Nghiên cứu phương pháp định lượng một số glycoside tim trong dược phẩm và dược liệu

ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN - BÙI THỊ TÂM NGHIÊN CỨU PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LƯỢNG MỘT SỐ GLYCOSIDE TIM TRONG DƯỢC PHẨM VÀ DƯỢC LIỆU LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC Hà Nội – Năm 2015 ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN - BÙI THỊ TÂM NGHIÊN CỨU PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LƯỢNG MỘT SỐ GLYCOSIDE TIM TRONG DƯỢC PHẨM VÀ DƯỢC LIỆU Chuyên ngành : Hoá Phân Tích Mã số : 60440118 LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC NGƢỜI HƢỚNG DẪN KHOA HỌC: PGS.TS NGUYỄN VĂN RI Hà Nội – Năm 2015 Luận văn thạc sĩ Bùi Thị Tâm LỜI CẢM ƠN! Sau thời gian học tập nghiên cứu hoàn thành luận văn cao học với đề tài: “Nghiên cứu phương pháp định lượng số glycoside tim dược phẩm dược liệu” dƣới hƣớng dẫn, bảo PGS.TS Nguyễn Văn Ri thầy cô, anh chị em, bạn môn Hóa phân tích Với lòng kính trọng biết ơn sâu sắc xin chân thành cảm ơn PGS.TS Nguyễn Văn Ri, ngƣời giao đề tài tận tình dẫn trình hoàn thành luận văn Tôi xin chân thành cảm ơn tất quý Thầy Cô môn hóa Phân tích khoa Hóa học trƣờng Đại học Khoa học Tự nhiên - Đại học Quốc gia Hà Nội tạo điều kiện thuận lợi cho em suốt trình làm luận văn Tôi xin chân thành gửi lời cảm ơn đến ThS Nguyễn Công Tuấn – phòng máy HPLC tạo điều kiện giúp đỡ trình hoàn thành luận văn Cuối xin chân thành cảm ơn toàn thể anh chị, bạn phòng thí nghiệm Hoá phân tích, bạn cao học K23 giúp đỡ thời gian thực đề tài Luận văn thạc sĩ Bùi Thị Tâm MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN! MỞ ĐẦU .1 CHƢƠNG 1: TỔNG QUAN Error! Bookmark not defined 1.1 Khái quát chung hợp chất glycoside tim Error! Bookmark not defined 1.1.1 Cấu tạo, tên gọi Error! Bookmark not defined 1.1.2 Tác dụng hợp chất glycoside tim Error! Bookmark not defined 1.1.3 Liên quan cấu trúc tác dụng Error! Bookmark not defined 1.1.4 Tính chất glycoside tim Error! Bookmark not defined 1.1.5 Phân bố tự nhiên Error! Bookmark not defined 1.1.6 Một số loại thuốc chứa glycoside tim Error! Bookmark not defined 1.2 Khái quát digoxin digitoxin Error! Bookmark not defined 1.2.1 Digoxin Error! Bookmark not defined 1.2.2 Digitoxin Error! Bookmark not defined 1.3 Các phƣơng pháp xác định glycoside tim Error! Bookmark not defined 1.3.1 Phƣơng pháp sắc kí xác định glycoside tim Error! Bookmark not defined 1.3.2 Phƣơng pháp khác xác định glycoside tim Error! Bookmark not defined 1.3.3 Phƣơng pháp chiết tách glycoside tim khỏi mẫu thựcError! Bookmark not 1.3.4 Phƣơng pháp định tính định lƣợng Error! Bookmark not defined CHƢƠNG 2: THỰC NGHIỆM Error! Bookmark not defined 2.1 Mục tiêu đối tƣợng nghiên cứu Error! Bookmark not defined 2.1.1 Mục tiêu nghiên cứu Error! Bookmark not defined 2.1.2 Đối tƣợng nghiên cứu Error! Bookmark not defined 2.2 Chất chuẩn, hoá chất, thiết bị Error! Bookmark not defined 2.2.1 Chất chuẩn Error! Bookmark not defined 2.2.2 Hoá chất Error! Bookmark not defined 2.2.3 Thiết bị, dụng cụ Error! Bookmark not defined 2.3 Phƣơng pháp phân tích Error! Bookmark not defined Luận văn thạc sĩ Bùi Thị Tâm 2.3.1 Phƣơng pháp xử lý mẫu Error! Bookmark not defined 2.3.2 Phƣơng pháp phân tích Error! Bookmark not defined 2.4 Thực nghiệm Error! Bookmark not defined 2.4.1 Khảo sát điều kiện tối ƣu Error! Bookmark not defined 2.4.2 Xây dựng đƣờng chuẩn Error! Bookmark not defined 2.4.3 Giới hạn phát giới hạn định lƣợng Error! Bookmark not defined 2.4.4 Đánh giá phƣơng pháp phân tích Error! Bookmark not defined CHƢƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN Error! Bookmark not defined 3.1 Tối ƣu hoá điều kiện chạy sắc ký Error! Bookmark not defined 3.1.1 Van bơm mẫu Error! Bookmark not defined 3.1.2 Cột tách Error! Bookmark not defined 3.1.3 Detector Error! Bookmark not defined 3.1.4 Bƣớc sóng hấp thụ cực đại glycoside timError! Bookmark not defined 1.1.5 Khảo sát chọn thành phần pha động tốc độ dòng.Error! Bookmark not defined 3.1.6 Khảo sát độ lặp lại thiết bị Error! Bookmark not defined 3.1.7 Điều kiện tối ƣu cho trình phân tích glycoside timError! Bookmark not define 3.2 Đƣờng chuẩn glycoside tim Error! Bookmark not defined 3.2.1 Khảo sát phụ thuộc diện tích pic vào nồng độ chấtError! Bookmark not defined 3.2.2 Dựng đƣờng chuẩn Error! Bookmark not defined 3.2.3 Giới hạn phát giới hạn định lƣợng Error! Bookmark not defined 3.3 Đánh giá phƣơng pháp phân tích Error! Bookmark not defined 3.3.1 Đánh giá độ lặp lại phƣơng pháp phân tíchError! Bookmark not defined 3.3.2 Đánh giá hiệu suất thu hồi phƣơng pháp Error! Bookmark not defined 3.4 Phân tích mẫu thực tế Error! Bookmark not defined KẾT LUẬN Error! Bookmark not defined TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt: Tiếng Anh: Luận văn thạc sĩ Bùi Thị Tâm DANH MỤC HÌNH VẼ Hình 3.1: Phổ UV glycoside tim Error! Bookmark not defined Hình 3.2: Sắc đồ tách glycoside tim tỉ lệ dung môi pha động khác Error! Bookmark not defined Hình 3.3: Sắc đồ tách glycoside tim tốc độ dòng pha động khác Error! Bookmark not defined Hình 3.4: sắc đồ digoxin điều kiện tối ƣu Error! Bookmark not defined Hình 3.5: Sắc đồ digitoxin điều kiện tối ƣu Error! Bookmark not defined Hình 3.6: Sắc đồ tách chất glycoside tim ở điều kiện tối ƣu.Error! Bookmark not defined Hình 3.8: Đƣờng chuẩn 02 glycoside tim nghiên cứu luận văn Error! Bookmark not defined Hình 3.9: Sắc đồ mẫu thực Error! Bookmark not defined Luận văn thạc sĩ Bùi Thị Tâm DANH MỤC BẢNG BIỂU Bảng 1.1: Tên gọi, công thức cấu tạo số glycoside tim [21] Error! Bookmark not defined Bảng 2.2: Nồng độ dung dịch chuẩn glycoside tim Error! Bookmark not defined Bảng 3.1: Khảo sát tỉ lệ pha động digoxin Error! Bookmark not defined Bảng 3.2: Khảo sát tốc độ pha động digoxin Error! Bookmark not defined Bảng 3.3: Khảo sát tỉ lệ pha động digitoxin Error! Bookmark not defined Bảng 3.4: Khảo sát tốc độ pha động digitoxin Error! Bookmark not defined Bảng 3.5: Độ lặp lại thời gian lƣu Glycoside tim Error! Bookmark not defined Bảng 3.6: Độ lặp lại diện tích píc Glycoside tim Error! Bookmark not defined Bảng 3.7: Các dung dịch đƣờng chuẩn Error! Bookmark not defined Bảng 3.8: Diện tích pic trung bình thu đƣợc glycoside tim Error! Bookmark not defined Bảng 3.9: Giới hạn phát giới hạn định lƣợng Glycoside tim Error! Bookmark not defined Bảng 3.10: Giới hạn phát giới hạn định lƣợng phƣơng pháp Error! Bookmark not defined Bảng 3.12: Hiệu suất thu hồi glycoside tim Error! Bookmark not defined Bảng 3.13: Kết thu đƣợc mẫu Error! Bookmark not defined Bảng 3.14: Kết thu đƣợc mẫu Error! Bookmark not defined Bảng 3.15: Kết thu đƣợc mẫu Error! Bookmark not defined Luận văn thạc sĩ Bùi Thị Tâm BẢNG KÝ HIỆU CÁC CHỮ CÁI VIẾT TẮT ACN: Acetonitrin DD: dung dịch HPLC: High performance liquid chromatography LC-MS: liquid chromatography – spectrometry LOD: Limit of detection LOQ: Limit of quantity RP-HPLC: Reversed-phase performance liquid chromatography RSD: Relative standard deviation PDA: Photo-diode – array SD: Standard deviation UV: Ultraviolet UV- VIS: Ultraviolet visible Luận văn thạc sĩ Bùi Thị Tâm MỞ ĐẦU Ra đời từ sớm phƣơng pháp sắc kí lỏng – lỏng đƣợc phát triển mạnh vào cuối kỉ 20 Vào năm 1970, sắc kí đƣợc phát triển mạnh đạt đƣợc thành tựu đáng kể nhƣ tách đƣợc hỗn hợp chất giống nhƣ nguyên tố đất hiếm, ankaloid, hydrocacbon mẫu dầu Ngày nhiều cải tiến đƣợc thực để nâng cao độ nhạy phƣơng pháp, nhƣ sử dụng pha tĩnh mới, detector có độ nhạy cao HPLC (sắc kí lỏng hiệu cao) kỹ thuật thiếu phân tích để quản lí mảng chất phân tích mà phƣơng pháp khác đáp ứng đƣợc Với việc áp dụng đƣợc cho nhiều loại đối tƣợng chất phân tích, từ không phân cực nhƣ: chất thơm PAHs, axit béo, dƣợc phẩm (digoxin, gitoxin, diginatin,…), mẫu sinh học phân tích lâm sàng (theobromine, theophilline, ) đến phân cực nhƣ: axit amin, phenol,…, phƣơng pháp RP – HPLC – UV ( RP – HPLC: sắc kí lỏng hấp phụ pha ngƣợc - Reversed-phase performance liquid chromatography) có độ nhạy tốt, độ chọn lọc cao hiệu tách cao, pic cân đối Thêm vào pha động thƣờng hỗn hợp nƣớc dung môi phân cực nên rẻ tiền, kinh tế Đây phƣơng pháp thành công [6,7] Glycoside tim nhóm chất bắt đầu đƣợc sử dụng y học bác sĩ ngƣời Anh - Withering vào năm 1985, glycoside tim có vị trí quan trọng thuốc điều trị bệnh tim Trong số nhiều loại glycoside tim có tự nhiên digoxin digitoxin đƣợc sử dụng rộng rãi điều trị suy tim sung huyết, loạn nhịp tim đƣợc nghiên cứu nhiều Tuy nhiên các chất glycoside tim thƣờng độc, sử dụng hàm lƣợng cho phép dẫn đến ngộ độc, chí dẫn tử vong cho ngƣời [18] Chính cần xác định xác hàm lƣợng glycoside tim loại thuốc để đƣa vào điều trị đạt hiệu cao không sử dụng liều ảnh hƣởng tới sức khỏe ngƣời tiêu dùng đƣợc trọng Luận văn thạc sĩ Bùi Thị Tâm Yêu cầu đặt phải có phƣơng pháp phù hợp định lƣợng glycoside tim dƣợc liệu, dƣợc phẩm cách nhanh chóng xác Việc ứng dụng phân tích HPLC vào phân tích thuốc dƣợc phẩm đƣợc làm nhiều giới nhƣng Việt Nam tƣơng đối mẻ chƣa có nhiều công trình lĩnh vực Chính lí xin lựa chọn thực đề tài “Nghiên cứu phương pháp định lượng số glycoside tim dược phẩm dược liệu” Trong đề tài sử dụng phƣơng pháp sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) ghép nối detector PDA để định lƣợng số glycoside tim dƣợc phẩm dƣợc liệu Luận văn thạc sĩ Bùi Thị Tâm TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt: Bộ y tế (2010), Dược điển Việt Nam, NXB y học, Hà Nội Bộ y tế (2012), Dược thư quốc gia Việt Nam, NXB y học, Hà Nội Phạm Luận (2000), Cơ sở lý thuyết sắc ký lỏng hiệu cao, NXB Đại học Quốc gia Hà Nội, Hà Nội Lê Đức Ngọc (2011), Bài giảng nhập môn xử lý số liệu kế hoạch hoá thực nghiệm, Hà Nội Nguyễn Đình Thành (2011), Cơ sở phƣơng pháp phổ ứng dụng hóa học, NXB khoa học kỹ thuật, Hà Nội Nguyễn Văn Ri (2006), Chuyên đề phương pháp tách chất, NXB Đại học Quốc gia Hà Nội, Hà Nội Nguyễn Văn Ri (2013), Các phương pháp tách, Trƣờng Đại học Khoa học Tự nhiên, ĐHQG Hà Nội, Hà Nội Tạ Thị Thảo (2006), Bài giảng thống kê hoá phân tích, Trƣờng Đại học Khoa học Tự Nhiên, Hà Nội Ngô Văn Thu (2004), Bài giảng dược liệu tập 1, Trƣờng Đại học Dƣợc Hà Nội, Hà Nội Tiếng Anh: 10 A Jedlicka, T Grafnetterova´, V Miller (2003), “HPLC method with UV detection for evaluation of digoxin tablet dissolution in acidic medium after solid-phase extraction”, Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis,33, pp 109 – 115 11 Belachew Desta, E Kwong and K M Mcerlane (1981), “ Sepration of digoxin, digitoxin and their potential metabolites, impurities or Luận văn thạc sĩ Bùi Thị Tâm degradation products by High – performance liquid choramatography”, Journal of Chromatography, 240, pp 137-143 12 Federica Pellati, Renato Bruni, Maria Grazia Bellardi, Assunta Bertaccini, Stefania Benvenuti (2009), “Optimization and validation of a high- performance liquid chromatography method for the analysis of cardiac glycosides in Digitalis lanata”, Journal of Chromatography A, 1216, pp 3260–3269 13 Ferenc Orosz, Mimi Nuridsa’ny and Judid Ova’di (1986), “Isolation and Quantitative Determination of Some Cardioactive Glycosides from Digitalis lanata by High-Performance Liquid Chromatography”, Analytical biochemistry, 156, pp 171 – 175 14 F Erni and R W Frei (1976), “A Comoarision of reversed – phase and partiion High performance liquid chromatography of some digitalis glycoside”, Journal of Chromarography, 130 , pp 169-180 15 Kevin L Kelly, Bruce A Kimball, John J Johnston (1995), Quantitation of digitoxin, digoxin, and their metabolites by high-performance liquid chromatography using pulsed amperometric detection”, Journal of Chromatography A, 711, pp 289-295 16 L.K Hearn, P.P Subedi (2009), “ Determining levels of steviol glycosides in the leaves of Stevia rebaudiana by near infrared reflectance spectroscopy”, Journal of Food Composition and Analysis, 22, pp 165–168 17 Ralf Dieter Josephs, Adeline Daireaux, Steven Westwood, Robert Ian Wielgosz (2010), “Simultaneous determination of various cardiac glycosides by liquid chromatography -hybrid mass spectrometry for the purity assessment of the therapeutic monitored drug digoxin”, Journal of Chromatography A, 1217, pp 4535–4543 18 Santosh J Vetticaden (1990), “ Review Chromatography of cardiac glycosides”, Journal of Chromatography,531, pp 215 - 234 Luận văn thạc sĩ Bùi Thị Tâm 19 Sarah Kohls, Barbara M Scholz-Bottcher, Jorg Teske, Patrick Zark, Jurgen Rullkotter (2012), “Cardiac glycosides from Yellow Oleander (Thevetia peruviana) seed”, Phytochemistry, 75, pp 114-127 20 V Ya Davydov, M Elizalde Gonzalez and A V Kiselev (1981), “ High performance liquid choramatography of cardiac glycosides”, Journal of Chromatography, 204, pp 293 – 301 21 V Ya Davydov, M Elizalde Gonzalez and A V Kiselev (1982), “Correlation between the retention of cardiac glicosides in reversed – phase High – performance liquid choramatography with a diphenylsil stationary phase, the strucure of their molecules and their biological activitty”, Journal of Chromatography,248, pp 49 -62 22 Youichi Fujii, Hitoml Fukuda, Yumko Saito and Mitsuru Yamazaki (1980), “Separation of digitalis glycosides by micro high-performance liquid chromatography”, Journal of Chromatography, 202 , pp 139- 143 23 Youichi Fujii, Hitoml Fukuda, Yumko Saito and Mitsuru Yamazaki (1989), “High – performance liquid choramatography determination of secondary cardiac glycosides in digitalis purpurea leaves”, Journal of Chromatography, 419, pp 319-325 24 Youichi Fujii, Yukari Mitsuru Yamazaki (1988), “Micro High – performance liquid choramatographic determination of cardiac glycosides in -methydioxin and digoxin tablets”, Journal of Chromatography, 448, pp 157-l64 25 Zozan B Todorovic’, Miodrag L Lazic’, Vlada B Veljkovic’ (2009), “Validation of an HPLC–UV method for the determination of digoxin residues on the surface of manufacturing equipment”, Joural of Serbian Chemical Societyl, 74 (10), pp 1143–1153 [...]... LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt: 1 Bộ y tế (2010), Dược điển Việt Nam, NXB y học, Hà Nội 2 Bộ y tế (2012), Dược thư quốc gia Việt Nam, NXB y học, Hà Nội 3 Phạm Luận (2000), Cơ sở lý thuyết sắc ký lỏng hiệu năng cao, NXB Đại học Quốc gia Hà Nội, Hà Nội 4 Lê Đức Ngọc (2011), Bài giảng nhập môn xử lý số liệu và kế hoạch hoá thực nghiệm, Hà Nội 5 Nguyễn Đình Thành (2011), Cơ sở các phƣơng pháp phổ ứng dụng trong. .. hóa học, NXB khoa học và kỹ thuật, Hà Nội 6 Nguyễn Văn Ri (2006), Chuyên đề các phương pháp tách chất, NXB Đại học Quốc gia Hà Nội, Hà Nội 7 Nguyễn Văn Ri (2013), Các phương pháp tách, Trƣờng Đại học Khoa học Tự nhiên, ĐHQG Hà Nội, Hà Nội 8 Tạ Thị Thảo (2006), Bài giảng thống kê trong hoá phân tích, Trƣờng Đại học Khoa học Tự Nhiên, Hà Nội 9 Ngô Văn Thu (2004), Bài giảng dược liệu tập 1, Trƣờng Đại... Assunta Bertaccini, Stefania Benvenuti (2009), “Optimization and validation of a high- performance liquid chromatography method for the analysis of cardiac glycosides in Digitalis lanata”, Journal of Chromatography A, 1216, pp 3260–3269 13 Ferenc Orosz, Mimi Nuridsa’ny and Judid Ova’di (1986), “Isolation and Quantitative Determination of Some Cardioactive Glycosides from Digitalis lanata by High-Performance... “Separation of digitalis glycosides by micro high-performance liquid chromatography”, Journal of Chromatography, 202 , pp 139- 143 23 Youichi Fujii, Hitoml Fukuda, Yumko Saito and Mitsuru Yamazaki (1989), “High – performance liquid choramatography determination of secondary cardiac glycosides in digitalis purpurea leaves”, Journal of Chromatography, 419, pp 319-325 24 Youichi Fujii, Yukari và Mitsuru Yamazaki... Westwood, Robert Ian Wielgosz (2010), “Simultaneous determination of various cardiac glycosides by liquid chromatography -hybrid mass spectrometry for the purity assessment of the therapeutic monitored drug digoxin”, Journal of Chromatography A, 1217, pp 4535–4543 18 Santosh J Vetticaden (1990), “ Review Chromatography of cardiac glycosides”, Journal of Chromatography,531, pp 215 - 234 4 Luận văn thạc sĩ Bùi... Sarah Kohls, Barbara M Scholz-Bottcher, Jorg Teske, Patrick Zark, Jurgen Rullkotter (2012), “Cardiac glycosides from Yellow Oleander (Thevetia peruviana) seed”, Phytochemistry, 75, pp 114-127 20 V Ya Davydov, M Elizalde Gonzalez and A V Kiselev (1981), “ High performance liquid choramatography of cardiac glycosides”, Journal of Chromatography, 204, pp 293 – 301 21 V Ya Davydov, M Elizalde Gonzalez and... chromatography of some digitalis glycoside , Journal of Chromarography, 130 , pp 169-180 15 Kevin L Kelly, Bruce A Kimball, John J Johnston (1995), Quantitation of digitoxin, digoxin, and their metabolites by high-performance liquid chromatography using pulsed amperometric detection”, Journal of Chromatography A, 711, pp 289-295 16 L.K Hearn, P.P Subedi (2009), “ Determining levels of steviol glycosides in the leaves... in digitalis purpurea leaves”, Journal of Chromatography, 419, pp 319-325 24 Youichi Fujii, Yukari và Mitsuru Yamazaki (1988), “Micro High – performance liquid choramatographic determination of cardiac glycosides in -methydioxin and digoxin tablets”, Journal of Chromatography, 448, pp 157-l64 25 Zozan B Todorovic’, Miodrag L Lazic’, Vlada B Veljkovic’ (2009), “Validation of an HPLC–UV method for the