Nghiên cứu cải thiện sự tồn tải của xạ khuẩn trong chế phẩm tồn trữ dạng đông khô

Tạp chı́ Khoa học Trường Đại học Cầ n Thơ Phần B: Nông nghiệp, Thủy sản Công nghệ Sinh học: 43 (2016): 1-7 NGHIÊN CỨU CẢI THIỆN SỰ TỒN TẠI CỦA XẠ KHUẨN TRONG CHẾ PHẨM TỒN TRỮ DẠNG ĐÔNG KHÔ Đoàn Thị Kiều Tiên, Huỳnh Vân An Nguyễn Thị Thu Nga Khoa Nông nghiệp Sinh học Ứng dụng, Trường Đại học Cần Thơ Thông tin chung: Ngày nhận: 06/06/2015 Ngày chấp nhận: 25/05/2016 Title: Study on improvement of survival of Actinomycetes in freeze-frying formulation Từ khóa: Chất phụ gia, chế phẩm đông khô, xạ khuẩn Keywords: Actinomycetes, freezefrying formulation, additives ABSTRACT Actinomycetes 54 RM is promising actinobacterium for controlling many fungal plant diseases Study on additives to protect and recovery Actinomycetes 54 RM cells in formulation during and after freeze - drying condition is necessary if this bacterium will be used for applying in large scale for controlling plant diseases In the first study on protecting effect of additives, results showed that gelatin 5% and 10% and sucrose 5% gave good effect and therefore sucrose 5% was selected for further experiments In the second study surveyed on six different additives glucose (5% and 10%), mannitol (5% and 10%) and skim milk (10% and 20%) for recovery effect of Actinomycetes 54 RM cells from the freeze-drying state to vegetative growth state, compared to the control without additive,; results showed that four additives skim milk (10% and 20%), glucose 10% and mannitol 10% gave good effect in the recovery of Actinomycetes cells from freeze-drying state to vegetative growth state Survey the survival of actinomycetes 54 RM cells in the formulation after freeze-drying during five months storage, with four treatments adding each additive such as skim milk 10% and 20%, glucose 10% or mannitol 10% after freeze-frying, and control without additives; results showed that skim milk 10% and 20% were good additives to help Actinomycetes 54 RM cells recovery after freeze-drying with higher density compared to the other treatments in all storage periods Freeze-drying formulation of Actinomycetes 54 RM did not reduce significantly of living cells after months storage in room temperature TÓM TẮT Xạ khuẩn 54 dòng xạ khuẩn triển vọng phòng trừ nhiều bệnh nấm gây hại trồng Nghiên cứu chất phụ gia giúp bảo vệ cải thiện tế bào xạ khuẩn điều kiện đông khô cần thiết cho việc ứng dụng xạ khuẩn diện tích rộng Nghiên cứu chất phụ gia bảo vệ tế bào xạ khuẩn 54 RM tồn điều kiện đông khô, kết ghi nhận gelatin 5% 10%, sucrose 5% thể hiệu bảo vệ tế bào xạ khuẩn 54 RM trình đông khô sucrose 5% chọn làm chất phụ gia bảo vệ tế bào xạ khuẩn trình đông khô cho thí nghiệm Nghiên cứu chất phụ gia giúp tế bào xạ khuẩn 54 RM hồi phục từ tình trạng đông khô tình trạng tăng trưởng, thí nghiệm khảo sát sáu chất phụ gia glucose (5% 10%), mannitol (5% 10%) sữa béo (10% 20%) đối chứng không chất phụ gia Kết chất sữa béo 10% 20%, glucose 10% mannitol 10% có hiệu phục hồi tế bào xạ khuẩn tốt so với đối chứng Thí nghiệm khảo sát thời gian tồn trữ chế phẩm xạ khuẩn 54 RM dạng bột đông khô Thí nghiệm gồm nghiệm thức đối chứng bốn nghiệm thức thêm chất bảo quản (sữa béo 10% 20%, glucose 10% mannitol 10%) với bốn lần lặp lại Kết sữa béo 10% 20% chất phụ gia tốt, có khả phục hồi tế bào tốt so với nghiệm thức lại Chế phẩm xạ khuẩn 54 RM sau đông khô không giảm ý nghĩa mật số sau tháng tồn trữ nhiệt độ phòng Trích dẫn: Đoàn Thị Kiều Tiên, Huỳnh Vân An Nguyễn Thị Thu Nga, 2016 Nghiên cứu cải thiện tồn xạ khuẩn chế phẩm tồn trữ dạng đông khô Tạp chí Khoa học Trường Đại học Cần Thơ 43b: 1-7 Tạp chı́ Khoa học Trường Đại học Cầ n Thơ Phần B: Nông nghiệp, Thủy sản Công nghệ Sinh học: 43 (2016): 1-7 ngày Sau thêm 10 ml nước muối sinh lí 0,9% vô trùng cho vào đĩa để thu hoạch huyền phù bào tử xạ khuẩn Xác định mật số tế bào xạ khuẩn huyền phù phương pháp pha loãng chà đĩa môi trường MS, đếm số khuẩn lạc hình thành sau ngày, từ xác định mật số xạ khuẩn (cfu/ml) ĐẶT VẤN ĐỀ Hiện nay, có nhiều nhà khoa học nghiên cứu việc sản xuất thuốc vi sinh từ vi sinh vật có lợi, vi sinh vật ức chế vi sinh vật có hại để áp dụng phòng trị bệnh trồng Trong đó, xạ khuẩn nhóm vi sinh vật triển vọng phòng trị sinh học bệnh trồng (Yan Min et al., 2000) Riêng Việt Nam, có số ghi nhận bước đầu khả phòng trị xạ khuẩn với số vi sinh vật gây bệnh trồng Pseudomonas solanacearum 222 (Đào Thị Lương ctv., 2002); Fusarium oxysporum f.sp niveum (Lê Thị Bích, 2011); Xanthomonas campestris pv vesicatoria (Nguyễn Thị Thùy Linh, 2011), Colletotrichum sp (Tô Huỳnh Như, 2012), Fusarium oxysporum (Đoàn Thị Kiều Tiên, 2012), Rhizoctonia solani (Nguyễn Thị Thu Nga Nguyễn Thị Mai Thảo, 2013) Riêng xạ khuẩn 54 RM phân lập từ đất ruộng trồng ớt Lương Phi - Tri Tôn - An Giang có khả hạn chế bệnh số loại trồng: bệnh thán thư ớt (Tô Huỳnh Như, 2012), bệnh héo rũ mè (Đoàn Thị Kiều Tiên, 2012) bệnh chết cải bắp (Nguyễn Thị Thu Nga Nguyễn Thị Mai Thảo, 2013) điều kiện phòng thí nghiệm nhà lưới Trên sở đó, “Nghiên cứu cải thiện tồn xạ khuẩn chế phẩm tồn trữ dạng đông khô” thực nhằm tìm chất bảo vệ tế bào xạ khuẩn 54 RM tốt điều kiện đông khô tìm chất phụ gia giúp tế bào xạ khuẩn 54 RM hồi phục từ tình trạng đông khô tình trạng tăng trưởng khảo sát mật số xạ khuẩn 54 RM bột đông khô sau thời gian tồn trữ Từ đó, góp phần đưa biện pháp sinh học ứng dụng vào thực tế công tác quản lý mầm bệnh Chuẩn bị dung dịch chất phụ gia: Các chất phụ gia chuẩn bị với nồng độ gấp đôi, trùng màng lọc vi khuẩn (đường kính 0,45  m ) , dụng cụ trùng trước sử dụng Bổ sung chất phụ gia vào huyền phù xạ khuẩn trước đông khô: Rút ml huyền phù xạ khuẩn + ml dung dịch chất phụ gia có nồng độ gấp đôi cho vào ống falcon (50 ml) để thu dược huyền phù xạ khuẩn hòa dung môi chất phụ gia có nồng độ tương ứng gồm glucose (5%, 10%); sucrose (5%, 10%); lactose (5%, 10%), gelatin (5%, 10%) trước đông khô Nghiệm thức đối chứng bổ sung ml huyền phù xạ khuẩn + ml nước cất trùng Sau nghiệm thức đông khô máy đông khô (Labconco) ba ngày áp suất 0,040 mbar với nhiệt độ - 500C Ghi nhận tiêu: Xác định mật số xạ khuẩn 54 RM sống nghiệm thức sau đông khô phương pháp pha loãng chà đĩa chứa 10 ml môi trường MS, sau ngày mật số khuẩn lạc hình thành đĩa Petri tương ứng nghiệm thức Đếm số khuẩn lạc hình thành x hệ số pha loãng để suy mật số tế bào xạ khuẩn nghiệm thức (cfu/ml) Xử lý số liệu: Mật số bào tử chuyển sang lograrit trước thống kê Các số liệu ghi nhận xử lý phần mềm Microsoft Office Excel phân tích phần mềm thống kê MSTATC qua phép thử Duncan 2.2 Nghiên cứu chất phụ gia giúp tế bào xạ khuẩn 54 RM hồi phục từ tình trạng đông khô tình trạng tăng trưởng PHƯƠNG TIỆN VÀ PHƯƠNG PHÁP Thí nghiệm thực Phòng thí nghiệm Bệnh nhà lưới môn Bảo vệ thực vật, Khoa Nông nghiệp Sinh học Ứng dụng, Trường Đại học Cần Thơ từ tháng 5/2014 đến tháng 12/2014 2.1 Nghiên cứu chất bảo vệ tế bào xạ khuẩn 54 RM tồn điều kiện đông khô Phương pháp: Thí nghiệm bố trí ngẫu nhiên, lần lặp lại, gồm nghiệm thức chất phụ gia (glucose; sucrose; lactose; gelantin), chất khảo sát hai nồng độ (5% 10%) nghiệm thức đối chứng không thêm chất phụ gia (Costa et al., 2000; Coman and Radvan, 2009) Phương pháp: Thí nghiệm bố trí hoàn toàn ngẫu nhiên với lần lặp lại gồm nghiệm thức, có nghiệm thức bổ sung chất phụ gia hai nồng độ khác như: sữa béo (10%, 20%), mannitol (5%, 10%) glucose (5%, 10%) nghiệm thức đối chứng không thêm chất phụ gia bổ sung nước cất (Costa et al., 2000; Nguyễn Thị Kim Xuyến, 2011) Cách tiến hành: Nhân nuôi xạ khuẩn 54 RM với môi trường MS (Mannitol soya flour) Cách tiến hành: Nhân nuôi xạ khuẩn 54 RM môi trường MS đĩa Petri Sau ngày thu Tạp chı́ Khoa học Trường Đại học Cầ n Thơ Phần B: Nông nghiệp, Thủy sản Công nghệ Sinh học: 43 (2016): 1-7 hoạch huyền phù bào tử, xác định mật số phương pháp pha loãng chà đĩa Sau đó, cho chất bảo vệ (được tìm từ thí nghiệm 1) vào huyền phù xạ khuẩn Huyền phù xạ khuẩn 54 RM (6 ml) đem đông khô máy đông khô ngày áp suất 0,040 mbar với nhiệt độ 500C Chuẩn bị dung dịch chất phụ gia: Các chất phụ gia chuẩn bị pha nồng độ 5% 10% nghiệm thức glucose, mannitol Riêng nghiệm thức sữa béo chuẩn bị hai nồng độ 10% 20% Nước cất trùng trước sử dụng để pha thành dung dịch chất phụ gia, loại đường lọc qua màng lọc vi khuẩn với đường kính 0,45  m Xác định mật số xạ khuẩn 54 RM sống thời điểm tồn trữ sau 0, 30, 60, 90, 120 150 ngày sau đông khô phương pháp pha loãng huyền phù vi sinh vật đếm mật số môi trường MS cách cho ml dung dịch loại chất phụ gia (được tìm từ thí nghiệm 2) vào ống tube chứa bột xạ khuẩn đông khô, nghiệm thức đối chứng thêm nước cất tương ứng Để yên huyền phù xạ khuẩn 54 RM phút sau xác định mật số tế bào xạ khuẩn sống phương pháp pha loãng chà đĩa môi trường MS Ghi nhận tiêu: Mật số xạ khuẩn 54 RM (cfu/ml) nghiệm thức phương pháp pha loãng huyền phù chà đĩa chứa 10 ml môi trường MS, sau ngày xác định mật số xạ khuẩn hình thành đĩa Petri nghiệm thức Đếm số khuẩn lạc hình thành x hệ số pha loãng để suy mật số tế bào xạ khuẩn nghiệm thức (cfu/ml) Bột xạ khuẩn 54 RM sau đông khô bổ sung thêm chất phụ gia sữa, sucrose, glucose, mannitol thể tích ban đầu ml Để yên huyền phù xạ khuẩn 54 RM phút, sau pha loãng đếm mật số phương pháp trải đĩa môi trường Xử lý số liệu: Số liệu mật số xạ khuẩn 54 RM chuyển sang log10 phân tích thống kê phần mềm MSTATC qua phép thử Duncan Ghi nhận tiêu: Mật số xạ khuẩn 54 RM (cfu/ml) nghiệm thức phương pháp pha loãng huyền phù chà đĩa chứa 10 ml môi trường MS, sau ngày xác định mật số xạ khuẩn hình thành đĩa Petri nghiệm thức Đếm số khuẩn lạc hình thành x hệ số pha loãng để suy mật số tế bào xạ khuẩn nghiệm thức (cfu/ml) KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1 Kết chất phụ gia bảo vệ tế bào xạ khuẩn 54 RM tồn điều kiện đông khô Log mật số xạ khuẩn 54 RM (cfu/ml) ban đầu trước đông khô 12,07 Kết khảo sát mật số xạ khuẩn nghiệm thức có bổ sung chất bảo vệ sau đông khô Kết Bảng cho thấy, nghiệm thức gelatin 5%, gelatin 10%, sucrose 5% thể vai trò bảo vệ tế bào xạ khuẩn điều kiện đông khô, với log (mật số xạ khuẩn cfu/ml) 12,06; 12,02 12,04, cao khác biệt ý nghĩa thống kê so với đối chứng với log mật số xạ khuẩn (cfu/ml) 11,38 Các nghiệm thức lại glucose 5%, glucose 10%, sucrose 10% có mật số tế bào sống cao hơn, nhiên không khác biệt ý nghĩa thống kê so với đối chứng Lactose 5% 10% hoàn toàn không giúp tế bào tồn tốt điều kiện đông khô so với đối chứng Kết phù hợp với Costa et al., (2000) cho thấy nghiên cứu khả tồn trữ vi khuẩn Pantoea agglomerans, kết ghi nhận đường sucrose chất phụ gia tốt Đến năm 2011, Nguyễn Thị Kim Xuyến ghi nhận đường sucrose 10% cho hiệu giúp bảo vệ tế bào vi khuẩn Pseudomonas aeruginosa 231-1 tốt trình đông khô Tóm lại, gelatin (5% 10%) sucrose 5% giúp bảo vệ tế bào xạ khuẩn 54 RM tồn tốt Xử lý số liệu: Số liệu mật số xạ khuẩn 54 RM chuyển sang log10 phân tích thống kê phần mềm MSTATC qua phép thử Duncan 2.3 Khảo sát thời gian tồn trữ chế phẩm xạ khuẩn 54 RM dạng bột đông khô Phương pháp: Thí nghiệm bố trí hoàn toàn ngẫu nhiên gồm nghiệm thức đối chứng (bột xạ khuẩn 54 RM sau đông khô không bổ sung chất phụ gia) nghiệm thức bổ sung thêm chất phụ gia hồi phục tế bào tốt tìm thấy thí nghiệm Mỗi nghiệm thức gồm bốn lặp lại Cách tiến hành: Nhân nuôi xạ khuẩn 54 RM môi trường MS đĩa Petri Sau ngày thu hoạch huyền phù bào tử, xác định mật số phương pháp pha loãng chà đĩa Sau đó, cho chất bảo vệ (được tìm từ thí nghiệm 1) vào huyền phù xạ khuẩn Huyền phù xạ khuẩn 54 RM (6 ml) đem đông khô máy đông khô ngày áp suất 0,040 mbar với nhiệt độ 500C Sau đông khô, ống tube đậy nắp kín cho vào túi nylon hàn kín lại bảo quản điều kiện phòng Tạp chı́ Khoa học Trường Đại học Cầ n Thơ Phần B: Nông nghiệp, Thủy sản Công nghệ Sinh học: 43 (2016): 1-7 điều kiện đông khô Tuy nhiên, hiệu kinh tế đường sucrose rẻ tiền, dễ hòa tan áp dụng rộng rãi thị trường Chính thế, đường sucrose nồng độ 5% chọn làm chất phụ gia bảo vệ tế bào xạ khuẩn để thực thí nghiệm thế, thí nghiệm thực dựa kết thí nghiệm Bảng 1: Mật số xạ khuẩn sau đông khô nghiệm thức cộng thêm chất bảo vệ khác STT STT Nghiệm Thức Gelatin 5% Gelatin 10% Glucose 5% Glucose 10% Lactose 5% Lactose 10% Sucrose 5% Sucrose 10% Đối chứng Mức ý nghĩa CV (%) Bảng 2: Mật số xạ khuẩn sau thêm vào chất phụ gia giúp tế bào phục hồi sau trình đông khô Nghiệm thức Glucose 5% Glucose 10% Mannitol 5% Mannitol 10% Sữa béo 10% Sữa béo 20% Đối chứng Mức ý nghĩa CV(%) Mật số xạ khuẩn log (cfu/ml) 12,06 a 12,02 a 11,96 ab 11,83 abc 11,31 c 11,39 bc 12,04 a 11,82 abc 11,38 bc * 3,29 Mật số xạ khuẩn log (cfu/ml) 12,33 abc 12,58 ab 11,87 bc 12,53 ab 12,77 a 12,66 a 11,65 c * 3,86 Ghi chú: Các số trung bình cột theo sau nhiều chữ giống không khác biệt qua phép kiểm định Duncan Số liệu chuyển sang logx trước phân tích thống kê *: khác biệt mức ý nghĩa 5% 3.3 Kết khảo sát thời gian tồn trữ chế phẩm xạ khuẩn 54 RM dạng bột đông khô Ghi chú: Các số trung bình cột theo sau nhiều chữ giống không khác biệt qua phép kiểm định Duncan Số liệu chuyển sang logx trước phân tích thống kê *: khác biệt mức ý nghĩa 5% Về vai trò chất phụ gia Nhìn chung, kết Bảng thấy nghiệm thức sữa béo (10% 20%) thể hiệu giúp tế bào phục hồi tốt, với mật số tế bào xạ khuẩn qua thời gian khảo sát cao khác biệt ý nghĩa so nghiệm thức đối chứng Chất phụ gia glucose 10% mannitol 10% cho hiệu cao nhiên không khác biệt ý nghĩa so với đối chứng Tại thời điểm ngày sau đông khô (NSĐK) nghiệm thức sữa béo (10% 20%) ghi nhận khả phục hồi tế bào tốt có khác biệt ý nghĩa so với nghiệm thức đối chứng Nghiệm thức sữa béo 10% cho mật số cao với log mật số (cfu/ml) 10,97, sữa béo 20% với log (mật số cfu/ml) 10,66 đối chứng đạt log (mật số cfu/ml) 8,42 Tương tự thời điểm 30 NSĐK, nghiệm thức sữa béo 10% cho log (mật số cfu/ml) 10,60 đạt cao thấp nghiệm thức glucose 10% với log mật số cfu/ml 9,38 Nghiệm thức sữa béo 10% hoàn toàn khác biệt ý nghĩa thống kê so với đối chứng Thời điểm 60 NSĐK, hai nghiệm thức sữa béo 10% 20% thể khả giúp tế bào hồi phục tốt với log (mật số cfu/ml) đạt cao khác biệt ý nghĩa so với nghiệm thức đối chứng 3.2 Hiệu chất phụ gia giúp tế bào xạ khuẩn 54 RM hồi phục từ tình trạng tiềm sinh sau đông khô tình trạng tăng trưởng Kết Bảng cho thấy, bốn nghiệm thức sữa béo (10% 20%), glucose 10% mannitol 10% có log (mật số cfu/ml) khoảng 12,5312,77 cao khác biệt ý nghĩa so với đối chứng với log (mật số cfu/ml) 11,65, hai nghiệm thức glucose 5% mannitol 5% không khác biệt ý nghĩa so với đối chứng Sữa béo thêm vào sau trình đông khô cho kết tế bào xạ khuẩn phục hồi tốt, làm cho tế bào gia tăng khả sống Theo Costa et al (2000), sữa gạn béo cung cấp vật liệu cho trình đông khô, với cấu trúc xốp giúp cho giai đoạn hấp thu nước tế bào diễn dễ dàng, thuận lợi Môi trường sữa gạn béo giúp tế bào kiểm soát tỉ lệ trình hút nước tế bào tránh tình trạng bị sốc Như vậy, qua thí nghiệm cho thấy nghiệm thức sữa béo (10% 20%), glucose 10%, mannitol 10% cho kết phục hồi tế bào tốt khác biệt ý nghĩa thống kê so với đối chứng Chính Tạp chı́ Khoa học Trường Đại học Cầ n Thơ Phần B: Nông nghiệp, Thủy sản Công nghệ Sinh học: 43 (2016): 1-7 Ở thời điểm 150 NSĐK (5 tháng), hai nghiệm thức sữa béo 10% 20% cho thấy hiệu việc phục hồi tế bào xạ khuẩn, với log (mật số cfu/ml) 9,76 9,71 cao nhiều (khoảng 100 lần) khác biệt ý nghĩa so với đối chứng đạt log (mật số cfu/ml) 7,69 Trong đó, hai nghiệm thức glucose 10% mannitol 10% cho hiệu không khác biệt ý nghĩa thống kê so với đối chứng Như vậy, sữa béo 10 % 20% giúp phục hồi tế bào xạ khuẩn trạng thái sau đông khô tốt Tại thời điểm 120 NSĐK, nghiệm thức có Thí nghiệm Costa et al., (2000) cho thấy sử chứa chất bảo quản không khác biệt ý nghĩa dụng sữa gạn béo 10% làm chất phụ gia giúp tế bào thống kê với nhau, tương tự có nghiệm thức vi khuẩn hấp thụ nước sau đông khô vi sữa béo 10% 20% giữ mật số tế bào sống khuẩn Pantoea agglomerans khả sống cao khác biệt ý nghĩa so với nghiệm thức tế bào vi khuẩn sau đông khô với đối chứng sữa gạn béo đạt 100% Bảng 3: Khả phục hồi tế bào xạ khuẩn qua thời điểm khảo sát từ đến 150 ngày sau đông khô Sau 90 NSĐK, nghiệm thức có giảm mật số có hiệu phục hồi tế bào xạ khuẩn Tại thời điểm nghiệm thức đối chứng với log (mật số cfu/ml) 7,90 thấp khác biệt ý nghĩa thống kê so với nghiệm thức sữa béo hai nồng độ 10% 20% với log (mật số cfu/ml) 10,02 9,93 Tương tự thời điểm trước, nghiệm thức glucose 10% mannitol 10% không khác biệt ý nghĩa thống kê với không khác biệt so với đối chứng STT Nghiệm Thức Mức ý nghĩa CV (%) Glucose 10% Mannitol 10% Sữa béo 10% Sữa béo 20% Đối chứng Mật số xạ khuẩn chế phẩm xạ khuẩn log (cfu/ml) 54 RM sau đông khô sau thời gian tồn trữ (NSĐK) NSĐK 30 NSĐK 60 NSĐK 90 NSĐK 120 NSĐK 150 NSĐK 9,71 ab 9,38 ab 8,76 ab 8,72 ab 8,65 ab 8,56 ab 9,76 ab 9,52 ab 8,94 ab 8,77 ab 8,65 ab 8,53 ab 10,97 a 10,60 a 10,23 a 10,02 a 9,87 a 9,76 a 10,66 a 10,34 ab 10,22 a 9,93 a 9,81 a 9,71 a 8,42 b 8,31 b 8,04 b 7,90 b 7,84 b 7,69 b * * * * * * 12,15 11,55 9,80 10,26 10,02 9,80 Ghi chú: Các số trung bình cột theo sau nhiều chữ giống không khác biệt qua phép kiểm định Duncan Số liệu chuyển sang logX trước phân tích thống kê *: khác biệt mức ý nghĩa 5% NSĐK: ngày sau đông khô mannitol 10%, sữa béo 10% 20% cho hiệu phục hồi tế bào xạ khuẩn Qua thời điểm tồn trữ, tế bào xạ khuẩn có giảm theo thời gian đảm bảo hiệu phục hồi tốt, giảm so với đối chứng Trong đó, sữa béo chất phụ gia cho hiệu tốt so với hai chất phụ gia lại Qua kết thấy phương pháp đông khô giúp tế bào xạ khuẩn tồn lâu, mật số có giảm cho hiệu phục hồi tốt sau thời gian dài tồn trữ Nên phương pháp đông khô tế bào phương pháp tốt để thực tồn trữ tế bào cách lâu tốt đồng thời sữa chất phụ gia cần thiết giúp hồi phục tế bào từ trạng thái tiềm sinh sau đông khô tình trạng tăng tưởng Về thời gian tồn trữ chế phẩm đông khô Qua Bảng so sánh thời gian tồn trữ sản phẩm xạ khuẩn đông khô tất nghiệm thức cho thấy nghiệm thức khác biệt ý nghĩa thống kê mật số qua thời gian tồn trữ khảo sát Như vậy, phương pháp đông khô thể hiệu tồn trữ tế bào xạ khuẩn ổn định qua tháng nhiệt độ phòng Kết cho thấy phương pháp tồn trữ triển vọng định hướng phát triển sản phẩm sinh học thương mại Qua thí nghiệm thời gian tồn trữ xạ khuẩn cho thấy tế bào xạ khuẩn bảo vệ đông khô sau có khả hoạt động tốt phục hồi Các nghiệm thức bao gồm glucose 10%, Tạp chı́ Khoa học Trường Đại học Cầ n Thơ Phần B: Nông nghiệp, Thủy sản Công nghệ Sinh học: 43 (2016): 1-7 Bảng 4: Khảo sát khả phục hồi chế phẩm nghiệm thức qua thời gian đến 150 ngày sau đông khô STT Mức ý nghĩa CV (%) Thời gian khảo sát NSĐK 30 NSĐK 60 NSĐK 90 NSĐk 120 NSĐK 150 NSĐK Mật số xạ khuẩn log (cfu/ml) chất phụ gia cho vào chế phẩm đông khô Glucose 10% Mannitol 10% Sữa béo 10% Sữa béo 20% Đối chứng 9,71 9,76 10,97 10,66 8,42 9,38 9,52 10,60 10,34 8,31 8,76 8,94 10,23 10,22 8,04 8,72 8,77 10,02 9,93 7,90 8,65 8,65 9,87 9,81 7,84 8,56 8,53 9,76 9,71 7,69 ns ns ns ns ns 11,55 11,03 13,62 7,00 8,47 Ghi chú: Các số trung bình cột theo sau nhiều chữ giống không khác biệt qua phép kiểm định Duncan Số liệu chuyển sang logx trước phân tích thống kê ns: không khác biệt mức ý nghĩa 5% NSĐK: ngày sau đông khô Hình 1: Mật số tế bào xạ khuẩn nghiệm thức xử lý chất phụ gia sau đông khô khảo sát thời gian 90 ngày sau đông khô (hình chụp nồng độ pha loãng 10-6) Tạp chı́ Khoa học Trường Đại học Cầ n Thơ Phần B: Nông nghiệp, Thủy sản Công nghệ Sinh học: 43 (2016): 1-7 Lê Thị Bích 2011 Đánh giá khả đối kháng xạ khuẩn nấm Fusarium oxysporum f.sp niveum điều kiện phòng thí nghiệm Luận văn tốt nghiệp kỹ sư Bảo vệ thực vật Bộ môn Bảo vệ thực vật Khoa Nông nghiệp Sinh học Ứng dụng Trường Đại học Cần Thơ Nguyễn Thị Kim Xuyến 2011 Nghiên cứu môi trường nhân nuôi tồn trữ vi khuẩn Pseudomnas aeruginosa 231-1, Luận văn Thạc sĩ Bảo vệ thực vật, Khoa Nông nghiệp Sinh học Ứng dụng, Trường Đại học Cần Thơ Nguyễn Thị Thu Nga Nguyễn Thị Mai Thảo 2013 Hiệu xạ khuẩn phòng trừ bệnh chết nấm Rhizoctonia solani gây cải bắp Hội thảo quốc gia Bệnh hại thực vật Việt Nam lần thứ 12 trường Đại học Vinh 2021/7/2013, 229-236 Nguyễn Thị Thùy Linh 2011 Phòng trị bệnh đốm vi khuẩn ớt (Xanthomonas campestric pv vesicatoria) xạ khuẩn điều kiện in vitro nhà lưới Luận văn tốt nghiệp kỹ sư Bảo vệ thực vật Bộ môn Bảo vệ thực vật Khoa Nông nghiệp Sinh học Ứng dụng Trường Đại học Cần Thơ Tô Huỳnh Như 2012 Đánh giá khả đối kháng hiệu phòng trị xạ khuẩn nấm Colletotrichum sp ST2 gây bệnh thán thư ớt Luận văn tốt nghiệp thạc sĩ chuyên ngành Bảo vệ thực vật, Khoa Nông nghiệp Sinh học Ứng Dụng, Trường Đại học Cần Thơ Yan Min V., Da Quun T., Shi Min T and Ding Z 2000 The antagonism of 26 strains Streptomyces spp against several vegetables pathogens, Hebaei Agric University, 23: 65-68 KẾT LUẬN  Gelatin 5% 10%, sucrose 5% thể hiệu bảo vệ tế bào xạ khuẩn 54 RM tốt trình đông khô  Sữa béo 10% 20%, glucose 10% mannitol 10% ghi nhận hiệu phục hồi tế bào xạ khuẩn 54 RM tốt sau trình đông khô  Khảo sát thời gian tồn trữ chế phẩm xạ khuẩn 54 RM với chất bảo vệ sucrose 5% chất phụ gia sữa béo 10% 20% dạng bột đông khô, mật số chế phẩm xạ khuẩn 54 RM sau đông khô không giảm ý nghĩa tháng tồn trữ nhiệt độ phòng TÀI LIỆU THAM KHẢO Coman, G and M., Radvan 2009 preliminary studies regarding the behaviour of selected streptomyces strains as xylanases producers preserved by lyophilization Scientific study & research, 4: 359 – 540 Costa, E.,J Usall, N TexidO, N Garcia, I Vinas 2000 Effect of protective agents, rehydration media and initial cell concentration on viability of Pantoea agglomerans strain CPA-2 subject to freeze-drying, Microbiology, 89: 793-800 Đào Thị Lương, Phạm Văn Ty, Trịnh Thành Trung Nguyễn Thị Anh Đào 2002 Nghiên cứu đặc điểm sinh học xạ khuẩn kháng Pseudomonas solanacearum gây héo trồng Trung tâm Công nghệ Sinh học – Đại học Quốc gia Hà Nội Đoàn Thị Kiều Tiên 2012 Đánh giá khả gây hại dòng nấm Fusarium oxysporum gây bệnh héo rũ mè (Sesamum indicum L.) bước đầu nghiên cứu hiệu phòng trừ biện pháp hóa học sinh học Luận văn thạc sĩ ngành Bảo vệ thực vật, Khoa Nông nghiệp Sinh học Ứng dụng Trường Đại học Cần Thơ