Đang tải... (xem toàn văn)
Bài 1: Đặc điểm virus thực vật Bài 2: Phân loại virus thực vật Bài 3: Chẩn đoán và phòng chống virus thực vật Bài 4: Phytoplasma và viroid thực vật Loại thể vùi: Thể vùi là sự kết tụ của: Các phân tử virus (tất cả các nhóm virus) Các protein vỏ virus (Vd tymovirus) Các protein không phải protein vỏ virus (Vd tenuivirus, potyvirus) Các cấu tử tế bào bị biến đổi do sự nhiễm bệnh (Vd chloroplasts của tế bào cây bị nhiễm tymovirus) Vị trí trong tế bào Trong tế bào chất (vd thể vùi hình trụ của potyvirus) Trong nhân (vd thể vùi trong nhân của geminivirus) Trong cả tế bào chất và nhân (thể vùi tinh thể của potyvirus) Trong không bào và tế bào chất (thể vùi tinh thể của cucumovirus)
Virus thực vật (10 tiết) Bài 1: Đặc điểm virus thực vật Bài 2: Phân loại virus thực vật Bài 3: Chẩn đoán phòng chống virus thực vật Bài 4: Phytoplasma viroid thực vật Bài 3: Chẩn đoán phòng chống I Chẩn đoán • Thể vùi • Huyết học, ELISA • PCR II Phòng chống • Giống bệnh • Giống kháng • Vector I Chẩn đoán bệnh virus Các phương pháp chẩn đoán Dựa vào đặc trưng sinh học Triệu chứng Cây thị Dựa vào đặc trưng hình thái Kính hiển vi điện tử Thể vùi Dựa vào huyết học (mức protein) Khuyếch tán gel ELISA Dựa vào acid nucleic PCR; RT-PCR Lai phân tử dsRNA Chẩn đoán dựa vào thể vùi (inclusion body) Loại thể vùi: Thể vùi kết tụ của: Các phân tử virus (tất nhóm virus) Các protein vỏ virus (Vd tymovirus) Các protein protein vỏ virus (Vd tenuivirus, potyvirus) Các cấu tử tế bào bị biến đổi nhiễm bệnh (Vd chloroplasts tế bào bị nhiễm tymovirus) Vị trí tế bào Trong tế bào chất (vd thể vùi hình trụ potyvirus) Trong nhân (vd thể vùi nhân geminivirus) Trong tế bào chất nhân (thể vùi tinh thể potyvirus) Trong không bào tế bào chất (thể vùi tinh thể cucumovirus) Thể vùi (inclusion body) Một số loại thể vùi: Thể vùi hình trụ tế bào chất potyvirus Cấu tạo từ phiến protein (từ CI protein) Đặc trưng cho potyvirus Chia làm nhóm: Sơ đồ thể vùi hình trụ potyvirus nhóm thể vùi hình trụ potyvirus KNV ĐT KHV QH Nhóm 1: vòng bánh xe cuôn Nhóm 2: vòng bánh xe Phiến nhóm thể vùi hình trụ potyvirus KNV ĐT KHV QH Nhóm 1: vòng bánh xe cuôn phiến Nhóm 4: vòng bánh xe phiến cong Thể vùi (inclusion body) Một số loại thể vùi: Thể vùi tinh thể TMV Cấu tạo từ phân tử virus xếp thành hàng => thành phiến chồng lên Có hình đa giác (lục giác) Hình thành tế báo chất không bào Lá bệnh, lông tinh thể virus tế bào lông Thể vùi (inclusion Kiểm tra thể vùi KHV quang học body) Tước mảnh biểu bì Cắt mảnh mô mỏng Làm = Triton X-100 (10-15 phút) Nhuộm thuốc nhuộm (10-15 phút) Thuốc nhuộm: Calcomine orange / 2-methoxyethanol Brilliant green / 2- methoxyethanol Azure A / 2-methoxyethanol + 0.2M Na2HPO4 DD làm trong: 5% Triton X-100 DD rửa: 70% 2-methoxyethyl acetate + 30% ethanol http://plantpath.ifas.ufl.edu/pdc/Inclusionpage/Florvirus.html Nhuộm thuốc nhuộm (10-15 phút) Xử lý = DD rửa Kiểm tra Chẩn đoán PCR: nguyên lý (tiếp) Chẩn đoán PCR Ví dụ cặp mồi chung phát nhiều loài virus thuộc chi Potyvirus 5’UTR 3’UTR P1 HC-Pro 6K P3 CI CIFor 6K VPg NIa-Pro CIRev ~ 0.7 kb 10 11 12 13 14 15 16 17 18 10 11 12 13 14 15 16 17 18 NIb CP Poly A TuMV LYSV SPFMV BCMV SCMV SrMV PVY DsMV ChiVMV PRSV (Vietnam) / Known identity ZYMV JGMV (Australia) / Known identity LMoV (Australia) / Known identity BBrMV (Philippines) / Known identity SYSV Telosma mosaic virus New Peace lily mosaic virus species Wild tomato mosaic virus II Phòng chống bệnh virus Phòng chống bệnh virus Không có hóa chất tiêu diệt trực tiếp virus tế bào Phòng chống bệnh virus Các chiến lược phòng trừ virus gồm Sử dụng giống bệnh Sử dụng giống kháng bệnh • Tính kháng tự nhiên • Tính kháng từ tác nhân gây bệnh Tiêu diệt nguồn virus • vụ trước • ký chủ phụ • nhổ bỏ bệnh vụ Phòng chống vector (hóa học, sinh học, nhà lưới, bẫy…) Phòng chống bệnh virus Sử dụng giống bệnh • Hạt giống • Khoảng > 100 virus truyền qua hạt • Phần lớn tồn hạt • Phương pháp tạo giống bệnh (giáo trình): Chọn giống từ nguồn Xử lý nhiệt Xử lý hóa chất đề trừ virus chi tobamovirus tồn vỏ hạt Nuôi cấy đỉnh sinh trưởng Tạo giống invitro Phòng chống bệnh virus Sử dụng giống kháng bệnh dùng gen kháng tự nhiên • Gen kháng có nguồn gốc từ Ví dụ: Gen kháng N thuốc kháng TMV Gen kháng Ty1, Ty3 từ cà chua dại kháng begomovirus Phòng chống bệnh virus Sử dụng giống kháng bệnh dùng gen kháng tự nhiên Cây thuốc (N tabacum cv Samsum có gen kháng N => vết bệnh cục TMV Cây thuốc (N tabacum cv SR1 gen kháng N => nhiễm hệ thống TMV Phòng chống bệnh virus Sử dụng giống kháng bệnh dùng gen virus • Gen qui định tính kháng gen virus Tính kháng có nhờ biểu gen CP virus Vd chuyển gen CP tạo protein vỏ PRSV đu đủ Tính kháng có nhờ chế câm gen (RNA silencing) Vd chuyển gen Replicase tạo dsRNA Pepper mild mottle virus (PMMoV) thuốc Phòng chống bệnh virus Sử dụng giống kháng bệnh dùng gen virus Tính kháng thông qua gen CP Cây đu đủ chuyển gen CP PRSV => kháng PRSV Cây đu đủ đối chứng => nhiễm PRSV Phòng chống bệnh virus Sử dụng giống kháng bệnh dùng gen virus Tính kháng thông qua gen CP Đu đủ chuyển gen CP PRSV Phòng chống bệnh virus Sử dụng giống kháng bệnh dùng gen virus Cơ chế RNA silencing chống virus 1.Hình thành dsRNA virus tế bào chất 2.Cắt dsRNA thành siRNA (21-22 nts) = protein Dicer 3.Lắp ráp siRNA (sợi đơn) thành phức hợp RISC (RNA indiced silencing complex) 4.SiRNA/RISC cắt đặc hiệu RNA virus (hoặc transcript) => virus transcript virus bị phân hủy Cơ chế RNA silencing chống virus RNA silencing Phòng chống bệnh virus Chuyển gen kháng PMMoV dựa chế RNA silencing Gen chuyển Phòng chống bệnh virus Chuyển gen kháng PMMoV dựa RNA silencing Cây chuyển gen => tạo dsRNA => kháng Cây không chuyển gen => không tạo dsRNA => nhiễm ... mosaic virus New Peace lily mosaic virus species Wild tomato mosaic virus II Phòng chống bệnh virus Phòng chống bệnh virus Không có hóa chất tiêu diệt trực tiếp virus tế bào Phòng chống bệnh virus. .. của: Các phân tử virus (tất nhóm virus) Các protein vỏ virus (Vd tymovirus) Các protein protein vỏ virus (Vd tenuivirus, potyvirus) Các cấu tử tế bào bị biến đổi nhiễm bệnh (Vd chloroplasts... hệ miễn dịch động vật máu nóng hình thành kháng thể Tính đặc hiệu: khả liên kết với kháng thể tương ứng Đối với virus thực vật, kháng nguyên là: Phân tử virus nguyên vẹn (thực chất protein