Khảo sát ảnh hưởng của thời gian ngâm nước vôi đến tốc độ lan tơ nấm hoàng trên giá thể vỏ mía 41

3.4 Thí nghiệm 4: Khảo sát ảnh hưởng của nồng độ nước vôi ngâm đến tốc độ lan tơ nấm hoàng kim 45

3.5 Thí nghiệm 5: Khảo sát ảnh hưởng của vôi một số nguyên tố khoáng vi lượng đến tốc độ lan tơ nấm hoàng kim trên giá thể vỏ mía 47

3.6 Một số thành phần hóa học trong mẫu vỏ mía phơi khô 51

3.7 Quả thể nấm hoàng kim 52

3.8 Quy trình trồng nấm hoàng kim trên giá thể vỏ mía 54

CHƯƠNG 4 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 55

4.1 Kết luận 55 4.2 Đề nghị 55 TÀI LIỆU THAM KHẢO 57

PHỤ LỤC

DANH M ỤC CÁC BẢNG

Bảng 1 1 Một số thành phần hóa học của hoàng kim 12

Bảng 1 2 Thành phần amino acid có trong nấm hoàng kim 13

Bảng 1 3 Thành phần vitamin có trong nấm hoàng kim 13

Bảng 1 4 Thành phần khoáng chất có trong nấm hoàng kim 14

Bảng 2 1 Các loại hóa chất sử dụng 19

Bảng 2 2 Các nghiệm thức của thí nghiệm 5 32

Bảng 3 1 Độ dài tơ nấm trên môi trường thạch (cấp 1) theo thời gian 37

Bảng 3 2 Độ dài tơ nấm trên môi trường hạt (cấp 2) theo thời gian 39

Bảng 3 3 Ảnh hưởng của thời gian ngâm vôi đến chiều dài của tơ nấm hoàng kim43 Bảng 3 4 Ảnh hưởng của nồng độ vôi ngâm đến chiều dài của tơ nấm hoàng kim 46 Bảng 3 5 Sự ảnh hưởng của một số nguyên tố khoáng vi lượng đến chiều dài sợi nấm hoàng kim 49

DANH MỤC HÌNH ẢNH

Hình 1 1 Máy bào vỏ mía 3

Hình 1 2 Nấm hoàng kim (P citrinopileatus) 7

Hình 1 3 Nấm hoàng kim 8

Hình 1 4 Chu trình sinh trưởng của nấm hoàng kim 8

Hình 1 5 Hình dạng quả thể nấm hoàng kim qua các giai đoạn phát triển 9

Hình 2 1 Nguyên liệu vỏ mía 26

Hình 2.2 Cắt vỏ mía 26

Hình 2 3 Ngâm vỏ mía bằng nước vôi 26

Hình 2 4 Chất đống ủ 26

Hình 2 5 Đảo đống ủ 27

Hình 2 6 Phối trộn dinh dưỡng 28

Hình 2 7 Vào bịch phôi 28

Hình 2 8 Làm nút cỗ và nhét bông 28

Hình 2 9 Cấy meo vào bịch phôi 28

Hình 2 10 Ủ tơ nấm 29

Hình 3 1 Tơ nấm hoàng kim phân lập trên môi trường thạch 35

Hình 3 2 Tơ nấm hoàng kim cấy chuyền trên môi trường thạch 36

Hình 3 3 Nấm cấy trên môi trường thạch nghiêng (dùng giữ giống) 37

Hình 3 4.Sự tăng trưởng tơ nấm hoàng kim trên môi trường thạch (cấp 1) 37

Hình 3 5 Tơ nấm hoàng kim trên môi trường thạch (40X) 38

Hình 3 6 Tơ nấm hoàng kim trên môi trường hạt 39

Hình 3 7 Sự tăng trưởng tơ nấm Hoàng kim trên môi trường hạt (cấp 2) 40

Hình 3 8 Tơ nấm hoàng kim trên môi trường hạt thóc (40X) 40

Hình 3 9 Sự phát triển của tơ nấm hoàng kim trên bịch phôi theo thời gian xử lý vỏ mía 42

Hình 3 10 Sự ảnh hưởng của thời gian ngâm vôi đến tốc độ lan tơ nấm hoàng kim

trong các nghiệm thức 43

Hình 3 11.Tơ nấm hoàng kim phát triển trên vỏ mía được xử lý các nồng độ vôi 45

Hình 3 12 Sự ảnh hưởng của nồng độ vôi đến tốc độ lan tơ nấm hoàng kim trong các nghiệm thức 46

Hình 3 13 Tơ nấm hoàng kim phát triển trên giá thể bổ sung các thành phần dinh dưỡng 48

Hình 3 14 Sự ảnh hưởng của một số nguyên tố khoáng vi lượng đến tốc độ lan tơ của nấm hoàng kim 49

Hình 3 15 Vỏ mía phơi khô 51

Hình 3 16 Các bịch phôi nấm hoàng kim ở nơi trồng nấm 52

Hình 3 17 Cácdạng quả thể của nấm hoàng kim 53

DANH MỤC SƠ ĐỒ

Sơ đồ 2 1 Sơ đồ bố trí thí nghiệm 21

Sơ đồ 2 2 Quy trình trồng nấm hoàng kim tren vỏ mía 54

MỞ ĐẦU

Ngành nuôi trồng nấm ngày càng được phát triển mạnh mẽ không chỉ riêng ở

Việt Nam mà trên toàn Thế Giới Nấm ăn là một loại thực phẩm sạch và giàu giá

trị dinh dưỡng , không những vậy nhiều loại nấm ăn còn có dược tính quý giá

Việc nuôi trồng nấm góp phần giải quyết vấn đề việc làm cho người lao động

và làm giảm thiểu sự ô nhiễm môi trường Vì nguồn nguyên liệu để trồng nấm là

tận dụng những phụ phẩm, phế thải trong nông nghiệp và công nghiệp như rơm rạ, mùn cưa, bông vải…

Được thiên nhiên ưu đãi, nước ta có điều kiện thời tiết thuận lợi cho các loài

nấm phát triển Đặc biệt khí hậu nhiệt đới gió mùa ẩm thuận lợi cho việc trồng

nấm quanh năm Cùng với nguồn nguyên liệu và lực lượng lao động dồi dào càng giúp cho nghề trồng nấm ở nước ta ngày càng phát triển mạnh mẽ

Nghề trồng nấm hiện nay rất đa dạng và phong phú về chủng loại, trong số đó

nấm hoàng kim ( Pleurotus citrinopileatus) là một loại nấm ăn ngon và bổ dưỡng,

có dược tính cao và là một loại nấm đang có tiềm năng phát triển mạnh và đem lại giá trị kinh tế cao

1 Lý do ch ọn đề tài

Nghề trồng nấm phát triển ở nước ta, đặc biệt là các loại nấm bào ngư, linh chi

do nhu cầu và sự lựa chọn của người tiêu dùng ngày càng cao Vì vậy việc trồng

và phát triển các loại nấm mới có giá trị như nấm hoàng kim (Pleurotus citrinopileatus) là vô cùng cần thiết Hiện nay trên thị trường nước ta nấm hoàng

kim chưa được trồng phổ biến và còn hiếm chính vì vậy việc nhân rộng mô hình nuôi trồng nấm hoàng kim hứa hẹn sẽ đem lại hiệu quả vô cùng lớn cho người nông dân

Bên cạnh đó, việc tìm ra những nguồn nguyên liệu mới làm giá thể để đáp ứng nhu cầu của việc trồng nấm là rất cần thiết Vỏ mía có hàm lượng lignin, cellulose

có thể đáp ứng được nhu cầu dinh dưỡng của nấm Tại Tp Hồ Chí Minh, hàng ngày lượng nước mía được bán ra rất lớn do đó lượng vỏ mỉa thải ra cũng rất lớn

Tận dụng nguồn phế phẩm vỏ mía này để trồng nấm đem lại hiệu quả kinh tế và góp phần giảm lượng rác thải ra môi trường Đó cũng chính là lý do để thực hiện

đề tài: “ Khảo sát điều kiện trồng nấm Hoàng Kim ( Pleurotus citrinopileatus)

trên giá th ể vỏ mía”

2 M ục đích nghiên cứu

Chuyển hóa vỏ mía thành cơ chất dinh dưỡng để trồng nấm hoàng kim

Xác định các thông số thích hợp, cần thiết để trồng nấm hoàng kim trên vỏ mía

3 Nhi ệm vụ nghiên cứu

Tìm hiểu tổng quan tài liệu liên quan đến đề tài

Phân lập và nhân giống nấm hoàng kim

Khảo sát một số đặc điểm của nấm hoàng kim trên các môi trường

Khảo sát điều kiện xử lý vỏ mía để làm nguyên liệu trồng nấm hoàng kim

Khảo sát một số điều kiện để trồng nấm hoàng kim trên nguyên liệu vỏ mía

Bước đầu xây dựng quy trình nuôi trồng nấm hoàng kim trên vỏ mía

4 Đối tượng và phạm vi nghiên cứu

Đối tượng nghiên cứu

Giống nấm hoàng kim được cung cấp bởi công ty Mộc Mạc Tình Yêu Nấm ( Địa

chỉ 470B quốc lộ 13, Hiệp Bình Phước, Q.Thủ Đức, Tp.HCM) Sau đó sẽ tiến

hành phân lập, quan sát và bảo quản giống để tiến hành thực hiện các thí nghiệm

CHƯƠNG 1 TỔNG QUAN TÀI LIỆU

1.1 Gi ới thiệu nguyên liệu vỏ mía

1.1.1 V ỏ mía

Mía từ lâu đã được chú ý nhờ những đặc tính vật lý tốt gần giống với gỗ và được sử dụng trong nghiên cứu sản xuất vật liệu composite Vỏ mía quan sát qua kính hiển vi điện tử quét cho thấy bên ngoài là một lớp sáp, tiếp theo là lớp xơ sợi, trong cùng là phần lõi Vỏ mía chứa lượng lignin và lượng hemicellulose cao

Hàm lượng cellulose gần bằng gỗ

Vỏ mía được tách ra khỏi thân cây mía nhờ máy bào vỏ mía thành các sợi

mảnh, bề rộng khoảng 5 mm và dài từ 7 – 10 cm uốn cong giống như gỗ bào Ngoài ra còn có các sợi mảnh hơn, ngắn hơn và cả mảnh vụn như mạt cưa Chính

vì vậy vỏ mía rất thuận tiện trong quá trình chế biến và bổ sung dinh dưỡng, có thể

sử dụng luôn để làm giá thể mà không cần phải xay nhỏ đến kích cỡ như mạt cưa

Hình 1 1 Máy bào v ỏ mía

1.1.2 Thành ph ần của vỏ mía

Thành phần chủ yếu của vách tế bào thực vật và chiếm 50% tổng lượng hydrocarbon trên Trái Đất Ngoài thực vật là nguồn chủ yếu, còn có ở trong giới động vật nhưng số lượng rất ít

Cellulose là polysaccharide liên kết với nhau bằng liên kết 1,4-glucoside, mức

độ polymer hóa của cellulose rất cao tới 10.000 – 14.000 đơn vị glucose/phân tử

Số lượng lớn liên kết hydro nội và ngoại phân tử làm cho cellulose có độ cứng và

vững chắc

Liên kết glucoside không bền với acid Cellulose dễ bị phân hủy với acid và tạo thành sản phẩm phân hủy không hoàn toàn là hydro-cellulose có độ bền cơ học kém hơn cellulose nguyên thủy, còn khi thủy phân hoàn toàn thì sản phẩm tạo thành là D-glucose

Về bản chất hóa học cellulose là rượu đa chức có phản ứng với kiềm hay kim

loại kiềm tạo thành cellulose-ancolat Nguyên tử hydro ở các nhóm –OH bậc một

và hai trong phân tử cellulose cũng có thể bị thay thế bới các gốc –metyl, -etyl,…,

tạo ra những chất có độ kết tinh cà độ hòa tan trong nước khác nhau

1.1.1.1 Cellulose

Cellulose cũng bị oxy hóa bởi một số tác nhân tạo thành sản phẩm oxy hóa một

phần là oxy – cellulose Tác nhân oxy hóa chọn lọc nhất là acid iodic (HIO4) và

muối của nó Cellulose không tan trong nước , dung dịch kiềm làm trương phồng

mạch cellulose và hòa tan một phần cellulose phân tử nhỏ Đặc biệt cellulose dễ hòa tan trong dung dịch cupri amin hydrat [Cu(NH3)4(OH)2]và hàng loạt các dung

dịch là các phức chất của đồng, niken, cadimi, kẽm,…(J.F.Kennedy, 1989)

1.1.1.2 Lignin

Lignin là một polymer gốc rượu , có cấu trúc 3 chiều rất phức tạp và có nhiệm

vụ nân đỡ cấu trúc tế bào gỗ Sau cellulose, lignin là một polymer phong phú trong

tự nhiên được thực vật tổng hợp và là phần lớn nguồn chất thơm đa dạng trên Trái Đất Sự có mặt của lignin giúp cho tế bào thực vật cứng rắn hơn và đồng thời giúp cho thực vật tránh được sự xâm nhiễm của vi sinh vật Lignin được tìm thấy trong vách tế bào ở dạng phức hợp với những polysaccharide như cellulose và hemicelluloses, nó cũng giúp bảo vệ những polysaccharide này khỏi sự phân hủy sinh học

Lignin được sinh tổng hợp bởi sự polymer hóa các tiền chất phenylpropanoid

Có 3 loại tiền chất được phân loại tùy thuộc theo số lượng nhóm methocyl trên

Lignin gỗ mềm chứa hầu hết những đơn vị guaiacyl (1 nhóm methocyl), lignin

gỗ cứng cũng chứa số lượng cân bằng guaiacyl và suringyl (2 nhóm methocyl), các lignin khác chứa cả p-hydroxylphenyl ( không có nhóm methocyl), và cả 2 loại kia (Nguyễn Thị Thanh Kiều, 2004; J.F.Kennedy, 1989)

bởi acid lỏng

Xylan là một hemicellulose phổ biến nhất trong tự nhiên chiếm 30% khối lượng rơm, 20 – 25% cây gỗ lá rộng, 7 – 17% cây gỗ lá kim (Nguyễn Thị Thanh Kiều, 2004; J.F.Kennedy, 1989)

1.1.1.4 Thành ph ần khác

Mỗi thành phần cấu tạo nên lignin – cellulose do bản chất các liên kết hóa học,

do mức độ polymer hóa và tính không tan trong nước là đối tượng khó phân hủy Tính khó phân hủy là gia tăng lên nhiều lần khi chúng liên kết với nhau và tới các thành phần khác nữa thành một thể cấu trúc chặc chẽ và phức tạp

Các mặt phân tử cellulose không bao giở tồn tại riêng lẻ mà nhờ liên kết hydro

giữa các phân tử tạo thành các cấu trúc lớn hơn gọi là vi sợi, dọc theo sợi có những

vùng tại đó các phân tử sắp xếp song song và chặt khít gọi là vùng kết tinh, xen kẽ

những vùng mà có sự sắp xếp kém trật tự và chặt chẽ là vùng vô định hình Các vi

sợi liên kết với nhau bằng cách đan xen ở những vùng vô định hình này

Các vi sợi cellulose, lignin đan xen theo những quy tắc nhất định đễ định thành nên cấu trúc Với cấu trúc nhiều lớp gồm nhiều thành phần có bản chất hóa học khác nhau như vậy, lignin – cellulose dó độ bền vật lý cao rất khó xâm nhập đối

với các vi sinh vật và enzyme Hơn nữa đễ phân hủy bất cứ thành phần nào của

phức hợp một cách hiệu quả và triệt để cần phải tác động đến thành phần khác (Nguyễn Thị Thanh Kiều, 2004; J.F.Kennedy, 1989)

1.2 T ổng quan về nấm hoàng kim

1.2.1 Gi ới thiệu về nấm hoàng kim

Nấm bào ngư là tên gọi dùng chung cho các loài thuộc giống Pleurotus Theo

Singer (1975) có tất cả 39 Nấm bào ngư là tên dùng chung cho các loài thuộc

giống Pleurotus Theo Singer ( 1975) có tất cả 39 loài và chia thành hai nhóm lớn:

- Nhóm ưa nhiệt trung bình( ôn hòa) kết quả thể ở nhiệt độ từ 10oC – 20oC

- Nhóm ưa nhiệt kết quả thể ở nhiệt độ từ 20o

C – 30oC

Nấm hoàng kim ( Pleurotus citrinopileatus) là một trong những loài nấm bào

ngư thuộc giống Pleurotus ưa nhiệt được phát hiện bởi nhà khoa học Singer vào năm 1942

Nấm hoàng kim có tên khoa học là Pleurotus citrinopileatus, tên tiếng Anh là

Golden Oyster ( hàu vàng) ,tên tiếng Nhật là tamogitake Ở Việt Nam có tên gọi là

hoàng kim hay tên gọi khác là sò vàng

Nấm hoàng him có nguồn gốc ở miền đông nước Nga, là loại nấm ăn phổ biến

ở Trung Quốc (Zhang et all, 1994), Ấn Độ (Ghosh & Chakravarty, 1986) và Nhật

Bản

1.2.2 V ị trí và phân loại

Nguồn: 1001 freedownloads.com Hình 1 2 N ấm hoàng kim (P citrinopileatus)

Nấm hoàng kim được phân loại:

1.2.3 Đặc điểm sinh học của nấm hoàng kim

Nấm hoàng kim là một loài thuộc chi nấm bào ngư cho nên nấm hoàng kim cũng có những đặc điểm sinh học chung của nấm bào ngư

Cây nấm có hình dạng phễu lệch gồm 3 bộ phận: mũ, phiến, và cuống nấm( hình 1.2) Chúng thường mọc tập trung thành từng cụm hoặc một số cây nấm nhóm lại với nhau…

1 Mũ nấm 2 Thân nấm 3 Cuống nấm 4 Sợi nấm

Hình 1 3 N ấm hoàng kim

Chu trình sống của nấm hoàng kim bắt đầu từ đảm bào tử hữu tính nảy mầm cho hệ sợi tơ dinh dưỡng sơ cấp và thứ cấp và kết thúc bằng việc hình thành cơ quan sinh trưởng là tai nấm Tai nấm lại sinh đảm bào tử và chu trình sống tiếp tục (hình 1.3)

Quả thể của nấm hoàng kim (P citrinopileatus) phát triển thành các cụm màu

vàng nhạt với mũ nấm màu nâu vàng với bề mặt khô Mũ rộng từ 20 – 65 mm đường kính Thịt mỏng và trắng, có vị nhẹ và không có mùi mạnh

Hình 1 4 Chu trình sinh trưởng của nấm hoàng kim

Cuốn nấm có hình trụ, màu trắng, thường cong hoặc uốn cong, dài khoảng 20 –

50 mm và đường kính từ 2 – 8 mm Phiến có màu trắng mang bào tử, khoảng cách chặt chẽ, và kéo dài xuống đến chân Các bào tử của nấm hoàng kim có hình

trụ hoặc hình elip

Quả thể nấm phát triển qua các giai đoạn (hình 1.4)

a D ạng san hô b D ạng dùi trống c D ạng phễu

d D ạng bán cầu lệch e D ạng lá lục bình Hình 1 5 Hình d ạng quả thể nấm hoàng kim qua các giai đoạn phát triển

- Dạng san hô: quả thể mới tạo thành, dạng sợi mãnh thành chum (hình 1.4.a)

- Dạng dùi trống: mũ xuất hiện dưới dạng khối tròn, còn cuống phát triển theo cả chiều ngang và chiều dài nên đường kính cuống và mũ không khác nhau bao nhiêu (hình 1.4.b)

- Dạng phễu: mũ mở rộng, trong khi cuống còn ở giữa nhìn giống cái phễu( hình 1.4.c)

- Dạng bán cầu lệch: cuống lớn nhanh một bên và bắt đầu lệch so với vị trí trung tâm của mũ (hình 1.4.d)

- Dạng lá lục bình: cuống ngừng tăng trưởng, trong khi mũ vẫn tiếp tục tăng trưởng, bìa mép thẳng đến dợn sóng (hình 1.4.e)

Nấm bào ngư nói chung và nấm hoàng kim nói riêng đều là loài có khả năng sử

dụng lignin mạnh , nhất là thời gian khởi đầu của việc tạo quả thể nấm

1.2.4 Đặc điểm sinh trưởng của nấm hoàng kim

Đặc điểm sinh trưởng của nấm hoàng kim cũng giống như những loài nấm bào

ngư thuộc chi Pleurotus khác

Ngoài yếu tố dinh dưỡng từ các chất có trong nguyên liệu trồng nấm hoàng kim thì sự tăng trưởng và phát triển của nấm có liên quan đến nhiều yếu tố khác như: nhiệt độ, ẩm độ, pH, ánh sáng, oxy

- Nhiệt độ: Nấm hoàng kim là một loại nấm sò chịu nhiệt, sinh trưởng trong khoảng nhiệt độ tương đối rộng 21 – 29 oC Ở giai đoạn ủ tơ, một số loài

c ần nhiệt độ từ 24 – 29o

C Nhi ệt độ thích hợp để nấm ra quả thể ở một

s ố loài cần từ 21 – 29o

C.

- Độ ẩm: độ ẩm rất quan trọng đối với sự phát triển tơ và quả thể của

n ấm Trong giai đoạn tăng trưởng tơ, độ ẩm nguyên liệu yêu cầu từ 50 - 60%, còn độ ẩm không khí không được nhỏ hơn 70% Ở giai đoạn tưới đón nấm ra quả thể, độ ẩm không khí tốt nhất là 70 – 95% Ở độ ẩm không khí 50%, n ấm ngừng phát triển và chết, nếu nấm ở dạng phễu

l ệch và dạng lá thì sẽ bị khô mặt Nhưng nếu độ ẩm cao trên 95%, tai

n ấm dễ bị nhũn và rũ xuống.

- pH: N ấm Hoàng kim có khả năng chịu đựng sự giao động pH tương đối

t ốt Tuy nhiên pH thích hợp đối với hầu hết các loài nấm hoàng kim trong kho ảng 5 – 7.

- Ánh sáng: Y ếu tố này chỉ cần thiết trong giai đoạn ra quả thể nhằm kích thích n ụ nấm phát triển Nhà nuôi trồng nấm cần có ánh sáng khoảng

200 – 300 lux (ánh sáng khu ếch tán – ánh sáng phòng).

- Thông thoáng: N ấm cần có oxy để phát triển vì vậy nhà trồng cần có độ thông thoáng v ừa phải, nhưng phải tránh gió lùa trực tiếp.

1.2.5 M ột số điểm lưu ý trong quá trình trồng nấm hoàng kim

1.2.5.1 Nh ạy cảm với môi trường

Nấm hoàng kim rất nhạy cảm với môi trường Khi nấm ở dạng san hô, nếu nhiệt

độ lên trên 32o

C trong 1 giờ, nụ nấm sẽ khô quéo lại như cỏ úa Cũng như trong giai đoạn này, nếu độ ẩm tăng lên trên 90% nhiều giờ thì nấm non sẽ bị thối nhũng

Đặc biệt nước tưới nhiễm phèn hơi nặng (pH acid), thì tai nấm ngã vàng, tai

nấm dị dạng, mũ nấm khô nứt Trường hợp phèn nhẹ cũng làm trên bề mặt mũ

nấm có những nốt sần mở ra thành hốc nhỏ

Nấm hoàng kim còn đặc biệt nhạy cảm với tác nhân gây ô nhiễm môi trường như hóa chất, thuốc trừ sâu, kim loại nặng… cả trong nguyên liệu, cũng như không khí nơi nuôi trồng Tai nấm thường sẽ bị biến dạng hoặc ngừng tạo quả thể

Do đó cần lưu ý khâu chế biến nguyên liệu hoặc kiểm tra các điều kiện nuôi

trồng khi thấy tai nấm có biểu hiện không bình thường

1.2.5.1 D ịch bệnh gây hại cho nấm

Giống với các loại nấm sò khác, nấm hoàng kim cũng là loài có ít bệnh hại

Chủ yếu thường gặp là hai loại bệnh phổ biến là: mốc xanh Trichoderma sp và ấu trùng ruồi nhỏ

Đối với mốc xanh, ngoài việc tranh giành thức ăn chúng còn thay đổi môi trường sống, tạo ra nhiều tạp chất ảnh hưởng đến sự phát triển và tăng trưởng của

nấm hoàng kim Để hạn chế sự phát triển loài mốc này, có hai biện pháp: khử trùng tốt nguyên liệu hoặc nâng pH

Đối với ấu trùng ruồi nhỏ, chúng thường chui vào khe của phiến nấm, cắn phá

và làm hư hại nấm Đối với bịch phôi, chúng làm tơ nấm đổi màu, thâm nâu,

quằng quện Tốc độ sinh trưởng của chúng lại rất nhanh, nên thiệt hại gây ra không phải nhỏ Nhà trồng vì vậy nên có tấm lưới chắn để chúng không lọt vào Tuy nhiên, vấn đề chính vẫn là đảm bảo vệ sinh nhà trại, không để ổ dịch phát sinh

1.2.5.3 D ị ứng do bào tử nấm hoàng kim

Bào tử nấm bào ngư (hay Hoàng kim) cũng rất nguy hiểm Người hít phải nếu

nhạy cảm sẽ biểu hiện trong 8 giờ, còn ngược lại là từ 4 – 6 tuần Người bệnh có

triệu chứng khó thở, mệt mỏi, nhiều vết đỏ ở tay, nhức đầu, ho và sốt (có thể tới

39oC) Bệnh có thể kéo dài trong vài ngày rồi dứt, nhưng sau đó lại tái phát và nhất

là sau khi tiếp xúc với mầm bệnh

1.2.6 Giá tr ị dinh dưỡng của nấm hoàng kim

Nấm ăn nói chung và nấm hoàng kim nói riêng là loại thực phẩm có giá trị dinh dưỡng cao Nấm hoàng kim giàu dinh dưỡng, ít calo nhưng giàu protein và một số vitamin nhất định

Dinh dưỡng nấm hoàng kim rất cao không kém dinh dưỡng của các sản phẩm từ động vật Kết quả phân tích của Fredrick Musieba và cộng sự năm 2013 cho thấy

nấm hoàng kim có hàm lượng protein chiếm khoảng 22% (bảng 1.1), đặc biệt có

chứa khoảng 18 loại axit amin (bảng 1.2), ngoài ra còn có carbohydrate, nhiều vitamin và các khoáng chất khác Sử dụng nấm không những không tăng cân mà còn ngăn ngừa một số bệnh như: giảm cholesterol trong máu, tiểu đường, béo phì, đau bao tử, rối loạn gan, ung thư, v.v , đồng thời người ăn nấm thường xuyên sẽ giúp cơ thể tăng tính miễn dịch, điều hòa huyết áp, dễ tiêu hóa và chống lão hóa

Bảng 1 1 Một số thành phần hóa học của hoàng kim

Acid béo không no 0,48 ± 0,11

(Ngu ồn Fredrick Musieba và cộng sự, 2013)

Thành phần các chất dinh dưỡng chính của một số loài nấm nấm hoàng kim bao gồm: carbonhydrate, protein, amino acid, chất béo, khoáng chất, hoạt chất và các vitamin được nhiều nhà dinh dưỡng học quan tâm nghiên cứu, nhằm đánh giá vai trò của nấm như nguồn thực phẩm cho con người

Carbonhydrate và protein là thành phần chính, chiếm từ 70 đến 90% trọng lượng khô quả thể, tro khoảng 10% chứa nhiều loại chất khoáng Chất béo có hàm lượng thấp trong hầu hết các loài, dao động trong khoảng 2 – 3 %

Giá trị về mặt năng lượng được đánh giá trên cơ sở thành phần protein thô, chất béo và carbohydrate, trị số này thấp khoảng từ 261 - 367 Kcal/100g chất khô Hàm lượng protein của nấm hoàng kim chỉ đứng sau thịt, cá, giàu các chất khoáng và các acid amin tan trong nước, các acid amin không thay thế như lysine, tryptophan, các acid amin chứa nhóm lưu huỳnh (bảng 1.2)

B ảng 1 2 Thành phần amino acid có trong nấm hoàng kim

STT Amino acid Hàm

lượng (%)

STT Amino acid Hàm

lượng (%)

(Ngu ồn Fredrick Musieba và cộng sự, 2013)

Ngoài ra nấm hoàng kim còn chứa một lượng lớn các vitamin quan trọng (bảng 1.3)

Bảng 1 3 Thành phần vitamin có trong nấm hoàng kim

Vitamin A (µg/100 g) < 10,00 Vitamin B1 (mg/100 g) 0,16 Vitamin B2 (mg/100 g) 0,94 Vitamin B3 (mg/100 g) 22,20 Vitamin B5 (mg/100 g) 17,30 Vitamin B6 (mg/100 g) 0,57 itamin B7 (µg/100 g) 9,40 Vitamin B9 (µg/100 g) 97,00 Vitamin B12 (µg/100 g) < 0,30 Vitamin C (mg/100 g) < 1,00

(Ngu ồn Fredrick Musieba và cộng sự, 2013)

Theo Ghada M Mendany( 2014), khi nuôi cấy nấm hoàng kim trên các môi trường khác nhau kết quả cho thấy hàm lượng protein thô của nấm ăn dao động trong khoảng 18,4 – 61,5 % Hàm lượng protein thô của nấm hoàng kim có giá trị trung bình 22 – 26 %, trị số này có ý nghĩa về mặt dinh dưỡng

Hàm lượng chất béo trong nấm hoàng kim nhìn chung là khá thấp Hàm lượng carbonhydrat tương đối và hàm lượng chất xơ trong P.citrinopileatus rất thấp, do

vậy về mặt cảm quan cho thấy nấm hoàng kim có mùi vị rất thơm ngon

Hàm lượng nước dao động trong khoảng 85 – 87 % nghĩa là lượng sinh khối khô chỉ vào khoảng 15% , song tỷ lệ chất dinh dưỡng rất đáng kể và cân đối, vượt hơn hẳn các loại rau quả Do đó quan niệm trước đây coi nấm như là một loại rau

là không chính xác Hàm lượng protein thô của nấm hoàng kim nếu như so với các

loại thịt cá lượng protein đạt xấp xỉ 40% trọng lượng khô, trị số sinh năng lượng khá thấp, chỉ cung cấp năng lượng ở mức tối thiểu, đây là một trong những ưu điểm của loài nấm ăn này, thích hợp cho người ăn kiêng

Trong nấm hoàng kim còn chứa một số loại khoáng chất thiết yếu cần cho sức

khỏe của con người (bảng 1.4)

B ảng 1 4 Thành phần khoáng chất có trong nấm hoàng kim

1.2.7 Giá tr ị dược liệu của nấm hoàng kim

Không chỉ là loài nấm có giá trị dinh dưỡng cao, nấm hoàng kim có có những dược tính quý giá

- Nấm hoàng kim là một nguồn vi chất dinh dưỡng tuyệt hảo và chứa các thành

phần chống oxy hoá Theo Rushita và cộng sự (2013) P citrinopileatus có

hoạt tính chống nôn cao và do đó có tiềm năng là một thành phần trong sản

phẩm chăm sóc sức khoẻ tự nhiên

- Nấm hoàng kim chứa nguồn chất chống oxy hóa Chiết xuất từ nấm hoàng kim đã được nghiên cứu về tính chất chống cao huyết áp, làm giảm lượng

đường trong máu ở chuột mắt bệnh đái tháo đường (Shu-Hui Hu et al,2006)

- Nấm hoàng kim cũng đã được nghiên cứu như là một nguồn thuốc hạ lipid

- Trong tự nhiên nấm hoàng kim tươi có tiết ra chất kháng tuyến trùng và giun tròn Do đó khi ăn nấm hoàng kim còn có tác dụng phòng ngừa giun, sán rất

Việc tổ chức sản xuất nấm hoàng kim của các đơn vị chuyên kinh doanh

về nấm còn nhiều thiếu sót Chất lượng giống nấm chưa đảm bảo từ khâu sản xuất

đến quá trình nuôi trồng, bảo quản, cách sử dụng Các giống hoàng kim đã và đang được nuôi trồng ở Việt Nam từ nhiều nguồn giống khác nhau Một số giống được

nhập từ một số nước và vùng lãnh thổ: Trung Quốc, Đài Loan, Nhật Bản,… Một

số khác được nhân giống trong nước, song cần việc chọn lọc, kiểm tra để đánh giá

tiềm năng về năng suất, chất lượng của từng loại, từ đó để nhân giống đại trà phục

vụ cho sản xuất hầu như chưa có đơn vị nào đảm trách

Khâu hướng dẫn kỹ thuật nuôi trồng, chế biến nấm đạt chất lượng xuất khẩu đến từng hộ gia đình không đầy đủ, do thiếu cán bộ và trình độ kỹ thuật viên non kém Đội ngũ cán bộ nghiên cứu và làm công tác kỹ thuật về nấm được đào tạo cơ

bản tại các trường đại học, có kinh nghiệm lâu năm và chuyên tâm với nghề nghiệp còn quá ít

Công tác nghiên cứu về công nghệ chọn, tạo giống, công nghệ nuôi trồng nấm bào ngư đạt năng suất cao, chi phí thấp, công nghệ bảo quản nấm đạt chất lượng ở các trung tâm nghiên cứu và cơ sở sản xuất chưa được chú trọng đúng mức Các thiết bị, công nghệ trồng nấm nhập khẩu từ Trung Quốc, Đài Loan, Nhật Bản,… không phù hợp với điều kiện tự nhiên, kinh tế, xã hội ở Việt Nam

1.2.8.2 Tình hình trên th ế giới

Từ lâu nấm hoàng kim đã trở thành một trong số những loại nấm ăn phổ biến ở

một số nước như Trung Quốc, Ấn Độ và Nhật Bản Với giá trị dinh dưỡng cũng như giá trị kinh tế cao, nấm hoàng kim ở các quốc gia này đã và đang được trồng

phổ biến ở quy mô lớn để phục vụ nhu cầu trong nước và xuất khẩu

Ở các nước phương Tây như Liên Ban Nga cũng coi nấm hoàng kim như loài

thực phẩm dinh dưỡng hàng đầu và rất được ưa chuộng

M ột số nghiên cứu về P citrinopileatus trên thế giới

Năm 2006, Shu Hui Hu et all đã nghiên cứu tác dụng chống trầm cảm và chống oxy hóa của chiết xuất từ P citrinopileatus trên chuột bạch Kết quả cho thấy rằng

chiết xuất P citrinopileatus có thể có hiệu quả chống cao huyết áp

Năm 2006, Yu-Ling Lee et all đã nghiên cứu về tính chất chống oxy hóa của ba

gốc hydroxyl là 53,4 – 80,1 % ở 20 mg / ml Khả năng tách chiết bằng nước lạnh

và nước nóng chiết xuất trên ion sắt cao hơn các chất chiết xuất ethanol Hàm lượng phenol tổng thể theo thứ tự giảm dần: quả thể (8,62 – 12,38 mg / g) > sợi

nấm ( 5,84 – 7,85 mg/g) > lọc (4.80 – 5.57 mg / g) Nhìn chung, ba chất chiết xuất

từ quả thể có hoạt tính chống oxy hóa cao hơn so với các chất từ sợi nấm và

filtrate

1.2.9 Ti ềm năng phát triển của nấm Hoàng kim tại Việt Nam

Nấm hoàng kim được trồng tại Việt Nam trong vài năm gần đây, trên nguyên

liệu chủ yếu là mạc cưa Hiện nay trên thị trường còn khan hiếm nên việc sản xuất

để phục vụ nhu cầu của người tiêu dùng ngày càng cao Nấm hoàng kim có giá trị dinh dưỡng cao, màu sắc đẹp, mùi vị thơm ngon nên sẽ được mọi người rất ưa chuộng

Kỹ thuật trồng, chăm sóc nấm hoàng kim không khó, chỉ cần người trồng tuân

thủ đúng quy trình hướng dẫn Hiệu quả kinh tế mà nó mang lại khá cao

Hiện nay đã có nhiều nông dân Việt Nam thoát nghèo nhờ việc trồng nấm bào ngư Mô hình trồng nấm bào ngư đa chủng loại đã được nhân rộng ra nhiều nơi như: Đồng Nai, Bến Tre, Củ Chi, Bình Thuận,Vĩnh Long, An Giang, Bình Dương,

Đà Lạt Đồng Tháp… Không những giúp người dân thoát nghèo, việc trồng nấm bào ngư đúng quy trình và theo quy mô lớn còn có thể giúp một số doanh nhân

biết cách đầu tư làm giàu nhanh chóng

CHƯƠNG 2 VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

Địa điểm

Phòng thí nghiệm Nhiên Liệu Sinh Học và Biomass, trường Đại học Bách Khoa thành phố Hồ Chí Minh

Th ời gian

Đề tài được tiến hành từ tháng 02/2017 đến tháng 7/2017

Đối tượng nghiên cứu:

Dùng bã mía để trồng nấm hoàng kim

N ội dung nghiên cứu

Khảo sát tốc độ lan, đặc điểm của tơ nấm hoàng kim trên môi trường thạch PGA (giống cấp 1)

Khảo sát tốc độ lan, đặc điểm của tơ nấm hoàng kim trên môi trường hạt thóc (giống cấp 2)

Khảo sát ảnh hưởng của thời gian ngâm vôi nguyên liệu vỏ mía đến tốc độ lan

tơ nấm hoàng kim

Khảo sát ảnh hưởng của nồng độ vôi xử lý nguyên liệu vỏ mía đến tốc độ lan tơ

Các hóa chất xử dụng trong quá trình thực hiện đề tài được trình bày trong bảng 2.1, bao gồm các hóa chất để phân tích và xử lý nguyên liệu

1 Axit sulfuric (H2SO4) Trung Quốc Thủy phân

Làm blank UV-vis

nước 2 lần Pha môi trường PGA

Khử trùng

B ảng 2 1 Các lo ại hóa chất sử dụng

b Môi trường vi sinh

Môi trường PGA (môi trường phân lập và nhân giống cấp 1): 200g khoai tây, 20 glucose, 20 agar, 1 lít nước cất

Môi trường hạt thóc (môi trường nhân giống cấp 2): 500g thóc, 50g cám gạo, 25g cám bắp

Môi trường nuôi trồng ra quả thể: vỏ mía, cám bắp, cám gạo, vôi bột, KH2PO4, MgSO4, (NH4)2SO4, (NH4)2HPO4

2.1.2 Thi ết bị và dụng cụ thí nghiệm

2.1.2.1 Thi ết bị

Tủ cấy

Nồi hấp khử trùng (hãng ALP – Nhật Bản)

Kính hiển vi, lam, lamel

Máy quang phổ kết hợp đo độ hòa tan tự động (Automatic UV-VIS, hãng JASCO – Nhật Bản.)

Hệ thống sắc ký lỏng HPLC

2.1.2.2 D ụng cụ thí nghiệm

Ống nghiệm Pipet các loại Bông không thấm Chai thủy tinh Đĩa petri Bình tam giác

Dao mổ, kẹp

Lam, lamel

Cốc sứ

Cốc crucible Cuvet thạch anh Bao PE chịu nhiệt Nút cỗ

Bồn ngâm 100 lít

Kệ trồng nấm Bình xịt tưới nấm

2.2 Phương pháp nghiên cứu

Quá trình thí nghiệm được thể hiện ở sơ đồ 2.1

Sơ đồ 2 1 Sơ đồ bố trí thí nghiệm

2.2.1 Thí nghi ệm 1: Khảo sát đặc điểm của nấm hoàng kim trên môi trường

tơ nấm

Đo tốc độ lan tơ, quan sát

tơ nấm

Meo giống

Cấy meo

Hấp khử trùng

Quả thể

Bổ sung

dinh dưỡng

Cấy chuyền 3 lần để làm thuần khiết giống

2.2.1.2 Phương pháp thực hiện

a Phương pháp pha môi trường phân lập

Môi trường dùng để phân lập nấm hoàng kim là môi trường PGA ( Potato Dextro Agar) thạch Môi trường này vừa dùng để phân lập vừa để cấy chuyền và

giữ giống nấm hoàng kim

Thành phần môi trường PGA gồm : 200g khoai tây 20 g đường glucose, 20g agar và 1 lít nước cất

Thao tác th ực hiện:

Khoai tây gọt vỏ, rửa sạch, cắt nhỏ Cho khoai tây vào nồi, thêm 600 mL nước

cất, đun sôi đến khi khoai tây mềm ra Lọc qua giấy lọc, thu dịch lọc ta được dịch chiết khoai tây

Bổ sung 20g glucose và 20g agar vào dịch chiết khoai tây vừa thu, khuấy đều, thêm nước cất đến 1 lít nước Đun sôi, khuấy đều hỗn hợp 3 – 5 phút, tắt bếp Phân chia môi trường vào các ống nghiệm (khoảng 1/3 ống) và chai thủy tinh Làm nút bông, gói đĩa petri, đem hấp khử trùng 1210C trong 10 phút

Lấy ống nghiệm ra, để nghiêng sao cho môi trường không chạm vào nút bông, khi nguội tạo thành môi trường thạch nghiêng

Bình thủy tinh để nguội đến nhiệt độ thích hợp (da tay có thể chịu đựng được)

Đổ đĩa trong tủ cấy vô trùng với 15ml môi trường/đĩa petri Không đổ môi trường với nhiệt độ quá nóng vì hơi nước sẽ đọng lại trên nắp sau đó rơi xuống làm ướt mặt thạch hoặc chảy ra ngoài khi úp ngược đĩa petri làm tăng khả năng nhiễm vi sinh vật Cũng không đổ môi trường khi đã nguội vì môi trường có thể đông vón lại khi đang đổ đĩa

b Thao tác phân lập nấm hoàng kim:

Mọi thao tác phải được thực hiện trong tủ cấy vô trùng

Các bước thực hiện:

- Sát trùng bề mặt quả thể nấm bằng cồn 70o Rửa lại bằng nước vô trùng

- Dùng dao gọt một lớp mỏng (lưỡi dao chỉ gọt một đường không quay lại để tránh nhiễm trùng) Tiếp tục gọt cho đến khi được một miếng mô nấm đã sạch

lớp bẩn bên ngoài Dùng kẹp đưa vào chai môi trường và thạch đĩa

Đem chai và đĩa thạch đã cấy ủ ở nhiệt độ phòng và ánh sáng khuếch tán nhẹ Theo dõi sự phát triển của mẫu cấy sau 2 ngày Loại bỏ các mẫu bị nhiễm khuẩn

vả nấm mốc Tiếp tục ủ trong 5 ngày sau đó cấy chuyền sang ống thạch nghiêng

và thạch đĩa mới Sau 3 lần cấy chuyền, thu được giống nấm thuần khiết làm giống

cấp 1

Giữ giống cấp 1 bằng cách bảo quản lạnh ở nhiệt độ 4o C

2.2.1.3 Ch ỉ tiêu và phương pháp theo dõi

Đo tốc độ lan tơ trên môi trường thạch đĩa, ghi nhận kết quả mỗi ngày kể từ khi

sợi nấm bắt đầu bám vào bề mặt môi trường

Quan sát tơ nấm dưới kính hiển vi bằng cách làm tiêu bản không nhuộm màu và tiêu bản nhuộm màu

Môi trường hạt thóc có bổ sung dinh dưỡng là môi trường được chọn để nhân

giống cấp 2 đối với nấm hoàng kim

Công thức môi trường hạt:

- Thóc hạt: 85%

- Cám gạo: 10%

- Cám bắp: 5%

a Quá trình chuẩn bị môi trường hạt

Cân khối lượng thóc cần làm đổ vào thau nhựa, rửa nhiều lần bằng nước sạch

để loại bỏ bụi, đất và các hạt thóc lép sau đó ngâm thóc trong nước sạch 12 – 16

giờ

Thóc sau khi ngâm, tiến hành đãi, rửa sạch để khử hết mùi chua Cho thóc vào

nấu đến khi vỏ trấu mở khoảng 1/3 Vớt thóc ra dụng cụ chứa , để ráo, độ ẩm còn khoảng 70 – 75% là được Chú ý khi luộc thóc phải thường xuyên khuấy trộn để

C trong thời gian 20 phút Để nguội 24 giờ sau đó cấy giống cấp 2

b Thao tác cấy chuyền giống cấp 2:

Mọi thao tác thực hiện trong tủ cấy vô trùng

- Đốt đèn cồn để đèn cồn, khử trùng lại dụng cụ cấy

- Mở nút bông và giữ nút bông của ống giống cấp 1 và chai môi trường cấp 2

bằng kẽ tay út và áp út, hơ miệng ống nghiệm và túi môi trường trên ngọn

lửa đèn cồn, chỉ mở nút bông quanh ngọn lửa đèn cồn và ở tư thế nằm ngang, quay miệng về hướng ngọn lửa

- Dùng que cấy chấn 1 phần giống trong ống giống cấp1 và chuyển phần

giống đó sang lọ môi trường cấp 2 Lật úp miếng thạch để tơ dễ lan trên môi trường mới

- Đậy nút bông lại Nuôi ủ tơ ở nhiệt độ phòng

2.2.2.3 Ch ỉ tiêu và phương pháp theo dõi

Đo tốc độ lan tơ kể từ khi tơ nấm bung ra và bám vào môi trường cho đến khi

ăn trắng toàn bộ chai

Quan sát tơ nấm dưới kính hiển vi 40X bằng cách làm tiêu bản không nhuộm màu và tiêu bản nhuộm màu

Nhận xét kết quả

2.2.3 Thí nghi ệm 3: Khảo sát ảnh hưởng của thời gian ngâm nước vôi đến tốc

độ lan tơ nấm hoàng kim

Ngâm vỏ mía trong nước vôi 1% ở những khoảng thời gian 15 phút, 24 giờ, 48

giờ, 72 giờ được bố trí như các nghiệm thức sau:

NT1: Ngâm nước vôi 1% trong 15 phút

NT2: Ngâm nước vôi 1% trong 24 giờ

NT3: Ngâm nước vôi 1% trong 48 giờ

NT4: Ngâm nước vôi 1% trong 72 giờ

2.2.3.2 Phương pháp thực hiện

a Xử lý nguyên liệu

Nguyên liệu vừa thu gom về (hình 2.1.a) và vỏ mía được phơi khô (hình 2.1.b), sau đó chặt nhỏ vỏ mía và lựa bỏ những phần than mía lân vào trong nguyên liệu Trích một phần mẫu đem phân tích một số thành phần hóa học của vỏ mía sau đó đem xử lý với nước vôi 1% (hình 2.3) với thời gian ngâm trong 15 phút, 24 giờ, 48

giờ và 72 giờ

a V ỏ mía tươi b Hình v ỏ mía khô

Hình 2 1 Nguyên li ệu vỏ mía

Hình 2.2 C ắt vỏ mía

Hình 2 3 Ngâm v ỏ mía bằng nước vôi

Nước đưa vào xử lý phải là nước sạch Lượng nước vôi ngâm phải đủ để

ngập bề mặt nguyên liệu

Nguyên liệu sau khi xử lý với nước vôi được vớt ra, chất thành đống, phủ nilon và ủ trong 1 tuần Trong quá trình ủ cần đảo đống ủ mỗi 3 ngày một lần

Hình 2 4 Ch ất đống ủ