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Identification of chemical constituents from polygonum chinense linn

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热带亚热带植物学报 2007, 15(5): 450- 454 Journal of Tropical and Subtropical Botany 火炭母化学成分的研究 谢贤强, 吴 萍, 林立东, 刘梅芳, 魏孝义 * (中国科学院华南植物园,广州 510650) 摘要: 从火炭母(Polygonum chinense Linn.)中分离获得了 12 个化合物。通过光谱分析, 分别鉴定为丁香酸(1)、芹菜 素(2)、 3,3'- 二甲基鞣花酸(3)、没食子酸(4)、原儿茶酸(5)、异鼠李素(6)、咖啡酸(7)、槲皮素(8)、木犀草素 广寄生苷(11)和 3,4,8,9,10-pentahydroxy-dibenzo[b,d]pyran-6-one(12)。除 4 和 8 外, 其余 (9)、没食子酸甲酯(10)、 化合物均为首次从火炭母中分离得到。 关键词 : 火炭母; 黄酮; 酚酸类 中图分类号: Q946 文献标识码: A 文章编号: 1005- 3395(2007)05- 0450- 05 Identification of Chemical Constituents fr om Polygonum chinense Linn. XI E Xi an-qi ang, WU Pi ng, LI N Li -dong, LI U Mei -f ang, WEI Xi ao-yi * (South China Botanical Garden, the Chinese Academy of Sciences, Guangzhou 510650, China) Abstr act: Twelve chemical constituents were isolated from Polygonum chinense Linn. On the bases of spectral data, they were identified as syringic acid (1), apigenin (2), 3,3'-di-O-methylellagic acid (3), gallic acid (4), protocatechuic acid (5), isorhamnetin (6), caffeic acid (7), quercetin (8), luteolin (9), gallicin (10), avicularin (quercetin-3-O-α-L-arabinofuranoside)(11) and 3,4,8,9,10-pentahydroxy-dibenzo [b,d]pyran-6-one (12). All these compounds except 4 and 8 were reported from the species for the first time. Key wor ds: Polygonum chinense; Flavones; Phenolic acid 火炭母是蓼科(Polygonaceae)蓼属(Polygonum) 植物火炭母草(Polygonum chinense Linn.)的药用 全草或根,别名火炭毛、乌炭子、山荞毒草、赤地利、 老鼠蔗等,广泛分布于我国南部的福建、广东、广西 和贵州等地区。本品性凉,味微酸、 涩, 有清热解毒, 利湿止痒,明目退翳之效,临床主要用于治疗各种 炎症、跌打损伤和感冒等[1,2]。以前的研究发现火炭 母对金黄葡萄球菌、大肠埃希氏菌和绿脓杆菌三种 成分进行过研究,主要确定为甾体类 [5]、黄酮类 [6]等 化合物。为了进一步明确火炭母的药效物质,本实 验对火炭母全草的化学成分进行了研究,分离、鉴 定了 12 个化合物。其中有 10 个化合物为首次从该 植物中得到。 1 材料和方法 菌具有一定的体外抑菌活性[3]。有文献报道火炭母 具有一定的体外抗肿瘤活性 [4],但抗菌及抗肿瘤药 1.1 材料 火炭母购自广州市清平中药材市场,经鉴定为 效物质并不十分明确。国内曾经对火炭母中的化学 蓼科蓼属植物 火炭母(Polygonum chinense Linn.) 收稿日期: 2007-03-12 接受日期: 2007-06-07 基金项目: 广东省科技计划项目(2005B30101014)资助 * 通讯作者 Corresponding author 第5期 谢贤强等: 火炭母化学成分的研究 451 图 1 火炭母中化合物 1- 12 的结构 Fig. 1 The structures of 1- 12 from P. chinense 的全草。柱层析用硅胶为青岛海洋化工厂生产,而 柱层析用凝胶 Sephadex LH-20 为瑞典 Amersham Biosciences 生产:柱层析用聚酰胺粉和聚酰胺薄 1.3 提取和分离 火炭母全草(5.5 kg)粉碎后用 95%的乙醇浸 提 3 次,每次 48 h,乙醇提取液减压浓缩后加水使 层层析板均 为浙江 省 台 州 市 路 桥 四 甲 生 化 塑 料 厂生产,反相硅胶十八烷基硅醚(RP-18)为日本 Nomura Chemical Co. Ltd.生产,反相硅胶层析板为 德国 Merck 公司出品,正相薄层层析板是烟台黄务 硅胶开发试验厂生产。 成悬浮液,依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇 萃取。 氯仿部分提取物(36 g)经硅胶柱层析(100- 200 目),氯仿 - 甲醇(100:0- 80:20)梯度洗脱,每 份收集 400 ml,经 TLC 检测合并相同的流份,得到 1.2 仪器 1 H NMR 谱和 13C NMR 谱采用 Bruker DRX-400 型超导核磁共振仪,以四甲基硅烷(TMS)为内标 测 定 。 ESI MS 分 析 使 用 MDS SCIEX API 2000 LC/MS/MS 仪,以甲醇为溶剂, 直接进样测定。紫外 光谱用 Perkin Elmer Lambda 25 紫外分光光度计测 定。高效液相色谱仪为 Shimadzu LC-6AD 型,采用 Shimadzu RID-6A 视差折光检测器;制备色谱柱为 YMC-Pack ODS-A(250×20 mm i.d.)。 F1- F8 八个组分。其中 F3(0.8 g)组分经硅胶柱层 析(100- 200 目),氯仿 - 甲醇(100:0- 80:20)梯度 洗脱,每份收集 20 ml,合并 17- 31 流份(84 mg)上 聚酰胺柱, 甲醇 - 水(1:3)洗脱, 得化合物 1(32 mg)。 F4 甲醇溶解部分(0.98 g)上凝胶柱,甲醇洗脱,每 份收集 2 ml,合并 75- 86 流份(83 mg)经硅胶柱层 析(100- 200 目),石油醚 - 丙酮(80:20- 60:40)梯 度洗脱, 得化合物 2(16 mg)。 乙酸乙酯部分提取物(80 g)经 硅胶柱层析 (100- 200 目),氯仿 - 甲醇(100:0- 80:20)梯度洗 452 热带亚热带植物学报 脱,每份收集 400 ml,得到 F1- F10 十个组分。其中 F4 组分用氯仿洗沉淀得化合物 3(4.4 mg)。洗出 F7 组分的结晶(140 mg)上凝胶柱,甲醇洗脱,每份 第 15 卷 (apigenin)一致。 3,3 ' - 二 甲 基 鞣 花 酸(3,3 ' -Di-O-methylellagic 收集 2 ml, 得化合物 4(20 mg)。 F6(1.4 g)组分经 RP-18 反相 柱 层 析 ,甲 醇 - acid, 3):黄色粉末状固体,分子式为 C16H10O8;负离 子 ESI MS m/z:329 [M-H] -;1H NMR(400 MHz, DMSO-d6): 4.03(6H, s, 3-OMe 和 3'-OMe), 7.49(2H, δ 水(10:90- 100:0)梯度洗脱,每份收集 100 ml,经 s,H-5 和 H-5'),10.70(2H,br s,4-OH 和 4'-OH)。 TLC检测合并相同的流份,得到 f1- f13 十三个组 分。其中 f2(170 mg)组分上凝胶柱,甲醇洗脱,每 光谱数据与文献[9]报道的 3,3′ - 二甲基鞣花酸(3, 3′ -di-O-methylellagic acid)一致。 份收集 2 ml,得化合物 5(13 mg)。f3(126 mg)组 没食子酸(Gallic acid,4):无色结晶(氯仿), 分上凝胶柱,甲醇洗脱,每份收集 2 ml,得到四个组 分, 第四组分上制备 HPLC,甲醇 - 水(6:4)洗脱, 得 分子式为 C7H6O5;负离子 ESI MS m/z: 339[2M- H]-, 化合物 6(4.5 mg)。f4(72 mg)组分上凝胶柱,甲 醇洗脱,每份收集 2 ml,得化合物 7(15 mg )。f10 (165 mg)上凝胶柱,甲醇洗脱,每份收集 2 ml,得 化合物 8(51 mg)和化合物 9(13.3 mg);剩下流份 合并再上凝胶柱,甲醇洗脱,每份收集 2 ml,得化合 物 10(39 mg)。 F9(8 g)组分经聚酰胺柱层析(80- 100 目),甲 醇 - 水(0:100- 100:0)梯度洗脱,每份收集 100 ml, 经TLC 检测合并相同的流份,得到 f1- f14 十四个组 分。其中 f10 组分洗出结晶(55 mg),上凝胶柱, 甲 醇 洗 脱 ,每 份 收 集 2 ml,得 化 合 物 11(33 mg)。 f4(159 mg)组分上凝胶柱,甲醇洗脱 ,每份收集 2 ml,得化合物 12(9.5 mg)。 1.4 结构鉴定 丁香酸(Syringic acid,1):黄色粉末状固体,分 子式为 C9H10O5; 负离子 ESI MS m/z: 197 [M-H]-,153 [M-H-CO2] -;1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ 3.79 (6H, s, 3-OMe 和 5-OMe), 7.19(2H, s, H-2 和 H-6), 13 9.19(1H, s, 4-OH), 12.55(1H, s, 1-COOH); C NMR (100 MHz, DMSO-d6): 106.8(C-2 和 δ120.5(C-1), C-6), 147.4(C-3 和 C-5), 140.1(C-4), 167.3(C-7), 55.9(3-OMe 和 5-OMe)。光谱数据与文献[7]报道 的丁香酸(syringic acid)一致。 芹菜素(Apigenin, 2):黄色结晶(MeOH),分 子式为 C15H10O5;负离子 ESI MS m/z:539 [2M-H]-, 1 269 [M-H]-; H NMR(400 MHz,DMSO-d6):δ6.18 (1H, d, H-6), 6.47(1H, d, H-8), J =2.0 Hz, J =2.0 Hz, 6.78(1H,s,H-3),6.92(2H,d,J = 8.0 Hz,H-3 ' 和 H-5'),7.90(2H,d,J = 8.0 Hz,H-2'和 H-6'),12.90 (1H, s, 5-OH)。光谱数据与文献[8]报道的芹菜素 1 205 [M + Cl]-, 169 [M-H]-, 125 [M-H-CO2]-; H NMR (400 MHz, DMSO-d6): s, H-2 和 H-6)。 δ6.90(2H, 光谱数据与文献[10]报道的没食子酸(gallic acid) 一致。 原儿茶酸(Protocatechuic acid, 5):白色粉末状 固体,分子式为 C7H6O4;负离子 ESI MS m/z: 153 [M 1 -H]-; H NMR(400 MHz, DMSO-d6):δ6.72(1H, d,J = 8.0 Hz,H-5),7.24(1H,dd,J = 8.0,2.0 Hz, H-6), 7.31(1H, d, H-2)。光谱数据与文 J = 2.0 Hz, 献[11]报道的原儿茶酸(protocatechuic acid)一致。 异鼠李素(Isorhamnetin, 6):褐色粉末状固体, 分子式为 C16H12O7;负离子 ESI MS m/z: 631 [2M- H]-, 1 351 [M+ Cl]-, 315 [M-H]-; H NMR(400 MHz, DMSO- d, H-6),6.40(1H, d, d6): δ6.18(1H, J = 2.0 Hz, J= 2.0 Hz, H-8),6.87(1H, d, H-5'), 7.43(1H, J = 8.0 Hz, dd, 2.0 Hz, H-6'), 7.53(1H, d, H-2')。 J = 8.0, J = 2.0 Hz, 光谱数据与文献[12]报道的异鼠李素(isorhamnetin) 一致。 咖啡酸(Caffeic acid, 7):褐色粉末状固体,易 溶于甲醇、DMSO, 分子式为 C9H8O4;负离子 ESI MS - 1 359 [2M-H] , 215 [M+ Cl]-, 179 [M-H]-; H NMR m/z: (400 MHz,DMSO-d6): d, δ6.16(1H, J = 15.6 Hz, H-8), 6.74(1H, d, H-5), 6.94(1H, d, J = 7.2 Hz, J= H-6), 7.01(1H, br s, H-2), 7.39(1H, d, 7.6 Hz, J= H-7)。光谱数据与文献[13]报道的咖啡酸 15.6 Hz, (caffeic acid)一致。 槲皮素(Quercetin, 8):黄色粉末状固体,易溶 于甲醇、 DMSO,难溶于氯仿,分子式为 C15H10O7;负 离子 ESI MS m/z: 603 [2M-H]-,337 [M+ Cl]-,301 1 [M-H]-; H NMR(400 MHz, DMSO-d6): δ6.17(1H, d,J = 1.6 Hz,H-6),6.40(1H, d, H-8), J = 1.6 Hz, 6.87(1H, d, H-5'), 7.53(1H, dd, J = 8.4 Hz, J = 8.4, 第5期 谢贤强等: 火炭母化学成分的研究 453 2.0 Hz,H-6'),7.67(1H, d,J = 2.0 Hz, H-2'), 12.48 对照文献[16]确 定 该 化 合 物 为 3,4,8,9,10-pentahy- (1H, s, 5-OH)。光谱数据与文献[13]报道的槲皮素 (quercetin)一致。 droxy-dibenzo[b,d]pyran-6-one。 木犀草素(Luteolin,9):黄色粉末状固体,分子 式为 C15H10O6;负离子 ESI MS m/z:571 [2M-H]-,321 2 结果和讨论 1 [M+ Cl]-, 285[M-H]-; H NMR(400 MHz, DMSO-d6): d, H-6), 6.43(1H, d, δ6.17(1H, J = 2.0 Hz, J = 2.0 Hz, H-8), 6.66(1H, s, H-3), 6.87(1H, d, H-5'), J = 8.0 Hz, 7.38(1H, d,J = 2.0 Hz, H-2'), 7.41(1H,dd,J = 8.4, 2.0 Hz,H-6'), 12.97(1H,s, 5-OH)。光谱数据与文 献[12]报道的木犀草素(luteolin)一致。 没食子酸甲酯(Gallicin, 10):黄褐色粉末状固 体,分子式为 C8H8O5;负离子 ESI MS m/z:367 [2M- H]-,219 [M+ Cl]-, 183 [M-H]-;1H NMR(400 MHz, DMSO-d6):δ3.73(3H,s,7-OMe),6.92(2H,s,H-2 和 H-6)。光谱数据与文献[14]报道的没食子酸甲酯 (gallicin)一致。 广 寄 生 苷(Avicularin 或 Quercetin-3-O-α-L- arabinofuranoside,11):黄褐色粉末状固体,易溶于 氯仿、 甲醇,分子式为 C20H18O11;负离子 ESI MS m/z: 867 [2M-H] -,469 [M + Cl] -,433 [M-H] -;1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): m), 5.53(1H, δ4.15-3.23(8H, s,H-1''), 6.19(1H, d, H-6), 6.40(1H, d, J = 1.6 Hz, H-8), 6.84(1H,d,J = 8.4 Hz, H-5'),7.47 J = 1.6 Hz, (1H, d, H-2'), 7.54(1H,dd,J = 8.4, 2.0 J = 1.6 Hz, 13 Hz,H-6'),12.63(1H, s, 5-OH); C NMR(100MHz, DMSO-d6): 133.4(C-3), 177.7(C-4), δ156.9(C-2), 161.2(C-5), 98.7(C-6), 164.3(C-7), 93.5(C-8), 156.3 (C-9),103.9(C-10),120.9(C-1'),115.5(C-2' or C-5'),145.1(C-3'),148.5(C-4'),121.7(C-6'), 107.8(C-1''), 82.1(C-2''), 76.9(C-3''), 85.8(C-4''), 1 13 60.6(C-5'')。 H NMR 和 C NMR 数据与文献[15]报 道广寄生苷(avicularin)基本一致。 3,4,8,9,10-Pentahydroxy-dibenzo [b,d]pyran-6-one (12):黄色粉末状固体,分子式为 C13H18O7;负离子 ESI MS m/z:551 [2M-H]-,311 [M+ Cl]-,275 [M-H]-; 1 H NMR(400 MHz, DMSO-d6): d, δ6.72(1H, J = 8.8 Hz,H-2),7.27(1H, s, H-7),8.30(1H, d, J = 8.8 Hz, 13 H-1);C NMR(100 MHz, DMSO-d6): δ117.1(C-1), 111.4(C-2), 145.7(C-3), 145.2(C-4), 142.8(C-4a), 110.5(C-4b), 160.7(C-6), 116.5(C-6a), 106.8(C-7), 140.3(C-8), 139.8(C-9), 132.3(C-10), 111.0(C-10a)。 从火炭母全草乙醇提取物中共分离获得 12 个 化合物(1- 12),分别确定为丁香酸(syringic acid, 3,3'- 二甲 基鞣花酸(3, 1)、芹菜素(apigenin, 2)、 3'-di-O-methylellagic acid, 3)、没食子酸(gallic acid, 4)、原 儿 茶 酸(protocatechuic acid, 5)、异 鼠 李 素 (isorhamnetin, 、 咖啡酸 (caffeic acid, 6) 7)、槲皮素 (quercetin, 8)、木犀草素(luteolin, 9)、没食子酸甲 酯(gallicin, 10)、广寄生苷(avicularin, 11)和 3,4,8, 9,10-pentahydroxy-dibenzo[b,d]pyran-6-one, 12)。其 中,化合物 1、 2、 3、 5、 6、 7、 9、 10、 11、 12 为首次从火 炭母中分离得到。 据报道,丁香酸(1)体内体外均有抗内毒素活 性[17];芹菜素(2)通过降低肿瘤细胞侵袭能力和抑 制肿瘤血管形成从而发挥抑制肿瘤生长、侵入和转 移的作用[18]。此外, 芹菜素还具有抗炎症、 扩血管、 抗 菌、抗病毒以及抗氧化作用等多方面的生物学活性 [18] ; 异鼠李素(6)在体内具有明显的抗肿瘤作用,其 机 理 可 能 与 下 调 PCNA 和 bcl-2 的 表 达 , 上 调 caspase-3、 bax 的表达有关,其抑制肿瘤细胞的生长 增殖,诱导细胞凋亡是其抗肿瘤作用的主要机制之 一 [19];咖啡酸(7)具有较强的抗氧化活性 [20] ;槲皮 素(8)具有去痰止咳平喘、抗炎、扩血管、抗氧化、 抗肿瘤等广泛的药理作用 [21];木犀草素(9)具有高 效的抗菌活性[22]。另外, 它还是抗肿瘤的启动因子, 对多种实体瘤、腹水癌和白血病细胞有显著抑制作 用[23]。火炭母含有这些成分, 与其药理活性和临床应 用相关。 致谢 承蒙华南植物园邢福武研究员鉴定植物标本,在此 表示感谢。 参考文献 [1] Lin J M(林敬明), Wang Y(汪艳), Xu Y C(许寅超), et al. 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Ngày đăng: 02/03/2017, 20:41

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