Tien Ho

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH LÊ THỊ HỒNG HUN NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HỐ HỌC RỄ TIỀN HỒ Radix Peucedani KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ ĐẠI HỌC TP HỒ CHÍ MINH - 2017 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH LÊ THỊ HỒNG HUN NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HOÁ HỌC RỄ TIỀN HỒ Radix Peucedani KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ ĐẠI HỌC Thầy hướng dẫn: TS NGUYỄN VIẾT KÌNH TP HỒ CHÍ MINH – 2017 LỜI CẢM ƠN Đầu tiên, em xin gửi lời cảm ơn sâu sắc đến thầy TS Nguyễn Viết Kình, người thầy ln theo sát hướng dẫn em suốt q trình thực khóa luận Em xin cảm ơn thầy quan tâm, lo lắng, truyền đạt kiến thức chuyên môn quý báu, kiên nhẫn giải thích tường tận nhiều vấn đề em cịn thắc mắc, rèn luyện cách làm việc khoa học vun đắp cho em niềm đam mê với nghiên cứu khoa học Em xin chân thành cảm ơn thầy TS Võ Văn Lẹo, thầy TS Phạm Đông Phương, thầy ThS Huỳnh Lời giúp đỡ, hỏi han giải đáp thắc mắc em thời gian tiến hành khóa luận môn Em xin cảm ơn thầy GS.TS Nguyễn Minh Đức giành thời gian để phản biện, góp ý giúp khóa luận em hồn chỉnh Em xin gửi lời cảm ơn chân thành đến anh ThS Lê Văn Huấn, chị ThS Lê Thị Hồng Vân hỗ trợ, động viên, truyền đạt kinh nghiệm dạy bảo cho em điều em chưa hiểu Em xin gửi lời cảm ơn đến thầy, cô, anh, chị Bộ môn Dược liệu tận tình hướng dẫn, giúp đỡ, tạo điều kiện thuận lợi em hồn thành khóa luận Cảm ơn bạn cố gắng, chia sẻ, giúp đỡ hồn thành khóa luận Cuối cùng, em xin cảm ơn gia đình em ln hỗ trợ, động viên, chia sẻ chỗ dựa vững cho em suốt trình học tập, nghiên cứu sống TÓM TẮT KHÓA LUẬN Khóa luận tốt nghiệp Dược sĩ đại học - Năm học 2016-2017 NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HÓA HỌC RỄ TIỀN HỒ Radix Peucedani Sinh viên: Lê Thị Hoàng Huyên Thầy hướng dẫn: TS Nguyễn Viết Kình Đặt vấn đề: Tiền hồ thuốc tiềm với nhiều tác dụng chữa ho, đờm, trị sốt, nhức đầu, tác dụng tim mạch, chống khối u, trị tiểu đường Trên thị trường hiê ̣n lưu hành mô ̣t số chế phẩm chứa Tiền hồ Thuốc ho trẻ em – OPC, Thuốc ho người lớn –OPC, Siro ho Hedera, … Hiện Tiền hồ có trồng vùng núi phía bắc nước ta nguồ n dươ ̣c liê ̣u chủ yế u vẫn là nhập từ Trung Quốc Vì khơng chủ động nguồn gốc dược liệu, nên viê ̣c kiểm định chất lượng dược liệu cần phải đươ ̣c ý Thao tác kiểm nghiệm cịn gặp khó khăn sử dụng mẫu đối chiếu dược liệu khơ Do đề tài “Nghiên cứu thành phần hóa học rễ Tiền hồ Radix Peucedani” tiến hành nhằm phân lập số hợp chất có phục vụ cho cơng tác tiêu chuẩn hóa kiểm nghiệm dược liệu, đồng thời xác định cấu trúc hợp chất phân lập bổ sung vào nguồn liệu phổ học hợp chất tự nhiên Đối tượng phương pháp nghiên cứu Đối tượng: cao cloroform thu từ rễ Tiền hồ Radix Peucedani Phương pháp nghiên cứu: sắc kí cột chân khơng, sắc kí cột cổ điển, kết tinh phân đoạn Kết quả: Từ 60 g cao cloroform, sau phân lập tinh chế thu ba hợp chất PD-1, PD-2 PD-3 Dựa vào liệu phổ UV, IR, NMR xác định cấu trúc hợp chất hai coumarin [PD-2 = peucedanol, PD-3 = bergapten] cùng hỗn hơ ̣p phytosterol gồ m [PD-1 = stigmasterol + β-sitosterol] Bảng Các chất phân lập từ cao clorofrom rễ Tiền hồ Tên CTPT KLPT P (mg) C29H50(48)O 414 (412) 52 PD-2 (peucedanol) C14H16O5 264 50 PD-3 (bergapten) C12H8O4 216 3,7 PD-1 (65% β-sitosterol 35% stigmasterol) Kết luận: Việc phân lập xác định cấu trúc hợp chất rễ Tiền hồ góp phần tạo sở cho việc kiểm nghiệm, tiêu chuẩn hóa dược liệu Final assay for the degree of BS Pharm – Academic year: 2016-2017 INVESTIGATE ON CHEMICAL CONSTITUENTS FROM HOG-FENNEL’S ROOTS Radix Peucedani Student: Le Thi Hoang Huyen Supervisor: Dr Nguyen Viet Kinh Introduction Hog-fennal is a posential herbal with a lot of function such as cure the cough, phlegm, fever, headache Furthermore, it can reduce cardiovascular effects, anti-tumor, cure the diabetes Nowadays, many products have included Hog-fennel in it such as Children’s cough medicine – OPC, Adults’ cough medicine – OPC, cough Siro Hedera … Although being planted in our northen highland, large amount of Hog-fennel is still imported from China Because the herbal medicine not be known well about the origin so that is the reason why the accreditation of quality should be noticed Besides, operation test still has difficulty in comparing the specimen with dried herbal medicine Because of that, “Investigate on chemical constituents from the Hog – fennel’s roots Radix Peucedani” has been proceeded in order to isolate some compounds from the herbal that support for standardization work and testing herbal, at the same time determining the isolated compounds structures, which are added into the reference of the source some natural compounds Materials and Methods Materials: chloroform extract from Hog – fennel’s roots Radix Peucedani Methods: Vacuum liquid chromatography (VLC), Classical column chromatography (CC), methods of recrystallization Results From 60 g chloroform extract, three compounds were isolated succesfully named PD-1, PD-2 and PD-3 According to spectroscopic analysis and chemical studies, the structure of these compounds were determined There are two coumarin peucedanol (PD-2; 50 mg), bergapten (PD-3; 3,7 mg) and a phytosterol mixture stigmasterol (35%) + β-sitosterol (65%) (PD-1; 52 mg), respectively Conclusion: The isolation and determine the structure of compounds from Hog-fennel’s roots have contributed to the foundation of operation testing, standardization the herbal MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN MỤC LỤC DANH MỤC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT 12 DANH MỤC HÌNH 14 DANH MỤC BẢNG 15 CHƯƠNG PHẦN TỔNG QUAN 1.1 TỔNG QUAN VỀ THỰC VẬT HỌC 1.1.1 Tên gọi 1.1.2 Vị trí phân loại loài Tiền hồ 1.1.3 Mô tả thực vật 1.1.4 Nguồn gốc phân bố sinh thái 1.1.5 Bộ phận dùng thu hái, chế biến, bảo quản [2] 1.2 TỔNG QUAN THÀNH PHÂN HÓA HỌC 1.2.1.Thành phần hóa ho ̣c của rễ Tiền hồ Radix Peucedani [17][30][40] 1.2.1.1 Coumarin 1.2.1.2 Các thành phần khác 10 1.2.2 Các phương pháp chiết xuất Tiền hồ 10 1.2.2.1 Chiết ngấm kiệt với cồn cao độ 10 1.2.2.2 Chiết nóng với cồn cao độ 10 1.2.2.3 Chiết hồi lưu với dung môi hữu 11 1.2.3 Các phương pháp phân lập 11 1.2.3.1 Phân lập phương pháp sắc ký cột pha thuận 11 1.2.3.2 Phân lập sắc ký cột Diaion HPLC điều chế 12 1.2.3.3 Phân lập HSCCC .12 1.3 TỔNG QUAN VỀ TÁC DỤNG SINH HỌC 15 1.3.1 Tác dụng chống tiểu đường [22] 15 1.3.2 Tác dụng chống khối u [17] .15 1.3.3 Tác dụng chống oxy hóa – kháng viêm [8] 16 1.3.3.1 Thử nghiệm DPPH 16 1.3.3.2 Thử nghiệm ABTS 16 1.3.3.3 Thử nghiệm NO 16 1.3.4 Tác dụng chống kết tập tiểu cầu [34] 17 1.4 CÁC BÀI THUỐC CÓ TIỀN HỒ [5] 17 1.4.1 Chữa viêm phế quản cấp tính 17 1.4.2 Chữa viêm phế quản cấp đợi cấp viêm phế quản mạn tính .17 1.4.3 Chữa viêm phế quản có đờm không tiết .17 1.4.4 Chữa hen phế quản 18 1.4.5 Chữa viêm quản khàn tiếng, nói khơng tiếng 18 1.4.6 Chữa cảm sốt, ho đờm, hen khó thở 18 1.4.7 Chữa cảm mạo .18 1.4.8 Chữa viêm phổi trẻ em thể phong hàn .18 1.4.9 Chữa sởi .18 1.5 CÁC CHẾ PHẨM CHỨA TIỀN HỒ .19 CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 21 2.1 ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU 21 2.1.1 Nguyên liệu 21 2.1.2 Dung môi, hóa chất 21 2.1.3 Trang thiết bị 21 2.2 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 21 2.2.1 Thử tinh khiết 21 2.2.2 Chiết xuất 22 2.2.3 Phân lập tinh chế 22 2.2.3.1 Sắc ký cột chân không (VLC) 22 2.2.3.2 Phương pháp kết tinh phân đoạn 22 2.2.4 Kiểm tra độ tinh khiết 23 2.2.5 Xác định cấu trúc hóa học 23 CHƯƠNG PHẦN THỰC NGHIỆM VÀ KẾT QUẢ 24 3.1 KHẢO SÁT THỰC VẬT HỌC 24 3.1.1 Rễ Tiền hồ 24 3.1.2 Bột rễ Tiền hồ 24 3.2 KHẢO SÁT HÓA HỌC 25 3.2.1 Thử tinh khiế t 25 3.2.2 Phân tích sơ thành phần hóa thực vật 25 3.2.2 Chiết xuất 25 3.3.3 Xử lý tủa từ cao cồn 26 3.3.4 Phân lâ ̣p chấ t từ cao cloroform 27 3.3.4.1 Thăm dị hệ dung mơi cho cột VLC-1 27 3.3.4.2 Tiến hành VLC-1 29 3.3.5 Tinh chế phân đoạn từ VLC-1 31 3.3.5.1 Phân đoạn 1.3 31 3.3.5.2 Phân đoạn 1.5 32 ... Ngọn mang hoa, hoa, quả, Ngọn mang hoa Tiền hồ hoa lá, rễ Tiền hồ hoa tím tím Ngọn mang hoa, cụm hoa, quả, lá, rễ Tiền hồ hoa trắng Cụm hoa Tiền hồ hoa trắng Lá Tiền hồ hoa tím Lá Tiền hồ hoa trắng... THỰC VẬT HO? ?C 1.1.1 Tên gọi Tên khoa học: Peucedanum decursivum(Miq.) Maximowicz, Peucedanum decursivum Maxim., lồi hoa tím Peucedanum praeruptorum (Miq.) Dunn, lồi hoa trắng thuô ̣c Họ Hoa tán... Peucedanum decursivum [38] Hình 1.2 Hình mang hoa, hoa, quả, lá, rễ Tiền hồ hoa trắng hoa tím Hình 1.3 Tiề n hờ hoa trắ ng da ̣ng phiế n - Hình