Nghiên cứu xây dựng quy trình và đánh giá sự có mặt của nấm mốc và vi khuẩn hiếu khí trong không khí môi trường lao động (Luận văn thạc sĩ)Nghiên cứu xây dựng quy trình và đánh giá sự có mặt của nấm mốc và vi khuẩn hiếu khí trong không khí môi trường lao động (Luận văn thạc sĩ)Nghiên cứu xây dựng quy trình và đánh giá sự có mặt của nấm mốc và vi khuẩn hiếu khí trong không khí môi trường lao động (Luận văn thạc sĩ)Nghiên cứu xây dựng quy trình và đánh giá sự có mặt của nấm mốc và vi khuẩn hiếu khí trong không khí môi trường lao động (Luận văn thạc sĩ)Nghiên cứu xây dựng quy trình và đánh giá sự có mặt của nấm mốc và vi khuẩn hiếu khí trong không khí môi trường lao động (Luận văn thạc sĩ)Nghiên cứu xây dựng quy trình và đánh giá sự có mặt của nấm mốc và vi khuẩn hiếu khí trong không khí môi trường lao động (Luận văn thạc sĩ)
Luận văn Thạc sĩ sinh học Vũ Duy Thanh VIỆN HÀN LÂM KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM VIỆN SINH THÁI VÀ TÀI NGUYÊN SINH VẬT - VŨ DUY THANH NGHIÊN CỨU XÂY DỰNG QUY TRÌNH VÀ ĐÁNH GIÁ SỰ CĨ MẶT CỦA NẤM MỐC VÀ VI KHUẨN HIẾU KHÍ TRONG KHƠNG KHÍ MƠI TRƢỜNG LAO ĐỘNG Chun ngành: Vi sinh vật học Hà Nội - 2014 K16 1Viện Sinh thái Tài nguyên sinh vật Luận văn Thạc sĩ sinh học Vũ Duy Thanh MỞ ĐẦU Trong khơng khí, ngồi bụi thành phần có vi sinh vật vi khuẩn, nấm mốc, thành phần có liên quan mật thiết với nồng độ bụi, bụi hữu nhiều số lượng vi sinh vật nhiều, vi sinh vật không khí gồm nhiều loại khác cầu khuẩn gây bệnh, trực khuẩn lao, trực khuẩn bạch hầu tạp khuẩn khác, quan trắc vi sinh vật khơng khí cách để dự phòng định hướng nguy tiểm ẩn gây ô nhiễm sinh học khơng khí Điều kiện ngoại cảnh điều kiện thời tiết có ảnh hưởng nhiều tới tình trạng số lượng vi sinh vật khơng khí, khí hậu Việt Nam thuộc vùng khí hậu nhiệt đới ấm ẩm, nước Việt Nam có vùng khác khí hậu miền Bắc thuộc vùng khí hậu nhiệt đới ấm ẩm, vùng khí hậu khu vực miền Trung thuộc vùng nhiệt đới gió mùa, vùng khí hậu vùng phía nam thuộc vùng khí hậu nhiệt đới Xavan (có hai mùa rõ rệt mùa khơ mùa mưa), đa dạng mà vùng Việt Nam có phân bố số lượng vi sinh vật khơng khí khác nhiều Tùy theo mùa có phát triển loại vi khuẩn hay vi nấm gây bệnh phát triển nhanh gây bệnh dịch hàng loạt Mùa hè khu vực miền Bắc nắng nóng, kèm theo ẩm cao tạo môi trường thuận lợi cho vi sinh vật gây bệnh phát triển, tác nhân gây bệnh viêm phổi, cảm cúm nhiều bệnh khác Hiện khoa học công nghệ sinh học, khoa học y học tiên tiến tìm nguồn gốc tác nhân gây bệnh người, động vật loài vi sinh vật gây lên, chúng có mặt khắp nơi trái đất, thể động vật thực vật, người hay phận cấp độ nhỏ Chúng phát tán lây nhiễm thông qua đất, nước, môi trường khơng khí đường phát tán nhanh lây nhiễm bệnh cho vùng rộng lớn nhanh chóng thành phần khơng khí có mật độ vi sinh gây dịch bệnh Việt Nam nước cơng nghiệp hóa, hàng năm với số lượng cơng ty nước ngồi đặt Việt Nam, tận dụng nguồn nhân lực rẻ đây, mật độ công nhân làm việc dây chuyền sản xuất công ty số lượng lớn, nguy lây truyền bệnh dịch cao, nước ta chưa có nhiều hành lang pháp lý, điều kiện để phòng ngừa kiểm sốt rủi đó, việc kiểm sốt đo kiểm mơi trường lao động cơng ty chưa có chuẩn mực cấp quốc gia, chưa có phương pháp có độ xác, độ tin cậy cao sử dụng quan trắc môi trường lao động Việt Nam, nghiên cứu xây dựng quy trình đánh giá yếu tố K16 2Viện Sinh thái Tài nguyên sinh vật Luận văn Thạc sĩ sinh học Vũ Duy Thanh gây ô nhiễm việc cần thiết, nhằm xây dựng sở liệu diễn biến môi trường, nhằm cảnh báo nguy gây nhiễm yếu tố sinh học Nghiên cứu quy trình kỹ thuật phân tích vi sinh vật khơng khí cần thiết, chưa có quy trình kỹ thuật thức chứng minh độ xác phổ biến cách thống phòng thí nghiệm Việt Nam, hay chứng minh tính xác quy trình kỹ thuật cách quy trình phân tích vi sinh vật khơng khí Trên sở lý luận khoa học ý nghĩa thực tiễn trình bày trên, chúng tơi thực đề tài: “Nghiên cứu xây dựng quy trình đánh giá có mặt nấm mốc vi khuẩn hiếu khí khơng khí mơi trường lao động”, với mục tiêu nội dung sau đây: Mục tiêu đề tài luận văn: - Đánh giá tổng vi khuẩn hiếu khí tổng nấm mơi trường khơng khí lao động - Có quy trình phân tích tổng vi khuẩn hiếu khí tổng nấm khơng khí mơi trường lao động Nội dung nghiên cứu: - Khảo sát chọn lựa môi trường nghiên cứu khảo sát lấy mẫu không khí - Quan trắc mơi trường khơng khí lao động - Đánh giá ô nhiễm chất lượng môi trường không khí sở sản xuất thực phẩm - Xây dựng quy trình phân tích nấm mốc vi khuẩn hiếu khí khơng khí mơi trường lao động Ý nghĩa khoa học thực tiễn đề tài: - Đề tài góp phần bổ sung sở lý luận việc nghiên cứu có mặt nấm vi khuẩn hiếu khí khơng khí mơi trường lao động - Đưa quy trình phân tích tổng vi khuẩn hiếu khí tổng nấm khơng khí môi trường lao động K16 3Viện Sinh thái Tài nguyên sinh vật Luận văn Thạc sĩ sinh học Vũ Duy Thanh CHƢƠNG I TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 TÌNH HÌNH NGHIÊN CỨU VI SINH VẬT TRONG KHƠNG KHÍ TRÊN THẾ GIỚI VÀ VIỆT NAM 1.1.1 Tình hình nghiên cứu vi sinh vật khơng khí giới Thế giới quan tâm nhiều đến tồn phát tán vi sinh vật khơng khí, mơi trường khơng khí khơng phải mơi trường dinh dưỡng, vi sinh vật sinh trưởng được, khơng mà mơi trường khơng khí khơng ô nhiễm Sự tồn phân tán vi sinh vật khơng khí hiểm họa tiềm tàng gây loại bệnh, có bệnh hiểm nghèo, tạo đà bùng phát dịch bệnh Viện Nghiên cứu quốc gia sức khỏe an toàn lao động Mỹ (NIOSH) đưa phương pháp lấy mẫu bioaerosol cho vùng khơng khí nhà (indoor air) từ năm 1998 (Method NIOSH) Quan trắc vi khuẩn nấm mốc khơng khí khơng đánh giá chất lượng mơi trường khơng khí khu vực mà phát sớm nguồn gốc có nguy nhiễm bệnh, nhằm phòng chống gây bệnh vi sinh vật gây nguy ngộ độc thực phẩm phát tán vi khuẩn, nấm nấm mốc khơng khí [28] 1.1.2 Tình hình nghiên cứuvi sinh vật khơng khí Việt Nam Việt Nam chưa có nhiều người quan tâm đến ảnh hưởng vi sinh khơng khí, chưa nhìn thấy ảnh hưởng đến mơi trường cộng đồng Năm 2003 Từ Hải Bằng ứng dụng kỹ thuật đặt đĩa thạch lấy mẫu khơng khí đánh giá chất lượng khơng khí mặt sinh học phòng thí nghiệm vi sinh kết so sánh hai mùa đông mùa hè, tiêu đánh giá trung bình mật độ khơng khí TVKHK 2,6.103 CFU/m3khơng khí cao mùa hè nhiều 5,13.102 CFU/m3 khơng khí, tổng số nấm tương tự 5,2.102CFU/m3 vào mùa nóng mùa lạnh 4,62.102CFU/m3 [1] Năm 2009 Nguyễn Quốc Tuấn có nghiên cứu đánh giá chất lượng phòng mổ 13 bệnh viện quanh thành phố Hồ Chí Minh, kết cho thấytỷ lệ phòng mổ, phòng hồi sức đạt mức C theo tiêu chuẩn EU GMP 1997 WHO 2002 6,1%; đạt mức D 21,2%, tỷ lệ đạt theo tiêu chuẩn K16 4Viện Sinh thái Tài nguyên sinh vật Luận văn Thạc sĩ sinh học Vũ Duy Thanh phòng phẫu thuật Merck 2009 (10 ÷ 200 CFU/m3) 21,2% Số lượng vi sinh khơng khí 13 bệnh viện Thành phố Hồ Chí Minh phần lớn tập trung khoảng từ 2.102 ÷ 5.102 CFU/m3 chiếm 70% (23/33 phòng) [9] Năm 2010 Trịnh Quỳnh Mai có nghiên cứu so sánh hai phương pháp lấy mẫu thiết bị lấy mẫu đạt đĩa thạch kết quảdùng thiết bị lấy mẫu có độ đồng so với phương pháp đặt đĩa thạch [6] Năm 2011 có nhiều nghiên cứu khảo sát mức độ nhiễm nấm mơi trường khơng khí phòng khơng máy lạnh, dược liệu bán thành phố Hồ Chí Minh, mức ô nhiễm vượt qua mức giới hạn cho phép tiêu chuẩn WHO [36] 1.2 SỰ TỒN TẠI CỦA VI SINH VẬT TRONG KHƠNG KHÍ Mơi trường khơng khí khơng phải làm mơi trường có thành phần dinh dưỡng, vi sinh vật khơng sinh trưởng khơng khí, vi sinh vật chúng bám vào hạt bụi lơ lửng bay khơng khí, tìm thấy nhiều loại vi sinh vật khác tồn khơng khí Qua nhiều người có quy định chung tên gọi Bioaerosol Bioaerosol hiểu bao gồm hạt bụi sinh học lơ lửng khơng khí có vi khuẩn nấm, hạt phấn hay bào tử khác 1.2.1 Vi khuẩn khơng khí Vi khuẩn khơng tồn độc lập mơi trường khơng khí vi khuẩn sinh vật nhỏ khơng thể tự phát tán di chuyển khơng khí thường bám vào hạt bụi lơ lửng khơng khí hay dạng hạt khác di chuyển lơ lửng khơng khí, phát tán vi khuẩn khơng khí gián tiếp nhờ vật chủ khác bay lơ lửng khơng khí, di chuyển từ nơi đến nơi khác nhờ tác động gió, bão, chuyển động khơng khí đưa đẩy hạt bụi khơng khí Vi khuẩn khơng sinh trưởng khơng khí nhà khoa học tìm thấy nguy tiềm ẩn rủi có nguồn gốc từ khơng khí Nhưng số lồi vi khuẩn tồn vài đến vài tháng môi trường khơng khí được, vi khuẩn lao chẳng hạn tồn mơi K16 5Viện Sinh thái Tài nguyên sinh vật Luận văn Thạc sĩ sinh học Vũ Duy Thanh trường tự nhiên khoảng ÷ tháng, chúng bám vào hạt bụi lơ lửng khơng khí 1.2.1.1 Bacillus khơng khí Vi khuẩn Bacillus bao gồm loại vi khuẩn hình que, Gram (+), hiếu khí thuộc họ Bacillaceae, chúng có mặt khắp nơi, nơi có điều kiện khắc nghiệt Điều kiện sống gay go chúng tạo bảo tử gần hình cầu để tự tồn dạng giống ngủ đông Đa số chủng vi khuẩn vô hại, có hai lồi xem quan trọng B anthracis B cereus thường gây ngộ độc thực phẩm, B anthracis gây bệnh than chết người sử dụng làm vũ khí sinh học nhiên chưa có nghiên cứu cơng bố tìm thấy khơng khí, B subtilis chủng xuất nhiều, chúng có khả đối kháng với vi khuẩn gây bệnh khác E.coli, ruột người chúng vi sinh có ích giúp cải thiện hệ thống tiêu hóa Ngộ độc thực phẩm gây vi khuẩn B cereus dẫn đến tiêu chảy độc tố thành phần tạo chủng vi khuẩn đục thủng giết chết tế bào Độc tố bao gồm ba protein (3 thành phần) hiếm, số enterotoxin khơng tán huyết, gọi Nhe Độc cho độc tố gây ngộ độc thực phẩm B cereus sản sinh Nó tìm thấy tất chủng B cereus gây ngộ độc thực phẩm gần tất chủng B cereus khác, ba protein độc tố Nhe gọi NheA, NheB NheC 1.2.1.2 Staphycoccus khơng khí Staphylococcus lọai cầu khuẩn, bao gồm giống hiếu khí (Micrococcus, Planococcus Deinococcus), giống kị khí tuỳ nghi (Staphylococcus, Stomacoccus, Streptococcus, Leuconostos, Pediococcus, Aerococcus Gemella) giống kị khí (Peptococcus, Peptostreptococcus, Ruminococcus, Coprococcus Sarcina) Họ Micrococcaceae gồm bốn giống: Micrococcus, Stomacoccus, Planococcus Staphylococcus Những đặc tính khác cầu khuẩn Gram (+) gồm: xếpcủa tế bào, hiếu khí bắt buộc, kị khí tuỳ nghi hay vi hiếu khí, kị kí bắt buộc, phản ứngcatalaza, diện cytochrom, sản phẩm lên men từ trình kị K16 6Viện Sinh thái Tài nguyên sinh vật Luận văn Thạc sĩ sinh học Vũ Duy Thanh khí,peptidoglycan, axit teichoic thành tế bào vi khuẩn (Scott E.M cs, 2000) Staphylococcus tụ cầu có khả gây bệnh lớn cho người động vật Trên phương diện gây bệnh tụ cầu khuẩn chia làm hai nhóm chính: có men coalugaza xuất mơi trường thạch máu có màu vàng gọi tụ cầu vàng khơng có men coagulaza xuất mơi trường thạch máu có màu trắng ngà gọi tụ cầu trắng Chúng tác nhân gây nhiều loại bệnh chúng bám cư trú phân thể da, khoang miệng, gây viêm phổi cấp tính bị hít phải Trong thực phẩm vi khuẩn cần 1,0 x 102CFU/g thức ăn đủ để bị ngộ độc, vi khuẩn nguy hiểm chúng xuất mơi trường khơng khí Khi bị nhiễm trùng da, mô tế bào, áp xe vi khuẩn S aureus mổ chúng tạo thành mủ có màu vàng, đặc, khơng Chúng gây nhiều loại viêm nhiễm khác phận thể chúng theo tuyến dịch hay vết thương hở[10]; [36] 1.2.2 Nấm nấm mốc không khí Giới nấm (Fungi) nhóm sinh vật đơn ngành thuộc dạng tế bào nhân thực, Cơ thể đơn bào đa bào dạng sợi, có thành kitin (trừ số có thành xenluloza), khơng có lục lạp, Sống dị dưỡng hoại sinh, ký sinh cộng sinh, sinh sản chủ yếu bào tử, bào tử thường khơng có lơng có roi Nấm phát triển điều kiện có sẵn chất hữu nhiệt độ từ 25 ÷ 30oC, Ở 0oC nấm không phát triển được, nhiệt độ 100oC giết chết nhiều loại nấm, hệ thống phân loại giới RH, (Whittaker the five kingdom system) nấm thuộc giới riêng rẽ gọi giới nấm, Theo Elizabeth Tootyll (1984) nấm mốc có khoảng 5.100 giống 50.000 lồi mơ tả, ước tính có đến 250.000 lồi nấm có mặt trái đất Nấm có nhiều lồi có lồi có lợi có lồi có hại, tùy vào diện đâu, điều kiện chất Chúng tạo chất ngoại độc tố nội độc tố gây hại cho môi trường xung K16 7Viện Sinh thái Tài nguyên sinh vật Luận văn Thạc sĩ sinh học Vũ Duy Thanh quanh Nấm có dạng điển hình gồm nấm men nấm sợi, chúng khác nhiều đặc điểm sinh học Nấm men (Yeast) sinh vật đơn bào, sinh sản nảy mầm chồi phân cắt Hình dạng cấu trúc nấm thể đơn bào có hình trứng (thường nấm men), đa số có hình sợi, sợi có ngăn vách (đa bào) hay khơng có ngăn vách (đơn bào) Sợi nấm thường ống hình trụ dài có kích thước lớn nhỏ khác tùy theo lồi, Đường kính sợi nấm thường từ ÷ µm, có dài đến 10 µm, chí đến mm, Chiều dài sợi nấm tới vài chục cm, sợi nấm phát triển theo chiều dài theo kiểu tăng trưởng Liên quan đến gây bệnh nấm thông qua phương thức là: ký sinh, gây bệnh với tượng dị ứng, gây bệnh ăn phải thực phẩm nhiễm nấm độc tố chúng, gây bệnh ăn phải nấm độc Nhiều loài phổ biến thuộc chi Aspergillus Penicillium chúng phân bố rộng rãi trái đất nhiều loại chất tự nhiên, chúng có mặt khắp nơi trái đất Theo E Kister, M Morelet (2000) ước tính số lồi biết chi Penicillium khoảng 233 loài, chi Aspergillus khoảng 185 loài Một số lượng lớn phát lợi ích mang lại có nhiều như, chúng tham gia q trình sản xuất cơng nghiệp kháng sinh, cơng nghệ lên men, nhiều ứng dụng khác có lợi cho người môi trường cộng đồng Bên cạnh có nhiều lồi có hại, chất độc nấm tạo gọi chung mycotoxin gây ảnh hưởng tới sức khỏe người vấn đề dị tật bẩm sinh, não, gan, thận[4]; [5]; [9]; [11]; 1.2.2.1 Aspergillus khơng khí Nấm Aspergillus giống có khuẩn ty phân nhánh, có vách ngăn ngang phát triển chủ yếu bề mặt chất, tế bào chất có nhiều nhân nhân di chuyển qua lại tế bào với lỗ nhỏ vách ngăn Khuẩn ty hình thành cọng mang túi bào tử Aspergillus Chúng sinh sản vơ tính hình thành cọng bào tử từ tế bào chân với túi có cuống (vehicle), thể bình bào tử đính (conidia) K16 8Viện Sinh thái Tài nguyên sinh vật Luận văn Thạc sĩ sinh học Vũ Duy Thanh 1.2.2.2 Penicillium khơng khí Giống Penicillium có khuẩn ty phân nhánh, có vách ngăn tế bào với lỗ nhỏ để phần tử tế bào chất thông thường Cọng bào tử phân nhánh với thể bình cấp 1, và tận đính bào tử trần dễ dàng phát tán khơng khí, đặc biệt đính bào tử có màu xanh lục đặc trưng cho giống Penicillium 1.2.2.3 Một số lồi nấm khác khơng khí Một số loài nấm khác thuộc giống Rhizopus, Mucor, Candida gây bệnh người, Microsporum gây bệnh chó, A fumigatus gây bệnh chim; Saprolegnia Achlya gây bệnh nấm ký sinh cá Những loài nấm gây bệnh trồng Phytophthora, Fusarium, Cercospora[18] 1.3 ẢNH HƢỞNG CỦA VI SINH VẬT TRONG KHƠNG KHÍ TỚI SỨC KHỎE CỘNG ĐỒNG 1.3.1 Ảnh hƣởng vi khuẩn đến môi trƣờng sức khỏe cộng đồng Vi khuẩn hiếu khí vi khuẩn mọc sống có xuất oxy Vi khuẩn hiếu khí bao gồm nhiều lồi, có loại gây dị ứng, gây bệnh truyền nhiễm, gây độc, nhóm vi sinh vật tồn số lượng lớn môi trường hiểm họa tiềm ẩn bùng phát dịch bệnh lúc nào, gặp điều kiện môi trường sống thuận lợi vi sinh vật gây bệnh bùng phát thành ổ dịch khơng kiểm sốt kịp thời trở thành đại dịch, bệnh gặp phổ biến viêm phổi cấp, lao, tả lỵ, thương hàn bệnh thường gặp nhất, ngồi nhiều bệnh khác gặp người mẫn cảm, hay địa người phù hợp với điều kiện sinh trưởng phát triển loại vi sinh vật gây bệnh này, lây truyền bệnh truyền nhiễm gây vi sinh vật thông qua đường khơng khí khó kiểm sốt, phát tán khơng gian rộng lớn Trong khơng khí có nhiều loại vi khuẩn có lồi có lợi, có khơng loài gây hại cho sức khỏe sinh vật, động vật người Vi K16 9Viện Sinh thái Tài nguyên sinh vật Luận văn Thạc sĩ sinh học Vũ Duy Thanh khuẩn chủ yếu gây bệnh nhiễm trùng khác tốc độ gây bệnh nhanh gây tử vong khơng kịp thời điều trị hơ hấp cấp tính (S aureus, S epidermidis) hay C trachomatis gây bệnh mắt hột, Mycoplasma pneumoniae gây bệnh viêm phổi Những loài gây dịch tả (Vibrio cholera) Còn nhiều loại bệnh khác, nguyên nhân gây vi khuẩn[10]; [13]; [14]; [15]; [19]; [24] 1.3.2 Ảnh hƣởng nấm đến môi trƣờng sức khỏe cộng đồng , hình thành nấm chuyển hóa chất dinh dưỡng có thức ăn nguyên liệu Sự hình thành nấm mốc độc tố chúng đồng, lúc thu hoạch, bảo quản trình chế biến thức ăn cho vật ni Như vậy, khơng nơi giới thoát khỏi nấm mốc độc tố từ chúng, tác hại chúng vô to lớn suất vật nuôi sức khỏe người Các loại độc tố sinh từ loại nấm mốc điển hình như: Aflatoxin: Aflatoxin nhiễm nhiều khơ dầu phộng, khô dầu dừa, bắp, cám, tấm… A flavus A.parasiticus sinh ra, độc tố gây tổn thương gan, thận, mật , làm giảm khả tiết sữa, đẻ trứng sức đề kháng gia súc, gia cầm Theo Tổ chức bệnh ung thư Quốc tế aflatoxin xếp vào danh sách tác nhân gây ung thư cho người Ochatoxin A: A ochraceus sinh ra, nguyên liệu dễ nhiễm độc tố cám gạo, lúa mì, bột mì, bắp, đậu nành, cà phê Dư lượng ochratoxin tìm thấy thịt heo thịt gia cầm Độc tố gây hại đến gan thận động vật Với nồng độ lớn 1ppm làm giảm sản lượng trứng gà đẻ, nồng độ lớn 5ppm gây nên tổn thương gan ruột Tương tự aflatoxin, độc tố gây nên giảm sức đề kháng tác nhân gây ung thư người Citrinin: Độc tố sinh nấm P citricum có nhiều gạo để mốc, độc tố gây hại cho thận, gây hoại tử nhiễm trùng làm tổn hại đến chất lượng quầy thịt K16 10Viện Sinh thái Tài nguyên sinh vật ... sở lý luận vi c nghiên cứu có mặt nấm vi khuẩn hiếu khí khơng khí mơi trường lao động - Đưa quy trình phân tích tổng vi khuẩn hiếu khí tổng nấm khơng khí mơi trường lao động K16 3Vi n Sinh thái... dựng quy trình đánh giá có mặt nấm mốc vi khuẩn hiếu khí khơng khí mơi trường lao động , với mục tiêu nội dung sau đây: Mục tiêu đề tài luận văn: - Đánh giá tổng vi khuẩn hiếu khí tổng nấm mơi trường. .. khơng khí lao động - Có quy trình phân tích tổng vi khuẩn hiếu khí tổng nấm khơng khí môi trường lao động Nội dung nghiên cứu: - Khảo sát chọn lựa môi trường nghiên cứu khảo sát lấy mẫu khơng khí