TRƯỜNG ĐẠI HỌC TÔN ĐỨC THẮNG KHOA KHOA HỌC ỨNG DỤNG NGÀNH CÔNG NGHỆ SINH HỌC MH. KỸ THUẬT DI TRUYỀN THƯ VIỆN BỘ GEN VÀ THƯ VIỆN cDNA GVHD: TS. Trần Thị Dung NỘI DUNG CHÍNH THƯ VIỆN BỘ GEN THƯ VIỆN cDNA THƯ VIỆN BỘ GEN KHÁI NIỆM QUÁ TRÌNH THÀNH LẬP KHÁI NIỆM • Thư viện gen (Ngân hàng gen) • Chia nhỏ DNA bộ gen và chèn chúng vào tế bào chủ Chứa tất cả DNA bộ gen của sinh vật QUÁ TRÌNH THÀNH LẬP TÁCH CHIẾT DNA ĐƯA VÀO TẾ BÀO CẮT TẠO DÒNG GẮN VECTOR SÀNG LỌC TÁCH CHIẾT VÀ TINH SẠCH DNA » » » » » Lấy mẫu vật (nuôi cấy vi sinh vật, nghiền mẫu mô động vật, thực vật ở nhiệt độ thấp) Phá vỡ màng tế bào và màng nhân Loại bỏ các thành phần không mong muốn trong mẫu chủ yếu là protein.(chiết xuất bằng phenol) Cô đặc DNA lại bằng ethanol hay isopropanol lạnh Rửa lại DNA bằng ethanol lạnh và đem bảo quản DNA trong dung dịch TE (ở nhiệt độ thấp) PHÂN CẮT DNA BỘ GEN • • Sử dụng enzyme cắt giới hạn RT (Reverse Transcriptase) Mỗi loại enzyme cắt tại một vị trí đặc hiệu trên DNA và vector chuyển gen => Tạo ra 2 thư viện gen khác nhau khi cắt bằng 2 loại enzyme RT