Nghiên cứu khả năng ngăn cản vi sinh vật của màng BC tạo ra từ chủng Gluconacetobater BHN2

Header Page -Header Page -Header Page - Header Page -Header Page -Header Page of 103 Khóa luận tốt nghiệp o n h h IC , ế P S TS T ịK ế N , , ThS GVC N K T , TS.GVC P P ế ,T S N , , , , N , 2013 S ị Footer Page -Footer Page -Footer Page -Footer Page -Footer Page -Footer Page of 103 Header Page -Header Page -Header Page - Header Page -Header Page -Header Page of 103 Khóa luận tốt nghiệp o n h I CA ĐOA T Kế T Nế h , ị N , Sinh viên T ịT Footer Page -Footer Page -Footer Page -Footer Page -Footer Page -Footer Page of 103 2013 Header Page -Header Page -Header Page - Header Page -Header Page -Header Page of 103 Khóa luận tốt nghiệp o n h h ỤC ỤC L L D D ế Ở ĐẦU CHƯ G 1: TỔ G QUA TÀI IỆU 1.1 V trí v đặc điểm phân loại Gluconacetobacter sinh giới 1.1.1 V trí phân loại c a Gluconacetobacter sinh giới 1.1.2 ặc điểm phân loại c a sinh giới 1.2 Nhu cầu dinh dưỡng c a vi khuẩn Gluconacetobacter 1.2.1 Ảnh hưởng c a nguồn cacbon 1.2.2 Nhu cầu nitơ c a vi sinh vật 1.2.3 H m lượng ethanol dung d ch lên men 10 1.3 ặc điểm v tính chất hình th nh m ng Bacterrial cellulose 10 1.3.1 ặc điểm cấu trúc c a m ng Bacterrial cellulose 10 1.3.2 Cơ chế tổng hợp Bacterial cellulose 12 1.3.3 ính chất c a m ng Bacteria cellulose 13 1.4 ình hình nghiên cứu m ng BC từ Acetobacter x linum 14 1.4.1 ình hình nghiên cứu Acetobacter x linum giới 14 1.4.2 ình hình nghiên cứu Acetobacter x linum Việt Nam 15 CHƯ 2.1 G 2: PHƯ G PHÁP GHIÊ CỨU 18 18 2.1.1 ối tượng nghiên cứu 18 2.1.2.Hoá chất 18 2.1.3 hiết b , dụng cụ 18 2.1.4 Môi trường nghiên cứu 19 Footer Page -Footer Page -Footer Page -Footer Page -Footer Page -Footer Page of 103 Header Page -Header Page -Header Page - Header Page -Header Page -Header Page of 103 Khóa luận tốt nghiệp o n h h 2.1.4.1.Môi trường phân lập giống (M 1) 19 2.1.4.2 Môi trường nhân giống (M 2) 19 2.1.4.3 Môi trường nghiên cứu khả tạo m ng 20 2.2 Phương pháp nghiên cứu 20 2.2.1 Phương pháp đếm khuẩn lạc 20 2.2.2 Phân biệt tế b o vi khuẩn phương pháp nhuộm Gram 20 2.2.3 Phương pháp bảo quản ch ng giống thạch nghiêng 21 2.2.4 Phương pháp hoạt hóa giống 21 2.2.5 Phương pháp lên men tạo m ng 21 2.2.6 Phương pháp thống kê v xử lý kết 21 2.2.7 Q trình xử lí m ng BC từ Gluconacetobacter 22 2.2.8 Phương pháp nghiên cứu khả ngăn cản vi sinh vật c a m ng BC tạo từ ch ng Gluconacetobacter 24 2.2.8.1 Nghiên cứu khả ngăn cản vi khuẩn c a m ng 24 2.2.8.2 Nghiên cứu khả ngăn cản nấm men c a m ng 25 2.2.8.3 Nghiên cứu khả ngăn cản xạ khuẩn c a m ng BC 25 2.2.8.4 Nghiên cứu khả ngăn cản nấm mốc c a m ng 26 CHƢƠNG 3: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 27 Kế Gluconacetobacter BHN2 27 3.2 Quá trình xử lí m ng 29 3 Kế 29 Kế 31 Kế 33 Kế 35 37 N KẾT LUẬN VÀ KIẾN N 37 Ị 39 Footer Page -Footer Page -Footer Page -Footer Page -Footer Page -Footer Page of 103 Header Page -Header Page -Header Page - Header Page -Header Page -Header Page of 103 Khóa luận tốt nghiệp o n h DA H 11 ỤC H ế h H Gluconacetobacter 12 Gluconacetobacter 13 K Gluconacetobacter 14 S 15 S Gluconacetobacter Hình 1.6 Con 17 M , ị 38 T ĩ 38 T ĩ Hình M 10 M 10 M 10 M 11 ị 11 ị 12 ị 12 13 ị ị ị ngày Hình 3.13 ngày 14 ị BC sau ngày 14 ị ngày Footer Page -Footer Page -Footer Page -Footer Page -Footer Page -Footer Page of 103 Header Page -Header Page -Header Page - Header Page -Header Page -Header Page of 103 Khóa luận tốt nghiệp DA H ỤC B o n h h G 21 11 ặ Gluconacetobacter theo Frateur (1950) Footer Page -Footer Page -Footer Page -Footer Page -Footer Page -Footer Page of 103 Header Page -Header Page -Header Page - Header Page -Header Page -Header Page of 103 Khóa luận tốt nghiệp o n h h CÁC TỪ VIẾT TẮT BC : Bacterial cellulose PMG : Phosphoglucomutase UGP : Glucose-1- phosphat uridylytransferase 1PFK : Fructose-1-phosphate kinase Fru-6-P : Fructose-6-phosphate Glc-1-p : Glucose-1-phosphate UDPGlc : Uridine diphosphoglucose GK : Glucokinase FPB : Fructose-1,6-biphosphate phosphatase G6PDH : Glucose-6-phosphatse dehydrogenase PGI : Phosphoglucoisomerase PTS : Fru-bi-P : Fructose-1,6-bi- Phosphate Glc-6-P : Glucose-6- phosphate PGA : Phosphogluconic acid FK : Fructokinase CS : Cellulose synthanse CFU : Colony Forming Unit UV : Ultra violet VSV :V : Footer Page -Footer Page -Footer Page -Footer Page -Footer Page -Footer Page of 103 f Header Page -Header Page -Header Page - Header Page -Header Page -Header Page of 103 Khóa luận tốt nghiệp o n h h Ở ĐẦU ý chọn đề tài M ( Bacterial cellulose; Biocellulose; ặ ) ( ế ế β-1,4 glucorit) cellulose v ỗ: : ế … hemicellulose, ẻ , , , ặ [14] T ế Bacterial cellulose ĩ : , ặ ế ế dùng , , ĩ ế ặ , ế ị , ỞV N , , ế ặ , ỉ ế ỉ T V N T Gluconacetobacter BHN2 có màng BC ị [10] , S , Gluconacetobacter BHN2 ị Footer Page -Footer Page -Footer Page -Footer Page -Footer Page -Footer Page of 103 ị Header Page -Header Page -Header Page - Header Page -Header Page -Header Page of 103 Khóa luận tốt nghiệp N o n h ặ ế ị ế h ặ D ẽ , ặ ẹ ế ế N , ế Staphylococcus, ế ế Pseudomonas, E.coli… ị ị V ế ị ế ế ch tìm màng BC ĩ : “Nghiên cứu khả ngăn cản vi sinh vật c a m ng BC từ vi khuẩn Gluconacetobacter BHN2 ” ục tiêu nghiên cứu đề tài 2.1 Nghiên Gluconacetobacter BHN2 22 2.3 N Gluconacetobacter BHN2 Điểm đề tài 3.1 ị 32 ế Gluconacetobacter BHN2 ội dung nghiên cứu Gluconacetobacter 4.1 N BHN2 4.2 L P Footer Page -Footer Page -Footer Page -Footer Page -Footer Page -Footer Page of 103 Header Page -Header Page -Header Page - Header Page -Header Page -Header Page 10 of 103 Khóa luận tốt nghiệp o n h h 4.3 N Gluconacetobacter BHN2 4.4 N Gluconacetobacter BHN2 4.5 N Gluconacetobacter BHN2 4.6 Nghiên Gluconacetobacter BHN2 Ý nghĩa 5.1 L ừ Gluconacetobacter BHN2 5.2 N Gluconacetobacter BHN2 Footer Page -Footer Page -Footer Page -Footer Page -Footer Page -Footer Page 10 of 103 Header Page -Header Page -Header Page - Header Page -Header Page -Header Page 35 of 103 Khóa luận tốt nghiệp 38 M o n h ĩ Q ĩ , vi Gluconacetobacter BHN2 lên me ẽ ị ( ẽ ( , , , ặ 38 ) S ( 38 ) S ), ẵ , Nế ế thu , , có màu , Kế BC Gluconacetobacter ế BHN2 N ặ , K h , T N Q T ị , N T ịT V ặ [10], [11], ị , Gluconacetobacter BHN2 , ế ị Gluconacetobacter BHN2 28 Footer Page -Footer Page -Footer Page -Footer Page -Footer Page -Footer Page 35 of 103 Header Page -Header Page -Header Page - Header Page -Header Page -Header Page 36 of 103 Khóa luận tốt nghiệp o n h h 3.2 Q trình xử lí màng Mà ( ), , ặ ế : , Q 227 … ế Hình 3.9 Màng BC M :  L  L ế  ỉ ( màng : 7) 3.3 Kết xử lí màng M nghiê ế ị ặ M ỉ 29 Footer Page -Footer Page -Footer Page -Footer Page -Footer Page -Footer Page 36 of 103 , ẹ, Header Page -Header Page -Header Page - Header Page -Header Page -Header Page 37 of 103 Khóa luận tốt nghiệp o n h h Kế 10 , , : 10 M 10 10 S M , ( ặ M ( 10 ) 10 ) , : ế 30 Footer Page -Footer Page -Footer Page -Footer Page -Footer Page -Footer Page 37 of 103 Header Page -Header Page -Header Page - Header Page -Header Page -Header Page 38 of 103 Khóa luận tốt nghiệp o n h , , ẻ ẻ , , ế ị N , Q , ế ặ , V h T ịN T [12], N N T ịT V L ,N [10] , , ặ , ế ị ị ị S ặ , ế 3.4 Kết nghiên cứu khả n ng ng n cản vi khuẩn màng BC ế ng BC ị tr 2281 11 ế ị 31 Footer Page -Footer Page -Footer Page -Footer Page -Footer Page -Footer Page 38 of 103 11 , : Header Page -Header Page -Header Page - Header Page -Header Page -Header Page 39 of 103 Khóa luận tốt nghiệp Hình 11 ị T o n h h không ị MPA, 30 0C, ị Q ị ( 11 ) ặ n , ặ Từ ế , , ( ị ặ 11 ), ế ị ( 11 ) Kế ế T ịN N T ịT V [10] , L ,N ế 32 Footer Page -Footer Page -Footer Page -Footer Page -Footer Page -Footer Page 39 of 103 V T [12], Header Page -Header Page -Header Page - Header Page -Header Page -Header Page 40 of 103 Khóa luận tốt nghiệp S o n h h ế , ế 3.5 Kết nghiên cứu khả n ng ng n cản nấm men màng BC , S N ế M ị , 25 - 300 , 3-5 ế ế ế ị Kế 3.12 a, b: Hình 3.12 a ị 33 Footer Page -Footer Page -Footer Page -Footer Page -Footer Page -Footer Page 40 of 103 ị Header Page -Header Page -Header Page - Header Page -Header Page -Header Page 41 of 103 Khóa luận tốt nghiệp Hình 3.12 Q ị ặ ( o n h h g BC ị , 12 ) , ị Q ( ị 12 ) ặ , ặ Từ ế , ị ặ trang , , ị ế ( Kế ặ 12 ) ế T ịN L ,N 34 Footer Page -Footer Page -Footer Page -Footer Page -Footer Page -Footer Page 41 of 103 V T [12], Header Page -Header Page -Header Page - Header Page -Header Page -Header Page 42 of 103 Khóa luận tốt nghiệp N T ịT V [10] , o n h , h , ế S ế , ế ế 3.6 Kết nghiên cứu khả n ng cản xạ khuẩn màng BC ế S – KTNN T V N ị ặ , , ế ị , 4-5 28 - 300 ế ị , ế 13 , b: Hình 3.13.a , ị 35 Footer Page -Footer Page -Footer Page -Footer Page -Footer Page -Footer Page 42 of 103 Header Page -Header Page -Header Page - Header Page -Header Page -Header Page 43 of 103 Khóa luận tốt nghiệp 13 Q 13 ), ( o n h ị h sau ngày ị ặ , Q ị ( , ặ 13 ) , ặ Kế ế T ịN N T ịT V L ,N [10], T , ị S , V ế ế ế 36 Footer Page -Footer Page -Footer Page -Footer Page -Footer Page -Footer Page 43 of 103 [12], Header Page -Header Page -Header Page - Header Page -Header Page -Header Page 44 of 103 Khóa luận tốt nghiệp o n h h 3.7 ghiên cứu khả n ng ng n cản nấm mốc màng BC ế ế ch ị ị 2-3 ế ị , 14 14 ế 14 , : ị sau ngày BC ị ngày 37 Footer Page -Footer Page -Footer Page -Footer Page -Footer Page -Footer Page 44 of 103 , Header Page -Header Page -Header Page - Header Page -Header Page -Header Page 45 of 103 Khóa luận tốt nghiệp 14 ) ặ Q ( h ị Quan sát ( o n h , ị 14 ) , ặ , ặ Từ ế , , ị ( N 14 ) , , , , , ị ị , , , ế qu T ị N D Kế L ,N V T [12], N , ị 38 Footer Page -Footer Page -Footer Page -Footer Page -Footer Page -Footer Page 45 of 103 T ịT V [10] Header Page -Header Page -Header Page - Header Page -Header Page -Header Page 46 of 103 Khóa luận tốt nghiệp KẾT UẬ VÀ KIẾ o n h h GHỊ Kết luận 1.1 Gluconacetobacter BHN2 , ị , 1.2 M ế , ế ẻ , ị 1.3 M : , , , ế Đề nghị T ế ị ế sau: +X +Tế ĩ 39 Footer Page -Footer Page -Footer Page -Footer Page -Footer Page -Footer Page 46 of 103 Header Page -Header Page -Header Page - Header Page -Header Page -Header Page 47 of 103 Khóa luận tốt nghiệp TÀI IỆU THA o n h h KH O TIẾ G VIỆT N L học, D (1976) Một số phương pháp nghiên cứu vi sinh vật 1- 2- 3, Nxb N L D ỹ , N Q sinh vật học N N , T N ế , P V T (1998) Vi 149-150 (1999) Cơ sở vi sinh vật học T 1, N SP N , tr 52-55, 62-102, 185-309 N T , N D T hực h nh vi sinh vật N 5.V T ị M , V T (1990) , tr 17-34, 63-74, 89-92 (2001) hực tập vi sinh vật N Q N , tr 1-50 N T (2006) Chọn lọc dùng Acetobac x linum thích hợp cho loại môi trường dùng sản xuất cellulose vi khuẩn với qu mô lớn L ế Q N L , M (2000) Công nghệ Vi sinh vật, Q N ỹ TP T ị N 1- 2- 3, Nxb M (2008) Nghiên cứu vi khuẩn Acetobacter x linum cho m ng Bacterial cellulose l m mặt nạ dưỡng da, L T ỹ T ịK SP N N (1996) Nghiên cứu số đặc điểm c a vi khuẩn Acetobacter v ứng dụng lên men acetic theo phương pháp chìm L T ị K 10 PTS N SP , T N (2009) N Q , N N T ị T V Acetobacter xylinum ị B 40 Footer Page -Footer Page -Footer Page -Footer Page -Footer Page -Footer Page 47 of 103 Báo cáo khoa học Header Page -Header Page -Header Page - Header Page -Header Page -Header Page 48 of 103 Khóa luận tốt nghiệp 11 N T ịT V o n h h (2009) Nghiên cứu đặc tính sinh học v khả tạo m ng Bacterial cellulose c a vi khuẩn Acetobacter x linum phân lập từ số nguồn ngu ên liệu Việt Nam, L T ỹ , T ị 12 L ,N SP V T N (2006) Nghiên cứu đặc tính m ng cellulose vi khuẩn từ Acetobacter x linum sử dụng l m m ng tr bỏng 13 P T ịN ,N ị T ịD ,N Acetobacter xylinum, T ặ 14 361, T T (1999) hống kê v ứng dụng N , tr 214- 267 15 L T ế T (1997), Bỏng - kiến thức chu ên ng nh, Nxb y N , tr 21 -109, 206 -209, 297 - 310, 453 - 482 16 P T ( 2000), Di tru ền học, Nxb TIẾ G A H 17 Nguyen Van Thanh et al (2005), Study on preparation bacterial cellulose from Acetobacter xylinum for treating burns and wounds, Proceedings of the 4-th Indochina Conf on Pharmaceutical Sciences, Nov 10-13, Univ of Medicine and Pharmacy of HCM City, Vietnam 18.Alexander Steinbuchel, Sang Ki Rhee (2005) Polysaccharides and polyamides in the food industry, www.wiley vch.pp 31-85 19 Hoyer, Alina Krystynowicz, Marianna Turkiewicz, Stanislaw Bielecki, Sokolnicki, Emilia Klemenska, Nodes, Aleksander Masny, Ebner, Heirich, Andrzej Plucienniczak (2005) Molecular basis of cellulose biosynthesis disappearance in submerged culture ofAcetobacter xylinum, Acta biochimica polonica, Vol 52, pp 691698 41 Footer Page -Footer Page -Footer Page -Footer Page -Footer Page -Footer Page 48 of 103 Header Page -Header Page -Header Page - Header Page -Header Page -Header Page 49 of 103 Khóa luận tốt nghiệp o n h h 20.Breed R.S., Murray E.G.D, Smith N.R (1957) Berge ’s manual of determinative bacteriology The Williams and Wilkins company, Baltimore 21 Bergey H, John G Holt (1992), Berge ’s manual of dererminativa bacteriology Wolters kluwer health, p.71- 84 22 Hong - Jon Son, Moon - Su Heo, Yong- Gyun Kim, Sang- Joon Lee (2001) Optimization of fermetation conditions for the production of bacterial cellulose by a newly isolated Acetobacter sp A9 in shaking cultures Vol 33, Biotechnol Appl Biochem, p 1-5 23 Brown R.M (1999), Cellulose structure and biosynthesis, Pure Appl Chem 24 Stanislw Bielecki, Alina Krystynowicz, Marianna Turkyewicz (1981) Bactrerial cellulose, Institute of TechnicalvBiochemmistry, Technical University of Ldz 25 Wan, WK & Millon E (2005) Poly – bacterial cellulose nanocomposite V S Pat Appl Publ US 2005037082 Al, 16 26 Frateur J (1950) Essai sur la systesmatique des Acetobacter La cellule, Vol 53, pp 278-398 27 Jean-Luc Wertz,Olivier Bédué,Jean P Mercier (2010), Cellulose Science and Technology, EPFL Press 28 http://www.rcub.bg.ac.yu/~todorom/tutorials/rad15.html 42 Footer Page -Footer Page -Footer Page -Footer Page -Footer Page -Footer Page 49 of 103 ... Phương pháp nghiên cứu khả ngăn cản vi sinh vật c a m ng BC tạo từ ch ng Gluconacetobacter 24 2.2.8.1 Nghiên cứu khả ngăn cản vi khuẩn c a m ng 24 2.2.8.2 Nghiên cứu khả ngăn cản nấm men... 2.2.8 Phƣơng pháp nghiên cứu khả ngăn cản vi sinh vật màng BC tạo từ chủng Gluconacetobacter Kế ỗ T ịK (S M) ỗ 18,9 – 104nm, N ế ế 2.2.8.1 Nghiên cứu khả ngăn cản vi khuẩn màng ế ị V : ị heo... tìm màng BC ĩ : Nghiên cứu khả ngăn cản vi sinh vật c a m ng BC từ vi khuẩn Gluconacetobacter BHN2 ” ục tiêu nghiên cứu đề tài 2.1 Nghiên Gluconacetobacter BHN2 22 2.3 N Gluconacetobacter BHN2