KHẢO sát KHẢ NĂNG TIẾT ENZYME CHITINASES và β 1,3 GLUCANASE của các CHỦNG nấm trichodermaspp được sưu tập tại ĐỒNG BẰNG SÔNG cửu LONG

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ÐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA NÔNG NGHIỆP VÀ SINH HỌC ỨNG DỤNG PHẠM HỒNG THI KHẢO SÁT KHẢ NĂNG TIẾT ENZYME CHITINASES VÀ β-1,3-GLUCANASE CỦA CÁC CHỦNG NẤM Trichoderma spp ĐƯỢC SƯU TẬP TẠI Trung tâm Học liệu ĐH Cần Thơ @ Tài liệu học tập nghiên cứu ĐỒNG BẰNG SÔNG CỬU LONG LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP KỸ SƯ NƠNG HỌC KHĨA 29 (2003 - 2008) Cần Thơ, 02 – 2008 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ÐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA NÔNG NGHIỆP VÀ SINH HỌC ỨNG DỤNG PHẠM HỒNG THI KHẢO SÁT KHẢ NĂNG TIẾT ENZYME CHITINASES VÀ β-1,3-GLUCANASE CỦA CÁC CHỦNG NẤM Trichoderma spp ĐƯỢC SƯU TẬP TẠI ĐỒNG BẰNG SÔNG CỬU LONG Trung tâm Học liệu ĐH Cần Thơ @ Tài liệu học tập nghiên cứu Chuyên ngành: Nông Học Mã số: TT0319A2 LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP KỸ SƯ NƠNG HỌC KHĨA 29 (2003 - 2008) CÁN BỘ HƯỚNG DẪN Th.s Dương Minh KS Lê Phước Thạnh KS Đào Thị Hồng Xuyến Cần Thơ, 02 – 2008 TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA NÔNG NGHIỆP VÀ SINH HỌC ỨNG DỤNG BỘ MÔN BẢO VỆ THỰC VẬT Chứng nhận chấp thuận luận văn với đề tài: “KHẢO SÁT KHẢ NĂNG TIẾT ENZYME CHITINASES VÀ β-1,3-GLUCANASE CỦA CÁC CHỦNG NẤM Trichoderma spp ĐƯỢC SƯU TẬP TẠI ĐỒNG BẲNG SÔNG CỬU LONG” Do sinh viên: PHẠM HỒNG THI thực đề nạp Kính trình hội đồng chấm luận văn tốt nghiệp xem xét Cần Thơ, ngày … tháng năm 2008 Trung tâm Học liệu ĐH Cần Thơ @ Tài liệu học tập nghiên cứu Cán hướng dẫn Th.s DƯƠNG MINH TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ NÔNG NGHIỆP VÀ SINH HỌC ỨNG DỤNG BỘ MÔN BẢO VỆ THỰC VẬT Hội đồng chấm luận văn tốt nghiệp chấp thuận luận văn với đề tài: “KHẢO SÁT KHẢ NĂNG TIẾT ENZYME CHITINASES VÀ β-1,3-GLUCANASE CỦA CÁC CHỦNG NẤM Trichoderma spp ĐƯỢC SƯU TẬP TẠI ĐỒNG BẲNG SÔNG CỬU LONG” Do sinh viên: PHẠM HỒNG THI thực bảo vệ trước hội đồng ngày… tháng… năm 2008 Luận văn hội đồng chấp thuận đánh giá mức:…………………… Ý kiến hội đồng: ……………………………………………………………… ……………………………………………………………………………………… ……………………………………………………………………………………… Trung tâm Học liệu ĐH Cần Thơ @ Tài liệu học tập nghiên cứu Cần Thơ, ngày … tháng … năm 2008 DUYỆT KHOA Trưởng khoa Nông Nghiệp Sinh Học Ứng Dụng Chủ tịch hội đồng LÝ LỊCH CÁ NHÂN Sinh viên: PHẠM HỒNG THI Sinh ngày 21 tháng năm 1985 Tại xã Hiếu Thành, huyện Vũng Liêm, tỉnh Vĩnh Long Con Ơng: PHẠM HỒNG CHUẨN Và Bà: HUỲNH ANH THƠ Đã tốt nghiệp trường Trung học Phổ thơng Hựu Thành, huyện Trà Ơn, tỉnh Vĩnh Long, năm 2003 Vào trường Đại học Cần Thơ năm 2003, theo học Ngành Nơng Học, khóa 29 Tốt nghiệp Kỹ sư Nông Nghiệp chuyên ngành Nông Học năm 2008 Trung tâm Học liệu ĐH Cần Thơ @ Tài liệu học tập nghiên cứu iv LỜI CẢM TẠ Kính dâng Ba Mẹ, người suốt đời tận tụy chúng con, xin cảm ơn người thân giúp đỡ, động viên suốt thời gian qua Thành thật biết ơn thầy Dương Minh, anh Lê Phước Thạnh chị Phan Thị Anh Thơ tận tình hướng dẫn, giúp đỡ động viên em suốt thời gian làm hoàn thành luận văn tốt nghiệp Chân thành cảm tạ thầy Cố vấn học tập Ngơ Thành Trí, tồn thể q thầy khoa Nơng nghiệp & Sinh học ứng dụng kiến thức mà quý thầy cô truyền đạt cho em suốt thời gian học tập trường Đây hành trang vững giúp em bước vào đời Xin gửi lời cảm tạ đến: - Chị Đào Thị Hồng Xuyến, anh chị Bộ môn Bảo vệ Thực vật đóng góp ý kiến quý báu tạo điều kiện thuận lợi cho em hoàn chỉnh luận văn tốt nghiệp - Các bạn khóa, đặc biệt bạn Dương Phạm Minh Châu Xin cảm ơn hỗ trợ tâm động viên bạn.Cần Thơ @ Tài liệu học tập nghiên cứu Trung Học liệucácĐH v Phạm Hồng Thi, 2007 “Khảo sát khả tiết enzyme chitinases β-1,3-glucanase chủng nấm Trichoderma spp sưu tập đồng sông Cửu Long” Luận văn tốt nghiệp kỹ sư Nông Học, khoa Nông Nghiệp Sinh Học Ứng Dụng, trường Đại học Cần Thơ TÓM LƯỢC Đề tài “Khảo sát khả tiết enzym chitinases β-1,3-glucanase chủng Trichoderma spp sưu tập đồng sông Cửu Long” thực từ tháng 9/2007 đến tháng 2/2008 nhằm chọn lọc chủng nấm Trichoderma spp có khả tiết nhiều enzyme chitinases β-1,3-glucanase cao điều kiện phịng thí nghiệm Kết đạt góp phần hữu ích chiến lược phòng trừ bệnh hại trồng theo hướng sinh học đồng sông Cửu Long tương lai Đề tài gồm hai thí nghiệm thực điều kiện phịng thí nghiệm mơn Bảo vệ Thực vật, khoa Nông nghiệp & Sinh học ứng dụng, đại học Cần Thơ từ tháng 9/2007 đến tháng 2/2008 Thí nghiệm bố trí theo thể thức khối hoàn toàn Trung tâm Học ngẫu nhiên, lặpliệu lại ĐH Cần Thơ @ Tài liệu học tập nghiên cứu Thí nghiệm 1: Khảo sát khả tiết enzyme chitinases chủng Trichoderma spp Thí nghiệm thực môi trường TSM lỏng với 11 chủng nấm Trichoderma T-BM2a, T-LV1a, T-OM2a, T-CB1b, T-CB3a, T-CB8a, T-CB8c, TCB8d, T-CB10a, T-CB10b T-CB11c chủng nấm Fusarium solani F-OM2 làm chất so với chitin Nấm F solani (106 bào tử/ml) ni lắc (140 vịng/phút) trước ngày, sau chủng nấm Trichoderma (106 bào tử/ml) lắc tiếp ngày điều kiện nhiệt độ phòng Thí nghiệm 2: Khảo sát khả tiết enzyme β-1,3-glucanase chủng Trichoderma spp Thí nghiệm thực môi trường TSM lỏng với 10 chủng nấm Trichoderma T-BM2a, T-CB8c, T-CB10b, T-CB11c, T-CTTG2e, T-CTTG6b, TCTTG7d, T-CTTG8c, T-CTTG9e, T-CTTG10a chủng nấm Phytophthora palmivora P-CL2 làm chất so với β-1,3-glucan Nấm P palmivora (106 bọc bào tử/ml) ni lắc (140 vịng/phút) trước ngày, sau chủng nấm Trichoderma (106 bào tử/ml) lắc tiếp ngày điều kiện nhiệt độ phịng vi Dịch trích mẫu thí nghiệm lọc qua giấy Whatman No5, trữ 40C ước lượng hàm lượng protein theo phương pháp Bradford (1976) khảo sát hoạt tính enzyme chitinases β-1,3-glucanase theo phương pháp Isaac Gokhale (1982) Kết thí nghiệm cho thấy: - Chitin chất giúp nấm Trichoderma gia tăng sinh khối khả tiết enzyme chitinases tốt khuẩn ty nấm F solani - Sinh khối khô nấm Trichoderma đạt cao nuôi môi trường TSM lỏng-chitin sau ngày nuôi lắc - Bốn chủng nấm T-BM2a, T-OM2a, T-CB1b T-CB8a tiết nhiều enzyme chitinases - Việc bổ sung vào môi trường nuôi cấy β-1,3-glucan nấm P palmivora không giúp gia tăng sinh khối khô chủng nấm Trichoderma thí nghiệm, nhiên lại giúp tăng khả tiết enzyme β-1,3-glucanase β-1,3-glucan chất giúp nấm Trichoderma tiết nhiều enzyme β-1,3-glucanase so với nấm P palmivora - Khả tiết enzyme β-1,3-glucanase chủng T-CTTG10a, T-BM2a, TCB8c, T-CB10b, T-CB11c T-CTTG9e tốt sau ngày nuôi lắc Trung tâm Học liệu ĐH Cần Thơ @ Tài liệu học tập nghiên cứu - Chủng nấm Trichoderma T-CB8c có khả tiết hai loại enzyme chitinases β-1,3-glucanase cao hai thí nghiệm Từ kết này, chủng Trichoderma có triển vọng (T-LV1a, T-OM2a, T-CB1b T-CB8c nấm đối nấm bệnh có vách tế bào chứa chitin; T-CTTG10a, T-BM2a, T-CB8c, T-CB10b, T-CB11c T-CTTG9e nấm bệnh có vách tế bào chứa glucan) tiếp tục thử nghiệm điều kiện nhà lưới đồng để đánh giá khả đối kháng với nấm bệnh chọn lọc chủng hiệu phục vụ cơng tác phịng trừ bệnh hại theo hướng sinh học tương lai vii MỤC LỤC Trang Lý lịch cá nhân iv Lời cảm tạ v Tóm lược vi Mục lục viii Danh sách bảng x Danh sách hình xi MỞ ĐẦU CHƯƠNG 1: LƯỢC KHẢO TÀI LIỆU 1.1 Nấm Trichoderma 1.1.1 Đặc điểm phân loại hình thái học nấm Trichoderma 1.1.2 Cơ chế tiết enzyme khả đối kháng nấm Trichoderma nấm bệnh gây hại trồng 1.1.3 Vai trò nấm Trichoderma phòng trừ sinh học bệnh trồng 1.2 Nấm Fusarium solani Phytophthora palmivora CHƯƠNG 2: PHƯƠNG TIỆN VÀ PHƯƠNG PHÁP 10 Trung Học cứu 2.1 tâm Phương tiện liệu ĐH Cần Thơ @ Tài liệu học tập nghiên 10 2.2 Phương pháp thí nghiệm 12 2.2.1 Thí nghiệm 1: Khảo sát khả tiết enzyme chitinases chủng Trichoderma spp * Ước lượng hàm lượng protein mẫu dịch trích * Khảo sát hoạt tính enzyme chitinases 2.2.2 Thí nghiệm 2: Khảo sát khả tiết enzyme β-1,3-glucanase chủng Trichoderma spp * Ước lượng hàm lượng protein mẫu dịch trích * Khảo sát hoạt tính β-1,3-glucanase 12 13 14 15 16 16 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 18 3.1 Khả tiết enzyme chitinases chủng nấm Trichoderma spp điều kiện phịng thí nghiệm 18 3.1.1 Ghi nhận tổng quát 18 3.1.2 Kết thí nghiệm 19 3.1.2.1 Sinh khối chủng nấm Trichoderma 19 3.1.2.2 Khả tiết enzyme chitinases chủng nấm Trichoderma 20 viii 3.2 Khả tiết enzyme β-1,3-glucanase chủng nấm Trichoderma spp điều kiện phịng thí nghiệm 22 3.2.1 Ghi nhận tổng quát 22 3.2.2 Kết thí nghiệm 22 3.2.2.1 Sinh khối chủng nấm Trichoderma 22 3.2.2.2 Khả tiết enzyme β-1,3-glucanase chủng nấm Trichoderma 24 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 28 TÀI LIỆU THAM KHẢO 29 PHỤ CHƯƠNG 34 Trung tâm Học liệu ĐH Cần Thơ @ Tài liệu học tập nghiên cứu ix ... tài: “KHẢO SÁT KHẢ NĂNG TIẾT ENZYME CHITINASES VÀ β- 1,3- GLUCANASE CỦA CÁC CHỦNG NẤM Trichoderma spp ĐƯỢC SƯU TẬP TẠI ĐỒNG BẲNG SÔNG CỬU LONG? ?? Do sinh viên: PHẠM HỒNG THI thực bảo vệ trước hội đồng. .. DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ÐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA NÔNG NGHIỆP VÀ SINH HỌC ỨNG DỤNG PHẠM HỒNG THI KHẢO SÁT KHẢ NĂNG TIẾT ENZYME CHITINASES VÀ β- 1,3- GLUCANASE CỦA CÁC CHỦNG NẤM Trichoderma spp ĐƯỢC SƯU TẬP... 1: Khảo sát khả tiết enzyme chitinases chủng Trichoderma spp * Ước lượng hàm lượng protein mẫu dịch trích * Khảo sát hoạt tính enzyme chitinases 2.2.2 Thí nghiệm 2: Khảo sát khả tiết enzyme β- 1,3- glucanase