1.1.Khái Niệm: Giải trình tự gen (DNA sequencing) phương pháp xác định vị trí xếp nucleotid phân tử DNA 1.2 Ý nghĩa Giúp xác định vị trí gen NST, cho phép kết luận chất gen Có ý nghĩa việc tìm hiểu chức cấu trúc gen dòng gen 2.2 Phương pháp Sanger Nguyên lý: Dựa vào tổng hợp mạch bổ sung cho trình tự cần xác định nhờ hoạt động enzyme DNA Polymerase Với việc sử dụng thêm dideoxynucleotid (ddNTP) deoxynucleotid thông thường 2.2 Phương pháp Sanger Việc tổng hợp mạch bổ sung bị dừng lại ddNTP khả hình thành liên kết phosphodieste 2.2 Phương pháp Sanger Vật liệu: - Primer( 20 nucleotides) - DNA polymerase - DNA template - dNTP ddNTP - Vật liệu đánh dấu - Hệ thống điện di Các bước tiến hành Bước 1: Biến tính DNA khuôn Điện di gel polyacrylamid để thu mạch đơn DNA, dùng DNA để tiến hành bước xử lý 2.1 Phương pháp Sanger Bước 2: Chuẩn bị cho phản ứng tổng hợp DNA Lấy ống Eppendorf, cho thành phần cần thiết vào ống : mạch khuôn, mồi có đánh dấu phóng xạ P32, enzyme DNA polymerase, dNTP, dung dịch đệm thích hợp thêm vào ống tương ứng loại ddNTP định 2.2 Phương pháp Sanger 2.2 Phương pháp Sanger Bước : Thực phản ứng tổng hợp DNA Bước 4: Điện di kết quả, so sánh kết chuỗi mạch đơn DNA tổng hợp để xác định trình tự mạch khuôn 2.2 Phương pháp Sanger ddTTP