môi trường nuôi cấy phân lập và giám định vi khuẩn 1

CHUYÊN ĐỀ: Các loại môi trường nuôi cấy phân lập giám định vi khuẩn MÔI TRƯỜNG NUÔI CẤY LÀ GÌ?? Mơi trường ni cấy (culture medium) chất dinh dưỡng pha chế, phối hợp nhằm đáp ứng cho yêu cầu sinh trưởng, phát triển, phát dục vi sinh vật điều kiện hoàn cảnh sống Phân loại môi trường Căn vào trạng thái vật lý môi trường : môi trường lỏng, môi trường bán cổ thể, môi trường cổ thể Căn vào thành phần nguồn gốc chất dinh dưỡng môi trường : môi trường tự nhiên , môi trường tổng hợp Căn mục đích phương pháp sử dụng mơi trường : môi trường sở , môi trường dinh dưỡng Nhu cầu chất dinh dưỡng khả đồng hóa vsv NGUYÊN TẮC Cân áp suất thẩm thấu môi trường tế bào vsv( tỷ lệ chất dinh dưỡng môi trường) Đảm bảo điều kiện lý hóa cho hoạt động trao đổi chất vsv 1.Môi trường thạch thường 1.Công thức - Nước thịt: 1000 mL (có thể thay g cao thịt) - Pepton bột: 10 g - NaCl tinh khiết: g - Thạch sợi: 20 g 2.Cách tiến hành - Cân, đong đủ nước thịt thành phần mơi trường vào nồi, đun nóng cho tan - Điều chỉnh pH 7,8- dung dịch kiềm acid Khuẩn lạc mọc thạch thường 1.Môi trường thạch thường - Cho thạch sợi rửa cắt nhỏ vào nồi Hấp 120⁰C/30phút - Kiểm tra lại pH 7,4- 7,6 - Lọc qua giấy lọc vào bình cầu mơi trường cịn nóng - Hấp 110⁰C 30 phút - Đổ đĩa ống nghiệm nhiệt độ khoảng 50 ⁰C Yêu cầu Thạch tan đều, môi trường không cứng mềm, đĩa thạch khơng dày q mỏng q ống thạch phải có phần chân lưỡi Môi trường thạch máu 1.Công thức: - Thạch thường: 250 ml - Máu thỏ máu cừu: 15ml Tiến hành -Đun nóng chảy 250 mL mơi trường thạch thường đựng bình cầu, để nguội 50⁰C - Lấy 15 ml máu từ tim thỏ từ ống có sẵn cho vào bình thạch lửa đèn cồn - Lắc nhẹ bình cầu cho máu hồ mơi trường - Đổ môi trường vào đĩa petri ống nghiệm, để ống nằm nghiêng cho thạch đông Yêu cầu - Môi trường phải có màu thạch đỏ tươi, thạch tan đều, đĩa thạch có độ dày vừa phải xấp xỉ mm, ống thạch có Mơi trường thạch máu Cơng thức - Thịt bò, thịt lợn thịt trâu: 500g - Nước cất: 1000ml Tiến hành - Lọc hết gân, mỡ thịt, xay, cân 500g - Ngâm thịt vào 1000 ml nước cất, để tủ lạnh qua đêm - Đun từ từ sôi, vớt bọt, khuấy đều, đun nhỏ lửa 1h, khuấy - Lọc qua giấy lọc để loại bỏ mỡ bã thịt - Thêm nước cất cho đủ 1000 ml, dùng để pha chế mơi trường - Nếu chưa dùng hấp 1100C/30p, bảo quản lạnh Yêu cầu Môi trường phải trong, không lắng cặn Môi trường nước thịt 4.Môi trường chocolate agar Công thức - Proteose Peptone 15g - Natri clorua 5g - Dipotassium Phosphate 4g - Monopotassium Phosphate 1g - Bột ngơ 1g - Hemoglobin, bị 10g - Coenzyme làm giàu 10ml - Agar 10g Môi trường thạch chocolate agar 4.Môi trường chocolate agar Tiến hành - Đun sơi hồ tan hồn tồn thành phần, điều chỉnh pH 7,4-7,6 - Hấp 121oC/15 phút Để nguội 45-500C, cho 50ml máu vào quay trịn bình cho máu hòa tan thạch - Cho vào đun cách thủy 800C/10 phút, ý ln lắc trịn bình thạch - Để nguội 45-500C đổ 20ml/đĩa Yêu cầu - Chocolate agar suất mờ đục màu nâu 4.Bảo quản - Môi trường đổ đĩa bảo quản 40C ... mơi trường Căn vào trạng thái vật lý môi trường : môi trường lỏng, môi trường bán cổ thể, môi trường cổ thể Căn vào thành phần nguồn gốc chất dinh dưỡng môi trường : môi trường tự nhiên , môi trường. .. nơi hấp 12 1 °C thời gian 15 phút Ứng dụng Phân biệt loại vi khuẩn dựa vào khả sử dụng citrate ( nguồn CO2 chủng phân lập) 4.Yêu cầu -Có màu xanh nước biển Môi trường Simmons Citrate 12 .Môi trường. .. hiếu khí quan sát phát triển, mơi trường có màu đen cho thấy có thủy phân esculin Ứng dụng - Phân biệt khả thủy phân esculin vi khuẩn Môi trường Esculin Agar 11 .Môi trường Simmons Citrate Công thức