Nghiên cứu chiết tách, xác định thành phần hóa học trong một số dịch chiết của thân cây Mật gấu ở Cao Bằng

Header Page of 145 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG ĐOÀN THỊ KIM ĐÀO NGHIÊN CỨU CHIẾT TÁCH, XÁC ĐỊNH THÀNH PHẦN HÓA HỌC TRONG MỘT SỐ DỊCH CHIẾT CỦA THÂN CÂY MẬT GẤU Ở CAO BẰNG Chuyên ngành: Hóa hữu Mã số: 60 44 01 14 TÓM TẮT LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC ĐàNẵng–Năm2016 Footer Page of 145 Header Page of 145 Cơng trình hồn thành ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG Người hướng dẫn khoa học: TS TRẦN MẠNH LỤC Phản biện 1: GS TS Đào Hùng Cường Phản biện 2: PGS TS Lê Thị Liên Thanh Luận văn bảo vệ trước Hội đồng chấm Luận văn tốt nghiệp thạc sĩ Khoa học họp Đại học Đà Nẵng vào ngày 20 tháng năm 2016 Có thể tìm hiểu luận văn tại: - Trung tâm Thông tin – Học liệu, Đại học Đà Nẵng - Thư viện trường Đại học Sư phạm, Đại học Đà Nẵng Footer Page of 145 Header Page of 145 MỞ ĐẦU Lý chọn đề tài Nước Việt Nam nằm vùng khí hậu nhiệt đới ẩm gió mùa, thiên nhiên ban tặng thảm thực vật đa dạng phong phú bao gồm nhiều thuốc quý với đầy đủ chủng loại, số lượng nhiều công dụng Cùng với kinh nghiệm dân gian, người sử dụng phận khác từ loại cây, cỏ thiên nhiên để chữa bệnh vô hiệu Những dược phẩm từ thảo dược khơng an tồn mà cịn phát huy tác dụng cộng hưởng nhiều hợp chất thành phần thuốc có ý nghĩa quan trọng việc chăm sóc điều trị nhiều loại bệnh Chính vậy, dược phẩm với hoạt chất từ nguồn dược liệu thiên nhiên trở thành đề tài nghiên cứu hàng đầu nhà khoa học lĩnh vực ydược ngày Cây mật gấu tên gọi nhiều loài thuộc chi Mahonia, họ hoàng liên gai (Berberidaceae) Các loài thuộc chi Mahonia phát nhiều vùng núi nước ta Cao Bằng, Hà Giang, Lai Châu, Lào Cai, Lâm Đồng Theo kinh nghiệm dân gian, mật gấu dùng để chữa bệnh tiêu hóa kiết lỵ, viêm ruột, tiêu chảy, viêm gan, vàng da dùng chữa viêm da, dị ứng, ngứa lở Nhân dân số địa phương thuộc tỉnh Cao Bằng dùng làm thuốc bổ dạng hãm chè “Mát gan” Theo kết nghiên cứu nhà khoa học giới cho thấy loài M aquifolium đặc biệt có hiệu chữa trị bệnh da vảy nến, eczema, da khô, nấm da Tuy nhiên Việt Nam, nghiên cứu thành phần hóa học có thân mật gấu cịn Để tiếp tục nghiên cứu sâu Footer Page of 145 Header Page of 145 mật gấu tỉnh Cao Bằng làm sở cho việc tạo chế phẩm thuốc, chọn đề tài “ ” làm luận văn thạc sĩ nhằm đóng góp thơng tin khoa học thành phần hóa học lồi Mục tiêu nghiên cứu Xác định thành phần hóa học từ dịch chiết thân mật gấu (Mahonia nepalensis DC ) Phân lập xác định thành phần hóa học từ số phân đoạn phân lập Đối tƣợng phạm vi nghiên cứu Dịch chiết phần thân mật gấu (Mahonia nepalensis DC ) thu mua Cao Bằng vào tháng năm 2015 Nội dung nghiên cứu 4.1 Nghiên cứu lý thuyết + Thu thập, tổng hợp, phân tích tài liệu, tư liệu nguồn nguyên liệu, thành phần hóa học ứng dụng mật gấu + Tổng hợp tài liệu phương pháp lấy mẫu, chiết tách, phân lập xác định thành phần hóa học chất từ dịch chiết mẫu thực vật 4.2 Nghiên cứu thực nghiệm + Xác định độ ẩm, hàm lượng tro ằng phương pháp trọng lượng + Xác định hàm lượng kim loại phương pháp AAS + Chiết tách chất ằng dung môi khác theo phương pháp chiết rắn – lỏng (soxhlet, ngâm dầm) chiết lỏng – lỏng + Dùng phương pháp C MS để định danh chất dịch chiết + Phân lập phương pháp sắc ký Footer Page of 145 Header Page of 145 Ý nghĩa khoa học thực tiễn đề tài 5.1 Ý nghĩa khoa học Cung cấp thơng tin khoa học quy trình chiết tách, thành phần hóa học số dịch chiết thân mật gấu Cao Bằng 5.2 Ý nghĩa thực tiễn óp phần khai thác, mở rộng sản xuất, sử dụng ảo vệ loài cách hiệu ền vững Bố cục luận v n Bố cục luận văn gồm phần Phần Mở đầu Phần Nội dung nghiên cứu Chương Tổng quan Chương Nguyên liệu phương pháp nghiên cứu Chương Kết thảo luận Phần Kết luận kiến nghị CHƢƠNG TỔNG QUAN 1.1 GIỚI THIỆU VỀ CHI MAHONIA 1.2 GIỚI THIỆU VỀ CÂY MẬT GẤU 1.2.1 Tên gọi Tên khoa học: Mahonia nepalensis DC., họ Hoàng liên gai (Berberidaceae) Tên Tiếng Việt: Mã hồ; Hồng liên rơ; Hồng bá gai; Thích hồng bá; Thập đại công lao Tên khác: Berberis nepalensis Spreng.; Mahonia japonica DC.; Mahonia annamica Gagnep Footer Page of 145 Header Page of 145 1.2.2 Phân bố 1.2.3 Đặc điểm thực vật 1.2.4 Tình hình nghiên cứu nước mật gấu 1.2.5 Giá trị sử dụng mật gấu Việt Nam 1.3 CÁC HỢP CHẤT ALKALOID 1.3.1 Khái niệm định nghĩa 1.3.2 Trạng thái thiên nhiên 1.3.3 Phân loại alkaloid CHƢƠNG NGUYÊN LIỆU VÀ PHƢƠNG PH P NGHI N C U 2.1 NGUY N IỆU DỤNG CỤ H CHẤT 2.1.1 Nguyên liệu Nguyên liệu nghiên cứu thân mật gấu, thu mua Cao Bằng vào tháng năm 2015 dạng thái lát, khô tự nhiên đựng sẵn bao polyetylen Thân mật gấu dạng thái lát, khô tự nhiên nghiền nhỏ để tiến hành nghiên cứu 2.1.2 Thiết ị dụng cụ h a chất a Thi t b , dụng cụ b Hóa ch t 2.2 PHƢƠNG PH P NGHI N C U 2.2.1 Các sơ đồ nghiên cứu * đồ chiết tách ng phƣơng pháp chiết so hlet Thân mật gấu dạng thái lát, khô tự nhiên nghiền nhỏ để tiến hành nghiên cứu Một phần dùng để xác định số hóa lý như: Độ ẩm, hàm lượng tro, hàm lượng kim loại Footer Page of 145 Header Page of 145 phần dùng chiết soxhlet với dung mơi có độ phân cực tăng dần: Hexane, dichloromethane, chloroform, methanol Quá trình chiết tách phương pháp chiết soxhlet mơ tả theo Hình 2.1 Thân mật gấu Độ ẩm Nghiền Xác định tiêu hóa lý Bột thân Hàm lượng tro Chiết song song Cô Dịch chiết hexane Cao hexane Hàm lượng kim loại Cô Cao Dịch chiết Dichloromethane Dịch chiết Chloroform Dichloromethane Cô Cao Chloroform - Cân xác định khối lượng - Định danh phổ GC/MS Cô Dịch chiết methanol Cao methanol Hình 2.1 Sơ đồ nghiên cứu thực nghiệm chiết soxhlet Footer Page of 145 Header Page of 145 * đồ chiết tách ác định thành phần hóa học từ tổng cao ethanol Thân mật gấu Chiết dung môi ethanol Cao tổng ethanol Phân tán vào nước Chiết phân bố lỏng - lỏng Dịch hexane Dịch dichloromethane Cô Cao hexane Dịch chloroform Cô Cô Cao dichloromethane Cao chloroform Cột sắc ký 50 x 3.5 cm Hệ hexane:ethyl acetate = 9:1→7:3 DA1.12 DA13.21 DA22.26 DB1.8 DB9.29 DB30.87 Cột sắc ký 45 x 1.5 cm ĐO GC/MS Da1 DA27.81 Da2 ĐO GC/MS Da3.7 Da8.17 Da18.39 Cột sắc ký 45 x 1.0 cm da1.2 da3.30 da31.37 ĐO GC/MS Sơ đồ chiết tác , xác định thành phần hóa học từ tổng cao ethanol Footer Page of 145 Header Page of 145 2.2.2 Đặc tính hóa lý a X ẩ v lượng tro b ng ươ ng lượng b X lượng kim loại b ươ ụ 2.2.3 Phƣơng pháp chiết soxhlet 2.2.4 Phƣơng pháp ph n lập ph n đoạn từ tổng cao ethanol a Đ ều ch cao ethanol b ươ m b Chi t phân b cao ethanol b ng dung môi hexane, dichloromethane, chloroform ạn b c Phân l ươ ắc ký 2.2.5 Xác định thành phần h a học ng phƣơng pháp quang phổ hấp thụ ph n tử UV – VI phƣơng pháp GC/M a P ươ q ổ b P ươ G /M ụ UV - VIS CHƢƠNG T QU V TH O UẬN 3.1 K T QU X C ĐỊNH MỘT SỐ CHỈ TIÊU HÓA LÝ 3.1.1 Độ ẩm Độ ẩm trung bình thân mật gấu 8.836% Kết cho ta thấy độ ẩm thân mật gấu tương đối thấp Tuy nhiên, độ ẩm thay đổi tùy thuộc vào điều kiện khí hậu, thổ nhưỡng nơi mật gấu sinh trưởng mùa hái Với độ ẩm này, nguyên liệu giữ chất lượng tốt bảo quản thời gian dài mà không bị ẩm mốc, đảm bảo yêu cầu cho bột dược liệu Footer Page of 145 Header Page 10 of 145 3.1.2 Hàm lƣợng tro Hàm lượng tro trung bình thân mật gấu 0.928% So với hàm lượng tro số dược liệu quy định Dược điển Việt Nam hàm lượng tro thân mật gấu thấp Kết cho thấy, thân mật gấu chứa lượng nhỏ chất vơ cơ, có mặt số muối kim loại hàm lượng kim loại chứa thân mật gấu không lớn 3.1.3 Hàm lƣợng kim loại Căn định Bộ Y tế số 46 2007 QĐ-BYT ngày 19 tháng 12 năm 2007 Bộ trưởng Bộ Y tế việc an hành “Quy định giới hạn tối đa nhiễm sinh học hóa học thực phẩm”, nhận thấy hàm lượng kim loại nặng có thân mật gấu (Cu, Cd, As, Pb, Hg, Zn) thấp nhiều so với hàm lượng cho phép thực phẩm (rau, quả, chè sản phẩm chè) Do sử dụng an tồn thân mật gấu dược liệu, không ảnh hưởng đến sức khỏe người 3.2 K T QU X C ĐỊNH THÀNH PHẦN HÓA HỌC TRONG CÁC DỊCH CHI T SOXHLET Chiết soxhlet với dung môi hexane, dichloromethane, chloroform methanol thu dịch chiết tương ứng 3.2.1 Kết ác định khối lƣợng cao chiết Bảng 3.1 Khối lượng cao dịch chiết soxhet với dung môi hexane, dichloromethane, chloroform, methanol STT Dung môi Hexane Dichloromethane Chloroform Methanol Footer Page 10 of 145 Khối lƣợng mẫu bột (g) 15.001 30.001 30.001 30.001 Khối lƣợng cao chiết g) 0.148 0.447 0.616 2.976 % cao chiết %) 0.987 1.490 2.053 9.920 10 Header Page 12 of 145 Campesterol (1.43%); Stigmasterol (0.65%) 3.2.5 Kết định danh thành phần hóa học dịch chiết soxhlet b ng dung môi methanol Bằng phương pháp C MS định danh 20 cấu tử dịch chiết methanol từ thân mật gấu, chiếm 41.43% tổng số cấu tử phát Cấu tử có hàm lượng lớn 9,12Octadecadienoic acid (Z,Z)- (6.25%) Ngồi thấy xuất beta-Sitosterol (0.88%) 3.2.6 Tổng kết thành phần hóa học dịch chiết soxhlet Bảng 3.2 Thành phần hóa học dịch chiết soxhlet từ thân mật gấu Diện tích peak (%) STT Tên gọi Hexane Dichloro Chlorofo methane rm methanol Furfural - - - 0.46 2-Furanmethanol - - - 0.94 - - - 2.30 - - - 1.89 - - - 3.07 - - - 3.81 - - 0.13 0.80 - 0.11 0.21 3.01 2,5-Dimethyl-43 hydroxy-3(2H)furanone dl-Malic acid, dimethyl ester 4H-Pyran-4-one, 2,3- dihydro-3,5dihydroxy-6-methyl2- Furancarboxaldehyde, 5-(hydroxymethyl)- 2-Methoxy-4vinylphenol Phenol, 2,6- Footer Page 12 of 145 11 Header Page 13 of 145 Diện tích peak (%) STT Tên gọi Dichloro Chlorofo methane rm - - - 0.65 - 0.12 0.35 1.63 - 0.39 1.31 3.97 - 0.08 - 1.12 - 0.26 - 0.30 13.36 13.72 13.84 4.85 - - - 0.53 - - - 0.52 23.20 37.02 26.99 6.25 6.87 3.65 10.49 4.09 Hexane methanol dimethoxyBenzoic acid, 49 hydroxy-3-methoxymethyl ester 10 Phenol, 3,4,5trimethoxy4-((1E)-3-Hydroxy-1- 11 propenyl)-2methoxyphenol Benzoic acid, 4- 12 hydroxy-3,5dimethoxy-, hydrazide 13 14 15 16 17 18 Hexadecanoic acid, methyl ester n-Hexadecanoic acid 9,12-Octadecadienoic acid, methylester 9-Octadecenoic acid, methyl ester 9,12-Octadecadienoic acid (Z,Z)cis-13-Octadecenoic acid 19 Octadecanoic acid 0.87 1.57 - 0.36 20 beta.-Sitosterol 7.64 6.85 8.83 0.88 21 2,4-Decadienal 0.32 - - - 22 Tetradecanoic acid 0.20 0.18 - - 23 Pentadecanoic acid 0.23 0.16 - - Footer Page 13 of 145 12 Header Page 14 of 145 Diện tích peak (%) STT Tên gọi Hexane Dichloro Chlorofo methane rm methanol 24 Heptadecanoic acid 0.29 0.32 - - 25 Campesterol 1.18 1.04 1.43 - 26 Stigmasterol 0.92 0.55 0.65 - - 0.14 0.30 - - - 1.08 - - 6.90 - - 27 Benzaldehyde, 3hydroxy-4-methoxyBenzaldehyde, 4- 28 hydroxy-3,5dimethoxy- 29 9,17-Octadecadienal, (Z)- Nhận xét chung: Từ bảng 3.2 cho thấy phương pháp C MS định danh 29 cấu tử dịch chiết; dịch chiết hexane 11 cấu tử, dịch chiết dichloromethane 17 cấu tử, dịch chiết chloroform 12 cấu tử, dịch chiết methanol 20 cấu tử Phần trăm diện tích peak cấu tử định danh dịch chiết dichloromethane (73.06%) lớn nhất, sau đến dịch chiết chloroform (65.61%), dịch chiết hexane (55.08%) nhỏ dịch chiết methanol (41.43%) Điều chứng tỏ dichloromethane có khả hịa tan tốt chiết nhiều cấu tử phân cực lẫn không phân cực với hàm lượng lớn từ thân mật gấu Thành phần hóa học dịch chiết soxhlet từ thân mật gấu chứa số cấu tử có hoạt tính sinh học cao đáng quan tâm 4H-Pyran-4-one, 2,3-dihydro-3,5-dihydroxy-6-methyl- có hoạt tính chống sưng, kháng khuẩn Với có mặt số thành phần dẫn xuất phenol, acid hữu cho ta thấy hoạt tính kháng khuẩn tốt dịch Footer Page 14 of 145 13 Header Page 15 of 145 chiết soxhlet từ thân mật gấu Beta-Sitosterol Stigmasterol có tác dụng chống oxy hoá, hoạt chất tác động hiệu đến việc hạ thấp mức cholesterol máu, làm tăng hàm lượng chất HDL-C, thành phần quan trọng để bảo vệ tim mạch, phòng chống xơ vữa động mạch Campesterol loại phytosterol, có tác dụng chống hấp thu cholesterol ruột, chống viêm 3.3 K T QU CHI T T CH X C ĐỊNH THÀNH PHẦN HÓA HỌC TỪ TỔNG CAO ETHANOL BẰNG PHƢƠNG PHÁP CHI T PHÂN BỐ Phổ UV - VIS dịch chiết ethanol từ thân mật gấu sau lần chiết thể Hình 3.1 0.23 Dịch chiết lần Dịch chiết lần Dịch chiết lần 0.1 0.0 A -0.1 -0.2 -0.3 -0.40 200.0 220 240 260 280 300.0 nm Hình 3.1 Phổ UV-VIS với dịch chiết ethanol 3.3.1 Kết ác định thành phần hóa học cao chiết hexane từ tổng cao ethanol a K t ổ UV – VIS Cao ethanol với dung môi hexane (3 lần, lần 200 ml), dịch chiết sau lần trích li đo UV-VIS, kết thể Hình 3.2 Footer Page 15 of 145 14 Header Page 16 of 145 0.0080 0.005 Dịch chiết lần Dịch chiết lần Dịch chiết lần 0.000 -0.005 A -0.010 -0.015 -0.0200 200.0 210 220 230 240 250.0 nm Hình 3.2 Phổ UV - VIS dịch chiết lỏng - lỏng với dung môi hexane từ tổng cao ethanol b K t nh thành ph n hóa h c Bằng phương pháp C MS định danh 13 cấu tử dịch chiết lỏng - lỏng với dung môi hexane từ tổng cao ethanol thân mật gấu, chiếm 66.80% tổng số cấu tử phát Các cấu tử có hàm lượng lớn 9,12-Octadecadienoic acid (Z,Z)(17.02%); 9,17-Octadecadienal, (Z)- (16.24%); n-Hexadecanoic acid (11.99%); beta-Sitosterol (8.98%); cis-13-Octadecenoic acid (6.46%) Ngồi cịn thấy xuất Campesterol (1.39%); Stigmasterol (0.93%); Stigmast-4-en-3-one (0.37%); Vitamin E (0.06%) Như vậy, phương pháp chiết lỏng - lỏng với dung môi hexane từ tổng cao ethanol thân mật gấu (13 cấu tử) định danh nhiều cấu tử so với phương pháp chiết soxhlet (11 cấu tử) 3.3.2 Kết ác định thành phần hóa học cao chiết dichloromethane từ tổng cao ethanol a K t ổ UV – VIS Cao ethanol với dung môi dichloromethane (7 lần, lần 200ml), dịch chiết sau lần trích li đo UV-VIS, kết thể Hình 3.3 Footer Page 16 of 145 15 Header Page 17 of 145 2.60 Dịch chiết lần Dịch chiết lần Dịch chiết lần Dịch chiết lần Dịch chiết lần Dịch chiết lần Dịch chiết lần 2.0 1.5 A 1.0 0.5 0.06 400.0 450 500 550 600 nm 650 700 750 800.0 Hình 3.3 Phổ UV - VIS dịch chiết lỏng - lỏng với dung môi dichloromethane từ tổng cao ethanol b K t nh thành ph n hóa h c Bằng phương pháp C MS định danh 25 cấu tử dịch chiết lỏng - lỏng với dung môi dichloromethane từ tổng cao ethanol thân mật gấu, chiếm 67.44% tổng số cấu tử phát Các cấu tử có hàm lượng lớn 9,12-Octadecadienoic acid (Z,Z) - (14.44%); Hexadecanoic acid, ethyl ester (11.53%); nHexadecanoic acid (7.56%); beta-Sitosterol (6.84%); 9,17- Octadecadienal, (Z)- (5.28%) Ngoài thấy xuất Campesterol (0.85%); Stigmasterol (0.52%) Như phương pháp chiết lỏng - lỏng với dung môi dichloromethane từ tổng cao ethanol thân mật gấu (25 cấu tử) định danh nhiều cấu tử so với phương pháp chiết soxhlet (17 cấu tử) 3.3.3 Kết ác định thành phần hóa học cao chiết chloroform từ tổng cao ethanol a K t ổ UV – VIS Cao ethanol với dung môi chloroform (6 lần, lần 200 ml), dịch chiết sau lần trích li đo UV-VIS, kết thể Hình 3.4 Footer Page 17 of 145 16 Header Page 18 of 145 0.022 Dịch chiết lần Dịch chiết lần Dịch chiết lần Dịch chiết lần Dịch chiết lần Dịch chiết lần 0.01 0.00 A -0.01 -0.02 -0.027 200.0 210 220 230 240 250.0 nm Hình 3.4 Phổ UV - VIS dịch chiết lỏng - lỏng với dung môi chloroform từ tổng cao ethanol b K t nh thành ph n hóa h c Bằng phương pháp C MS định danh 21 cấu tử dịch chiết lỏng - lỏng với dung môi chloroform từ tổng cao ethanol thân mật gấu, chiếm 66.54% tổng số cấu tử phát Các cấu tử có hàm lượng lớn 9,12-Octadecadienoic acid (Z,Z)(14.70%); Hexadecanoic acid, ethyl ester (11.20%); 9,12- Octadecadienoic acid, ethyl ester (10.74%); beta-Sitosterol (9.01%); nHexadecanoic acid (8.03%) Ngồi cịn thấy xuất Campesterol (1.42%); Stigmasterol (1.03%) Như vậy, phương pháp chiết lỏng - lỏng với dung môi chloroform từ tổng cao ethanol thân mật gấu (21 cấu tử) định danh nhiều cấu tử so với phương pháp chiết soxhlet (12 cấu tử) Nhận xét chung kết đo phổ UV – VIS: Các phổ đo UV - VIS dung môi hexane, dichloromethane, chloroform hầu hết có peak hấp thụ rải ước sóng từ 200 nm đến 650 nm Ở vùng có ước sóng khoảng 200-300 nm xuất nhiều peak, chứng tỏ chất thân mật gấu có chứa nhóm chức: acide carboxylic (-COOH) (200-210 nm), ester (-COOR) (205nm), cacbonyl (C=O) (270-295 nm) 3.3.4 Tổng kết thành phần hóa học dịch chiết Footer Page 18 of 145 Header Page 19 of 145 17 lỏng - lỏng từ tổng cao ethanol Bảng 3.3 Thành phần hóa học dịch chiết lỏng – lỏng từ tổng cao ethanol thân mật gấu Diện tích peak (%) STT Tên gọi 4H-Pyran-4-one, 2,3-dihydro-3,5dihydroxy-6-methyl4H-Pyran-4-one, 3,5-dihydroxy-2methyl2- Furancarboxaldehyde, 5(hydroxymethyl)Phenol, 2,6-dimethoxyBenzaldehyde, 3-hydroxy-4methoxy- Dichloro Chlorofo methane rm - 0.54 0.28 - 0.90 0.16 - 2.37 1.04 - 0.68 0.51 - 0.75 0.48 Hexane L-Glutamic acid - 0.90 - Homovanillyl alcohol - 0.51 - Phenol, 3,4,5-trimethoxy- - 0.86 0.58 - 3.17 1.38 - 0.58 0.37 - 0.31 0.27 - 3.69 3.33 - 0.73 0.57 10 11 12 Benzaldehyde, 4-hydroxy-3,5dimethoxyPhenol, 2,6-dimethoxy-4-(2propenyl)Ethanone, 1-(4-hydroxy-3,5dimethoxyphenyl)4-((1E)-3-Hydroxy-1-propenyl)-2methoxyphenol Benzoic acid, 4-hydroxy-3,5- 13 dimethoxy-, hydrazide 14 Hexadecanoic acid, methyl ester 0.08 0.24 0.28 15 n-Hexadecanoic acid 11.99 7.56 8.03 16 Hexadecanoic acid, ethyl ester 2.44 11.53 11.20 Footer Page 19 of 145 Header Page 20 of 145 18 Diện tích peak (%) STT 17 Tên gọi 9,12-Octadecadienoic acid (Z,Z), methyl ester Dichloro Chlorofo methane rm - 0.50 - Hexane 18 9,12-Octadecadienoic acid (Z,Z)- 17.02 14.44 14.70 19 9,17-Octadecadienal, (Z)- 16.24 5.28 - - 2.98 10.74 0.77 0.53 - 20 9,12-Octadecadienoic acid, ethyl ester 21 Octadecanoic acid 22 Octacosanol - 0.18 - 23 Campesterol 1.39 0.85 1.42 24 Stigmasterol 0.93 0.52 1.03 25 beta-Sitosterol 8.98 6.84 9.01 26 Butylated Hydroxytoluene 0.07 - - 27 cis-13-Octadecenoic acid 6.46 3.65 - 28 Vitamin E 0.06 - - 29 Stigmast-4-en-3-one 0.37 - - 30 Tetradecanoic acid - 0.18 - 31 Pentadecanoic acid - 0.16 - 32 Heptadecanoic acid - 0.32 - 33 2-Methoxy-4-vinylphenol - - 0.57 - - 0.59 34 9-Octadecenoic acid (Z)-, methyl ester Nhận xét: Từ Bảng 3.3 cho thấy phương pháp C MS định danh 34 cấu tử dịch chiết, dịch chiết hexane 13 cấu tử, dịch chiết dichloromethane 25 cấu tử, dịch chiết chloroform 21 cấu tử Phần trăm diện tích peak cấu tử định danh dịch chiết dichloromethane lớn (67.44%), sau đến dịch chiết hexane (66.80%) nhỏ dịch Footer Page 20 of 145 19 Header Page 21 of 145 chiết chloroform (66.54%) Điều chứng tỏ dichloromethane có khả hòa tan tốt chiết nhiều cấu tử phân cực lẫn không phân cực với hàm lượng lớn từ thân mật gấu Như vậy, phương pháp chiết lỏng - lỏng với dung môi hexane, dichloromethane chloroform từ tổng cao ethanol thân mật gấu (34 cấu tử) định danh nhiều cấu tử so với phương pháp chiết soxhlet dung môi methanol (20 cấu tử) Các cấu tử 4H-Pyran-4-one, 2,3-dihydro-3,5-dihydroxy-6 methyl-; 2-Furancarboxaldehyde, 5-(hydroxymethyl)-; Phenol, 2,6dimethoxy-; Phenol, 3,4,5-trimethoxy-; propenyl)-2-methoxyphenol; Benzoic 4-((1E)-3-Hydroxy-1acid, 4-hydroxy-3,5- dimethoxy- hydrazide; Hexadecanoic acid, methyl ester; nHexadecanoic acid; 9,12-Octadecadienoic acid (Z,Z)-; Octadecanoic acid; beta - Sitosterol; 2ethoxy-4-vinylphenol xuất dịch chiết Thành phần hóa học dịch chiết lỏng - lỏng từ thân mật gấu chứa số cấu tử có hoạt tính sinh học cao đáng quan tâm 4H-Pyran-4-one, 2,3-dihydro-3,5-dihydroxy-6-methyl-; 9,12-octadecadienoic acid (Z,Z)-; octadecanoic acid; hexadecanoic acid; beta-Sitosterol; stigmasterol; campesterol Nhận xét chung: Tổng cấu tử dịch chiết soxhlet định danh 29 cấu tử, dịch chiết lỏng – lỏng định danh đến 34 cấu tử Qua ta thấy chiết lỏng - lỏng chiết nhiều cấu tử so với chiết soxhlet Điều giải thích rằng, chiết lỏng – lỏng q trình lắc làm tăng diện tích tiếp xúc bề mặt chất rắn, dung môi dễ thẩm thấu, việc chiết hiệu Footer Page 21 of 145 20 Header Page 22 of 145 3.4 DI R ME E Ừ Ổ G E 3.4.1 đồ phân lập ph n đoạn cao dichloromethane từ tổng cao ethanol Tổng cao ethanol (39.038g) Chiết lỏng - lỏng với dichloromethane Cao Dichloromethane (4.344g) Cột sắc ký 50 x 3.5 cm Hệ hexane:ethyl acetate = 9:1→7:3 DA1.12 (0.356g) DA13.21 DA22.26 DA27.81 DB1.8 DB9.29 DB30.87 ) (0.442g) (0.091g) (0.102g) (0.162g) (0.141g) (0.208g Cột sắc ký 45 x 1.5 cm ĐO GC/MS Da1 (0.005g) Da2 (0.011g) ĐO Da3.7 Da8.17 Da18.39 (0.009g) (0.010g) (0.201g) Cột sắc ký 45 x 1.0 cm GC/MS da1.2 da3.30 da31.37 (0.010g) (0.019g) (0.005g) ĐO GC/MS Hình 3.5 Sơ đồ phân lập phân đoạn cao dichloromethane Footer Page 22 of 145 21 Header Page 23 of 145 3.4.2 ịnh danh thành phần hóa học phân đoạn DA13.21 Kết định danh thành phần hóa học phân đoạn DA13.21 thể Bảng 3.4 ả ầ ọc t o STT Thời gian lƣu (phút) Diện tích peak (%) 23.366 1.45 27.016 2.22 29.370 5.19 30.320 10.15 35.420 10.57 35.619 8.50 39.507 15.35 đoạn DA13.21 Tên gọi Tetradecanal (C14H28O) 1,2-Benzenedicarboxylic acid, bis(2methylpropyl)esther (C16H22O4) Dibutyl phthalate (C16H22O4) Hexadecanoic acid, ethyl ester (C18H36O2) 9,12-Octadecadienoic acid, methyl ester, (E,E), (C19H34O2) E-11-Hexadecenoic acid, ethyl este (C18H34O2) 1,2-Benzenedicarboxylic acid, diisooctyl ester (C24H38O4) Nhận t Từ kết Bảng 3.4 cho thấy phương pháp C MS định danh cấu tử chiếm 53.43% tổng số cấu tử phát 3.4.3 Định danh thành phần hóa học ph n đoạn Da2 Kết định danh thành phần hóa học phân đoạn Da2 thể Bảng 3.5 ả ầ Thời gian lƣu (phút) 29.877 35.202 STT Footer Page 23 of 145 Diện tích peak (%) 25.40 32.04 ọc t o đoạ Da2 Tên gọi n-Hexadecanoic acid (C16H34O2) Hexadecenoic acid, Z-11(C16H30O2) 22 Header Page 24 of 145 Nhận t Từ kết Bảng 3.5 cho thấy phương pháp C MS định danh cấu tử chiếm 57.44% tổng số cấu tử phát 3.4.4 Định danh thành phần hóa học ph n đoạn da1.2 Kết định danh thành phần hóa học phân đoạn da1.2 thể Bảng 3.6 ả ầ ọc t o đoạ da1.2 STT Thời gian lƣu (phút) 25.527 Diện tích peak (%) 2.65 27.022 3.92 29.357 5.43 39.500 31.57 Tên gọi Nonadecane (C19H40) 1,2-Benzenedicarboxylicacid,bis(2methylpropyl)ester (C16H22O4) 1,2-Benzenedicarboxylic acid, butyl 2-ethylhexyl ester (C20H30O4) Di-n-octyl phthalate (C24H38O4) Nhận xét: Từ Bảng 3.6 cho thấy phương pháp C MS định danh cấu tử chiếm 43.57% tổng số cấu tử phát Nhận xét chung: Kết phân lập phân đoạn cao dichloromethane (từ tổng cao ethanol) sắc ký cột sắc ký mỏng, cho thấy tổng số cấu tử định danh ba phân đoạn DA13.21, Da2, da1.2 (12 cấu tử) nhỏ hai lần so với số cấu tử định danh dịch chiết lỏng – lỏng dung môi dichloromethane từ tổng cao ethanol thân mật gấu (25 cấu tử) Trong đó, cấu tử Hexadecanoic acid, ethyl ester cấu tử nHexadecanoic acid xuất phân lập phân đoạn cao dichloromethane dịch chiết lỏng – lỏng với dung môi dichloromethane (Cấu tử n-Hexadecanoic acid phân đoạn Da2 Footer Page 24 of 145 Header Page 25 of 145 23 (25.40%) làm giàu lần so với dịch chiết lỏng – lỏng dung môi dichloromethane từ tổng cao ethanol (7.56%)) K T LUẬN VÀ KI N NGHỊ Kết luận Sau thực đề tài “Nghiên c nh thành ph t s d ch chi t c a thân m t g u Cao B ng”, thu số kết sau: Xác định thông số hóa lý nguyên liệu thân mật gấu: - Độ ẩm trung bình thân mật gấu khơ 8.836% - Hàm lượng tro trung bình thân mật gấu 0.928% - Hàm lượng kim loại Cu, Cd, As, Pb, Hg, Zn nằm khoảng cho phép theo định Bộ Y tế số 46 2007 QĐ-BYT ngày 19 tháng 12 năm 2007 Bộ trưởng Bộ Y tế việc ban hành “Quy định giới hạn tối đa ô nhiễm sinh học hóa học thực phẩm Từ bột thân mật gấu, dùng phương pháp chiết soxhlet định danh C MS xác định 29 cấu tử, dịch chiết hexane 11 cấu tử, dịch chiết dichloromethane 17 cấu tử, dịch chiết chloroform 12 cấu tử dịch chiết methanol 20 cấu tử Các cấu tử beta-Sitosterol; 9,12-Octadecadienoic acid (Z,Z)-; n-Hexadecanoic acid có mặt dịch chiết Cấu tử Stigmasterol; Campesterol có mặt dịch chiết hexane, dichloromethane, chloroform cấu tử Octadecanoic acid có mặt dịch chiết hexane, dichloromethane, methanol Từ tổng cao ethanol, dùng phương pháp chiết phân ố lỏng – lỏng định danh ằng C MS xác định 34 cấu tử, dịch chiết hexane 13 cấu tử, dịch chiết dichloromethane 25 cấu tử dịch chiết chloroform 21 cấu tử Các cấu tử 9,12Octadecadienoic acid (Z,Z)-; n-Hexadecanoic acid; Campesterol; Footer Page 25 of 145 Header Page 26 of 145 24 Stigmasterol; beta-Sitosterol có mặt dịch chiết Cấu tử 4HPyran-4-one, 2,3-dihydro-3,5-dihydroxy-6-methyl- có mặt hai dịch chiết dichloromethane, chloroform cấu tử Octadecanoic acid có mặt hai dịch chiết hexane, dichloromethane Đã phân lập phân đoạn cao dichloromethane (từ tổng cao ethanol) sắc ký cột sắc ký mỏng, kết cho thấy tổng số cấu tử định danh a phân đoạn DA13.21, Da2, da1.2 (12 cấu tử) nhỏ hai lần so với số cấu tử định danh dịch chiết lỏng – lỏng dung môi dichloromethane từ tổng cao ethanol thân mật gấu (25 cấu tử) Trong đó, cấu tử Hexadecanoic acid, ethyl ester cấu tử n-Hexadecanoic acid xuất phân lập phân đoạn cao dichloromethane dịch chiết lỏng – lỏng với dung môi dichloromethane (Cấu tử nHexadecanoic acid phân đoạn Da2 (25.40%) làm giàu lần so với dịch chiết lỏng – lỏng dung môi dichloromethane từ tổng cao ethanol (7.56%)) Kiến nghị Do thời gian nghiên cứu có hạn, thơng qua kết đề tài mong muốn đề tài phát triển rộng số vấn đề sau: - Thân mật gấu có chứa số chất có ứng dụng y học thực phẩm Stigmasterol; Stigmast-4-en-3-one; Betasitosterol; Campesterol Vitamin E Vì vậy, cần nghiên cứu phương pháp tách cấu tử nhằm đáp ứng nhu cầu sống Đồng thời thử hoạt tính sinh học chất tách để có nhìn tổng quát hoạt tính sinh học thân mật gấu, góp phần làm tăng giá trị sử dụng chữa bệnh thân mật gấu thuốc dân gian - Nghiên cứu hoạt tính chống oxy hóa số dịch chiết thân mật gấu Footer Page 26 of 145 ... Nguyên liệu nghiên cứu thân mật gấu, thu mua Cao Bằng vào tháng năm 2015 dạng thái lát, khô tự nhiên đựng sẵn bao polyetylen Thân mật gấu dạng thái lát, khô tự nhiên nghiền nhỏ để tiến hành nghiên. .. từ tổng cao ethanol Thân mật gấu Chiết dung môi ethanol Cao tổng ethanol Phân tán vào nước Chiết phân bố lỏng - lỏng Dịch hexane Dịch dichloromethane Cô Cao hexane Dịch chloroform Cô Cô Cao dichloromethane... tổng cao ethanol (7.56%)) K T LUẬN VÀ KI N NGHỊ Kết luận Sau thực đề tài ? ?Nghiên c nh thành ph t s d ch chi t c a thân m t g u Cao B ng”, thu số kết sau: Xác định thơng số hóa lý nguyên liệu thân