BAO-CAO-HOA-SINH

Thực hành Hóa Sinh Lớp K14S1_Nhóm 2_tổ MỤC LỤC CHƯƠNG I: PROTEIN BÀI 1: PHẢN ỨNG BIURE .2 BÀI 2: KẾT TỦA THUẬN NGHỊCH BẰNG MUỐI TRUNG TÍNH BÀI 3: PHƯƠNG PHÁP SORENSEN .6 (PHƯƠNG PHÁP XÁC ĐỊNH ĐẠM FORMOL) BÀI 4: ĐỊNH LƯỢNGPROTEIN BẰNG PHƯƠNG PHÁP KJELDAHL .7 (GIẢNG TRÊN MƠ HÌNH) .7 CHƯƠNG II: ENZYME BÀI 1: ẢNH HƯỞNG CỦA NHIỆT ĐỘ ĐẾN HOẠT TÍNH CỦA ENZYME BÀI 2: ẢNH HƯỞNG CỦA CÁC CHẤT HOẠT HĨA VÀ KÌM HÃM ĐẾN HOẠT TÍNH CỦA ENZYME 10 BÀI 3: XÁC ĐỊNH HOẠT ĐỘ α -AMYLASE THEO PHƯƠNG PHÁP WOHLGEMUTH 11 CHƯƠNG III: GLUCIDE .13 BÀI 1: PHẢN ỨNG VỚI THUỐC THỬ FEHLING .13 BÀI 2: PHẢN ỨNG SELIWANOFF .15 BÀI 3: XÁC ĐỊNH ĐƯỜNG KHỬ BẰNG PHƯƠNG PHÁP QUANG PHỔ KẾ 17 CHƯƠNG IV: VITAMIN .19 BÀI 1: PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH TÍNH VITAMIN A 19 BÀI 2: PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH TÍNH VITAMIN C .20 BÀI 3: PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LƯỢNG VITAMIN C 21 BÀI 1: SỰ NHŨ TƯƠNG HÓA LIPIDE 23 BÀI 2: PHẢN ỨNG XÀ PHỊNG HĨA 24 BÀI 3: XÁC ĐỊNH CHỈ SỐ IOD CỦA CHẤT BÉO 25 BÀI 4: XÁC ĐỊNH CHỈ SỐ ACIDE CỦA CHẤT BÉO 27 BÀI 5: XÁC ĐỊNH LIPIT TỔNG SỐ 28 (GIẢNG TRÊN MƠ HÌNH) 28 - 2010 - Thực hành Hóa Sinh Lớp K14S1_Nhóm 2_tổ Chương I: PROTEIN Bài 1: PHẢN ỨNG BIURE I) Nguyên tắc: − − Đây phản ứng đặc trưng liên kết peptide (CO-NH-) Trong môi trường kiềm, hợp chất có chứa từ hai liên kết peptide trở lên phản ứng với CuSO4 tạo thành phức chất màu xanh tím, tím, tím đỏ hay đỏ − Cường độ màu thay đổi tùy thuộc vào độ dài mạch peptide − Phản ứng thường thường đượcứng dụng để định lượng protein II) Nguyên liệu hóa chất: − − − − Dung dịch lịng trắng trứng 1% Ure tinh thể Dung dịch NaOH 10% Dung dịch CuSO4 1% III) Cách tiến hành & kết quả: Điều chế biure: cho vào ống nghiệm khô tinh thể urê, đung lửa yếu Lúc đầu urê nóng chảy, đến bắt đầu cứng lại ngừng đun Quá trình tạo biure, acide cianuric amoniac Dùng ống nghiệm: Ống nghiệm Cho vào ống nghiệm 1ml dd NaOH 10% 1-2 giọt CuSO4 1% Ống (Đựng biure) Dung dịch tím đỏ Ống (3ml dd lòng trắng trứng 1%) Dung dịch màu tím Chú ý khơng cho q nhiều CuSO4 màu xanh Cu(OH)2 tạo thành  Giải thích: - 2010 - Thực hành Hóa Sinh Lớp K14S1_Nhóm 2_tổ − Thuốc thử phản ứng màu biure dung dịch NaOH CuSO4, đơi gọi tác chất biure − Tuy nhiên chữ biure khơng phải thuốc thử có chứa biure mà biure protein cho phản ứng màu giống với NaOH CuSO4, Cường độ màu thay đổi tùy thuộc vào độ dài mạch peptide − Phản ứng so màu Biure, liên kết peptide với Cu2+ MT kiềm, phản ứng đặc trưng để nhận biết protein  Nguyên tắc phản ứng màu khác protein: − Phản ứng xantoproteic: đặc trưng với axit amin vòng thơm Các gốc amino acid Tyr,Trp,Phe protein tác dụng với HNO đặc tạo thành màu vàng sau thêm kiềm chuyển thành da cam − Phản ứng ninhydrin: đặc trưng với α- axit amin − Phản ứng Pholia: đặc trưng với axit amin chứa lưu huỳnh − Phản ứng Millon : phát Tyrosin gốc Tyr tác dụng với thủy ngân nitrate HNO3 đặc tạo thành kết tủa màu nâu đất − Phản ứng Folin: phát Tyrosin, Tryptophan − Phản ứng Sakaguchi: phát Arginin Gốc Arg tác dụng với dung dịch kiềm α-naphtol hypobromite cho màu đỏ anh đào - 2010 - Thực hành Hóa Sinh Lớp K14S1_Nhóm 2_tổ Bài 2: KẾT TỦA THUẬN NGHỊCH BẰNG MUỐI TRUNG TÍNH I) Nguyên tắc: − Các muối kim loại kiềm kiềm thổ (thường dùng (NH4)2SO4 , Na2SO4, NaCl, MgSO4) có tác dụng gây kết tủa thuận nghịch protein Sau loại bỏ nhanh yếu tố gây kết tủa ,protein trở trạng thái dung dịch keo bền − Các protein khác bị kết tủa vơí nồng độ muối khác nhau,vì dùng muối để tách riêng protein khỏi hỗn hợp chúng II) Nguyên liệu hóa chất: − − − − Dung dịch lịng trắng trứng khơng pha lỗng Dung dịch (NH4)2SO4 bảo hòa Tinh thể NaCl Nước cất III) Cách tiến hành & kết quả: 1) Cho vào ống nghiệm 3ml lòng trắng trứng + 3ml dd (NH4)2SO4 bảo hoà, lắc đến dung dịch bán bảo hoà xuất kết tủa globulin Để phút, lọc bỏ kết tuả ( thấm ướt giấy lọc dd (NH4)2SO4) vào ống nghiệm khác Cho vào dịch lọc 3g tinh thể (NH4)2SO4 (nếu dịch lọc 4ml) dung dịch bảo hoà, lắc, albumin kết tủa,lọc, thu kết tủa Cho riêng kết tủa globulin albumin vào ống nghiệm tương ứng, thêm vào ống từ 23ml nước cất, lắc  Kết quả:  Ống 1: tức ống chứa kết tủa globulin ,sau cho nước cất vào kết tủa tan từ từ nước cất − Do Globunlin dạng kết tủa ,đó Globulin bị biến tính ,khơng quay trạng thái dung dịch keo ( tượng kết tủa không thuận nghịch )  Ống : tức ống chứa kết tủa albumin,sau cho nước cất vào kết tủa tan nước cất − Do Albumin trở trạng thái dung dịch keo ban đầu, kết tủa tan hoàn toàn (hiện tượng kết tủa thuận nghịch) 2)Cho vào ống nghiệm 3ml lòng trắng trứng , cho tiếp NaCl vào ,dùng đũa thuỷ tinh khuấy dung dịch bảo hoà Để yên phút thấy xuất kết tủa a Lọc kết tủa sau acid hố phần dịch lọc cách thêm vào giọt CH3COOH 1% ,thì thấy xuất kết tủa b  Kết quả: Kết tủa a Globulin Kết tủa b Albumin  Giải thích : - 2010 - Thực hành Hóa Sinh Lớp K14S1_Nhóm 2_tổ Mỗi loại protein kết tủa nồng độ khác Khi cho NaCl vào ,đầu tiên Globulin kết tủa trước Sau đó lọc hết kêt tủa ,cho vào dịch lọc CH3COOH 1%, pH giảm làm xuất kết tủa Albumin - 2010 - Thực hành Hóa Sinh Lớp K14S1_Nhóm 2_tổ Bài 3: PHƯƠNG PHÁP SORENSEN (Phương pháp xác định đạm formol) I) Nguyên tắc: − Các amino acide phản ứng với formol trung tính để tạo thành dẫn xuất metylenic.Kết nhóm amin tính chất ,ngược lại nhóm cacboxyl amino acide tồn dạng metylen tự chuẩn độ với NaOH − Phương pháp ứng dụng trường hợp nhóm cacboxyl nhóm amin tự II) Nguyên liệu hóa chất: − − − − Dung dịch formol ½ (pha formol : nước cất tỉ lệ 1:1 chuẩn bị trước dùng) Nước mắm,nước cất Dung dịch NaOH 0,1N Thuốc thử Phenolphtalein 3% III) Cách tiến hành & kết quả: Lấy bình nón đánh dấu bình bình  Bình : Dùng làm bình kiểm tra Cho vào 50ml dd formol ½ thêm vào giọt phenolphthalein 3%.Sau dùng dd NaOH 0,1N để hiệu chỉnh màu bình cịn màu hồng nhạt Ta formon ½ trung hịa  Bình : Dùng làm bình thí nghiệm Cho vào 10ml dịch mẫu (đã pha loãng từ đến 20 lần ), thêm 10ml dd formol ½ trung hồ giọt phenolphthalein 3%, lắc cho phản ứng xảy hoàn tồn Sau chuẩn độ dd NaOH 0,1N dd bình có màu hồng (đậm màu bình 1) Thực thử thật thử không(thay dd đạm nước cất), lấy trị số trung bình: Lần Lần Lần Trung bình Thử khơng Thử thật 0,4 0,5 0,4 V1= 0,45ml = 0,00045 l 10,6 10,7 10,5 V2= 10,6ml = 0,0106 l  Lượng đạm formol có 1l nguyên liệu : M(g/l) = 1,4 ( V2 – V1 )/a Trong : V1 thể tích NaOH 0,1N trung bình lần thử khơng V2 thể tích NaOH 0,1N trung bình lần thử thật a lượng mẫu (ml) ứng với 10ml dịch mẫu pha loãng x lần (a= ml = 0,001 l) ⇒ M(g/l) = 1,4 (0,0 106 – 0,00045 )/0.001 = 14,21 - 2010 - Thực hành Hóa Sinh Lớp K14S1_Nhóm 2_tổ Bài 4: ĐỊNH LƯỢNGPROTEIN BẰNG PHƯƠNG PHÁP KJELDAHL (Giảng mơ hình) I) Ngun tắc: − Dưới tác dụng cùa H2SO4 đặc nhiệt độ cáo ,các hợp chất hữu có chứa nitơ bị phân hủy bị oxy hóa đến CO2 H2O ,cịn nitơ chuyển thành ammoniac tiếp tục kết hợp với H2SO4 tạo thành muối amoni sulphate Quá trình tiến hành theo bước sau : − Vơ hóa mẫu : R-CHNH2 – COOH + H2SO4  CO2 + H2O + (NH4)2SO4 − Cất đạm : (NH4)2SO4 + NaOH  Na2SO4 + 2NH3 + 2H2O − Sau lượng NH3 nước lôi dụng cụ máy Parnas –Wargner (máy chưng cất đạm )và dẫn đến bình tam giác có chứa lượng thời H2SO4.Từ cho phép xác định lượng NH3 phóng thích ,có nghĩa xác định lượng đạm có mẫu nguyên liệu : NH3 + H2SO4  (NH4)2SO4 + H2SO4dư − Chuẩn độ H2SO4 dư bình hứng dung dịch NaOH 0,01N II) Nguyên liệu hóa chất: − Vật phẩm có chứa Nitơ ( nước mắm ,đậu hũ ,các loại thực phẩm ) − H2SO4đậm đặc − K2SO4 tinh khiết − CuSO4 tinh khiết − Se − NaOH 40% − H2SO4 0,1N : 2,8ml H2SO4 đậm đặc (d=1,84/lít) − NaOH 0,1N : 4g NaOH tinh thể/lít − Phenolphtalein 1% cồn − HCl loãng (Nên dùng ống chuẩn để chuẩn bị H2SO4 NaOH 0,1N) III) Cách tiến hành & kết quả: − Đầu tiên hút 1ml (đối với nguyên liệu lỏng ) hay cân xác 1g (đối với ngun liệu khơ nghiền nhuyễn ) cho vào bình Kjendanl ,cho thêm 10ml H 2SO4 đậm đặc (d=1,84).Để tăng q trình vơ hóa (đốt cháy) cần cho thêm chất xúc tác.Tốt dùng 0,5g hỗn hợp K2SO4 : CuSO4 : Se (100:10 :1) Có thể dùng Se kim loại 0,05g dùng hỗn hợp CuSO K2SO4 acid perchloric - 2010 - Thực hành Hóa Sinh Lớp K14S1_Nhóm 2_tổ Hỗn hợp xúc tác có tác dụng làm tăng nhiệt độ sơi,do làm tăng vận tốc q tình phản ứng Sau thêm chất xúc tác đun nhẹ hợp dunh dịch hoàn toàn màu Chỉ đun mạnh hỗn hợp hoàn toàn chuyển sang dịch lỏng Trong trình đun lắc nhẹ,tráng khéo léo sau cho khơng cịn vết đen mẫu nguyên liệu thí nghiệm chưa bị phân hủy sót lại thành bình Đun dung dịch hồn tồn trắng − Sau chuyển tồn dung dịch sau vơ hóa xong bình Kjendahl vào bình định mức 100ml ,thêm nước cất ngấn chia,lắc Dụng cụ cất trước sử dụng phải rửa : lấy vào bình tam giác 10ml H2SO4 0,1N ,thêm vài giọt thị phenolphthalein lắp vào máy cất mơ hình Đun sơi nước bình cầu tạo nước ,mở nước ống sinh hàn Sau qua phễu cho vào bình cất 10ml dd thí nghiệm từ bình định mức tiếp 8-10ml dung dịch NaOH 40% Tráng phễu lượng nhỏ nước cất ,rồi đóng khóa Hơi nước từ bình cầu sục qua bình phản ứng kéo theo NH3 sang bình hấp phụ Quá trình cất kết thúc sau 15 phút Định phân lượng H 2SO4 dư dung dịch NaOH 0,1N − Sau lấy bình hấp phụ đặt bình nước cất vào ,đóng khóa,đồng thời mở khóa bình rửa Dung dịch chuyển từ bình cất sang bình rửa ,tháo bỏ dung dịch bẩn Sau thí nghiệm xong phải rửa máy cất vi lượng lần HCl loãng nhiều lần nước cất Tính kết : Hàm lượng nitơ tính theo cơng thức sau : (a − b).0,0014.10000.100 X = 10.V X: hàm lượng nitơ (g/l) a: số mol H2SO4 0,1N đem hấp thụ NH3 b: số mol NaOH 0,1N tiêu xchuẩn tiêu tốn cho chuẩn sđộ V: số ml phẩm vật đem vô hóa 0,0014: lượng g nitơ ứng với 1ml H2SO4 0,1N - 2010 - Thực hành Hóa Sinh Lớp K14S1_Nhóm 2_tổ Chương II: ENZYME Bài 1: ẢNH HƯỞNG CỦA NHIỆT ĐỘ ĐẾN HOẠT TÍNH CỦA ENZYME I) Nguyên tắc: − Nhiệt độ có ảnh hưởng quan trọng đến tốc độ phản ứng enzyme Sự tăng tốc độ phản ứng enzyme cách nân nhiệt độ có hiệu khoảng nhiệt độ tương đối hẹp − Nhiệt độ tối thích phần lớn enzyme khoảng 40-60 0C Ở nhiệt độ 800C hầu hết enzyme bị biến tính khơng thuận nghịch II) Cách tiến hành & kết quả: Chuẩn bị ống nghiệm, cho vào ống 2ml dd tinh bột 1%  Ống : gia nhiệt 85-900C  Ống : cho vào nước đá  Ống : để tủ ấm 45-500C  Ống : để nhiệt độ phòng − Giữ ống 15 phút để dd ống đạt đến nhiệt độ tương ứng − Tiếp tục cho vào ống 0,5ml dd amylase đạt nhiệt độ đặt ống nghiệm nhiệt độ cũ − Sau 1, 2, 4, 6, 12 phút lấy từ ống giọt, nhỏ vào giọt thuốc thử Lugol chuẩn bị sẵn kính Quan sát màu tạo thành phút phút phút phút phút 12 phút Ống Ống Ống Ống Xanh đen Xanh đen Xanh đen Xanh đen Xanh đen Xanh đen Tím đen Đen nhạt Nâu đen Nâu đen Nâu đất Nâu đen Đen Tím đen Nâu nhạt Nâu nhạt nhạt Nâu nhạt Nâu nhạt Đen đậm Nâu đất Nâu đất nhạt Nâu đất nhạt Nâu đất nhạt Màu lugol Qua bảng ta thấy : ống ống màu dd tinh bột thay đổi khơng đáng kể, ống ống màu dd tinh bột thay đổi nhờ enzyme thủy phân  Giải thích : Nhiệt độ có ảnh hưởng quan trọng đến tốc độ phản ứng enzyme Nhiệt độ tối thích phản ứng enzyme nằm phạm vi 40-50 0C biển đổi phụ thuộc vào nhiều yếu tố độ enzyme, thời gian phản ứng…Nhiệt độ mà enzyme bị hoàn toàn hoạt tính xúc tác gọi nhiệt độ tới hạn, thường vào khoảng 70 0C Ở nhiệt độ tới hạn, enzyme bị biến tính, có khả hồi phục lại hoạt độ Ngược lại, - 2010 - Thực hành Hóa Sinh Lớp K14S1_Nhóm 2_tổ 00C, hoạt độ enzyme bị giảm lại tăng lên đưa nhiệt độ bình thường Bài 2: ẢNH HƯỞNG CỦA CÁC CHẤT HOẠT HÓA VÀ KÌM HÃM ĐẾN HOẠT TÍNH CỦA ENZYME I) Ngun tắc: Chất hoạt hóa có khả làm tăng cường tác dụng enzyme Chất kìm hám giảm lực enzyme với chất hay làm enyme khả kết hợp với chất II) Cách tiến hành & kết quả: Chuẩn bị ống nghiệm: Ống nghiệm Sau cho vào ống 1ml nước bọt 1ml dd tinh bột, lắc Sau vài phút, thêm vào ống vài giọt thuốc thử Lugol, lắc Ống 1ml nước cất Màu vàng đậm Ống 1ml dd NaCl 1% Màu vàng nhạt Ống 1ml dd CuSO4 Màu xanh đen  Kết quả: Ta thấy enzyme hòa tan tốt nước, dung dịch muối lỗng khơng tan dung mơi khơng phân cực - 2010 - 10 Thực hành Hóa Sinh Lớp K14S1_Nhóm 2_tổ Bài 2: PHẢN ỨNG SELIWANOFF I) Nguyên tắc: − Khi trộn dd acid ascorbic với dd xanh metylen dd màu Phản ứng xảy acid ascorbic bị oxi hóa thành acid dehidro ascorbic xanh metylen trở thành dạng không màu II) Nguyên liệu hóa chất: − − − − Dung dịch fructose 1% Dung dịch glutose 1% Dung dịch NaCl 1% Thuốc thử Seliwanoff III) Cách tiến hành & kết quả: Cho vào ống nghiệm 2ml thuốc thử Seliwanoff thêm vào :  Ống : 2ml dd fructose 1%  Ống : 2ml dd glucose 1%  Ống : 2ml nước cất Tất đun cách thủy phút Kết Ống Có màu đỏ anh đào tươi Ống Màu đỏ vàng nhạt Ống Khơng tượng  Giải thích : Phản ứng seliwanoff đặc trưng fructose cetohexose không nhạy aldohexoz - 2010 - 15 Thực hành Hóa Sinh Lớp K14S1_Nhóm 2_tổ - 2010 - 16 Thực hành Hóa Sinh Lớp K14S1_Nhóm 2_tổ Bài 3: XÁC ĐỊNH ĐƯỜNG KHỬ BẰNG PHƯƠNG PHÁP QUANG PHỔ KẾ I) Nguyên tắc: − Các loại đường khử có khả khử Ferricyanur (Fe 3+) thành Ferrocyanur (Fe2+) ion có màu xanh đậm (xanh prusse) Do ta dùng phương pháp so màu để định lượng đường − Chuẩn bị mẫu: − 1g nguyên liệu thơm + H2SO4 10% (ngập mẫu), đun cách thủy khoảng 1h, lấy cho NaOH vào để trung hịa đến pH=7, lọc có cặn ta dung dịch mẫu − Lấy 1ml dd mẫu pha loãng thành 30-100ml dd dùng để xác định đường khử II) Chuẩn bị mẫu: − 1g nguyên liệu thơm + H2SO4 10% (ngập mẫu), đun cách thủy khoảng 1h, lấy cho NaOH vào để trung hịa đến pH=7, lọc có cặn ta dung dịch mẫu − Lấy 1ml dd mẫu pha loãng thành 30-100ml dd dùng để xác định đường khử III) Cách tiến hành & kết quả: Thực ống nghiệm theo mẫu sau: Số ống ml glucose 0,02mg/ml ml nước cất ml đường định nồng độ Nồng độ ống chuẩn (µg/ml) 1 0,05 0,1 0,95 0,9 0,2 0,8 0,4 0,6 0,6 0,4 12 17,994 20,337 − Cho vào ống 1ml thuốc thử A (Na2CO3 + KCN/H2Ocất) 1ml thuốc thử B(K3Fe(CN)6/ H2Ocất), lắc đều, đun sôi cách thủy 15 phút − Làm lạnh, thêm 5ml thuốc thử C (Fe[NH4(SO4)2] + Lauryl sulfat/H2SO4), lắc đều, để yên 15phút − Đo Mode “Absorbance” với độ dài sóng 690nm - 2010 - 17 Thực hành Hóa Sinh Lớp K14S1_Nhóm 2_tổ  Đồ thị theo nồng độ đường độ hấp thu - 2010 - 18 Thực hành Hóa Sinh Lớp K14S1_Nhóm 2_tổ Chương IV: VITAMIN Bài 1: PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH TÍNH VITAMIN A I) Nguyên tắc: Dưới tác dụng H2SO4 đậm đặc , Vitamin A bị nước tạo thành sản phẩm ngưng tụ có màu khơng bền Sau biến đổi nhanh thành màu đặc trưng liporom (nâu đen) II) Cách tiến hành & kết quả: − Nhỏ giọt dầu cá hòa tan 25 giọt Cloroform, sau cho giọt H 2SO4đđ vào lắc − Do tác dụng với H2SO4đđ, vitamin A dầu cá bị nước tạo thành sản phẩm ngưng tụ có màu hồng khơng bền, sau biến đổi nhanh thành màu nâu đen - 2010 - 19 Thực hành Hóa Sinh Lớp K14S1_Nhóm 2_tổ Bài 2: PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH TÍNH VITAMIN C I) Nguyên tắc: Khi trộn dd acid ascorbic với dd xanh metylen dd màu Phản ứng xảy acid ascorbic bị oxy hoá thành acid dehydro ascorbic xanh metylen trở thành dạng khơng màu II) Ngun liệu hóa chất: − − − Dd Vitamin C Xanh metylen 0,01%, Dd NaOH 5% III) Cách tiến hành & kết quả: Chuẩn bị ống nghiệm: Ống 1: 1ml dd Vitamin C Thêm vào giọt xanh Từ màu xanh  suốt metylen, lắc Ống 2: 1ml nước cất Thêm vào giọt NaOH 5%, Vẫn giữ nguyên màu lắc suốt  Giải thích: Do Vitamin C làm màu dd xanh metylen - 2010 - 20 Thực hành Hóa Sinh Lớp K14S1_Nhóm 2_tổ Bài 3: PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LƯỢNG VITAMIN C I) Nguyên tắc: Để xác định hàm lượng Vitamin C (Acid ascorbic) nguyên liệu phương pháp chuẩn độ iod người ta cho tất acid ascorbic bị oxy hoá iod , phần iod thừa cho màu xanh với dung dịch tinh bột Điều nói lên phản ứng kết thúc II) Nguyên liệu hóa chất: − − − − dd HCl 5% dd I2 0,01N dd tinh bột 1% Chanh trái ,bưởi ,cam III) Cách tiến hành & kết quả: − Lấy 10g thịt trái chanh 20ml HCl 5% vào cối sứ để giã ,nghiền nhỏ dung dịch có dạng đồng thể, dùng nước cất để chuyển toàn dịch chiết đồng thể vào bình định mức 100ml, thêm nước cất đến vạch 100ml Lắc cho lượng axit ascorbic có nguyên liệu hoà tan hoàn toàn, lọc cặn vào bình tam giác 250ml, ta có dung dịch mẫu hay dd nguyên liệu − Hút 20ml dd nguyên liệu lọc cặn vào bình nón, thêm5-10 giọt hồ tinh bột 1% − Dùng I2 0,01N chuẩn độ dung dịch bắt đầu xuất màu xanh lam nhạt − Lặp lại chuẩn độ lần, lấy kết trung bình ta V(ml) dd I 0,01N dùng để chuẩn độ Vitamin C Chuẩn độ dd I2 0,01N Lần Lần Lần Trung bình 0,5 0,5 0,6 V= 0,533ml  Hàm lượng Vitamin C : X(%) = Trong : V V1 0,00088.100 V2 m m : lượng mẫu thí nghiệm (5gr) 0,00088 : số gram acid ascorbic ứng với 1ml dd I2 0,01N V1 : thể tích dd mẫu (50ml) V2 : thể tích dịch mẫu lấy để xác định ( 20ml) V: số ml Iode 0,01N dùng để chuẩn độ 0,533.50.0,00088.100 = 0,023452% 20.5  Phản ứng oxy hoá acide ascorbic : ⇒ X(%) = - 2010 - 21 Thực hành Hóa Sinh Lớp K14S1_Nhóm 2_tổ − Iốt tương đối không tan nước, điều cải thiện cách pha trộn iốt với iođua hình thành triiođua: I + I↔ – I3 − Triiođua oxy hóa vitamin C tạo acid dehydroascorbic: C6H8O6 + I3 – + H2O → - 2010 - C6H6O6 + 3I - + 2H + 22 Thực hành Hóa Sinh Lớp K14S1_Nhóm 2_tổ Chương V: LIPIDE Bài 1: SỰ NHŨ TƯƠNG HÓA LIPIDE I) Nguyên tắc: − Sự nhũ tương hoá lipide thể giai đoạn đầu hấp thụ chung − Để giữ cân mơi trường phân hố ( H 2O ) với pha phân tán (lipide) phải cần có chất gây nhũ tương ( natri carbonat , protein, xà phòng , muối mật,….) II) Nguyên liệu hóa chất: − − − Dầu lạc ( dầu đậu phụng ) Gelatin 2% Rỉ đường III) Cách tiến hành & kết quả: − Chuẩn bị ống nghiệm ,, lau khô , tiến hành đánh dấu ống nghiệm thành ống ống − Tiếp theo cho vào ống 0,5ml dầu lạc − Sau cho vào ống :  Ống : 0,5ml gelatin 2%  Ống : 0,5ml nước mật rỉ đường − Lắc mạnh ống * Kết : Ống Ống Kết Giải thích Tạo thành lớp ,lớp dầu lên trên.(là hạt dầu không nhập vào nỗi lên trên) Chuyển thành trắng đục ,để thời gian phân lớp Bản chất protein  nhũ tương mạnh rỉ đường - 2010 - Cho mật rỉ đường vào rỉ đường có muối mật chất gây nhũ tương nên xảy tương nhũ tương yếu ống 23 Thực hành Hóa Sinh Lớp K14S1_Nhóm 2_tổ Bài 2: PHẢN ỨNG XÀ PHỊNG HĨA I) Ngun tắc: − Chỉ số savon hóa lượng mg KOH cần để trung hòa acide béo tự liên kết có 1g chất béo − Dưới tác dụng kiềm, glyxerit bị thủy phân tạo thành glyxerin xà phòng ( muối Natri Kali acid béo ) II) Cách tiến hành & kết quả: − Cho vào cốc sứ 0,5ml dầu lạc + 10 ml KOH 30% − Khấy đun cách thủy qnh lại ta xà phịng, cho nước vào lắc lên thấy xuất bọt xà phòng  Giải thích: Dưới tác dụng enzyme, axit kiềm, đun nóng, mỡ bị thủy phân tạo thành glixerin axit béo muối axit béo bậc cao gọi xà phòng Phản ứng sau : - 2010 - 24 Thực hành Hóa Sinh Lớp K14S1_Nhóm 2_tổ Bài 3: XÁC ĐỊNH CHỈ SỐ IOD CỦA CHẤT BÉO I) Nguyên tắc: − − Chỉ số iod chất béo số gram iod kết hợp với 100gr chất béo Xác định số iod dựa khả iod kết hợp với acide béo chỗ nhựng liên kết đơi, nối đơi lipit cho phản ứng cộng với nguyên tử nhóm halogen Do đó, ta cho chất béo tác dụng với lượng thừa iod xác định lượng thừa giúp ta suy số iod − Như số iod xác định tổng quát acid béo không no chất béo II) Nguyên liệu hóa chất: − − − − − Dầu ăn Cồn 96o Dd I2 0,1N Dd Na2S2O3 0,1N dùng chuẩn độ Dd tinh bột 1% III) Cách tiến hành & kết quả: − Lấy bình tam giác: Bình 1,2,3 (mẫu trắng):1ml nước cất Bình 4,5,6 (mẫu nguyên liệu): 1→2g dầu ăn − Thêm vào bình 10ml cồn 96o lắc đều, thêm 10ml I2 0,1N Sau dùng giấy bịt kín miệng bình tam giác để tránh bay I2   1ml H2O cất Bình (1) (2) 2g Dầu ăn (3) (4) (5) (6) Để yên tối từ 10 – 15 phút, sau chuẩn độ Na2S2O3 0,1N đến dung dịch có màu vàng nhạt Na2S2O3 0,1N dùng chuẩn độ (ml) 9,7 9,7 9,8 9,7 9,6 9,7 Thêm vào bình 1ml dung dịch tinh bột 1%, tiếp tục chuẩn độ đến màu xanh Na2S2O3 0,1N dùng chuẩn độ (ml) 0,4 0,3 0,4 0,5 0,3 0,4  Tính số iod: a: số ml Na2S2O3 0,1N dùng chuẩn độ mẫu trắng  9,7 + 9,7 + 9,8   0,4 + 0,3 + 0,4  +  = 10,1 (ml) a = 3     - 2010 - 25