Nghiên cứu lên men sinh tổng hợp kháng sinh nhờ streptomyces 188 11

BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI TRẦN THỊ VÂN LINH Mã sinh viên: 1201340 NGHIÊN CỨU LÊN MEN SINH TỔNG HỢP KHÁNG SINH NHỜ STREPTOMYCES 188.11 KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ Người hướng dẫn: PSG.TS Cao Văn Thu Nơi thực hiện: Bộ môn Vi sinh – Sinh học HÀ NỘI – 2017 LỜI CẢM ƠN Lời đầu tiên, xin gửi lời cảm ơn chân thành sâu sắc đến PGS.TS Cao Văn Thu – người trực tiếp hướng dẫn, bảo giúp đỡ tận tình suốt trình nghiên cứu để hoàn thành tốt khóa luận Tiếp theo, xin chân thành cảm ơn đến thầy cô giáo, cán kỹ thuật viên giảng dạy công tác môn Vi sinh – Sinh học, viện Công nghệ Dược phẩm quốc gia, viện Vệ sinh dịch tễ Trung ương, Viện Hóa học – Viện hàn lâm khoa học Việt Nam tạo điều kiện giúp đỡ thời gian thực khóa luận Nhân dịp này, xin gửi lời cảm ơn sâu sắc tới thầy cô giáo trường Đại học Dược Hà Nội truyền đạt kiến thức quý giá giúp đỡ trình học tập trường Cuối cùng, xin gửi lời cảm ơn tới gia đình, bạn bè bên cạnh quan tâm động viên để hoàn thời gian nghiên cứu Do thời gian thực có hạn, điều kiện nghiên cứu trình độ thân hạn chế nên tránh khỏi sai sót khóa luận Vì vậy, mong nhận ý kiến đóng góp thầy cô để khóa luận hoàn thiện Tôi xin chân thành cảm ơn Hà Nội, tháng năm 2017 Sinh viên Trần Thị Vân Linh MỤC LỤC ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG 1: TÔNG QUAN 1.1 Đại cương kháng sinh 1.1.1 Định nghĩa kháng sinh 1.1.2 Phân loại kháng sinh 1.1.3 Cơ chế tác dụng kháng sinh 1.1.4 Các ứng dụng kháng sinh 1.1.5 Tình trạng đề kháng kháng sinh giới Việt Nam 1.2 Đại cương xạ khuẩn 1.2.1 Đặc điểm hình thái xạ khuẩn 1.2.2 Đặc điểm hình thái sinh lý xạ khuẩn thuộc chi Streptomyces 1.2.3 Phân loại Streptomyces 1.3 Cải tạo bảo quản giống xạ khuẩn 1.3.1 Mục đích 1.3.2 Phương pháp cải tạo giống 1.3.3 Bảo quản giống xạ khuẩn 1.4 Lên men sinh tổng hợp kháng sinh 1.4.1 Khái niệm lên men 1.4.2 Phương pháp lên men 1.4.3 Một số yếu tố ảnh hưởng đến trình lên men 1.5 Chiết tách tinh chế kháng sinh từ dịch lên men 10 1.5.1 Vai trò 10 1.5.2 Chiết xuất 10 1.5.3 Tinh chế 10 1.6 Nghiên cứu cấu trúc kháng sinh 11 1.6.1 Phổ hồng ngoại 11 1.6.2 Phổ tử ngoại – khả kiến 11 1.6.3 Phổ khối 11 1.6.4 Phổ cộng hưởng từ hạt nhân 11 1.7 Một số nghiên cứu kháng sinh có nguồn gốc từ Streptomyces 12 CHƯƠNG 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 14 2.1 Đối tượng nghiên cứu 14 2.1.1 Chủng giống vi sinh vật 14 2.1.2 Các môi trường nuôi cấy 14 2.1.3 Dụng cụ, dung môi hóa chất 16 2.2 Nội dung nghiên cứu 19 2.3 Phương pháp thực nghiệm 19 2.3.1 Phương pháp nuôi cấy giữ giống ống thạch nghiêng 19 2.3.2 Xác định sơ đặc điểm hình thái chủng Streptomyces 188.11 19 2.3.3 Đánh giá hoạt tính kháng sinh phương pháp khuếch tán 20 2.3.4 Xác định môi trường nuôi cấy thích hợp 21 2.3.5 Phương pháp cải tạo chọn giống 21 2.3.6 Phương pháp lên men chìm tổng hợp kháng sinh 23 2.3.7 Phương pháp chiết kháng sinh từ dịch lọc dung môi hữu 23 2.3.8 Phương pháp xác định độ bền nhiệt, độ bền pH hoạt tính kháng sinh 24 2.3.9 Phương pháp tách kháng sinh sắc ký 24 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ THỰC NGHIỆM 26 3.1 Xác định sơ đặc điểm hình thái xạ khuẩn Streptomyces 188.11 26 3.1.1 Đặc điểm hình thái xạ khuẩn theo phân loại ISP 26 3.1.2 Đặc điểm hình thái xạ khuẩn qua chụp kính hiển vi điện tử 26 3.2 Kết sinh tổng hợp kháng sinh Streptomyces 188.11 môi trường khác 27 3.3 Kết sàng lọc ngẫu nhiên 28 3.4 Kết đột biến UV 28 3.4.1 Cải tạo giống lần 28 3.4.2 Cải tạo giống lần 29 3.5 Kết đột biến hóa học 30 3.6 Kết lên men sinh tổng hợp kháng sinh 30 3.6.1 Chọn môi trường lên men tốt 30 3.6.2 Chọn dạng chủng, biến chủng lên men tốt 31 3.7 Kết đánh giá ảnh hưởng pH nhiệt độ đến độ bền hoạt tính kháng sinh 32 3.7.1 Ảnh hưởng nhiệt độ 32 3.7.2 Ảnh hưởng pH 32 3.8 Kết chọn dung môi hữu chiết xuất kháng sinh 33 3.9 Kết tách kháng sinh sắc ký lớp mỏng 34 3.10 Kết sắc ký cột 35 3.10.1 Sắc ký cột lần 35 3.10.2 Sắc ký cột lần 36 3.10.3 Hiệu suất trình tách tinh chế kháng sinh 37 3.11 Kết sơ xác định kháng sinh tinh khiết thu 37 BÀN LUẬN 39 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 40 TÀI LIỆU THAM KHẢO 42 DANH MỤC CÁC KÝ HIÊU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT ADN Acid 2’ deoxyribonucleic COSY Correlation Spectroscopy Đường kính trung bình DMHC Dung môi hữu ĐB Đột biến ĐBHH Đột biến hóa học GARP Hiệp hội đề kháng kháng sinh toàn cầu HMBC Heteronuclear Multiple Bond Correlation HPLC Sắc ký lỏng hiệu cao HTKS Hoạt tính kháng sinh HSQC Heteronuclear Single Quantum Coherence IR Infrared – Hồng ngoại ISP International Streptomyces Project (Chương trình Streptomyces quốc tế) KS Kháng sinh MS Mass spectrometry – Phổ khối MT Môi trường MTdt Môi trường dịch thể NMR Nuclear Magnetic Resonance (Phổ cộng hưởng từ hạt nhân) s Sai số chuẩn có hiệu chỉnh SKLM Sắc ký lớp mỏng SLNN Sàng lọc ngẫu nhiên UV Ultraviolet – Tử ngoại VSV Vi sinh vật DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1: Phân loại kháng sinh theo cấu trúc hóa học Bảng 2.1: Các vi sinh vật kiểm định Bảng 2.2: Thành phần môi trường nuôi cấy xạ khuẩn (g/100ml) Bảng 2.3: Môi trường nuôi cấy VSV kiểm định Bảng 2.4: Môi trường phân loại xạ khuẩn theo ISP Bảng 2.5: Các dung môi (a) hóa chất (b) sử dụng Bảng 3.1: Đặc điểm theo ISP Streptomyces 188.11 Streptomyces albidus Bảng 3.2: Kết thử HTKS với VSV kiểm định Bảng 3.3: Kết thử hoạt tính kháng sinh sau sàng lọc ngẫu nhiên Bảng 3.4: Kết thử hoạt tính kháng sinh sau đột biến UV Bảng 3.5: Kết thử hoạt tính kháng sinh sau đột biến UV Bảng 3.6: Kết thử hoạt tính kháng sinh sau đột biến hóa học Bảng 3.7: Kết chọn môi trường lên men Bảng 3.8: Kết lên men dạng chủng, biến chủng MT1dt Bảng 3.9: Độ bền hoạt tính kháng sinh với nhiệt độ Bảng 3.10: Ảnh hưởng pH lên độ bền hoạt tính kháng sinh Bảng 3.11: Kết lựa chọn dung môi pH chiết kháng sinh Bảng 3.12: Chiết kháng sinh n-Butanol pH =5, chiết lặp lần Bảng 3.13: Kết SKLM lựa chọn hệ dung môi Bảng 3.14: Kết thử hoạt tính phân đoạn sau chạy sắc ký cột lần Bảng 3.15: Kết sắc ký lớp mỏng phân đoạn sau chạy cột lần Bảng 3.16: Kết thử hoạt tính phân đoạn sau chạy cột lần Bảng 3.17: Kết sắc ký lớp mỏng phân đoạn sau chạy cột lần Bảng 3.18: Kết phổ IR KS1 (a) KS2 (b) DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ VÀ ĐỒ THỊ Hình PH.1: Sơ đồ chế tác dụng kháng sinh Hình PH.2: Thử hoạt tính kháng sinh phương pháp khối thạch Hình PH.3: Thử hoạt tính kháng sinh phương pháp giếng thạch Hình PH.4: Thử hoạt tính kháng sinh phương pháp khoanh giấy lọc Hình PH.5: Sắc ký cột tách kháng sinh Hình PH.6: Bình chứa dịch lên men Hình PH.7: Khuẩn lạc sau đột biến UV Hình PH.8: Hình ảnh bề mặt bào tử (a) chuỗi bào tử (b) Streptomyces 188.11 Hình PH.9: Phổ UV-VIS kháng sinh Hình PH.10: Phổ UV-VIS kháng sinh Hình PH.11: Phổ IR KS1 Hình PH.12: Phổ IR KS2 Hình PH.13: Phổ khối MS KS1 Hình PH.14: Phổ khối MS KS2 Hình PH.15: Phổ 1H-NMR KS1 Hình PH.16: Phổ DEPT-NMR KS1 Hình PH.17: Phổ 13C-NMR KS1 Hình PH.18: Hình ảnh xạ khuẩn Streptomyces albidus qua kính hiển vi điện tử Bảng PB.1: So sánh bước sóng 13C KS1 nhân phenoxazone Bảng PB.2: Kết thử hoạt tính kháng sinh sau sàng lọc ngẫu nhiên Bảng PB.3: Kết thử hoạt tính kháng sinh sau đột biến UV1 Bảng PB.4: Kết thử hoạt tính kháng sinh sau đột biến UV2 Bảng PB.5: Kết thử hoạt tính kháng sinh sau đột biến hóa học ĐẶT VẤN ĐỀ Sự phát triển vi sinh vật học nói chung, vi sinh công nghiệp nói riêng, với bước ngoặt lịch sử phát chất kháng sinh Alexander Fleming (1928) mở kỉ nguyên y học: khai sinh ngành công nghệ sản xuất kháng sinh ứng dụng thuốc kháng sinh vào điều trị cho người Sự đời phát triển công nghệ kháng sinh làm giảm đáng kể tỷ lệ tử vong nhiễm khuẩn dần trở thành nhóm thuốc thiết yếu y học đại Tuy nhiên, ngày tượng đề kháng kháng sinh ngày gia tăng vấn đề thời quốc gia giới đặc biệt nước phát triển, có Việt Nam Do lạm dụng sử dụng thuốc, vi sinh vật đột biến gen thúc đẩy nhanh tình trạng kháng thuốc, hậu dẫn đến mắc bệnh nhiễm trùng nặng gia tăng nguy tử vong Ngoài ra, đề kháng kháng sinh làm tăng chi phí chăm sóc sức khỏe với thời gian nằm viện dài hơn, cần chăm sóc đặc biệt Vì vậy, việc tìm kháng sinh có hoạt tính cao, phổ rộng vấn đề cấp bách, thách thức lớn cho nhà khoa học Hiện với phát triển công nghệ khoa học kĩ thuật công nghệ vi sinh coi ngành hàng đầu giới Trong phải kể đến công nghệ sinh học vi sinh sản xuất kháng sinh phục vụ đời sống người có bước phát triển vượt bậc Trong số vi sinh vật có khả sinh kháng sinh xạ khuẩn nhóm có tiềm lớn chiếm 60% số chất kháng sinh [8] Nhiều công trình nghiên cứu chứng minh Streptomyces chi xạ khuẩn có khả sinh tổng hợp kháng sinh đa dạng cấu trúc đặc điểm kháng khuẩn Xuất phát từ yêu cầu thực tế trên, từ chủng xạ khuẩn phân lập Bộ môn Vi sinh – Sinh học trường Đại học Dược Hà Nội, chọn đề tài nghiên cứu: “Nghiên cứu lên men sinh tổng hợp kháng sinh nhờ Streptomyces 188.11” với mục tiêu sau: - Xác định số đặc điểm hình thái xạ khuẩn Streptomyces 188.11 - Nghiên cứu cải tạo giống theo hướng nâng cao hiệu suất sinh tổng hợp kháng sinh - Xác định, lựa chọn môi trường lên men thích hợp, lựa chọn dung môi chiết xuất tốt nhất, tinh chế kháng sinh - Bước đầu xác định vài đặc tính vật lý, hóa học kháng sinh tổng hợp CHƯƠNG 1: TÔNG QUAN 1.1 Đại cương kháng sinh 1.1.1 Định nghĩa kháng sinh Thuật ngữ kháng sinh theo quan niệm truyền thống, định nghĩa chất vi sinh vật (vi khuẩn, nấm, xạ khuẩn…) tạo có khả ức chế phát triển tiêu diệt vi khuẩn khác Ngày nay, kháng sinh không tạo vi sinh vật mà tạo trình bán tổng hợp tổng hợp hóa học, định nghĩa kháng sinh thay đổi, kháng sinh định nghĩa sau: Kháng sinh chất có nguồn gốc vi sinh vật, bán tổng hợp tổng hợp hóa học, với liều thấp có tác dụng kìm hãm tiêu diệt chọn lọc vi sinh vật nhiễm sinh [2], [3] 1.1.2 Phân loại kháng sinh Hiện nay, có nhiều cách phân loại kháng sinh tùy vào mục đích nghiên cứu cách sử dụng thuốc như: phân loại theo cấu trúc hóa học, theo nguồn gốc, theo chế tác dụng… Trong phân loại kháng sinh theo cấu trúc hóa học khoa học giúp cho người nghiên cứu nhanh chóng định hướng đặc điểm chất kháng sinh phát biết cấu trúc hóa học Phân loại kháng sinh theo cấu trúc hóa học thường chia nhóm chất sau [2]: Bảng 1.1: Phân loại kháng sinh theo cấu trúc hóa học Nhóm kháng sinh Kháng sinh cụ thể Penicillin, cephalexin, … -lactam Phenicol Chloramphenicol, … Aminosid Streptomycin, Gentamycin, … Macrolid Erythromycin, Spiramycin, … Lincosamid Lincomycin, clindamycin, … Tetracyclin Tetracyclin, doxycycline, … Quinolon Ciprofloxacin, ofloxacin, … Peptid Vancomycin, Polymycin, … Các nhóm kháng sinh khác Oxazolidinon 1.1.3 Cơ chế tác dụng kháng sinh Các kháng sinh tác dụng chủ yếu thông qua việc ức chế phản ứng tổng hợp khác tế bào vi sinh vật gây bệnh cách gắn vào phân tử Hình PH.9: Phổ UV-VIS kháng sinh Hình PH.10: Phổ UV-VIS kháng sinh Hình PH.11: Phổ IR KS1 Hình PH.12: Phổ IR KS2 MSD Trap Report v4 (A4-Opt2) Hình PH.13: Phổ khối MS KS Hình PH.14: Phổ MS KS2 Hình PH.15: Phổ 1H-NMR KS1 Hình PH.16: Phổ DEPT-NMR KS1 Hình PH.17: Phổ 13C-NMR KS1 Hình PH.18: Hình ảnh xạ khuẩn Streptomyces albidus qua kính hiển vi điện tử Bảng PB.1: So sánh bước sóng 13C KS1 nhân phenoxazone Vị trí C=O 4a 5a Phenoxazone C # 101,6 146,0 # 113,5 145,1 140,5 KS1 - Vị trí 9a 4-CH3 6-CH3 Phenoxazone C 127,5 130,2 125,9 132,6 129,1 7,7 15,0 KS1 127,26 130,32 129,5 7,53 - Bảng PB.2: Kết thử hoạt tính kháng sinh sau sàng lọc ngẫu nhiên Dạng chủng 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 Chứng B.subtilis (mm) 23,19 24,30 23,76 17,91 19,17 24,15 24,85 23,03 21,50 23,35 23,58 23,59 21,83 19,20 18,61 23,39 22,77 22,41 23,29 22,47 21,35 22,63 22,57 20,89 23,40 20,59 21,45 22,17 19,96 22,17 22,09 22,51 22,45 E.coli s 0,59 0,26 0,79 1,29 1,53 0,97 1,44 0,46 1,32 0,32 0,76 0,45 0,65 1,42 1,33 0,45 0,43 0,86 1,13 0,72 0,70 0,60 1,43 0,29 0,94 0,88 0,48 0,37 0,45 0,33 0,38 0,69 0,67 (mm) 20,23 21,22 20,99 15,25 16,60 20,72 20,99 20,26 19,27 21,26 20,73 19,75 16,90 16,59 16,67 19,85 19,35 18,27 21,35 20,83 20,00 20,38 20,07 18,29 20,78 18,89 18,84 20,93 19,05 20,25 20,07 20,79 20,91 s 0,49 0,38 0,42 1,05 0,87 0,55 0,88 0,49 0,08 0,17 1,11 0,83 0,62 0,77 1,46 1,16 0,08 0,95 0,27 0,16 1,10 0,28 1,06 0,32 0,93 0,59 1,48 1,59 0,53 0,64 1,05 0,51 0,96 Bảng PB.3: Kết thử hoạt tính kháng sinh sau đột biến UV Dạng chủng 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 Chứng (mm) 20,13 20,00 19,87 19,43 20,39 20,07 20,60 19,87 19,87 20,00 20,29 20,47 18,80 20,60 19,20 19,74 20,09 19,63 20,24 19,97 19,73 19,60 19,83 20,37 19,80 19,17 19,00 19,87 19,33 18,77 20,39 19,59 20,32 B.subtilis s % biến đổi hoạt tính 0,76 99,05 1,73 98,43 0,99 97,80 0,51 95,64 0,79 100,36 0,22 98,77 1,22 101,38 1,50 97,77 0,81 97,77 1,00 98,43 0,61 99,87 1,33 100,72 1,06 92,52 2,16 101,38 1,31 94,49 1,53 97,15 1,13 98,85 0,64 96,62 0,69 99,59 0,09 98,26 0,37 97,08 0,20 96,46 0,76 97,57 0,78 100,23 0,20 97,44 0,29 94,32 0,00 93,50 0,27 97,77 0,31 95,14 0,22 92,39 0,34 100,33 0,37 96,42 0,05 100,00 (mm) 19,24 19,03 19,25 19,33 20,63 19,98 20,37 19,60 19,10 19,47 19,03 19,57 18,60 20,37 18,93 20,15 19,87 18,80 19,57 19,30 18,93 19,00 19,51 19,00 19,30 19,51 19,00 19,33 19,97 19,17 19,46 18,32 20,05 E.coli s % biến đổi hoạt tính 0,15 95,94 0,55 94,91 0,91 95,98 0,85 96,41 0,35 102,89 0,47 99,63 0,06 101,56 0,53 97,74 0,17 95,25 0,81 97,07 0,06 94,91 0,64 97,61 0,53 92,75 0,34 101,56 1,45 94,41 1,03 100,50 1,50 99,07 0,35 93,75 0,81 97,57 0,30 96,24 0,81 94,41 0,00 94,75 0,73 97,31 1,00 94,75 0,61 96,24 0,50 97,31 0,00 94,75 0,31 96,41 0,06 99,60 0,29 95,58 0,58 97,04 0,29 91,36 0,57 100,00 Bảng PB.4: Kết thử hoạt tính kháng sinh sau đột biến UV2 Dạng chủng 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 Chứng (mm) 18,20 22,07 20,87 21,10 21,49 21,12 21,20 21,06 21,10 22,00 22,13 21,09 21,17 20,61 21,15 19,00 21,14 22,47 21,48 20,27 23,15 20,80 21,03 22,90 21,57 21,32 20,27 21,10 22,57 21,67 20,21 20,73 20,00 B.subtilis s % biến đổi hoạt tính 0,72 91,00 0,12 110,33 0,81 104,33 0,46 105,50 0,46 107,43 0,33 105,60 0,35 106,00 0,35 105,30 0,17 105,50 0,00 110,00 0,12 110,67 0,16 105,47 0,15 105,83 0,54 103,07 0,27 105,77 1,00 95,00 0,99 105,70 0,25 112,33 0,98 107,40 0,23 101,33 0,25 115,73 0,20 104,00 0,38 105,17 0,17 114,50 0,55 107,83 1,25 106,60 0,24 101,37 0,17 105,50 0,60 112,83 0,29 108,33 0,67 101,07 0,23 103,67 1,00 100,00 (mm) 18,96 20,91 20,40 20,96 21,19 20,47 19,95 20,02 21,22 21,52 20,01 21,11 21,80 21,60 21,67 18,17 21,29 23,17 21,85 20,83 23,30 20,77 20,73 22,30 20,97 21,23 20,60 20,01 20,33 20,79 21,27 20,59 19,73 E.coli s % biến đổi hoạt tính 0,07 96,11 0,85 106,02 0,40 103,41 0,46 106,25 0,29 107,43 0,42 103,75 0,32 101,12 0,61 101,49 0,38 107,57 0,46 109,09 0,02 101,45 0,33 107,00 0,20 110,51 0,00 109,50 0,21 109,83 0,30 92,13 0,16 107,94 0,29 117,44 0,15 110,75 0,57 105,61 0,26 118,11 0,21 105,27 0,31 105,10 0,30 113,04 0,35 106,29 0,06 107,64 0,20 104,43 0,01 101,42 0,58 103,08 0,35 105,41 0,28 107,81 0,20 104,36 0,37 100,00 Bảng PB.5: Kết thử hoạt tính kháng sinh sau đột biến hóa học Dạng chủng 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 Chứng (mm) 21,70 22,90 22,33 21,00 21,47 21,27 20,70 21,83 21,63 21,80 21,70 22,23 20,40 20,37 19,27 19,56 20,40 19,61 20,11 20,43 19,20 20,36 19,18 20,31 20,61 20,76 19,40 19,33 20,07 19,33 19,01 21,07 20,60 B.subtilis s % biến đổi hoạt tính 0,36 105,34 0,56 111,17 0,29 108,41 0,00 101,94 0,40 104,21 0,38 103,24 0,30 100,49 0,45 105,99 0,85 105,02 0,35 105,83 0,36 105,34 0,68 107,93 0,36 99,03 0,06 98,87 0,28 93,56 0,51 94,95 0,40 99,03 0,54 95,21 0,99 97,64 0,44 99,16 0,35 93,20 0,34 98,83 0,22 93,11 0,27 98,61 0,19 100,03 0,32 100,78 0,69 94,17 0,58 93,85 0,12 97,41 0,58 93,85 0,02 92,30 0,31 102,27 0,72 100,00 (mm) 20,62 21,47 21,40 20,33 20,15 20,46 20,50 20,10 20,20 20,47 20,63 20,67 20,01 20,52 19,51 19,94 20,48 20,40 20,13 20,01 19,95 19,73 20,37 19,35 20,17 20,29 19,73 18,80 19,60 20,49 19,24 19,71 19,70 E.coli s % biến đổi hoạt tính 0,54 104,67 0,81 108,97 0,10 108,63 0,34 103,18 0,27 102,30 0,44 103,86 0,50 104,06 0,17 102,03 0,35 102,54 0,50 103,89 0,78 104,74 0,76 104,91 0,88 101,56 0,50 104,16 0,16 99,05 0,12 101,22 0,29 103,96 0,69 103,55 0,23 102,20 0,01 101,56 0,08 101,29 0,37 100,14 0,34 103,38 0,08 98,24 0,15 102,37 0,35 103,01 0,37 100,14 0,35 95,43 0,53 99,49 0,42 104,03 0,15 97,66 0,28 100,07 0,20 100,00 ... khuẩn phân lập Bộ môn Vi sinh – Sinh học trường Đại học Dược Hà Nội, chọn đề tài nghiên cứu: Nghiên cứu lên men sinh tổng hợp kháng sinh nhờ Streptomyces 188. 11 với mục tiêu sau: - Xác định... 1.4 Lên men sinh tổng hợp kháng sinh 1.4.1 Khái niệm lên men 1.4.2 Phương pháp lên men 1.4.3 Một số yếu tố ảnh hưởng đến trình lên men 1.5 Chiết tách tinh chế kháng sinh. .. 2.2 Nội dung nghiên cứu ♦ Nghiên cứu xác định hình thái xạ khuẩn ♦ Cải tạo chủng xạ khuẩn ban đầu ♦ Nghiên cứu lên men, chiết xuất, tinh chế kháng sinh thu ♦ Nghiên cứu cấu trúc kháng sinh 2.3 Phương