ĐÁNH GIÁ KHẢ NĂNG CHỊU ĐỰNG độc CHẤT sắt (fe 2+ ) và NHÔM (al 3+ ) của CHỦNG nấm TRICHODERMAT BM2a

TRƯỜNG ðẠI HỌC CẦN THƠ KHOA NÔNG NGHIỆP & SINH HỌC ỨNG DỤNG LÊ HỮU DIỆN ðÁNH GIÁ KHẢ NĂNG CHỊU ðỰNG ðỘC CHẤT SẮT (Fe2+) VÀ NHÔM (Al3+) CỦA CHỦNG NẤM TRICHODERMA T-BM2a Luận văn tốt nghiệp Ngành: BẢO VỆ THỰC VẬT Cần Thơ, 2010 TRƯỜNG ðẠI HỌC CẦN THƠ KHOA NÔNG NGHIỆP & SINH HỌC ỨNG DỤNG Luận văn tốt nghiệp Ngành: BẢO VỆ THỰC VẬT Tên ñề tài: ðÁNH GIÁ KHẢ NĂNG CHỊU ðỰNG ðỘC CHẤT SẮT (Fe2+) VÀ NHÔM (Al3+) CỦA CHỦNG NẤM TRICHODERMA T-BM2a Giảng viên hướng dẫn: ThS Dương Minh Ks Trần Minh Tài Sinh viên thực hiện: Lê Hữu Diện MSSV: 3064921 Lớp: BVTV K32 Cần Thơ, 2010 TRƯỜNG ðẠI HỌC CẦN THƠ KHOA NÔNG NGHIỆP & SINH HỌC ỨNG DỤNG BỘ MÔN BẢO VỆ THƯC VẬT Chứng nhận ñã chấp thuận luận văn với ñề tài: “ðÁNH GIÁ KHẢ NĂNG CHỊU ðỰNG ðỘC CHẤT SẮT (Fe2+) VÀ NHÔM (Al3+) CỦA CHỦNG NẤM TRICHODERMA T-BM2a” Do sinh viên: LÊ HỮU DIỆN thực đề nạp Kính trình hội đồng chấm luận văn tốt nghiệp xem xét Cần Thơ, ngày … tháng năm 2010 Cán hướng dẫn ThS DƯƠNG MINH i TRƯỜNG ðẠI HỌC CẦN THƠ KHOA NÔNG NGHIỆP & SINH HỌC ỨNG DỤNG BỘ MÔN BẢO VỆ THỰC VẬT Hội ñồng chấm luận văn tốt nghiệp ñã chấp thuận luận văn với ñề tài: “ðÁNH GIÁ KHẢ NĂNG CHỊU ðỰNG ðỘC CHẤT SẮT (Fe2+) VÀ NHÔM (Al3+) CỦA CHỦNG NẤM TRICHODERMA T-BM2a” Do sinh viên LÊ HỮU DIỆN thực bảo vệ trước hội ñồng ngày… tháng… năm 2010 Luận văn ñã ñược hội ñồng chấp thuận ñánh giá mức:…………………… Ý kiến hội ñồng: ………………………………………………………………………………… …… …………………………………………………………………………… Duyệt khoa Cần Thơ, ngày … tháng … năm 2010 Trưởng khoa Nông Nghiệp Sinh Học Ứng Dụng ii Chủ tịch hội ñồng LỜI CAM ðOAN Tơi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu thân Các số liệu, kết trình bày luận văn trung thực chưa cơng bố luận văn trước ñây Tác giả luận văn (ký tên) Lê Hữu Diện iii LÝ LỊCH CÁ NHÂN Sinh viên: LÊ HỮU DIỆN Sinh ngày 10 tháng 05 năm 1988 Tại Cai Lậy - Tiền Giang Con Ông: Lê Quang Thử - sinh năm: 1960 Và Bà: Phan Thị Dung - sinh năm: 1962 ðã tốt nghiệp trường Trung học phổ thông ðốc Binh Kiều, huyện Cai Lậy, tỉnh Tiền Giang, năm 2006 Vào Trường ðại học Cần Thơ năm 2006, theo học Ngành Bảo Vệ Thực Vật, khóa 32 Tốt nghiệp Kỹ sư Nông Nghiệp chuyên ngành Bảo Vệ Thực Vật năm 2010 iv LỜI CẢM TẠ Kính dâng Ba Mẹ, người suốt đời tận tụy con, xin cảm ơn người thân ñã giúp ñỡ, ñộng viên suốt thời gian qua Thành thật biết ơn thầy Dương Minh, Ks Trần Minh Tài ñã tận tình hướng dẫn, giúp đỡ động viên em suốt thời gian làm việc hoàn thành luận văn tốt nghiệp Chân thành cảm tạ thầy cố vấn học tập Lê Văn Vàng tồn thể q thầy khoa Nơng Nghiệp Sinh Học Ứng Dụng kiến thức mà q thầy truyền đạt cho em suốt thời gian học tập trường ðây hành trang vững giúp em bước vào ñời Xin gửi lời cảm tạ ñến: Tất anh chị Bộ Mơn Bảo Vệ Thực Vật ñóng góp ý kiến quý báu tạo ñiều kiện thuận lợi cho em hoàn chỉnh luận văn tốt nghiệp Các anh chị tập thể lớp Bảo Vệ Thực Vật khố 32 đặc biệt chị Xuyến, Phúc, Như, anh Kiệt, bạn Thúy, Xuyến, Nhụy, Phúc, Duy, Yến nhiệt tình giúp đỡ tơi thời gian làm luận văn tốt nghiệp Xin cảm ơn hỗ trợ ñộng viên bạn Trân trọng! v Lê Hữu Diện, 2010 “ðánh giá khả chịu ñựng ñộc chất sắt (Fe2+) nhôm (Al3+) chủng nấm Trichoderma T-BM2a” Luận văn tốt nghiệp Kỹ sư Bảo vệ Thực vật, khoa Nông Nghiệp Sinh Học Ứng Dụng, trường ðại học Cần Thơ TÓM LƯỢC ðề tài “ðánh giá khả chịu đựng độc chất sắt (Fe2+) nhơm (Al3+ ) chủng nấm Trichoderma T-BM2a” ñược thực nhằm bước ñầu ñánh giá khả chịu ñựng ñộc chất sắt (Fe2+), nhơm (Al3+) điều kiện pH mơi trường thấp chủng T-BM2a điều kiện phịng thí nghiệm ðề tài ñược thực từ tháng 01 năm 2010 đến tháng năm 2010, phịng thí nghiệm Bệnh cây, môn Bảo Vệ Thực Vật, khoa Nông Nghiệp Sinh Học Ứng Dụng, trường ðại học Cần Thơ ðề tài thực với thí nghiệm: (1) Thí nghiệm đánh giá khả chịu đựng độc chất sắt (Fe2+) chủng T-BM2a bố trí theo thể thức hoàn toàn ngẫu nhiên với bốn nghiệm thức, bốn lần lặp lại (2) thí nghiệm đánh giá khả chịu đựng độc chất nhơm (Al3+) chủng T-BM2a bố trí theo thể thức hồn tồn ngẫu nhiên hai nhân tố với bốn nghiệm thức, bốn lần lặp lại để đánh giá khả thích nghi chủng T-BM2a với điều kiện mơi trường có diện ñộc chất Fe2+ Al3+ Mỗi lặp lại bình tam giác chứa 100 ml mơi trường PDB + hóa chất Fe2+ nồng độ 0; 2; 4; mmol 0; 1,5; 3; 4,5 mmol Al3+, chủng T-BM2a mật số 105 bào tử/ml vào bình tam giác ñể hai ñiều kiện ñể yên lắc (140 vịng/phút) 10 ngày nhiệt độ phịng Sau 10 ngày bố trí thí nghiệm, lọc phần sinh khối thu sấy khơ (ở 1050C giờ) đem cân, phần dung dịch mơi trường thu ñem ño pH, EC, ñếm mật số bào tử Trichoderma tạo thành Kết sau 10 ngày bố trí thí nghiệm cho thấy: Chủng T-BM2a có khả thích nghi điều kiện pH mơi trường thấp có diện sắt (Fe2+) nhôm (Al3+) Ở hai nồng ñộ mmol Fe2+ ba nồng ñộ 1,5; 4,5 mmol Al3+ T-BM2a tạo sinh khối cao khác biệt so với ñối chứng Mật số bào tử khơng khác biệt so với đối chứng hai nồng ñộ mmol Fe2+ ba nồng ñộ 1,5; 4,5 mmol Al3+ điều kiện để n Từ kết thí nghiệm này, nồng ñộ Fe2+, Al3+ mà T-BM2a chịu ñựng tốt tiếp tục thử nghiệm chủng Trichoderma chịu úng tốt khác ñể chọn lọc chủng triển vọng, vừa có khả chịu úng vừa chịu ñựng ñược ñộc chất sắt nhôm, ứng dụng vào sản xuất vi MỤC LỤC Trang Phụ bìa Chấp nhận ñề tài cán hướng dẫn Chấp nhận ñề tài hội ñồng Lời cam ñoan Lý lịch cá nhân Lời cảm tạ Tóm lược Mục lục Danh sách bảng Danh sách hình MỞ ðẦU CHƯƠNG 1: LƯỢC KHẢO TÀI LIỆU 1.1 Nấm Trichoderma 1.1.1 ðặc ñiểm phân loại hình thái 1.1.2 Sự phân bố 1.1.3 Khả phân hủy chất hữu 1.1.4 Ảnh hưởng pH ñến sinh trưởng phát triển Trichoderma 1.2 ðất phèn 1.2.1 Khái niệm, hình thành phân bố ñất phèn 1.2.2 ðặc ñiểm ñất phèn 1.2.2.1 pH thấp 1.2.2.2 ðộc chất nhôm (Al3+) 1.2.2.3 ðộc chất sắt (Fe2+) 1.2.2.4 ðộ dẫn ñiện (EC) CHƯƠNG 2: PHƯƠNG TIỆN PHƯƠNG PHÁP 2.1 Phương tiện 2.1.1 Thời gian địa điểm thí nghiệm 2.1.2 Vật liệu thí nghiệm 2.2 Phương pháp thí nghiệm 2.2.1 Mục đích thí nghiệm 2.2.2 Chuẩn bị nguồn nấm 2.2.3 Bố trí thí nghiệm 2.2.4 Cách thực 2.2.5 Các tiêu theo dõi 2.2.6 Xử lý số liệu CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ THẢO LUẬN 3.1 Ghi nhận tổng qt 3.2 Thí nghiệm đánh giá khả chịu ñựng ñộc chất sắt (Fe2+) chủng T-BM2a 3.2.1 pH ñộ dẫn ñiện (EC) mơi trường thời điểm bắt đầu thí nghiệm sau 10 ngày bố trí thí nghiệm 3.2.2 Sinh khối mật số bào tử 3.3 Thí nghiệm đánh giá khả chịu đựng độc chất nhơm (Al3+) vii i ii iii iv v vi vii ix ix 2 2 3 4 5 6 6 7 7 8 9 9 10 11 chủng T-BM2a 3.3.1 pH độ dẫn điện (EC) mơi trường thời điểm bắt đầu thí nghiệm sau 10 ngày bố trí thí nghiệm 3.3.2 Sinh khối 3.3.3 Mật số bào tử CHƯƠNG 4: KẾT LUẬN VÀ ðỀ NGHỊ 4.1 Kết luận 4.2 ðề nghị TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ CHƯƠNG viii 11 13 13 16 16 16 17 CHƯƠNG PHƯƠNG TIỆN VÀ PHƯƠNG PHÁP 2.1 PHƯƠNG TIỆN 2.1.1 Thời gian địa điểm thí nghiệm - Thời gian thí nghiệm: Thí nghiệm thực từ tháng 01 năm 2010 ñến tháng năm 2010 - ðịa điểm: Phịng thí nghiệm Bệnh cây, Bộ mơn Bảo Vệ Thực Vật, Khoa Nông Nghiệp Sinh Học Ứng Dụng, Trường ðại học Cần Thơ 2.1.2 Vật liệu thí nghiệm
Thiết bị dụng cụ: - Nồi trùng ướt (autoclave) hiệu Sibata, model KL300 - Tủ cấy hiệu Dalton, model FAP1300AN - Máy ño pH hiệu Oakton (do Eutech instruments sản xuất) - Máy ño EC hiệu Hanna, model HI8733 - Máy lắc hiệu Vortex Stuart SA6, Uk - Cân ñiện tử hiệu Shimadzu, model UX620H - Bơm hút chân khơng - ðĩa petri (đường kính đáy 9,5 cm, nắp 10 cm) - Bình tam giác (erlen meyer) loại 250 ml - Lamme ñếm hồng cầu (haemocytometer) hiệu Malassez (ðức) - Các vật dụng cần thiết khác
Hóa chất: - Iron (II) sulphate (FeSO4.7H2O) - Aluminum chloride (AlCl3.6H2O) - Các hóa chất cần thiết khác: Ethanol, HCl, NaOH, nước cất
Nguồn nấm: Chủng nấm Trichoderma T-BM2a ñược sưu tập huyện Bình Minh tỉnh Vĩnh Long tồn trữ Bộ mơn Bảo Vệ Thực Vật, khoa Nông Nghiệp Sinh Học Ứng Dụng, trường ðại học Cần Thơ
Môi trường nuôi cấy: - Môi trường PDA (Potato Dextrose Agar) Khoai tây Glucose Agar Nước cất (vừa ñủ) pH 200 g 20 g 20 g 1.000 ml 6,5 - 6,8 - Môi trường PDB (Potato Dextrose Broth) Khoai tây Glucose Nước cất (vừa ñủ) pH 200 g 20 g 1.000 ml 3,8 2.2 PHƯƠNG PHÁP THÍ NGHIỆM 2.2.1 Mục đích thí nghiệm Thí nghiệm thực nhằm ñánh giá khả chịu ñựng ñộc chất sắt nhôm nồng ñộ khác chủng T-BM2a điều kiện phịng thí nghiệm 2.2.2 Chuẩn bị nguồn nấm Chủng T-BM2a ni cấy đĩa petri chứa mơi trường PDA (pH = 6,5 6,8) tuần cho bào tử nấm phát triển trước bố trí thí nghiệm 2.2.3 Bố trí thí nghiệm Thí nghiệm 1: ðánh giá khả chịu đựng độc chất sắt (Fe2+) chủng T-BM2a Thí nghiệm thực nhằm ñánh giá khả chịu ñựng ñộc chất sắt nồng ñộ 0; 2; 4; mmol Fe2+ điều kiện để n Thí nghiệm bố trí theo thể thức hồn tồn ngẫu nhiên với nghiệm thức lần lặp lại, lặp lại bình tam giác (250 ml) có chứa 100 ml PDB Các nghiệm thức bố trí sau: + Nghiệm thức (ðối chứng): 100 ml môi trường PDB + Nghiệm thức (2 mmol): 100 ml môi trường PDB + 0,556 (g/l) FeSO4.7H2O + Nghiệm thức (4 mmol): 100 ml môi trường PDB + 1,112 (g/l) FeSO4.7H2O + Nghiệm thức (6 mmol): 100 ml môi trường PDB + 1,668 (g/l) FeSO4.7H2O Tổng cộng: nghiệm thức x lặp lại = 16 bình tam giác Thí nghiệm 2: ðánh giá khả chịu đựng độc chất nhơm (Al3+) chủng T-BM2a Thí nghiệm thực nhằm ñánh giá khả chịu ñựng ñộc chất nhôm nồng ñộ 0; 1,5; 3; 4,5 mmol Al3+ hai ñiều kiện để n lắc Thí nghiệm bố trí theo thể thức hoàn toàn ngẫu nhiên hai nhân tố với nghiệm thức, lần lặp lại, lặp lại bình tam giác (250 ml) có chứa 100 ml PDB - Thí nghiệm bố trí gồm hai nhân tố: + Môi trường nuôi cấy: Chủng nấm T-BM2a ni cấy mức nồng độ Al3+ 0; 1,5; 3; 4,5 mmol + ðiều kiện ni cấy: Các nghiệm thức bố trí hai điều kiện: ðể n lắc 140 vịng/phút (hình 3.1) - Các nghiệm thức bố trí sau: + Nghiệm thức (ðối chứng): 100 ml môi trường PDB + Nghiệm thức (1,5 mmol): 100 ml môi trường PDB + 0,362 (g/l) AlCl3.6H2O + Nghiệm thức (3 mmol): 100 ml môi trường PDB + 0,725 (g/l) AlCl3.6H2O + Nghiệm thức (4,5 mmol): 100 ml môi trường PDB + 1,087 (g/l) AlCl3.6H2O Tổng cộng: nghiệm thức x lặp lại x nhân tố = 32 bình tam giác 2.2.4 Cách thực + Chuẩn bị mơi trường PDB, điều chỉnh pH mơi trường (pH = 3,8) Cân lượng hóa chất tương ứng nghiệm thức cho vào bình tam giác ðong 100 ml mơi trường PDB vào bình tam giác + Thanh trùng bình tam giác nồi trùng ướt (ở 1210C 20 phút) + Các bình tam giác sau trùng ñược chủng T-BM2a vào lặp lại với mật số 105 bào tử/ml 2.2.5 Các tiêu theo dõi - ðo pH EC (mS/cm) môi trường thời điểm bắt đầu sau 10 ngày bố trí thí nghiệm - ðếm mật số bào tử (bào tử/ml) sau 10 ngày bố trí thí nghiệm - Sinh khối (g/l) tạo thành: Sau 10 ngày bố trí thí nghiệm tiến hành lấy tiêu, dùng máy hút chân không lọc lấy phần dung dịch mơi trường qua gịn thấm Phần sinh khối tạo thành sấy khơ 105oC Sau cân sinh khối nấm tạo thành (g/l) 2.2.6 Xử lý số liệu Các số liệu ñược xử lý phần mềm Excel phân tích thống kê phần mềm IRRISTAT for Dos CHƯƠNG KẾT QUẢ THẢO LUẬN 3.1 GHI NHẬN TỔNG QUÁT Thí nghiệm tiến hành điều kiện phịng thí nghiệm với nhiệt độ trung bình 25 - 30 oC ẩm độ tương đối khơng khí 65 - 85% Khả chịu ñựng ñộc chất sắt (Fe2+) nhơm (Al3+) T-BM2a thể qua khả sinh trưởng, phát triển sinh bào tử nồng độ Fe2+ Al3+ khác Nhìn chung tất nồng độ Fe2+ Al3+ T-BM2a ñều có khả tạo sinh khối, bào tử sau 10 ngày bố trí thí nghiệm (BTTN) với nhiều mức ñộ khác có khác biệt mặt thống kê ðối với thí nghiệm đánh giá khả chịu đựng độc chất nhơm (Al3+) T-BM2a, điều kiện mơi trường lắc phát triển T-BM2a tương đối tốt điều kiện để n 3.2 THÍ NGHIỆM ðÁNH GIÁ KHẢ NĂNG CHỊU ðỰNG ðỘC CHẤT SẮT (Fe2+) CỦA CHỦNG T-BM2a Fe2+ nguyên tố ñộc mơi trường đất phèn Tuy nhiên, Fe2+ dễ bị oxy hóa thành Fe3+ (màu vàng nâu đỏ), đặc tính Fe3+ gây độc hóa tính Trong điều kiện lắc, oxy khơng khí dễ khuếch tán vào mơi trường, Fe2+ bị oxy hóa thành Fe3+ làm tính độc, khơng đánh giá ảnh hưởng độc chất sắt Trichoderma Cho nên thí nghiệm ñánh giá khả chịu ñựng ñộc chất sắt chủng T-BM2a, tiến hành BTTN ñiều kiện ñể yên 3.2.1 pH ñộ dẫn ñiện (EC) mơi trường thời điểm bắt đầu thí nghiệm sau 10 ngày bố trí thí nghiệm Bảng 3.1: pH mơi trường thời điểm bắt đầu thí nghiệm sau 10 ngày bố trí thí nghiệm chịu đựng độc chất Fe2+ (ðại học Cần Thơ, 2010) Nghiệm thức ðối chứng mmol Fe2+ mmol Fe2+ mmol Fe2+ Trung bình F CV (%) pH Bắt đầu thí nghiệm 3,97 a 3,32 b 3,09 c 3,12 c 3,38 A Sau 10 ngày 3,70 a 2,94 b 2,91 b 2,88 b 3,11 B Khác biệt ** ** ** ** ** ** 2,5 Ghi chú: Trong cột số có chữ theo sau giống không khác biệt ý nghĩa thống kê qua phép thử Duncan **: khác biệt mức ý nghĩa 1% ... giá khả chịu ñựng ñộc chất sắt (Fe2 +) nhôm (Al3 + ) chủng nấm Trichoderma T -BM2a? ?? ñược thực nhằm bước ñầu ñánh giá khả chịu đựng độc chất sắt (Fe2 +), nhơm (Al3 +) ñiều kiện pH môi trường thấp chủng. .. 200 7) Trên sở đề tài “ðánh giá khả chịu ñựng ñộc chất sắt (Fe2 +) nhơm (Al3 +) chủng nấm Trichoderma T -BM2a? ?? thực nhằm bước ñầu ñánh giá khả chịu ñựng ñối với ñộc chất sắt nhôm ñiều kiện pH thấp chủng. .. ( 1) Thí nghiệm đánh giá khả chịu ñựng ñộc chất sắt (Fe2 +) chủng T -BM2a bố trí theo thể thức hồn tồn ngẫu nhiên với bốn nghiệm thức, bốn lần lặp lại ( 2) thí nghiệm đánh giá khả chịu đựng độc chất