BENZYLPENICILIN KALI Benzylpenicillinum kalicum C16H17KN2O4S P.t.l: 372,5 Benzylpenicilin kali kali (2S,5R,6R)-3,3-dimethyl-7-oxo-6-[(phenylacetyl)amino]-4-thia-1azabicyclo[3.2.0]heptan-2-carboxylat, sản xuất cách nuôi cấy chủng Penicillium notatum chủng họ hay điều chế phương pháp khác; phải chứa từ 96,0 đến 102,0% C16H17KN2O4S, tính theo chế phẩm làm khô Tính chất Bột kết tinh màu trắng gần trắng Rất tan nước, thực tế không tan dầu béo dầu parafin Định tính Có thể chọn hai nhóm định tính sau: Nhóm 1: A,D Nhóm 2: B, C, D A Phổ hồng ngoại (Phụ lục 4.2) chế phẩm phải phù hợp với phổ hồng ngoại benzylpenicilin kali chuẩn (ĐC) B Tiến hành sắc ký lớp mỏng theo định tính penicilin (Phụ lục 8.2) C Phản ứng B phép thử phản ứng màu penicilin cephalosporin (Phụ lục 8.3) D Chế phẩm cho phản ứng (A) ion kali (Phụ lục 8.1) pH Từ 5,5 đến 7,5 (Phụ lục 6.2) Hòa tan 2,0 g chế phẩm nước carbon dioxyd (TT) pha loãng thành 20 ml với dung môi Góc quay cực riêng Từ +270o đến +300o tính theo chế phẩm làm khô (Phụ lục 6.4) Hòa tan 0,500 g chế phẩm nước carbon dioxyd (TT) pha loãng thành 25,0 ml với dung môi Độ hấp thụ ánh sáng Hòa tan 94,0 mg chế phẩm nước pha loãng thành 50,0 ml với dung môi Đo độ hấp thụ ánh sáng (Phụ lục 4.1) dung dịch thu bước sóng 325 nm, 280 nm cực đại hấp thụ 264 nm, pha loãng dung dịch cần thiết để đo độ hấp thụ 264 nm Độ hấp thụ 325 nm 280 nm không lớn 0,10 cực đại hấp thụ 264 nm phải từ 0,80 đến 0,88 tính theo dung dịch không pha loãng (1,88 g/l) Kiểm tra độ phân giải máy quang phổ (Phụ lục 4.1), tỷ lệ độ hấp thụ phải 1,7 Tạp chất liên quan Không 1,0% Xác định phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao (Phụ lục 5.3) Dung dịch thử: Hòa tan 80,0 mg chế phẩm nước pha loãng thành 20,0 ml với dung môi Dung dịch đối chiếu: Hòa tan 50,0 mg benzylpenicilin kali chuẩn (ĐC) nước pha loãng thành 50,0 ml với dung môi Pha loãng 2,0 ml dung dịch thu thành 50,0 ml nước Điều kiện sắc ký giống phần định lượng Tiêm dung dịch đối chiếu, tiến hành sắc ký đẳng dòng với thành phần pha động giống phần định lượng Tiêm dung dịch thử, đặt chương trình pha động cho ban đầu rửa giải với pha động đẳng dòng giống trên; sau pic benzylpenicilin rửa giải khỏi cột, thay đổi tỷ lệ pha động theo chương trình sau: Thời gian (phút) Pha động A (% tt/tt) Pha động B (% tt/tt) Ghi 0-20 70→0 30→100 Gradient tuyến tính 20-35 100 đẳng dòng 35-50 70 30 Cân cột Tiêm nước, tiến hành sắc ký giống với dung dịch thử để thu sắc ký đồ mẫu trắng Trên sắc ký đồ dung dịch thử: diện tích pic phụ trừ pic tương ứng với mẫu trắng, không lớn diện tích pic dung dịch đối chiếu Mất khối lượng làm khô Không 1,0 % (Phụ lục 9.6) (1,00 g; 100 – 105 oC) Nội độc tố vi khuẩn Phải nhỏ 0,16 IU/mg (Phụ lục 13.2; phương pháp đo màu điểm dừng) Nếu chế phẩm dùng để pha thuốc tiêm mà không loại bỏ nội độc tố vi khuẩn phải đạt yêu cầu Định lượng Phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao (Phụ lục 5.3) Dung dịch đệm phosphat pH 3,5: Dung dịch kali dihydrophosphat 6,8% (TT) điều chỉnh pH đến 3,5 dung dịch có chứa 500 g/l dung dịch acid phosphoric M (TT) Pha động A: Dung dịch đệm phosphat pH 3,5 - methanol - nước (10 : 30 : 60) Pha động B: Dung dịch đệm phosphat pH 3,5 - nước - methanol (10 : 40 : 50) Dung dịch thử: Hòa tan 50,0 mg chế phẩm nước pha loãng thành 50,0 ml với dung môi Dung dịch đối chiếu (1): Hòa tan 50,0 mg benzylpenicilin natri chuẩn (ĐC) nước pha loãng thành 50,0 ml với dung môi Dung dịch phân giải: Hòa tan 10 mg benzylpenicilin natri chuẩn (ĐC) 10 mg acid phenylacetic (TT) nước, pha loãng thành 50,0 ml với dung môi Dung dịch đối chiếu (2): Pha loãng 1,0 ml dung dịch đối chiếu (1) thành 20,0 ml nước Pha loãng 1,0 ml dung dịch thu thành 50,0 ml nước Điều kiện sắc ký: Cột thép không gỉ (25 cm x 4,6 mm) nhồi pha tĩnh C (5 µm) Detector quang phổ tử ngoại đặt bước sóng 225 nm Tốc độ dòng: 1,0 ml/phút Thể tích tiêm: 20 µl Cách tiến hành: Cân cột với pha động hỗn hợp pha động A pha động B (70 : 30) Tiêm dung dịch phân giải Độ phân giải hai pic phải 6,0 (điều chỉnh tỷ lệ pha động A pha động B cần thiết) tỷ số phân bố khối lượng (D m) pic thứ hai (benzylpenicilin) phải từ 4,0 đến 6,0 Tiêm dung dịch đối chiếu (2), điều chỉnh hệ thống để thu tỷ lệ tín hiệu độ nhiễu Tiêm dung dịch thử dung dịch đối chiếu (1) Tính hàm lượng benzylpenicilin natri dựa vào diện tích pic đáp ứng Hàm lượng benzylpenicilin kali hàm lượng benzylpenicilin natri nhân với 1,045 Bảo quản Bao bì kín, nhiệt độ không 25 oC Nếu chế phẩm vô khuẩn, bảo quản bao bì vô khuẩn, bảo đảm kín Nhãn Phải ghi rõ chế phẩm nội độc tố vi khuẩn Chế phẩm Thuốc tiêm Loại thuốc Kháng khuẩn