ppt chọn và tạo giống môn công nghệ sinh học thực vật Các phương pháp truyền thống Các phương pháp hiện đại Cách kiểm tra thực vật chuyển gen Khái niệm về chọn và tạo giống cây trồng Chọn, tạo giống cây trồng vừa có tính chất khoa học, vừa có tính chất nghệ thuật, thông qua một lịch sử lâu dài về nội dung thuần hóa các loài hoang dại trở thành loài trồng trọt.
CHỌN VÀ TẠO GIỐNG THỰC VẬT NỘI DUNG CHÍNH I II III IV V Chọn tạo giống trồng Các phương pháp truyền thống Phương pháp chuyển gen Các phương pháp kiểm tra - phân tích thực vật biến đổi gen Tạo giống trồng virus I Chọn, tạo giống trồng gì? Định nghĩa Chọn giống trồng: phát giữ lại cá thể mang đặc tính tốt đáp ứng yêu cầu đề & loại cá thể xấu không đạt yêu cầu → hoàn thiện giống & nâng cao suất trồng Tạo giống trồng nhằm chọn lọc từ biến dị tự nhiên & biến dị nhân tạo có quần thể để tạo giống → đáp ứng mục đích, nhu cầu kinh tế thị hiếu người Chọn, tạo giống trồng vừa có tính chất khoa học, vừa có tính chất nghệ thuật, thông qua lịch sử lâu dài nội dung hóa loài hoang dại trở thành loài trồng trọt I Chọn, tạo giống trồng gì? Mục tiêu Nâng cao hiệu kinh tế thông qua: Nâng cao suất giống trồng Nâng cao chất lượng sản phẩm nông nghiệp Thay đổi thời gian sinh trưởng Thay đổi đặc tính nông học (thêm tính trạng có lợi, loại bỏ tính trạng có hại) Tăng tính cảm quang sản phẩm Các đặc tính khác: chịu hạn, chịu mặn, chống sâu bệnh… II Các phương pháp truyền thống Phương pháp phả hệ Phương pháp chọn giống trồng tự thụ phấn theo phương pháp chọn cá thể hệ phân ly theo hệ thống ghi chép cách hệ thống, từ hệ đến hệ ổn định sau II Các phương pháp truyền thống Phương pháp phả hệ II Các phương pháp truyền thống Chọn giống trồng ưu lai Khai thác ưu lai thành công loài thụ phấn chéo mà loài tự thụ phấn lúa Tiềm giá trị ưu lai đạt từ 150% đến 200% suất hạt II Các phương pháp truyền thống Chọn giống trồng ưu lai II Các phương pháp truyền thống Chọn giống trồng sinh sản vô tính Những cặp lai F1 trồng sinh sản vô tính dị hợp tử từ ưu việt chọn lọc nhân giống quan sinh sản thực vật Giống phát triển ổn định phục vụ sản xuất, mà suy giảm phân ly tượng tái tổ hợp gen II Các phương pháp truyền thống Chọn giống trồng sinh sản vô tính Các bước thực Nhập nội giống trồng thích nghi hóa khí hậu Chọn lọc Lai Đột biến Nhân giống 1.1 Các phương pháp tạo virus c Xử lí nhiệt kết hợp nuôi cấy MPS đỉnh Quy trình tạo bệnh phương pháp xử lí nhiệt kết hợp với nuôi cấy ĐST Kiểm tra virus 1.1 Các phương pháp tạo virus d Tạo chồi bất định kết hợp với nuôi cấy MPS đỉnh Lyly bị nhiễm virus kích thích để tạo thành củ bị cất định in vitro, kích thước ĐST chồi mọc từ củ tăng đến 1mm chuyển sang môi trường nuôi cấy khác để ĐST tiếp tục phát triển Ở thuốc lá, bắp cải, có vùng đặc biệt không bị nhiễm virus toàn bị nhiễm Những vùng cô lập & kích thích để tạo chồi bất định tạo bệnh 1.1 Các phương pháp tạo virus e Vi ghép Nếu không cảm ứng tăng trưởng ĐST thu hút chồi từ nuôi cấy ĐST ghép ĐST vào in vitro để tăng trưởng Có ý nghĩ thân gỗ tiến hành nuôi cấy ĐST 1.1 Các phương pháp tạo virus e Vi ghép Sau đó, Navarro & c.s hoàn thiện quy trình vi ghép chồi đỉnh có múi in vitro Bệnh tristeza Bệnh chảy gôm V TẠO GIỐNG CÂY SẠCH VIRUS Một số phương pháp chuẩn đoán bệnh virus a Phương pháp thị Cây thị có triệu chứng bệnh điển hình biểu nhanh chóng Cây thị chia làm hai nhóm: nhiễm bệnh cục nhiễm bệnh hệ thống Để thu thị cần phải thực theo yêu cầu sau: • Các điều kiện chuẩn bị để làm thí nghiệm lây bệnh thị: đất thí nghiệm, phân bón • Phương pháp trồng trọt thị • Phương pháp tiến hành lây bệnh nhân tạo V TẠO GIỐNG CÂY SẠCH VIRUS Một số phương pháp chuẩn đoán bệnh virus b Xét nghiệm kính hiển vi điện tử Sử dụng dịch chứa virus chiết từ bệnh hay thông qua làm tinh khiết cố định hóa chất lưới đồng để quan sát kính hiển vi điện tử Sử dụng kháng huyết dùng phương pháp xem trực tiếp để phân biệt trường hợp nghi mẫu bị lẫn virus khác Phương pháp giúp xác định hai virus khác mẫu V TẠO GIỐNG CÂY SẠCH VIRUS Một số phương pháp chuẩn đoán bệnh virus c Xét nghiệm phương pháp PCR Khuếch đại gen Sản phẩm PCR đặc trưng gen virus sau phân tích điện di agarose gel Độ nhạy cao, xác tốn phương pháp nói V TẠO GIỐNG CÂY SẠCH VIRUS Ứng dụng tạo dứa bệnh héo đỏ đầu virus PMWaV a Đặc điểm nhận biết .Lá già gần → vệt màu đồng → dứa chuyển sang màu đỏ nhạt → đỏ đậm .Bìa uốn cong phía trên, chóp khô dần xuống → toàn bị héo khô .Ở rễ, rễ non bị thối → toàn hệ thống rễ bị thối → ảnh hưởng đến trình hút nước & chất dinh dưỡng V TẠO GIỐNG CÂY SẠCH VIRUS Ứng dụng tạo dứa bệnh héo đỏ đầu virus PMWaV b Tác nhân gây bệnh: virus c Đặc điểm phát sinh phát triển bệnh Virus lan truyền từ vụ trước → vụ sau đường giống thông qua rệp sáp Ủ bệnh từ 3-8 tháng, nhiễm bệnh thuốc chữa trị Cây tăng trưởng kém, còi cọc, có nhỏ, khô, ăn không ngon Có thể làm bị héo chết IV TẠO GIỐNG CÂY SẠCH VIRUS Ứng dụng tạo dứa bệnh héo đỏ đầu virus PMWaV a Phát PMWaV .Sử dụng kĩ thuật RT-PCR Southern Blot để phát PMWaV .Mô hay rệp tách chiết RNA tổng số sử dụng Rneasy Plant Mini Kits → tạo cDNA → PCR thể đơn dòng đặc hiệu cho PMWaV sử dụng kĩ thuật TBIA .RT – PCR TBIA sử dụng song song để phát PMWaV Gel chứa sản phẩm Kháng V TẠO GIỐNG CÂY SẠCH VIRUS Ứng dụng tạo dứa bệnh héo đỏ đầu virus PMWaV b Loại bỏ virus - Tạo nguyên liệu ban đầu: nhân chồi dứa môi trường khoáng MS + BA (2mg/l) Sau tháng, tách chồi & cấy chuyền tủ cấy vô trùng Các bình nuôi cấy bảo quản phòng điều kiện sau: • o o Nhiệt độ: 24 C ± C • Thời gian chiếu sáng: 16 (từ - 21 giờ) • Cường độ ánh sáng 1000 – 2000 lux • Độ ẩm: 55 – 60% V TẠO GIỐNG CÂY SẠCH VIRUS Ứng dụng tạo dứa bệnh héo đỏ đầu virus PMWaV b Loại bỏ virus - Xử lí nhiệt: Cây dứa in vitro cao khoảng – 5cm → cấy chuyền sang môi trường MS trước xử lí nhiệt tuần Các bình nuôi cấy đặt tủ xử lí nhiệt Điều kiện xử lí nhiệt: • o o Nhiệt độ: 37 C ± 0,1 C • Độ ẩm: 55% • Thời gian chiếu sáng: 16 giờ/ ngày • Cường độ chiếu sáng 2000 lux • Thời gian xử lí: 30 ngày V TẠO GIỐNG CÂY SẠCH VIRUS Ứng dụng tạo dứa bệnh héo đỏ đầu virus PMWaV b Loại bỏ virus - Nuôi cấy đỉnh sinh trưởng: Mẫu nuôi cấy ĐST chồi dứa in vitro qua xử lí nhiệt Quan sát kính hiển vi soi nổi, dùng dao lam tách ĐST kích thước 0,3 – mm & đặt nhẹ lên bề mặt môi trường Mỗi ĐST cấy vào ống nghiệm chứa 10ml môi trường MS Các ống nghiệm chứa ĐST bảo quản điều kiện phòng nuôi ghi nhận kết sau 30, 50 70 ngày Tài liệu tham khảo Tài liệu sách: TS Phạm Thị Minh Thu, 2016 Giáo trình nuôi cấy mô tế bào thực vật Bùi Chí Bửu, Nguyễn Thị Lang, 2007 Chọn giống trồng – phương pháp truyền thống phân tử, NXB Nông Nghiệp Công nghệ sinh học thực vật_Phạm Ngọc Minh Quỳnh, 2013 Tài liệu internet: http://doan.edu.vn/do-an/de-tai-van-de-nghien-cuu-tao-cay-dua-cayenne-in-vitro-sach-virus-gay-benh-heo-do-dau-la-24141/ THANKS FOR WATCHING!!!