Bài Giảng Tìm Kiếm Và Thu Nhận Tế Bào Gốc

TÌM KIẾM – THU NHẬN TẾ BÀO GỐC TÌM Ở ĐÂU ? Ngân hàng (tế bào, mô) Phôi (người, động vật) Mô (người bệnh, người hiến) + Mềm (máu, tuỷ, dịch ối…) + Cứng (Mô mỡ, khối u, + mô nhũ nhi, mô khác…) Biến đổi gen TB soma Động vật biến đổi gien Sinh phẩm sản (nhũ nhi) Thai bỏ (từ bệnh viện, viện thẩm mỹ ) TẾ BÀO GỐC TRƯỞNG THÀNH Da Tủy xương Mỡ Não Cơ quan tổ chức khác Nguyên tắc thu nhận Thu nhận mẫu mô chứa tế bào gốc quan tâm Xử lí mô Tách tế bào thành tế bào đơn Thu nhận tế bào gốc từ huyền phù Tính bám dính Tính phân chia Các marker chuyên biệt Tính chất khác Tại phải tách rời tế bào đơn? Loại bỏ giá thể mô Loại bỏ tín hiệu mô Loại bỏ vi môi trường cũ Tạo không gian Giải phóng protein bề mặt Thu TB ứng viên Loại bỏ nhân tố tạp TB SẴN SÀNG CHO MỘT CƠ CHẾ HOẠT ĐỘNG MỚI PHƯƠNG PHÁP Huyền phù hỗn hợp TB MÔ CỨNG NUÔI SƠ CẤP MÔ LỎNG – HỖN HỢP HUYỀN PHÙ TẾ BÀO LY TÂM LỌC NUÔI ĐẶC HIỆU FLOW CYTOMETRY NUÔI SƠ CẤP THU NHẬN TBG PHÔI NUÔI CẤY Có lớp feeder Feeder phát triển từ lớp nguyên bào sợi số chủng chuột (lớp tb ức chế tăng trưởng) Không lớp feeder Sử dụng cho TBG bám phát triển giá thể plastic, thủy tinh dụng cụ nuôi chuyên biệt Vài trường hợp, cần lót lớp gelatin bề mặt đĩa nuôi để tăng bám dính tb BẢO QUẢN Cryopreservation + Nguyên tắc + Ứng dụng + Phương pháp NGUY ÊN TẮC CƠ BẢN Ức chế phản ứng sinh lý, sinh hóa tế bào, mô Toàn vẹn cấu trúc tế bào mô Đảm bảo khả hồi phục sau bảo quản ỨNG DỤNG • Nuôi cấy tế bào Tiết kiệm thời gian, hóa chất, dụng cụ Hạn chế biến đổi di truyền Sự chuyển dạng đặc điểm tăng sinh, chuyển dạng ác tính tế bào Lưu trữ dòng tế bào quý Hạn chế tạp nhiễm vi khuẩn Hạn chế nhiễm chéo dòng tế bào khác ỨNG DỤNG • Các ngân hàng đông lạnh Ngân hàng tế bào gốc trung mô từ máu cuống rốn Trong ngân hàng mô, quan Ngân hàng tinh trùng, trứng, phôi ỨNG DỤNG Ngân hàng mô quan Tất dạng tế bào mô  Mạch máu nhỏ  Perfusion ỨNG DỤNG Hỗ trợ sinh sản  Bảo tồn khả sinh sản trước điều trị bệnh lý  Phục vụ thụ tinh ống nghiệm người chồng mặt  Bảo tồn giống động vật quý  Thành lập ngân hàng tinh trùng  Xuất giống tốt, tránh truyền nhiễm bệnh DỤNG CỤ DÙNG CHO ĐÔNG LẠNH Cryo tube Bình ni tơ lỏng PHƯƠNG PHÁP Đông lạnh chậm theo chương trình giải đông nhanh Đông lạnh (3 bước) giải đông nhanh Đông lạnh cực nhanh (thủy tinh hóa) Đông lạnh chậm & giải đông nhanh  Tube tế bào đông lạnh  Theo chương trình buồng làm lạnh đến -80oC  Ni tơ lỏng  Giải đông water bath 37oC Đông lạnh nhanh & giải đông nhanh Các bước: Tủ lạnh 40 c – 30 phút Tủ -20 0C – Tủ -80 0C - qua đêm  Ni tơ lỏng Hộp có vách dày -80 0C, ni tơ lỏng Ứng dụng - Đông lạnh tế bào nuôi cấy - Thường sử dụng Đông lạnh cực nhanh (thủy tinh hóa) Môi trường có áp suất thẩm thấu cao 4000 mOM, khử nước nhanh, trạng thái tủy tinh Đặt tế bào môi trường đông lạnh vào ni tơ lỏng Giảm di động phân tử nước phân tử chất hòa tan Giải đông nhanh Tổ chức mô, quan: Đông lạnh tụy đảo Langerhan giác mạc, đông lạnh tế bào sinh dục ĐÔNG KHÔ Nguyên tắc - Khử nước - Ngăn chặn chết, làm vật liệu dễ vận chuyển - Đông lạnh giảm áp để thăng hoa nước từ phase rắn sang phase khí PHƯƠNG PHÁP Một số chất đông khô Các bước: Đông lạnh Khô sơ cấp Khô thứ cấp Lypoprotectant: - Polyhydroxy (mono-, di-, oligo saccharide), polyalcohol dẫn xuất; - Trehalose, sucrose CHÚC CÁC EM HỌC TỐT