THAM DINH QUY TRINH PHAN TICH

HƯỚNG DẪN CỦA ASEAN VỀ THẨM ĐỊNH QUY TRÌNH PHÂN TÍCH Được trích dẫn theo hướng dẫn ICH (International Conference on Harmonisation): -ICH Q2A: Thẩm định phương pháp phân tích: Định nghĩa thuật ngữ, ngày 27 tháng 10 năm 1994 -ICH Q2B: Thẩm định quy trình phân tích: Phương pháp luận, ngày tháng 11 năm 1996 MỤC LỤC 1- Giải thích thuật ngữ 2- Giới thiệu 3- Các loại quy trình phân tích cần thẩm định 4- Các tiêu thẩm định quy trình phân tích 4.1- Tính đặc hiệu (Specificity) 4.2- Tính tuyến tính (Linearity) 4.3- Khoảng xác định (Range) 4.4- Độ (Accuracy) 4.5- Độ xác (Precision) 4.6- Giới hạn phát (Detection Limit = DL) 4.7- Giới hạn định lượng (Quantitation Limit = QL) 4.8- Độ thô (Robustness) 4.9- Kiểm tra tính thích hợp hệ thống (System Suitability Testing) 1- GIẢI THÍCH CÁC THUẬT NGỮ 1.1 Quy trình phân tích (Analytical Procedure) Quy trình phân tích cách tiến hành phân tích, mơ tả chi tiết bước cần thiết để thực phép thử phân tích Quy trình bao gồm cách pha mẫu thử, mẫu chuẩn thuốc thử, cách sử dụng thiết bị, cách thiết lập đường chuẩn, sử dụng cơng thức để tính kết khơng giới hạn phần 1.2 Tính đặc hiệu (Specificity) Tính đặc hiệu khả đánh giá chắn chất phân tích có mặt thành phần khác có mẫu thử Thơng thường thành phần gồm tạp chất, sản phẩm phân huỷ, chất Một quy trình phân tích đặc hiệu bổ trợ nhiều quy trình phân tích khác Định nghĩa có liên quan đến phép thử sau: + Định tính để khẳng định có mặt chất phân tích + Thử tinh khiết để khẳng định tất quy trình phân tích cho phép xác định xác hàm lượng tạp chất chất phân tích ví dụ phép thử tạp chất liên quan, kim loại nặng, hàm lượng dung môi tồn dư + Định lượng (hàm lượng hoạt lực) đưa kết xác hàm lượng hoạt lực chất phân tích mẫu thử 1.3 Độ (Accuracy) Độ quy trình phân tích biểu diễn đồng giá trị tìm thấy với giá trị thực giá trị đối chiếu chấp nhận Đơi khái niệm gọi độ xác thực (trueness) 1.4 Độ xác (Precision) Độ xác quy trình phân tích diễn tả thống (mức độ phân tán) kết loạt phép đo từ nhiều lần lấy mẫu mẫu thử đồng điều kiện mơ tả Độ xác chia thành cấp: độ lặp lại, độ xác trung gian độ tái lặp Độ xác nên thử mẫu thử thực, đồng Tuy nhiên, mẫu đồng dùng mẫu tự tạo dung dịch mẫu thử Độ xác thường biểu thị dạng độ dao động, độ lệch chuẩn hệ số độ dao động loạt phép đo 1.4.1-Độ lặp lại (Repeatability) Độ lặp lại diễn tả độ xác quy trình phân tích điều kiện thí nghiệm khoảng thời gian ngắn Độ lặp lại gọi độ xác điều kiện định lượng 1.4.2- Độ xác trung gian (Intermediate precision) Độ xác trung gian diễn tả mức dao động kết phòng thí nghiệm thực ngày khác nhau, kiểm nghiệm viên khác thiết bị khác 1.4.3- Độ tái lặp (Reproducibility) Độ tái lặp diễn tả độ xác phòng thí nghiệm ( Các nghiên cứu phối hợp phòng thí nghiệm thường áp dụng để tiêu chuẩn hoá phương pháp) 1.5 Giới hạn phát (Detection Limit ) Giới hạn phát quy trình phân tích lượng nhỏ chất phân tích mẫu thử phát khơng thiết để định lượng 1.6 Giới hạn định lượng ( Quantitation Limit) Giới hạn định lượng quy trình phân tích lượng nhỏ chất phân tích mẫu thử để định lượng với độ độ xác thích hợp Giới hạn định lượng thông số phép định lượng chất có nồng độ thấp mẫu thử, đặc biệt thường dùng để xác định tạp chất và/hoặc sản phẩm phân huỷ 1.7 Tính tuyến tính (Linearity) Tính tuyến tính quy trình phân tích diễn tả kết phân tích thu tỷ lệ với nồng độ (trong khoảng định) chất phân tích mẫu thử 1.8 Khoảng xác định (range) Khoảng xác định quy trình phân tích khoảng cách nồng độ chất phân tích mẫu thử (bao gồm nồng độ này), khoảng nơng độ này, quy trình phân tích chứng minh đáp ứng độ xác, độ tính tuyến tính 1.9 Độ th« (Robustness) Độ thơ quy trình phân tích nh»m đánh giá khả trì quy trình phân tích khơng bị ảnh hưởng biến đổi nhỏ có tính chủ định thơng số phương pháp mức tin cậy quy trình điều kiện sử dụng bình thường 2- GIỚI THIỆU Việc thẩm định quy trình phân tích nhằm chứng minh quy trình có phù hợp với mục đích ứng dụng không Bản hướng dẫn đưa các hướng dẫn gợi ý cho việc đánh giá cỏc quy trỡnh phõn tớch dùng hồ sơ đăng ký thuèc khu vực ASEAN Tài liệu chủ yếu trích dẫn từ hai hướng dẫn ICH “Q2A: Thẩm định phương pháp phân tích: Định nghĩa thuật ngữ, ngày 27 tháng 10 năm 1994” “Q2B: Thẩm định quy trình phân tích: Phương pháp luận, ngày tháng 11 năm 1996” Hệ phương pháp áp dụng cho chế phẩm sinh học công nghệ sinh học khác so với chế phẩm hoá học Tất số liệu liên quan thu q trình thẩm định cơng thức sử dụng để tính tốn đại lượng đặc trưng việc thẩm định cần đưa thảo luận Các chất đối chiếu sử dụng trình thẩm định cần phải đánh giá rõ ràng kèm theo tài liệu độ tinh khiết Mức độ tinh khiết phụ thuộc vào mục đích sử dụng Trong thực tế, thường phác thảo cơng việc thực nghiệm nhằm xem xét tiến hành đánh giá cách thích hợp đồng thời nhiều thuộc tính để đưa hiểu biết khả quy trình phân tích, ví dụ: tính đặc hiệu, tuyến tính, khoảng xác định, độ độ xác Những phương pháp phân tích theo dược điển khơng u cầu thẩm định nhựng tính phù hợp chúng phải kiểm chứng lại điều kiện sử dụng thực tế Theo yêu cầu ASEAN : tất liệu liên quan đến tiêu thẩm định với tiêu chấp nhận tương ứng phải nộp cho quan quan lý dược phẩm 3- CÁC LOẠI QUY TRÌNH PHÂN TÍCH CẦN THẨM ĐỊNH Thẩm định quy trỡnh phõn tớch liên quan đến loi quy trình chung sau đây: + Định tính + Định lượng hàm lượng tạp chất + Phép thử giới hạn tạp chất + Định lượng hoạt chất mẫu nguyên liệu thành phẩm thuốc hay nhiều thành phần chọn khác thành phẩm thuốc Sau mô tả ngắn gọn loại phép thử đề cập tài liệu này: - Định tính: nhằm để khẳng định có mặt chất phân tích mẫu thử Thơng thường thực cách so sánh kết phân tích (ví dụ : phổ đồ, đáp ứng sắc ký, phản ứng hoá học, vv ) mẫu thử với chất chuẩn - Phép thử tạp chất: định lượng thử giới hạn tạp chất mẫu thử, nhằm mục đích phản ánh xác mức độ tinh khiết mẫu thử So với phép thử giới hạn tạp chất phép thử định lượng tạp chất yêu cầu thêm số tiêu thẩm định khác - Định lượng: nhằm mục đích đo lượng chất phân tích có mặt mẫu thử Trong tài liệu này, định lượng hiểu phép đo hàm lượng nhiều thành phần dược chất Đối với thành phẩm thuốc, tiêu thẩm định tương tự áp dụng định lượng hoạt chất hay nhiều thành phần lựa chọn khác Các tiêu thẩm định áp dụng cho phép định lượng liên quan đến quy trình phân tích khác (ví dụ thử độ hồ tan) Mục đích quy trình phân tích phải hiểu rõ ràng điều định tiêu cần đánh giá Danh mục sau tiêu điển hình thẩm định cần xem xét: Độ Độ xác Độ lặp lại Độ xác trung gian Độ tái lặp Tính đặc hiệu Giới hạn phát (DL) Giới hạn định lượng (QL) Tính tuyến tính Khoảng xác định Độ thô Các tiêu thẩm định định nghĩa phần giải thích thuật ngữ Bảng liệt kê tiêu xem quan trọng cho việc thẩm định loại quy trình phân tích khác Danh mục xem điển hình quy trình phân tích nêu, nhiên trường hợp ngoại lệ phải giải theo trường hợp cụ thể Cần ý độ thô không liệt kê bảng cần xem xét đến giai đoạn thích hợp trình phát triển quy trình phân tích Ngồi việc thẩm định lại quy trình phân tích cần thiết trường hợp đây: - Thay đổi khâu tổng hợp dược chất - Thay đổi thành phần thành phẩm - Thay đổi quy trình phân tích Mức độ thẩm định lại yêu cầu tuỳ thuộc vào chất thay đổi Một số thay đổi khác yêu cầu phải thẩm định lại Loại quy trình phân tích Định tính Xác định tạp chất Định Thử lượng giới hạn Định lượng: - Độ hoà tan - Hàm lượng/ hoạt lực - + - + + - + +(1) + -(3) + + + + + - + +(1) + + + Các tiêu - Độ - Độ xác + Độ lặp lại + Độ xác trung gian - Tính đặc hiệu (2) - Giới hạn phát hiện(LOD) - Giới hạn định lượng (LOQ) - Tính tuyến tính - Khoảng xác định Dấu - nhằm chỉ tiêu thông thường không cần phải đánh giá Dấu + nhằm chỉ tiêu cần phải đánh giá (1) tường hợp tiến hành kiểm tra độ tái lặp độ xác trung gian khơng cần phải xem xét (2) quy trình phân tích đặc hiệu bổ trợ hay nhiều quy trình phân tích hỗ trợ khác (3) cần số trường hợp 4- CÁC CHỈ TIÊU TRONG THẨM ĐỊNH QUY TRÌNH PHÂN TÍCH 4.1 Tính đặc hiệu Việc xác định tính đặc hiệu cần thiết tiến hành thẩm định phép thử định tính, xác định tạp chất định lượng Quy trình dùng để xác định tính đặc hiệu phụ thuộc vào mục tiêu định quy trình phân tích Khơng phải lúc xác định quy trình phân tích đặc hiệu cho chất phân tích định (phân biệt hồn tồn) Trong trường hợp này, cần thiết phải kết hợp hai hay nhiều quy trình phân tích để đạt mức độ đặc hiệu cần thiết 4.1.1- Định tính Những phép thử định tính phù hợp phép thử phân biệt hợp chất có cấu trúc tương tự có mặt mẫu thử Khả phân biệt quy trình định tính khẳng định kết dương tính mẫu có chứa chất phân tích (có thể cách so sánh với chất đối chiếu biết) kết hợp với kết âm tính mẫu thử khơng chứa chất phân tích Thêm vào đó, phép thử định tính áp dụng cho chất có cấu trúc tương tự gần với với cấu trúc chất phân tích để chứng tỏ phép thử định tính khơng cho kết dương tính với chất Việc lựa chọn xem chất có khả lẫn vào mẫu phân tích cần dựa đánh giá khoa học kết hợp cân nhắc xem chúng có khả có mặt không 4.1.2- Định lượng thử tạp chất Đối với quy trình sắc ký, sắc ký đồ đại diện nên sử dụng để chứng minh tính đặc hiệu thành phần riêng biệt phải ghi lại rõ ràng Với kỹ thuật phân tách khác cần phải có ghi chép tương tự Giới hạn phân tách sắc ký cần phải xem xét mức độ phù hợp Đối với giới hạn phân tách sắc ký, chia tách quan trọng, tính đặc hiệu chứng minh độ phân giải hai thành phần rửa giải gần Trong trường hợp sử dụng phép định lượng khơng đặc hiệu, cần dùng quy trình phân tích hỗ trợ khác để chứng minh tính đặc hiệu chúng, ví dụ dùng phương pháp chuẩn độ thể tích để định lượng nguyên liệu xuất xưởng, kết hợp phép định lượng với phép thử tạp chất thích hợp Cách đánh giá giống phép định lượng thử tạp chất bao gồm: 4.1.2.1- Những tạp chất sẵn có Đối với phép định lượng, cần phải chứng minh phương pháp dùng phân biệt chất cần phân tích có mặt tạp chất và/hoặc tá dược; thực tế, thực cách thêm lượng thích hợp tạp chất và/hoặc tá dược vào mẫu ban đầu cần định lượng (nguyên liệu thành phẩm) chứng minh kết định lượng khơng bị ảnh hưởng có mặt tạp chất và/hoặc tá dược (bằng cách so sánh với kết định lượng mẫu không thêm tạp chất và/hoặc tá dược) Đối với phép thử tạp chất, phân biệt thiết lập cách thêm vào nguyên liệu thành phẩm lượng thích hợp tạp chất chứng minh tạp chất riêng biệt tách riêng rẽ khỏi và/hoặc khỏi thành phần khác có mẫu 4.1.2.2- Những tạp chất khơng có sẵn Nếu khơng có tạp chất sản phẩm phân huỷ chuẩn, tính đặc hiệu chứng minh cách so sánh kết phân tích mẫu thử có chứa tạp chất sản phẩm phân huỷ quy trình phân tích xây dựng với kết phân tích mẫu thử có chứa tạp chất chất phân huỷ quy trình thống khác ví dụ phương pháp dược điển quy trình phân tích khác thẩm định (quy trình độc lập) Nếu cần, bao gồm so sánh mẫu lưu trữ điều kiện khắc nghiệt có liên quan như: ánh sáng, nhiệt độ, độ ẩm, thuỷ phân acid/kiềm oxi hoá - Để định lượng cần so sánh hai kết - Để thử tạp chất cần so sánh hồ sơ tạp chất thu Các phép thử độ tinh khiết đỉnh hữu ích để đỉnh sắc ký chất phân tích khơng chứa nhiều thành phần (ví dụ phép thử độ tinh khiết detector dãy di-ốt, detector khối phổ) 4.2 Tính tuyến tính Cần đánh giá mối tương quan tuyến tính khoảng xác định (xem mục 4.3) quy trình phân tích Tuyến tính thực trực tiếp mẫu chuẩn (bằng cách pha loãng dung dịch chuẩn gốc) và/hoặc cân riêng biệt hỗn hợp tự tạo chứa thành phần dược chất dựa quy trình đặt Cách sau dùng để nghiên cứu khoảng phân tích Tính tuyến tính đánh giá cách quan sát đồ thị tín hiệu ứng với nồng độ hàm lượng chất phân tích Nếu có tương quan tuyến tính kết thử phải đánh giá băng phương pháp thống kê thích hợp, ví dụ cách tính đường hồi quy dựa vào phương pháp bình phương tối thiểu Trong số trường hợp, để có mối tương quan tuyến tính định lượng nồng độ mẫu thử, số liệu phân tích thu cần phải qua bước biến đổi tốn học trước phân tích hồi quy Các số liệu từ đường hồi quy giúp đưa ước lượng toán học mức độ tuyến tính Cần phải đưa hệ số tương quan, giao điểm với trục tung, độ dốc đường hồi quy tổng hiệu bình phương Đồ thị số liệu cần đưa Thêm vào đó, việc phân tích độ lệch khỏi đường hồi qui điểm liệu thực tế hữu ích cho việc đánh giá độ tuyến tính Một số quy trình phân tích định lượng miễn dịch khơng thể tính tuyến tính sau phép biến đổi Trong trường hợp này, cần có hàm thích hợp để biểu thị mối liên quan đáp ứng thu với nồng độ (lượng) chất phân tích mẫu Để xác định tính tuyến tính cần tiến hành nồng độ Trong trường hợp khác, cần nêu rõ lí 4.3 Khoảng xác định Khoảng xác định thường lấy từ nghiên cứu tính tuyến tính phụ thuộc vào việc ứng dụng dự định quy trình Khoảng xác định thiết lập việc khẳng định quy trình phân tích xây dựng có tính tuyến tính, độ độ xác chấp nhận áp dụng để định lượng mẫu thử chứa chất phân tích với hàm lượng nằm khoảng cực (cực đại cực tiểu) khoảng xác định quy trình phân tích Sau khoảng xác định tối thiểu cần cân nhắc: - Để định lượng nguyên liệu thành phẩm thuốc: Thường từ 80 -120% nồng độ thử - Đối với độ đồng hàm lượng: Trong khoảng từ 70 -130% nồng độ thử trừ trường hợp chất dạng bào chế (ví dụ ống hít định liều) cần khoảng xác định thích hợp rộng - Để thử độ hồ tan:  20% khoảng quy định tiêu chuẩn, ví dụ tiêu chuẩn yêu cầu cho chế phẩm giải phóng hoạt chất có kiểm sốt phải giải phóng hoạt chất khoảng từ 20% sau đến 90% sau 24 khoảng đánh giá từ 0% đến 110% hàm lượng ghi nhãn - Để xác định tạp chất: Từ giới hạn cho phép tạp chất đến 120% tiêu chuẩn; tạp chất biết có độc tính bất thường sinh độc tính có tác dụng dược lý khơng mong muốn giới hạn phát (LOD) giới hạn định lượng (LOQ) tạp chất phải tương ứng với giới hạn mà tạp chất cần kiểm sốt Ghi chú: Để thẩm định quy trình thử tạp chất tiến hành phát triển sản phẩm cần thiết phải cân nhắc khoảng xác định xung quanh giới hạn gợi ý Nếu định lượng phép thử tinh khiết thực đồng thời phép thử sử dụng chuẩn 100% tính tuyến tính cần phải phủ tồn khoảng xác định từ giới hạn cho phép tạp chất đến 120% tiêu chuẩn định lượng tham khảo chương “Reporting Impurity Content of Batches” hướng dẫn ICH : Các tạp chất dược chất tạp chất thành phẩm thuốc 4.4 Độ Độ cần thiết lập khoảng phân tích xác định quy trình phân tích 10 4.4.1 Định lượng 4.4.1.1- Nguyên liệu Một số phương pháp xác định độ đúng: a- Áp dụng quy trình phân tích chất phân tích biết rõ độ tinh khiết (ví dụ chất đối chiếu) b- So sánh kết quy trình phân tích đề xuất với kết quy trình phân tích thống có độ công bố và/hoặc xác định (quy trình độc lập xem mục 4.1.2) c- Độ suy độ xác, tính tuyến tính tính đặc hiệu thiết lập 4.4.1.2- Thành phẩm thuốc Một số phương pháp xác định độ đúng: a- Áp dụng quy trình phân tích hỗn hợp mẫu tự tạo chứa thành phần thành phẩm thuốc mà có lượng biết trước dược chất cần phân tích thêm vào b- Trong trường hợp khơng có đầy đủ thành phần để làm mẫu tự tạo chấp nhận cho thêm lượng biết chất cần phân tích vào chế phẩm so sánh kết thu với quy trình thống thứ hai có độ cơng bố và/ xác định (quy trình độc lập xem mục 4.1.2) c- Độ suy độ xác, tính tuyến tính tính đặc hiệu thiết lập 4.4.2 Tạp chất (định lượng) Độ phải tiến hành mẫu thử (nguyên liệu thành phẩm thuốc) thêm lượng tạp chuẩn biết Trong trường hợp khơng có tạp và/hoặc sản phẩm phân huỷ chuẩn chấp nhận so sánh kết thu với quy trình độc lập (xem mục 4.1.2) Hệ số đáp ứng hoạt chất sử dụng Trong trường hợp, cần phải xác định rõ tạp chất tổng tạp chất tính so với chất phân tích (ví dụ khối lượng/ khối lượng phần trăm diện tích) 4.4.3 Các liệu cần có Độ phải tính dựa tối thiểu lần định lượng mức nồng độ khác khoảng nồng độ xác định quy trình phân tích (ví dụ nồng độ, nồng độ tiến hành lần) 11 Độ biểu thị dạng phần trăm tìm thấy chất phân tích trước biết thêm vào mẫu thử độ lệch giá trị trung bình đo giá trị thực với khoảng tin cậy 4.5 Độ xác Thẩm định phép thử định lượng phép thử xác định hàm lượng tạp chất cần xác định độ xác 4.5.1 Độ lặp lại (Repeatability) Độ lặp lại đánh giá kết của: a- Tối thiểu lần định lượng khoảng nồng độ xác định quy trình (ví dụ nồng độ, nồng độ tiến hành lần) b- Tối thiểu lần định lượng nồng độ thử 100% 4.5.2 Độ xác trung gian( Intermediate Precision) Việc xác định độ xác trung gian phụ thuộc vào tình hình cụ thể quy trình phân tích áp dụng Cơ sở đăng ký cần ảnh hưởng biến cố ngẫu nhiên đến độ xác quy trình phân tích Những thay đổi điển hình cần xem xét bao gồm: ngày phân tích, kiểm nghiệm viên, thiết bị, v.v Thực tế không cần phải nghiên cứu ảnh hưởng cách riêng rẽ Khuyến khích sử dụng thiết kế thực nghiệm (ma trận) 4.5.3 Độ tái lặp (Reproducibility) Độ tái lặp xác định cách so sánh kết phòng thí nghiệm Độ tái lặp tiến hành đánh giá trường hợp tiêu chuẩn hố quy trình phân tích ví dụ quy trình dược điển Những số liệu không nằm hồ sơ đăng ký thuốc 4.5.4 Dữ liệu cần có Độ xác quy trình cần phải đưa liệu sau: Độ lệch chuẩn (standart deviation), độ lệch chuẩn tương đối (Relative standart deviation hay hệ số biến thiên = coefficient of variation) khoảng tin cậy 4.6 Giới hạn phát (Detection Limit= DL) Phương pháp xác định giới hạn phát tuỳ thuộc vào quy trình phân tích phương pháp phân tích dụng cụ hay khơng dụng cụ Ngoài phương pháp nêu đây, phương pháp khác chấp nhận để xác định giới hạn phát 12 4.6.1 Dựa vào quan sát Phương pháp thường dùng cho phương pháp phân tích khơng dụng cụ, dùng cho phương pháp phân tích dụng cụ Giới hạn phát xác định phân tích mẫu thử có chất phân tích biết nồng độ xác định nồng độ tối thiểu mà đọc đáp ứng chất phân tích 4.6.2 Dựa vào tỉ lệ đáp ứng so với nhiễu Phương pháp áp dụng cho phương pháp phân tích có nhiễu đường Việc xác định tỉ lệ đáp ứng nhiễu tiến hành cách so sánh đáp ứng đo mẫu thử có nồng độ chất phân tích thấp biết với đáp ứng mẫu trắng từ tính nồng độ tối thiểu chất phân tích phát Tỷ lệ đáp ứng nhiễu nằm 3:1 2:1 thường chấp nhận để thiết lập giới hạn phát 4.6.3 Dựa vào độ lệch chuẩn đáp ứng độ dốc Giới hạn phát (DL) tính sau: 3,3 σ DL = S Trong đó: σ độ lệch chuẩn đáp ứng S độ dốc đường chuẩn độ dốc S tính dựa vào đường chuẩn chất phân tích Có thể xác định S theo nhiều cách khác , ví dụ như: 4.6.3.1-Dựa vào độ lệch chuẩn mẫu trắng Tiến hành số lượng thích hợp phân tích mẫu trắng, đo đáp ứng tính độ lệch chuẩn đáp ứng 4.6.3.2- Dựa vào đường chuẩn Dựa vào đường chuẩn đặc trưng mẫu thử có chứa chất phân tích có nồng độ nằm khoảng DL Số dư độ lệch chuẩn đường hồi quy độ lệch chuẩn giá trị giao điểm với trục tung đường hồi quy sử dụng độ lệch chuẩn 4.6.4 Các liệu cần có Cần đưa giới hạn phát (DL) cách xác định giới hạn phát Nếu DL xác định dựa vào quan sát dựa vào tỷ lệ đáp ứng nhiễu cần đưa sắc ký đồ có liên quan Trong trường hợp ước tính giá trị DL tính tốn ngoại suy sau ước tính cần đánh giá cách phân tích độc lập số lượng mẫu thử 13 thích hợp có nồng độ biết gần với giới hạn phát giới hạn phát 4.7 Giới hạn định lượng (Quantitation Limit = QL) Phương pháp xác định giới hạn định lượng (QL) tuỳ thuộc vào quy trình phân tích phương pháp phân tích dụng cụ hay khơng dụng cụ Ngoài phương pháp nêu đây, phương pháp khác chấp nhận để xác định giới hạn định lượng 4.7.1 Dựa vào quan sát Phương pháp thường dùng cho phương pháp phân tích khơng dụng cụ, dùng cho phương pháp phân tích dụng cụ Giới hạn định lượng (QL) thường xác định phân tích mẫu thử có chất phân tích biết nồng độ xác định nồng độ tối thiểu mà định lượng chất cần phân tích với độ độ xác chấp nhận 4.7.2 Dựa vào tỉ lệ đáp ứng so với nhiễu Phương pháp dùng cho phương pháp phân tích có thấy nhiễu đường Việc xác định tỉ lệ đáp ứng nhiễu tiến hành cách so sánh đáp ứng đo mẫu thử có nồng độ chất phân tích thấp biết so với đáp ứng mẫu trắng xác định nồng độ tối thiểu chất phân tích định lượng Tỷ lệ đáp ứng nhiễu thông thường 10:1 4.7.3 Dựa vào độ lệch chuẩn đáp ứng độ dốc Giới hạn định lượng (QL) tính sau: 10 s QL = S Trong đó: s độ lệch chuẩn đáp ứng S độ dốc đường chuẩn Độ dốc S tính dựa vào đường chuẩn chất phân tích Cũng tính theo nhiều cách khác ví dụ như: 4.7.3.1-Dựa vào độ lệch chuẩn mẫu trắng Tiến hành số lượng thích hợp phân tích mẫu trắng, đo dao động đáp ứng tính độ lệch chuẩn đáp ứng 4.7.3.2- Dựa vào đường chuẩn Xây dựng đường chuẩn đặc trưng mẫu thử có chứa chất phân tích có nồng độ nằm gần khoảng QL Số dư độ lệch chuẩn đường hồi 14 quy độ lệch chuẩn giá trị giao điểm với trục tung đường hồi quy sử dụng độ lệch chuẩn 4.7.4 Các liệu cần có Cần đưa giới hạn định lượng (QL) cách xác định giới hạn định lượng Giới hạn sau cần đánh giá cách phân tích số lượng mẫu thử thích hợp có nồng độ biết gần với giới hạn định lượng giới hạn định lượng 4.8 Độ thô (Robustness) Việc đánh giá độ thô cần xem xét giai đoạn phát triển phương pháp tuỳ thuộc vào loại quy trình phân tích nghiên cứu Độ thơ mức độ tin cậy phương pháp có thay đổi nhỏ có chủ định thơng số phương pháp Nếu phép đo nhạy cảm với thay đổi điều kiện phân tích, điều kiện phân tích cần kiểm sốt thích hợp dẫn điểm cần lưu ý q trình phân tích Kết đánh giá độ thô kết đánh giá dãy thơng số phản ánh tính thích hợp hệ thống (ví dụ phép thử độ phân giải) phải thiết lập để đảm bảo trì tính hiệu lực quy trình phân tích sử dụng Những ví dụ biến đổi thường gặp phân tích là: - tính ổn định dung dịch phân tích - thời gian chiết Trong trường hợp sắc ký lỏng, biến đổi thường gặp là: - Ảnh hưởng thay đổi pH pha động - Ảnh hưởng thay đổi thành phần pha động - Các cột khác (do nhà cung cấp /hoặc lô khác nhau) - Nhiệt độ - Tốc độ dòng Trong trường hợp sắc ký khí, biến đổi thường gặp là: - Các cột khác (do nhà cung cấp /hoặc lơ khác nhau) - Nhiệt độ - Tốc độ dòng 4.9 Phép thử tính thích hợp hệ thống Kiểm tra tính tương thích hệ thống phần khơng thể tách rời nhiều quy trình phân tích Đánh giá tính thích hợp hệ thống phép thử nhằm đánh giá tính thích hợp tồn hệ thống phân tích cấu thành yếu tố máy móc thiết bị, hệ thống điện, cách tiến hành phân tích mẫu thử Các thơng số phép thử tính tương thích hệ thống thiết lập cho quy trình riêng biệt phụ thuộc vào loại quy trình thẩm định Các thơng số đặc biệt quan trọng phương pháp sắc ký, xem dược điển để có thêm thơng tin 15 16 ... phẩm phân huỷ quy trình phân tích xây dựng với kết phân tích mẫu thử có chứa tạp chất chất phân huỷ quy trình thống khác ví dụ phương pháp dược điển quy trình phân tích khác thẩm định (quy trình... dụng quy trình phân tích chất phân tích biết rõ độ tinh khiết (ví dụ chất đối chiếu) b- So sánh kết quy trình phân tích đề xuất với kết quy trình phân tích thống có độ công bố và/hoặc xác định (quy. .. tính chủ định thơng số phương pháp mức tin cậy quy trình điều kiện sử dụng bình thường 2- GIỚI THIỆU Việc thẩm định quy trình phân tích nhằm chứng minh quy trình có phù hợp với mục đích ứng dụng