ĐẶT VẤN ĐỀ Tiêu chảy là bệnh có tỷ lệ mắc, tỷ lệ tử vong cao thường gặp ở trẻ em, theo Tổ chức Y tế Thế giới hàng năm trên thế giới có khoảng 1,5 tỷ lượt trẻ bị mắc tiêu chảy và 1,5-2,5 triệu trẻ em dưới 5 tuổi tử vong vì bệnh tiêu chảy, trong đó 80% trẻ em dưới 2 tuổi [4], [22]. Trung bình trẻ dưới 3 tuổi mắc từ 3 đến 4 đợt tiêu chảy, thậm chí có những trẻ mắc 8 đến 9 đợt tiêu chảy mỗi năm [2]. Tiêu chảy gây ảnh hưởng đến sự tăng trưởng của trẻ và là gánh nặng không chỉ về kinh tế mà còn về tinh thần cho gia đình cũng như cho xã hội, đặc biệt các quốc gia nghèo hoặc đang phát triển trong đó có Việt Nam [57]. Trong những năm qua, mặc dù có nhiều biện pháp tích cực trong công tác phòng và chống bệnh tiêu chảy, nhưng bệnh tiêu chảy vẫn xảy ra ở mức độ cao với nguyên nhân có thể là do vi rút, vi khuẩn, ký sinh trùng,… Trong số các nguyên nhân này, đối với trẻ em, tiêu chảy do vi rút thường chiếm ưu thế, trong đó norovirus (NoV) là nguyên nhân gây tiêu chảy đứng thứ hai sau rotavirus (RV) [117], [216]. Trên thế giới NoV được đánh giá là tác nhân quan trọng gây tiêu chảy ở trẻ em, tại một số nước châu Á như Nhật Bản trẻ tiêu chảy phát hiện NoV trong phân chiếm 33,8% [135], Hàn Quốc là 35,8% [55], còn ở Ý, một nước thuộc khu vực châu Âu chiếm tới 48,4% [56]. NoV thuộc các nhóm gen gây bệnh trên người thường gặp là GI và GII, ở Brazil GI chiếm 6,1% và GII chiếm 78,7% [39]. Tại Việt Nam nhiễm NoV ở trẻ em được phát hiện bằng kỹ thuật Real-time RT-PCR đã xác định tỷ lệ nhiễm NoV ở trẻ tiêu chảy nhập bệnh viện Nhi Trung ương chiếm tới 36,3% [142], tương tự như tỷ lệ nhiễm NoV ở các nước trên thế giới. Như vậy, nhờ có kỹ thuật xét nghiệm nhạy và đặc hiệu, việc chẩn đoán tình trạng nhiễm NoV đã được đánh giá chính xác tại các nước phát triển. Nghiên cứu cho thấy NoV sử dụng kháng nguyên nhóm máu có trên niêm mạc và trong dịch tiết của cơ thể để xâm nhập vào tế bào ở biểu mô ruột [50]. Do vậy, có sự liên quan giữa tình trạng tiết kháng nguyên nhóm máu và khả năng cảm nhiễm đối với vi rút này. Nghiên cứu đánh giá về mặt dịch tễ học lâm sàng, một số yếu tố ảnh hưởng đến bệnh tiêu chảy cũng như phân tích sâu sự liên quan giữa kháng nguyên nhóm máu với bệnh tiêu chảy do NoV ở trẻ em Việt Nam còn hạn chế. Cho đến nay hầu hết các nghiên cứu tại Việt Nam mới dừng lại ở mức độ xác định tỷ lệ nhiễm NoV ở một số bệnh viện như bệnh viện Nhi Trung ương, bệnh viện Đa khoa tỉnh Khánh Hòa, bệnh viện Nhi Đồng I thành phố Hồ Chí Minh. Riêng tại bệnh viện Đa khoa tỉnh Hà Nam, hàng năm số trường hợp tiêu chảy trong địa bàn tỉnh khoảng 1800 trường hợp, cho thấy đây là một địa điểm phù hợp để thực hiện nghiên cứu về tiêu chảy do NoV nhằm làm rõ (1) Thực trạng nhiễm NoV ở trẻ tiêu chảy và trẻ không tiêu chảy có những điểm đặc trưng gì? (2) Trẻ nhiễm NoV có mối liên quan như thế nào với kháng nguyên nhóm máu? Để trả lời các câu hỏi này, nghiên cứu được triển khai với tên đề tài: “Thực trạng nhiễm norovirus và mối liên quan với kháng nguyên nhóm máu ở bệnh nhi dưới 5 tuổi điều trị tại bệnh viện Đa khoa Hà Nam năm 2012-2013” với các mục tiêu: 1. Mô tả thực trạng và một số yếu tố liên quan đến nhiễm norovirus ở bệnh nhi dưới 5 tuổi có/không có triệu chứng tiêu chảy cấp điều trị tại bệnh viện đa khoa Hà Nam 12/2012-11/2013. 2. Xác định mối liên quan giữa kháng nguyên hệ nhóm máu ABO và Lewis với tình trạng nhiễm norovirus.
VIỆN VỆ SINH DỊCH TỄ TRUNG ƯƠNG NGUYỄN MINH HIỆP THỰC TRẠNG NHIỄM NOROVIRUS VÀ MỐI LIÊN QUAN VỚI KHÁNG NGUYÊN NHÓM MÁU Ở BỆNH NHI DƯỚI TUỔI ĐIỀU TRỊ TẠI BỆNH VIỆN ĐA KHOA HÀ NAM NĂM 2012-2013 LUẬN ÁN TIẾN SĨ Y HỌC CHUYÊN NGÀNH: DỊCH TỄ HỌC MÃ SỐ: 62 72 01 17 HÀ NỘI, 2017 ĐẶT VẤN ĐỀ Tiêu chảy bệnh có tỷ lệ mắc, tỷ lệ tử vong cao thường gặp trẻ em, theo Tổ chức Y tế Thế giới hàng năm giới có khoảng 1,5 tỷ lượt trẻ bị mắc tiêu chảy 1,5-2,5 triệu trẻ em tuổi tử vong bệnh tiêu chảy, 80% trẻ em tuổi [4], [22] Trung bình trẻ tuổi mắc từ đến đợt tiêu chảy, chí có trẻ mắc đến đợt tiêu chảy năm [2] Tiêu chảy gây ảnh hưởng đến tăng trưởng trẻ gánh nặng khơng kinh tế mà cịn tinh thần cho gia đình cho xã hội, đặc biệt quốc gia nghèo phát triển có Việt Nam [57] Trong năm qua, có nhiều biện pháp tích cực cơng tác phòng chống bệnh tiêu chảy, bệnh tiêu chảy xảy mức độ cao với nguyên nhân vi rút, vi khuẩn, ký sinh trùng,… Trong số nguyên nhân này, trẻ em, tiêu chảy vi rút thường chiếm ưu thế, norovirus (NoV) nguyên nhân gây tiêu chảy đứng thứ hai sau rotavirus (RV) [117], [216] Trên giới NoV đánh giá tác nhân quan trọng gây tiêu chảy trẻ em, số nước châu Á Nhật Bản trẻ tiêu chảy phát NoV phân chiếm 33,8% [135], Hàn Quốc 35,8% [55], Ý, nước thuộc khu vực châu Âu chiếm tới 48,4% [56] NoV thuộc nhóm gen gây bệnh người thường gặp GI GII, Brazil GI chiếm 6,1% GII chiếm 78,7% [39] Tại Việt Nam nhiễm NoV trẻ em phát kỹ thuật Real-time RT-PCR xác định tỷ lệ nhiễm NoV trẻ tiêu chảy nhập bệnh viện Nhi Trung ương chiếm tới 36,3% [142], tương tự tỷ lệ nhiễm NoV nước giới Như vậy, nhờ có kỹ thuật xét nghiệm nhạy đặc hiệu, việc chẩn đốn tình trạng nhiễm NoV đánh giá xác nước phát triển Nghiên cứu cho thấy NoV sử dụng kháng nguyên nhóm máu có niêm mạc dịch tiết thể để xâm nhập vào tế bào biểu mơ ruột [50] Do vậy, có liên quan tình trạng tiết kháng ngun nhóm máu khả cảm nhiễm vi rút Nghiên cứu đánh giá mặt dịch tễ học lâm sàng, số yếu tố ảnh hưởng đến bệnh tiêu chảy phân tích sâu liên quan kháng nguyên nhóm máu với bệnh tiêu chảy NoV trẻ em Việt Nam hạn chế Cho đến hầu hết nghiên cứu Việt Nam dừng lại mức độ xác định tỷ lệ nhiễm NoV số bệnh viện bệnh viện Nhi Trung ương, bệnh viện Đa khoa tỉnh Khánh Hòa, bệnh viện Nhi Đồng I thành phố Hồ Chí Minh Riêng bệnh viện Đa khoa tỉnh Hà Nam, hàng năm số trường hợp tiêu chảy địa bàn tỉnh khoảng 1800 trường hợp, cho thấy địa điểm phù hợp để thực nghiên cứu tiêu chảy NoV nhằm làm rõ (1) Thực trạng nhiễm NoV trẻ tiêu chảy trẻ khơng tiêu chảy có điểm đặc trưng gì? (2) Trẻ nhiễm NoV có mối liên quan với kháng nguyên nhóm máu? Để trả lời câu hỏi này, nghiên cứu triển khai với tên đề tài: “Thực trạng nhiễm norovirus mối liên quan với kháng nguyên nhóm máu bệnh nhi tuổi điều trị bệnh viện Đa khoa Hà Nam năm 2012-2013” với mục tiêu: Mô tả thực trạng số yếu tố liên quan đến nhiễm norovirus bệnh nhi tuổi có/khơng có triệu chứng tiêu chảy cấp điều trị bệnh viện đa khoa Hà Nam 12/2012-11/2013 Xác định mối liên quan kháng nguyên hệ nhóm máu ABO Lewis với tình trạng nhiễm norovirus CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Bệnh tiêu chảy 1.1.1 Một số khái niệm Định nghĩa tiêu chảy Theo Tổ chức Y tế Thế giới: Tiêu chảy tình trạng trẻ ngồi phân lỏng từ lần trở lên 24 giờ, kèm theo triệu chứng nôn, sốt, đau bụng, mệt mỏi…[4], [18] Đợt tiêu chảy Đợt tiêu chảy thời gian kể từ ngày mắc tiêu chảy sau hai ngày phân trẻ trở lại bình thường Nếu sau hai ngày mắc tiêu chảy trở lại trẻ bắt đầu mắc đợt tiêu chảy [5], [19] Tiêu chảy cấp Tiêu chảy cấp đợt tiêu chảy kéo dài không 14 ngày (thường ngày) [2] 1.1.2 Các tác nhân vi rút liên quan đến bệnh tiêu chảy Tác nhân gây tiêu chảy đa dạng, nghiên cứu cho thấy có 26 loại tác nhân khác gây tiêu chảy, rotavirus (RV), norovirus (NoV), adenovirus (Adv), sapovirus (SaV), đến vi khuẩn chủng E.coli gây tiêu chảy, vi khuẩn thuộc họ Vibrio có phảy khuẩn tả (V.cholera), Salmonella, Shigella, ký sinh trùng [21] Trong số tác nhân gây bệnh, nguyên vi rút chiếm tỷ lệ 60-70%, chủ yếu RV NoV, tác nhân vi rút khác chiếm tỷ lệ adenovirus, sapovirus, astrovirus… [106], [116], [144] 1.1.2.1 Norovirus NoV thuộc họ Caliciviridae Họ vi rút có chi, NoV, sapovirus (SaV), Vesivirus Lagovirus Các vi rút gây bệnh cho người chủ yếu thuộc chi NoV với bệnh cảnh viêm dày ruột cấp (gastroenteritis) NoV gây bệnh người khó ni cấy dịng tế bào Bảng 1.1.Tỷ lệ nhiễm NoV gây tiêu chảy Việt Nam [141],[185],[194] Thời gian Địa điểm Tuổi (Tháng) Tỷ lệ (%) 2007-2008 Thành phố Hà Nội 0-59 36,3 2005-2006 Khánh Hòa < 44 6,0 2002-2003 Thành phố Hồ Chí Minh 0-59 7,1 1.1.2.2 Rotavirus, adenovirus, astrovirus sapovirus Trong số RV gây bệnh cho người, vi rút thuộc nhóm A hay gặp nhất, gây tiêu chảy nặng trẻ em Rotavirus nhóm B thường gây vụ dịch tiêu chảy nặng người lớn, RV nhóm C gây trường hợp tiêu chảy lẻ tẻ trẻ em Bảng 1.2 Tỷ lệ nhiễm RV gây tiêu chảy Việt Nam [140], [141], [185] Thời gian Địa điểm Tuổi (Tháng) Tỷ lệ (%) 2001-2002 Thành phố Hà Nội 6-60 46,7 2005-2006 Khánh Hòa < 44 47,5 2002-2003 Thành phố Hồ Chí Minh 0-60 67,4 Các nghiên cứu cho rằng, adenovirus (Adv) gây bệnh bội nhiễm với vi rút khác, đặc biệt kết hợp với RV Sự kết hợp hai loại vi rút giải thích sau: RV gây nhiễm bề mặt vi nhung mao tế bào ruột non, kết hợp với adenovirus gây nhiễm tế bào đáy (basal) (tế bào có khả nhân lên) cho nguyên nhân gây tiêu chảy nặng lớp tế bào có chức thay tái tạo [116] Bảng 1.3 Tỷ lệ nhiễm adenovirus gây tiêu chảy Việt Nam [140], [16] Thời gian Địa điểm Tuổi (Tháng) Tỷ lệ (%) 2011-2012 Thái Bình 0-59 3,2 2002-2003 Thành phố Hồ Chí Minh 0-59 5,5 Astrovirus gây bệnh tiêu chảy đào thải số lượng lớn phân Astrovirus truyền qua đường tiêu hóa thơng qua thực phẩm nước bị ô nhiễm từ người sang người bề mặt bị ô nhiễm Astrovirus gây bệnh trẻ sơ sinh, trẻ em, người cao tuổi người bị suy giảm miễn dịch Bảng 1.4 Tỷ lệ nhiễm astrovirus gây tiêu chảy trẻ em Việt Nam [16], [140] Thời gian Địa điểm Tuổi (Tháng) Tỷ lệ (%) 2011-2012 Thái Bình 0-59 2,4 0-59 0,6 2002-2003 Thành phố Hồ Chí Minh Sapovirus gây bệnh cho người với bệnh cảnh viêm dày ruột cấp Đây tác nhân gây dịch tiêu chảy người lớn trẻ em [68], [70] Bảng 1.5 Tỷ lệ nhiễm sapovirus gây tiêu chảy trẻ em Việt Nam [140], [194] Thời gian Địa điểm Tuổi (Tháng) Tỷ lệ (%) 2007-2008 Thành phố Hà Nội 0-59 1,4 2002-2003 Thành phố Hồ Chí Minh 0-59 0,8 1.2 Tình hình nghiên cứu nhiễm NoV trẻ em tuổi giới Việt Nam 1.2.1 Tình hình nghiên cứu nhiễm NoV trẻ em mắc tiêu chảy NoV tác nhân gây nên vụ dịch tiêu chảy tất nhóm tuổi, gặp chủ yếu trẻ em Sau thành công điều tra dịch tễ học RV, nước bắt đầu tiến hành phát vi rút gây tiêu chảy khác Ở Brazil, 33% trẻ mắc tiêu chảy cấp nhiễm NoV, GI chiếm 6,1% GII chiếm 78,7%, lại bội nhiễm genogroup Một nghiên cứu khác Tokyo Osaka Nhật Bản cho thấy NoV tác nhân quan trọng thứ sau RV, phát 29% trẻ mắc tiêu chảy, nhóm gen GII chiếm 98,6% GII.4 chiếm tới 77,4%[135] Tỷ lệ mắc cao đến 48,4% Ý lần đánh giá tầm quan trọng vi rút tiêu chảy trẻ [56] Ở Ấn Độ Thái Lan, tỷ lệ nhiễm vi rút dao động từ 12 - 44%, tùy theo phương pháp sử dụng để phát tác nhân gây tiêu chảy NoV [101], [128] Các tác giả khác giới cho thấy tiêu chảy NoV dao động từ 12% đến 36% cho thấy tác nhân phổ biến gây tiêu chảy trẻ em Bảng 1.6 Tỷ lệ nhiễm NoV trẻ tiêu chảy số nước giới Tác giả Abugalia Ajjampur Al –Thani Huhulescu Ltuririza Li Oryan Podkolzin Xi Wang Quốc gia Libya Ấn độ Qutar Austria Anh Hồng Kông Chile Nga Trung Quốc Năm 2008 2008 2009 2009 2009 2008 2008 2007 2015 NoV(%) 17,5 15,8 28,5 36,0 24,5 23,0 18,0 12,5 23,6 TLTK [28] [29] [32] [84] [87] [111] [146] [156] [212] Nhiều kiểu gen NoV gây bệnh cho người phát hiện, 25 kiểu gen nhiều phân nhóm khác đa dạng chủng Trong năm gần đây, chủng NoV GII ghi nhận bắt đầu chiếm ưu nguyên nhân gây tiêu chảy Các nghiên cứu từ 1999-2004 vụ dịch quân đội Israel cho thấy chủng phân lập GII.6, nhanh chóng chuyển thành chủng vi rút GII.4 từ 2005 đến [45] Điều tra Mỹ CDC tiến hành cuối năm 2006 cho thấy tỷ lệ trường hợp nhiễm với GII.4 tăng lên rõ rệt tất bang Mỹ [117] Ngoài tượng đột biến điểm, tượng tái tổ hợp chế biến đổi phổ biến vi rút thuộc họ Caliciviridae Tái tổ hợp xảy thường xuyên NoV Chủng NoV Mc37 phân lập Thái Lan có đến 97,2% đồng trình tự nucleotide với chủng Saitama U1 ORF1, lại giống 71,3% 67,9% trình tự thuộc ORF2 ORF-3 Tương tự vậy, chủng NoV 026 phân lập Việt Nam chủng có trình tự tái tổ hợp [101], [128] Từ năm 1990, chủng GII.4 xuất trở thành chủng phổ biến Điều quan trọng sau 2-3 năm lại có chủng GII.4 xuất sau nhanh chóng trở thành tác nhân vụ dịch Khả lây nhiễm lan tràn chủng GII.4 chúng có khả tóm bắt rộng rãi loại kháng nguyên A, B, H hệ kháng nguyên nhóm máu, genotype khác khó nhận biết kháng nguyên hệ với phổ hẹp hơn, khơng có ưu chủng GII.4 Một số nghiên cứu NoV GII.4 tiến hóa theo giai đoạn, giống vi rút cúm tiến hóa bị ảnh hưởng miễn dịch cộng đồng Bề mặt tiếp xúc HBGA NoV bảo thủ, cho thấy HBGA đóng vai trị tiến hóa NoV Theo dõi tiến hóa chủng GII.4 có ý nghĩa quan trọng việc phát triển vắc xin phòng NoV [80] Phan T.G (2006) nghiên cứu vùng Nhật Bản từ tháng 7/2003 đến 6/2006 với 402 trẻ bị tiêu chảy cho thấy GII chiếm 98,3% với chủng phát GI.4, GII.2, GII.3, GII.4 GII.6, GII.3 chiếm 43,9%, GII.4 gọi Lordsdale chiếm 35,1% chủng có biến thể GIIb’’ GII/4’’ phát lưu hành Nhật Bản Lần xuất chủng GIIb GII/3 dạng tái tổ hợp, chủng chiếm tới 96% chủng phân lập [155] Nghiên cứu Italy Ramirez cs thấy có xuất chủng biến thể GII.4 2002, GII.4 2004, GII.4 2006a GII.4 2006b [159] Như năm 2006 tìm thấy chủng GII.4 gọi Lordsdale, Năm 2013 lưu hành chủng GII.4SYDNEY tác nhân gây tiêu chảy, nhiên đến năm 2015 tác giả Haili Chen cs nghiên cứu Thượng Hải, Trung Quốc tìm thấy chủng GII.17 thay chủng GII.4 tồn thập kỷ [79] Ở nước ta, nhóm Nguyễn Vân Trang cộng nghiên cứu 501 mẫu phân trẻ em bị viêm dày ruột cấp tính bệnh viện Nhi Trung ương từ tháng 11/2006 đến 10/2007 kỹ thuật Real time RT-PCR xác định tỷ lệ nhiễm NoV 36,3% Kết giải trình tự gen chủng NoV phân lập cho thấy NoV GII.4 genotype phổ biến thuộc cluster Minerva GII.42006b, khác với cluster chủng GII.4 phân lập năm 1998-1999 bệnh viện [194] Tác giả Tamura T cộng đưa tỷ lệ nhiễm NoV 6,0% trẻ em bệnh viện Đa khoa tỉnh Khánh Hòa từ tháng 12/2005 - 6/2006, với GII genogroup Trong nghiên cứu này, tác giả sử dụng phương pháp khuếch đại chuỗi axit nucleic NASBA (Kainos Laboratories Inc, Nhật Bản) để định genotype NoV [185] Khi nghiên cứu trẻ tiêu chảy cấp bệnh viện Nhi Đồng thành phố Hồ Chí Minh, Nguyễn Anh Tuấn cộng kỹ thuật RT-PCR xác định tỷ lệ nhiễm NoV có 7,1% [140] Theo nghiên cứu khác Việt Nam Nguyễn Vân Trang tiến hành bệnh viện Nhi Thái Bình từ 9/2011 đến 9/2012 260 trẻ tuổi bị viêm dày ruột, có 77 mẫu dương tính với NoV (27,5%) kiểu gen GII.4, GII.3 GII.13 22, 28 [20] Như có khác tỷ lệ nhiễm NoV nghiên cứu vùng khác toàn quốc Tuy nhiên, khác biệt địa dư, thời điểm triển khai nghiên cứu, kỹ thuật áp dụng, phương pháp chọn mẫu dẫn đến chênh lệch 1.2.2 Tình hình nghiên cứu nhiễm NoV trẻ em không mắc tiêu chảy NoV gây tiêu chảy cấp cho trẻ, mà cịn mối nguy hiểm cho cộng đồng, nghiên cứu Ấn Độ cho thấy trẻ lành mang NoV chiếm tới 6,6%, nguồn lây lan mạnh cộng đồng đặc biệt nhà trẻ, trường học Người lành nhiễm NoV không biểu bệnh mối đe dọa cho cộng đồng nguy bùng phát dịch lớn Trên giới có số nghiên cứu tình trạng nhiễm NoV khơng biểu lâm sàng tiêu chảy [41], [128] Theo nghiên cứu tác giả Miguel L O’ Ryan cs 198 trẻ Chile (2009), tỷ lệ nhiễm NoV RV không biểu triệu chứng lâm sàng 8% 1,3% [125] Một nghiên cứu khác thực Mexico Herbert cs năm 2006 63 trẻ em cho thấy tỷ lệ nhiễm NoV không biểu tiêu chảy 19,8% [82] Shuwan Zhang cs Trung Quốc nghiên cứu 201 trẻ tiêu chảy 53 trẻ không tiêu chảy bệnh viện thấy tỷ lệ nhiễm NoV biểu tiêu chảy lâm sàng chiếm tỷ lệ 35,9% không biểu triệu chứng 9% [177] Tại Anh (2010) tỷ lệ nhiễm NoV khơng có triệu chứng lâm sàng 10% [74] Một nghiên cứu đánh giá tình trạng nhiễm NoV 229 bệnh nhân tiêu chảy 90 bệnh nhân không tiêu chảy Vitoria Brazil (2010) cho thấy 17% bệnh nhân có triệu chứng 13% bệnh nhân 148 195 Trivedi TK, Desai R., Hall AJ, Patel M., and Lopman BA (2013), "Clinical characteristics of norovirus-associated deaths: a systematic literature review" Am J Infect Control, 41(7), pp 654-7 196 Tsai CN, Lin CY, Lin CW, Shih KC, Chiu CH and Chen SY (2014), "Clinical relevance and genotypes of circulating noroviruses in northern Taiwan, 2006–2011" J Med Virol., 86(2), pp 335-46 197 Tsang O T., A T Wong, C B Chow, and S H Liu (2008), "Clinical characteristics of nosocomial norovirus outbreaks in Hong Kong" J Hosp Infect, 69(2), pp 135-40 198 Van Trang N., H T Vu, P Huang, X Jiang and D D Anh (2014) "Association between norovirus and rotavirus infection and histo-blood group antigen types in Vietnamese children" J Clin Microbiol, 52(5), pp 1366-74 199 Vega E, et al (2014), "Genotypic and epidemiologic trends of norovirus outbreaks in the United States, 2009 to 2013" J Clin Microbiol, 52, pp 147155 200 Vernacchio L., R M Vezina, et al (2006), "Characteristics of persistent diarrhea in a community-based cohort of young US children" J Pediatr Gastroenterol Nutr, 43(1), pp 52-8 201 Vernacchio L., R M Vezina, A A Mitchell, et al (2006), "Diarrhea in American infants and young children in the community setting: incidence, clinical presentation and microbiology" Pediatr Infect Dis J, 25(1), pp 2-7 202 Verónica Costantini, et al (2010), "Diagnostic accuracy and analytical sensitivity of IDEIA Norovirus assay for routine screening of human norovirus" J Clin Microbiol, 48, pp 2770–2778 203 Vesna Blazevic, et al (2016), "Rotavirus capsid VP6 protein acts as an adjuvant in vivo for norovirus virus-like particles in a combination vaccine" Human Vaccines & Immunotherapeutics(3), pp 740-748 149 204 Vildevall M., A Grahn, S L Oliver, J C et al (2013) "Human antibody responses to bovine (Newbury-2) norovirus (GIII.2) and association to histoblood group antigens" J Med Virol, 82(7), pp 1241-6 205 Vinjé Jan (2015), "Advances in Laboratory Methods for Detection and Typing of Norovirus" J Clin Microbiology, 53, pp 373-381 206 Vipin Kumar Menon, et al (2013), "Short Report: Norovirus Genogroup II Gastroenteritis in Hospitalized Children in South India" Am J Trop Med Hyg., 89(5), pp 1019-1022 207 Vipin Kumar Menon et al (2016), "Norovirus Gastroenteritis in a Birth Cohort in Southern India" Plos One, 11(6) 208 Wang L., Cao D., Wei C., Meng XJ, Jiang X and Tan M (2014), "A dual vaccine candidate against norovirus and hepatitis E virus" Vaccine, 32(4), pp 445-52 209 Wang QH, Constantini V, and S LJ (2007), "Porcine enteric caliciviruses: genetic and antigenic relatedness to human caliciviruses, diagnosis and epidemiology" Vaccin, 25(30), pp 5453-66 210 Xi Jiang, et al (1990), "Norwalk virus genome cloning and characterization" Science, 250, pp 1580-1583 211 Xiaoli Wang, et al (2015), "A bivalent virus-like particle based vaccine induces a balanced antibody response against both enterovirus 71 and norovirus in mice" Vaccine, 33(43), pp 5779–5785 212 Xin Wang, et al (2015), "Etiology of Childhood Infectious Diarrhea in a Developed Region of China: Compared to Childhood Diarrhea in a Developing Region and Adult Diarrhea in a Developed Region" Plos One, 10(11) 150 213 Xu J., Y Yang, J Sun and Y Ding (2009), "Molecular epidemiology of norovirus infection among children with acute gastroenteritis in Shanghai, China, 2001-2005" J Med Virol, 81(10), pp 1826-30 214 Yazawa S., T Yokobori, G Ueta, et al (2013) "Blood group substances as potential therapeutic agents for the prevention and treatment of infection with noroviruses proving novel binding patterns in human tissues" PLoS One, 9(2), pp 890- 97 215 Zeng M., X Xu, C Zhu, J Chen, Q Zhu, et al (2013) "Clinical and molecular epidemiology of norovirus infection in childhood diarrhea in China" J Med Virol, 84(1), pp 145-51 216 Zhang LJ, Fang ZY, Zeng G, Steele D, Jiang BM, Kilgore P (2007), "Relationship between severity of rotavirus diarrhea and serotype G and genotype" Zhonghua Shi Yan He Lin Chuang Bing Du Xue Za Zhi, 21, pp 144-146 217 Zhang XF, Tan M., Chhabra M., and Jiang X (2013), "Inhibition of histo-blood group antigen binding as a novel strategy to block norovirus infections" PLoS One, 8(7), pp 1-9 151 DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT Từ Viết tắt Ct DNA HBGA G IEM EM EIA NoV OR ORF PCR POC RIA RNA RT-PCR VLP RV WHO Từ Tiếng Anh Threshold Cycle Acid Deoxyribonucleic Histo Blood Group Antigen Genogroup Immu Electron Microscopy Electron microscopy Enzym Immune Assay Norovirus Odd Ratio Open Reading Frame Polymerase Chain Reaction Proof of concept Radio Immuno Assay Acid Ribonucleic ReverseTranscriptase Polymerase Chain Reaction Virus like particle Rotavirus World Health Organization Từ nghĩa tiếng Việt Chu kỳ ngưỡng Axít Deoxyribonucleic Kháng nguyên nhóm máu Nhóm gen hiển vi điện tử miễn dịch Hiển vi điện tử trực tiếp thử nghiệm miễn dịch enzym Virút Noro Tỷ suất chênh Khung đọc mở Phản ứng khuếch đại gen Thử nghiệm thử nghiệm miễn dịch phóng xạ Axít Ribonucleic Phản ứng chuỗi gen mã ngược Hạt giả virút Virút Rota Tổ chức Y tế Thế giới 152 MỤC LỤC Đặt vấn đề CHƯƠNG 1: Tổng quan tài liệu 1.1 Bệnh tiêu chảy 1.1.1 Một số khái niệm 1.1.2 Các tác nhân virus gây bệnh tiêu chảy 1.2 Tình hình nghiên cứu nhiễm NoV trẻ em tuổi giới Việt Nam 1.21 Tình hình nghiên cứu nhiễm NoV trẻ em mắc tiêu chảy 1.2.2 Tình hình nghiên cứu nhiễm NoV trẻ em không mắc tiêu chảy 1.3 Dịch tễ học bệnh tiêu chảy NoV 1.4 Đặc điểm lâm sàng tiêu chảy vi rút (nói chung) NoV (nói riêng) 1.5 Điều trị phịng bệnh tiêu chảy 1.6 Cấu trúc di truyền NoV 1.7 Các phương pháp chẩn đoán NoV 1.7.1 Chẩn đoán NoV 1.7.2 Định typ NoV 1.8 Kháng nguyên nhóm máu tình trạng nhiễm NoV 1.8.1 Kháng ngun nhóm máu ABO 1.8.2 Kháng nguyên nhóm máu Lewis 1.8.3 Mối liên quan Kháng nguyên nhóm máu nhiễm NoV CHƯƠNG 2: Đối tượng phương pháp nghiên cứu 2.1 Đối tượng nghiên cứu 2.2 Địa điểm thời gian nghiên cứu 2.3 Phương pháp nghiên cứu 2.3.1.Thiết kế nghiên cứu 2.3.2 Quy trình nghiên cứu 2.3.3 Cỡ mấu nghiên cứu cách chọn mẫu 2.3.4 Biến số, số 2.3.5 Kỹ thuật công cụ thu thập thông tin 2.4 Phương pháp xác định NoV 2.5 Phương pháp Elisa xác định kháng nguyên nhóm máu 2.6 Quản lý, xử lý, phân tích số liệu khống chế sai số 2.7 Cán tham gia 2.8 Đạo đức nghiên cứu 2.9 Hạn chế đề tài CHƯƠNG 3: Kết 3.1 Thực trạng số yếu tố liên quan đến nhiễm NoV trẻ tuổi bệnh viện đa khoa tỉnh Hà Nam 3.1.1 Thực trạng nhiễm NoV trẻ có/khơng có triệu chứng tiêu chảy 3 3 6 10 15 20 22 27 27 33 35 35 36 39 45 45 46 47 47 47 47 51 53 56 60 61 62 62 63 64 64 64 153 3.1.2 Thực trạng nhiễm NoV bệnh nhân tiêu chảy 3.1.3 Một số yếu tố liên quan đến nhiễm NoV trẻ tuổi có/khơng có triệu chứng tiêu chảy cấp 3.2 Mối liên quan kháng nguyên hệ nhóm máu ABO Lewis với tình trạng nhiễm NoV CHƯƠNG 4: Bàn luận 4.1 Thực trạng số yếu tố liên quan đến nhiễm NoV trẻ tuổi có/khơng có triệu chứng tiêu chảy cấp 4.1.1 Thực trạng nhiễm NoV trẻ có/khơng có triệu chứng tiêu chảy cấp 4.1.2 Thực trạng nhiễm NoV trẻ tiêu chảy tuổi 4.1.3 Một số yếu tố liên quan tới tình trạng nhiễm NoV bệnh nhi tuổi 4.2 Mối liên quan kháng nguyên hệ nhóm máu ABO Lewis với tình trạng nhiễm NoV Kêt luận Kiến nghị Danh mục cơng trình cơng bố tác giả có liên quan đến luận án Tài liệu tham khảo Phụ lục 66 77 80 90 90 90 91 106 109 122 124 125 154 DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1 1.2 1.3 1.4 1.5 1.6 1.7 1.8 1.9 1.10 1.11 1.12 1.13 1.14 2.1 2.2 2.3 3.1 3.2 3.3 3.4 3.5 3.6 3.7 3.8 3.9 3.10 3.11 3.12 3.13 3.14 3.15 3.16 3.17 3.18 3.19 Tên bảng Tỷ lệ nhiễm NoV gây tiêu chảy Việt Nam Tỷ lệ nhiễm RV gây tiêu chảy Việt Nam Tỷ lệ nhiễm Adenovirus gây tiêu chảy Việt Nam Tỷ lệ nhiễm Astrovirus gây tiêu chảy Việt Nam Tỷ lệ nhiễm Sapovirus gây tiêu chảy Việt Nam Tỷ lệ nhiễm NoV trẻ tiêu chảy số nước giới Tình hình phát triển số vắc xin Phân loại lâm sàng tiêu chảy nước theo WHO Thang điểm Vesikari Clark đánh giá mức độ biểu bệnh Các xét nghiệm phân tích phát NoV Phân bố nhóm máu hệ ABO Tần xuất xuất kháng nguyên Lea Leb Kiểu hình kháng ngun nhóm máu hệ Lewis Các kiểu tóm bắt HBGA genotype NoV Cơng thức tính yếu tố liên quan nhiễm NoV Thành phần kỹ thuật Realtime RT-PCR đơn cặp primer probe phát NoV genotype GI Thành phần kỹ thuật Realtime RT-PCR đơn cặp primer probe phát NoV genotype GII Phân bố nhiễm NoV tình trạng bệnh Phân bố bệnh nhân theo tuổi tình trạng bệnh Phân bố bệnh nhân theo giới tình trạng bệnh Phân bố bệnh nhân theo địa dư tình trạng bệnh Phân bố bệnh nhân theo tuổi tình trạng nhiễm NoV tiêu chảy Phân bố bệnh nhân theo giới tình trạng nhiễm NoV tiêu chảy Phân bố bệnh nhân theo triệu chứng lâm sàng tình trạng nhiễm NoV tiêu chảy Tần xuất tiêu chảy /ngày theo tình trạng nhiễm NoV Phân bố bệnh nhân mắc tiêu chảy theo tình trạng nơn tình trạng nhiễm NoV Tần xuất nơn /ngày theo tình trạng nhiễm NoV Phân bố bệnh nhân theo tình trạng sốt nhiễm NoV tiêu chảy Phân bố bệnh nhân theo mức độ sốt tình trạng nhiễm NoV Mức độ biểu bệnh theo thang điểm Vesikari Mức độ biểu bệnh theo thang điểm Clark Phân bố độ nước lâm sàng theo tình trạng nhiễm NoV Thuốc điều trị tiêu chảy tình trạng nhiễm NoV Thuốc kháng sinh tình trạng nhiễm NoV tiêu chảy Liên quan tuổi với tỷ lệ nhiễm NoV Liên quan tháng mùa với tỷ lệ nhiễm NoV Trang 4 5 15 18 19 32 36 38 39 41 49 57 58 64 64 65 65 66 67 69 70 71 72 73 73 74 75 75 76 77 78 78 155 3.20 3.21 3.22 3.23 3.24 3.25 3.26 3.27 3.28 3.29 3.30 3.31 3.32 3.33 3.34 3.35 Liên quan tiền sử sinh với tỷ lệ nhiễm NoV Liên quan tình trạng dinh dưỡng với tỷ lệ nhiễm NoV Liên quan sử dụng Vắc xin với tỷ lệ nhiễm NoV Phân bố kiểu gen virus Noro tình trạng bệnh Phân bố kháng nguyên Lewis ab trẻ nhiễm NoV Phân bố kháng nguyên Lewis xy trẻ nhiễm NoV Tổ hợp kiểu hình Lewis ab Lewis xy trẻ nhiễm NoV Phân bố kháng nguyên hệ nhóm máu ABO trẻ nhiễm NoV Mối liên quan kiểu hình Lewis ab Lewis xy với tình trạng nhiễm NoV Mối liên quan cặp kiểu hình Lewis với tình trạng nhiễm NoV Mối liên quan kháng nguyên tiết với kiểu gen NoV Mối liên quan kiểu hình Lewis ab Lewis xy với tình trạng nhiễm NoV GI Mối liên quan kiểu hình Lewis ab Lewis xy với tình trạng nhiễm NoV GII Mối liên quan kiểu hình ABO với tình trạng nhiễm NoV Mối liên quan kiểu hình ABO với tình trạng nhiễm NoV GI Mối liên quan kiểu hình ABO với tình trạng nhiễm NoV GII 79 79 80 81 82 82 83 83 84 85 86 87 88 88 89 89 156 DANH MỤC BIỂU ĐỒ Biểu đồ 3.1 3.2 3.3 3.4 3.5 Tên biểu đồ Phân bố tuổi cộng dồn tình trạng nhiễm NoV tiêu chảy Phân bố bệnh nhân theo địa dư tình trạng nhiễm NoV Phân bố bệnh nhân theo tháng tình trạng nhiễm NoV Số ngày tiêu chảy theo tình trạng nhiễm NoV Số ngày nơn theo tình trạng nhiễm NoV tiêu chảy Trang 67 68 68 70 72 157 DANH MỤC HÌNH Hình 1.1 1.2 1.3 1.4 1.5 1.6 1.7 1.8 2.1 Tên hình NoV kính hiển vi điện tử Mơ hình cấu trúc vỏ capsid NoV Hỉnh ảnh NoV kỹ thuật cryo-EM Cây phả hệ xác định genotype NoV Các chủng NoV Vai trò gen FUT-2 FUT-3 hình thành HBGA Sự tương tác NoV kháng nguyên nhóm máu Liên kết vùng P GII.4 với mẫu nước bọt Sơ đồ qui trình nghiên cứu Trang 22 23 24 26 33 37 40 43 47 158 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan số liệu luận án phần số liệu nghiên cứu “Đáp ứng miễn dịch sau nhiễm norovirus mối liên quan đến kháng nguyên nhóm máu trẻ em Việt Nam” mà thành viên Tôi chủ nhiệm đề tài thành viên nhóm nghiên cứu đồng ý cho phép sử dụng đề tài luận án để bảo vệ tiến sĩ Các số liệu, kết nghiên cứu phân tích luận án trung thực chưa cơng bố cơng trình khác Tác giả luận án Nguyễn Minh Hiệp 159 LỜI CẢM ƠN Hoàn thành luận án tiến sỹ y học, tơi xin bày tỏ lịng kính trọng biết ơn sâu sắc tới: - Các thầy cô hướng dẫn PGS.TS Nguyễn Vân Trang, GS.TS Phan Thị Ngà tận tâm giúp đỡ, động viên khích lệ tơi suốt q trình học tập, nghiên cứu hồn thành luận án - GS.TS Đặng Đức Anh Viện Trưởng Viện Vệ Sinh Dịch Tễ Trung ương Thầy gợi mở cho ý tưởng nghiên cứu quan tâm, động viên tơi q trình học tập nghiên cứu - GS.TS Phạm Ngọc Đính ngun Phó Viện Trưởng – Viện Vệ sinh Dịch tễ Trung ương quan tâm giúp đỡ, động viên khích lệ tơi suốt q trình học tập, nghiên cứu Tơi xin bày tỏ lòng biết ơn chân thành tới: - Viện Vệ sinh Dịch tễ Trung ương sở đào tạo sau đại học Viện xây dựng lực, tạo điều kiện đào tạo tơi để tơi có luận án - Đảng ủy, Ban Giám Đốc Bệnh viện đa khoa Hà Nam Bệnh viện Sản Nhi Bắc Ninh tạo điều kiện tốt để nghiên cứu hoàn thành luận án - PGS.TS Nguyễn Vân Trang cho hội tham gia đề tài “Đáp ứng miễn dịch sau nhiễm norovirus mối liên quan đến kháng nguyên nhóm máu trẻ em Việt Nam” Quỹ Fogarty–Viện Sức Khỏe Hoa Kỳ tài trợ, thông qua Bệnh viện trẻ em Cincinnati, Ohio, Hoa Kỳ, để thực đề tài sử dụng kết nghiên cứu đề tài phần luận án - Các đồng nghiệp phịng thí nghiệm Miễn dịch vắc xin Viện Vệ sinh Dịch tễ Trung ương, Trung tâm Dự phòng Tỉnh Hà Nam, Khoa Nhi- Phòng lưu trữ hồ sơ bệnh án Bệnh viện đa khoa Hà Nam Bệnh viện Sản Nhi Bắc ninh tận tình hỗ trợ tơi suốt q trình nghiên cứu để hồn thành luận án - Những bệnh nhân người nhà bệnh nhân, giúp thực nghiên cứu cung cấp cho số liệu vô quý giá để hồn thành luận án Cuối cùng, tơi xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc tới gia đình tơi bạn bè thân thích người ln ủng hộ hỗ trợ mặt sống để tơi hồn thành luận án Nguyễn Minh Hiệp 160 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ VIỆN VỆ SINH DỊCH TỄ TRUNG ƯƠNG NGUYỄN MINH HIỆP THỰC TRẠNG NHIỄM NOROVIRUS VÀ MỐI LIÊN QUAN VỚI KHÁNG NGUYÊN NHÓM MÁU Ở BỆNH NHI DƯỚI TUỔI ĐIỀU TRỊ TẠI BỆNH VIỆN ĐA KHOA HÀ NAM NĂM 2012-2013 LUẬN ÁN TIẾN SỸ Y HỌC HÀ NỘI – 2017 161 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ VIỆN VỆ SINH DỊCH TỄ TRUNG ƯƠNG NGUYỄN MINH HIỆP THỰC TRẠNG NHIỄM NOROVIRUS VÀ MỐI LIÊN QUAN VỚI KHÁNG NGUYÊN NHÓM MÁU Ở BỆNH NHI DƯỚI TUỔI ĐIỀU TRỊ TẠI BỆNH VIỆN ĐA KHOA HÀ NAM NĂM 2012-2013 Chuyên ngành: Dịch tễ học Mã số: 62 72 01 17 LUẬN ÁN TIẾN SỸ Y HỌC Người hướng dẫn khoa học: PGS.TS Nguyễn Vân Trang GS.TS Phan Thị Ngà HÀ NỘI – 2017 162 ... khai với tên đề tài: ? ?Thực trạng nhi? ??m norovirus mối liên quan với kháng nguyên nhóm máu bệnh nhi tuổi điều trị bệnh viện Đa khoa Hà Nam năm 2012-2013? ?? với mục tiêu: Mô tả thực trạng số yếu tố liên. .. liên quan đến nhi? ??m norovirus bệnh nhi tuổi có/khơng có triệu chứng tiêu chảy cấp điều trị bệnh viện đa khoa Hà Nam 12/2012-11/2013 Xác định mối liên quan kháng nguyên hệ nhóm máu ABO Lewis với. .. tỷ lệ nhi? ??m NoV số bệnh viện bệnh viện Nhi Trung ương, bệnh viện Đa khoa tỉnh Khánh Hòa, bệnh viện Nhi Đồng I thành phố Hồ Chí Minh Riêng bệnh viện Đa khoa tỉnh Hà Nam, hàng năm số trường hợp