Nghiên cứu thành phần hóa học của lá cây cà phê chè (coffea arabica, rubiacea)

1 ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƢỜNG ĐẠI HỌC SƢ PHẠM ––––––––––––––––– NGUYỄN QUỐC NAM HẢI NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA LÁ CÂY CÀ PHÊ CHÈ (COFFEA ARABICA, RUBIACEA) LUẬN VĂN THẠC SĨ HOÁ HỌC THÁI NGUYÊN - 2009 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƢỜNG ĐẠI HỌC SƢ PHẠM ––––––––––––––––– NGUYỄN QUỐC NAM HẢI NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA LÁ CÂY CÀ PHÊ CHÈ (COFFEA ARABICA, RUBIACEA) CHUYÊN NGÀNH: HOÁ HỌC HỮU CƠ MÃ SỐ: 60.44.27 LUẬN VĂN THẠC SĨ HOÁ HỌC NGƢỜI HƢỚNG DẪN KHOA HỌC: TS NGUYỄN QUYẾT TIẾN THÁI NGUYÊN - 2009 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan công trình nghiên cứu riêng tôi, số liệu, kết nêu luận văn trung thực chƣa đƣợc công bố công trình khác Tác giả NGUYỄN QUỐC NAM HẢI Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn LỜI CẢM ƠN Bản luận văn đƣợc hoàn thành phòng Hoạt chất Sinh học, Viện Hóa học - Viện Khoa học Công nghệ Việt Nam Tôi xin chân thành bày tỏ lòng cảm ơn sâu sắc tới TS Nguyễn Quyết Tiến, TS Phạm Thị Hồng Minh, PGS.TS Phạm Văn Thỉnh ngƣời thầy hƣớng nghiên cứu, hƣớng dẫn tận tình, động viên giúp đỡ bƣớc trình nghiên cứu thực luận văn Xin chân thành cảm ơn Phòng Hoạt chất Sinh học, Phòng Nghiên cứu Cấu trúc -Viện Hóa học nhiệt tình giúp đỡ tạo điều kiện thuận lợi để hoàn thành kế hoạch nghiên cứu Nhân dịp này, xin trân trọng cảm ơn Ban Giám hiệu, Ban Lãnh đạo Khoa Hóa, Khoa Sau đại học - Trƣờng Đại học Sƣ phạm Thái Nguyên, Sở giáo dục đào tạo tỉnh Bắc Ninh, Ban Giám hiệu Trƣờng THPT Thuận Thành số tạo điều kiện thuận lợi cho hoàn thành luận văn Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới Bố, Mẹ tôi, ngƣời thân gia đình đồng nghiệp giúp đỡ, động viên nhiều trình thực luận văn Thái Nguyên, tháng năm 2009 Tác giả Nguyễn Quốc Nam Hải Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn MỤC LỤC Trang Lời cam đoan Lời cảm ơn Danh mục chữ viết tắt dùng luận văn Danh mục hình, bảng sơ đồ MỞ ĐẦU Chƣơng TỔNG QUAN 1.1 CHI COFFEA VÀ THÀNH PHẦN HOÁ HỌC CỦA CHÚNG 1.1.1 Giới thiệu chi Coffea 1.1.2 Những nghiên cứu thành phần hoá học 1.2 CÂY CÀ PHÊ CHÈ VÀ NHỮNG SỬ DỤNG TRONG Y HỌC 1.2.1 Mô tả thực vật 1.2.2 Một số thuốc chữa bệnh sỏi thận Y học cổ truyền 1.3 MỘT SỐ ANCALOIT SỬ DỤNG TRONG Y HỌC 1.3.1 Giới thiệu chung ancalnoit 1.3.2 Phƣơng pháp phân tích 10 1.3.2.1 Phân tích định tính 10 1.3.2.1.1 Các phản ứng tạo tủa 10 1.3.2.1.2 Các phản tạo màu 11 1.3.2.2 Phân tích định lượng 12 1.3.2.2.1 Xác định hàm lượng ancaloit phương pháp phân tích trọng lượng 13 1.3.2.2.2 Xác định hàm lượng ancaloit phương pháp “không nước” 15 1.3.3 Phƣơng pháp phân lập ancaloit 15 1.3.3.1 Chiết tách phân lập ancaloit phương pháp bazơ - dung môi hữu 15 1.3.3.2 Chiết tách phân lập ancaloit phương pháp axit-nước 16 1.3.4 Phân loại ancaloit quan trọng Y dƣợc theo khung 16 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 1.3.4.1 Ancaloit khung indol 17 1.3.4.2 Ancaloit khung pyridin - (pyperidin) 18 1.3.4.3 Ancaloit vòng ngưng tụ pyrrolidin-pyperidin (khung tropan) 20 1.3.4.4 Ancaloit khung ruban (quinin, quinidin, cinchonin, cinchonidin) 21 1.3.4.5 Ancaloit khung benzyl-isoquinolin 22 1.3.4.6 Ancaloit khung morphinan 23 1.3.4.7 Ergot ancaloit (dẫn xuất axit lysergic) 23 1.3.4.8 Ancaloit khung imidazol 24 1.3.4.9 Ancaloit strychnin 25 1.3.4.10 Ancaloit kháng sinh 25 Chƣơng THỰC NGHIỆM 30 2.1 ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 30 2.1.1 Thu mẫu cây, xác định tên khoa học phƣơng pháp xử lý mẫu 30 2.1.2 Phƣơng pháp ngâm chiết 31 2.1.3 Thử hoạt tính sinh học 31 2.1.4 Phƣơng pháp phân lập hợp chất từ dịch chiết 31 2.1.5 Phƣơng pháp khảo sát cấu trúc hoá học chất 31 2.2 DỤNG CỤ, HOÁ CHẤT VÀ THIẾT BỊ NGHIÊN CỨU 32 2.2.1 Dụng cụ, hoá chất 32 2.2.2 Thiết bị nghiên cứu 33 2.3 THU NHẬN CÁC DỊCH CHIẾT TỪ LÁ CÂY CÀ PHÊ CHÈ 33 2.3.1 Thu nhận dịch chiết 33 2.3.2 Khảo sát định tính dịch chiết 35 2.3.2.1 Phát hợp chất sterol 35 2.3.2.2 Phát ancaloit 35 2.3.2.3 Phát flavonoid 36 2.3.2.4 Phát cumarin 36 2.3.2.5 Định tính glucosit tim 36 2.3.2.6 Định tính saponin 37 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 2.3.3 Thử hoạt tính kháng vi sinh vật kiểm định(antimicrobial activity) 38 2.4 PHÂN LẬP VÀ TINH CHẾ CÁC CHẤT 39 2.4.1 Cặn dịch chiết n-hexan (Cof H) 39 2.4.1.1 Ancol mạch dài E4C (hexatriacontan-1-ol) 40 2.4.1.2 -Sitosterol 40 2.4.1.3 Stigmast-5,22-dien-3-β-ol 41 2.4.2 Cặn dịch chiết etylaxetat 42 2.4.2.1 Tritecpenoit 31H6 42 2.4.2.2 3-O--Sitostery - glucopyranosit 43 2.4.3 Cặn dịch chiết MeOH 44 Chƣơng THẢO LUẬN KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 45 3.1 NGUYÊN TẮC CHUNG 45 3.2 PHÂN LẬP VÀ NHẬN DẠNG CÁC HỢP CHẤT CÓ TRONG CÁC DỊCH CHIẾT KHÁC NHAU CỦA LÁ CÂY CÀ PHÊ CHÈ 45 3.2.1 Ancol mạch dài E4C(hexatriacontanol) COF.E4C: C36H74O 46 3.2.2 Các hợp chất sterol 46 3.2.2.1.-Sitosterol 47 3.2.2.2 Stigmast-5,22-dien-24R-3-ol 47 3.2.2.3 3-Sitostery-1l-O--D-glucopyranosit 49 3.2.2.4 Hợp chất axit lupan-3β-hydroxi-12(13)-en-28-oic (COF18E3-C30H48O3) 50 3.2.2.5 Hợp chất cafein (COF.An – C8H10N4O2) 60 3.3 HOẠT TÍNH BÀI SỎI THẬN CỦA LÁ CÂY CÀ PHÊ CHÈ 61 KẾT LUẬN 62 DANH MỤC CÁC CÔNG TRÌNH ĐÃ CÔNG BỐ LIÊN QUAN ĐẾN LUẬN VĂN 63 TÀI LIỆU THAM KHẢO 64 PHỤ LỤC 67 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT DÙNG TRONG LUẬN VĂN  Các phƣơng pháp sắc ký CC : Column Chromatography TLC : Thin-layer Chromatography SKLM : Sắc ký lớp mỏng CAD : Collisional Activated Dissociation MS : Mass Spectroscopy EI-MS : Electron Impact Mass Spectroscopy ESI-MS : Electron Spray Ionization Mass Spectroscopy FT-IR : Fourier Transform Infrared Spectroscopy NMR : Nuclear Magnetic Resonance :  Các phƣơng pháp phổ H-NMR 13 C-NMR : H-Nuclear Magnetic Resonance 13 C- Nuclear Magnetic Resonance DEPT : Distortionless Enhancement by Polarisation Transfer COSY : Correlated Spectroscopy HMQC : Heteronuclear Multiple - Quantum Coherence HMBC : Heteronuclear multiple - Bond Correlation  Các lĩnh vực khác MIC : Minimum inhibitory concentration HIV : Human Immunodeficiency Virus đvC : Đơn vị Cacbon v/v : Thể tích/thể tích Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn DANH MỤC CÁC BẢNG Trang Bảng 2.1: Các hệ dung môi triển khai SKLM 32 Bảng 2.2: Khối lƣợng cặn chiết phân đoạn Cà phê chè 35 Bảng 2.3: Kết định tính nhóm chất Cà phê chè 37 Bảng 2.4: Kết thử hoạt tính kháng vi sinh vật kiểm định cặn chiết Cà phê chè 39 Bảng 3.1: Số liệu phổ 13C-NMR (CDCl3, 125MHz) số sterol cà phê chè (Coffea arabica) 48 Bảng 3.2: Bảng tƣơng tác xa C  H(HMBC) COF18E3 59 Bảng 3.3: Bảng tƣơng tác xa C  H(HMBC) COF.Anc 60 DANH MỤC CÁC HÌNH Trang Hình 2.1: Cây Cà phê chè (Coffea arabica) Hình 3.1: Phổ FT - IR COF18E3 51 Hình 3.2: Phổ EIS - MS COF18E3 52 Hình 3.3: Phổ 1H-NMR COF18E3 53 Hình 3.4: Phổ 13C- NMR COF18E3 54 Hình 3.5: Phổ DEPT COF18E3 55 Hình 3.6: Phổ HSQC COF18E3 56 Hình 3.7: Phổ HMBC COF18E3 57 DANH MỤC CÁC SƠ ĐỒ Trang Sơ đồ 2.1: Sơ đồ ngâm chiết cà phê chè 34 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn MỞ ĐẦU Nƣớc ta có diện tích khoảng 330.000 km Đồi núi chiếm 3/4 diện tích núi cao 500 m chiếm 1/3 diện tích lãnh thổ Khí hậu nhiệt đới gió mùa, có mùa rõ rệt thay đổi theo địa hình Nhiệt độ trung bình hàng năm 22 C, lƣợng mƣa vào khoảng 1200 - 2800 mm, độ ẩm tƣơng đối cao (trên 80%) Những đặc thù điều kiện tự nhiên nhƣ thuận lợi cho hệ sinh thái phát triển Vì nƣớc ta có hệ thực vật vô phong phú đa dạng Theo số liệu thống kê có 12000 loài, có 3200 loài thực vật đƣợc sử dụng làm thuốc y học dân gian [5] Từ xƣa đến nay, thuốc dân gian đóng vai trò quan trọng đời sống ngƣời Ngày nay, hợp chất tự nhiên có hoạt tính sinh học đƣợc phân lập từ cỏ đƣợc ứng dụng nhiều ngành công nghiệp nhƣ ngành nông nghiệp, chúng đƣợc sản xuất thuốc chữa bệnh, thuốc bảo vệ thực vật, làm nguyên liệu cho ngành công nghiệp thực phẩm mỹ phẩm… Ngày nay, ngành công nghệ tổng hợp hoá dƣợc phát triển mạnh mẽ tạo biệt dƣợc khác đƣợc sử dụng công tác phòng, chữa bệnh nhờ giảm tỉ lệ tử vong, nâng cao tuổi thọ Tuy nhiên, vai trò thảo dƣợc không chỗ đứng Y học Nó tiếp tục đƣợc dùng làm nguyên liệu trực tiếp, gián tiếp cung cấp chất dẫn đƣờng (lead-compounds) cho công nghệ bán tổng hợp nhằm tìm kiếm dƣợc phẩm đáp ứng cho việc điều trị chứng bệnh thông thƣờng nhƣ bệnh nan y (Ung thƣ, HIV, ) Trên sở cho thấy, nguồn thuốc dân gian nhƣ thuốc đồng bào dân tộc kho tàng vô quí giá để khám phá, tìm kiếm loại thuốc có hiệu lực cao cho công tác phòng chữa Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn bệnh Việc nghiên cứu thuốc giúp cho hiểu rõ thành phần cấu trúc hoá học, hoạt tính sinh học, tác dụng dƣợc lí thuốc Từ đó, ngƣời ta tạo chất có hoạt tính sinh học cao để làm thuốc chữa bệnh Cây Cà phê chè (Coffea arabica) không công nghiệp quan trọng, mà dƣợc liệu quí Ở Malaysia Indonesia ngƣời ta sử dụng Cà phê chè sắc nƣớc để làm thuốc lợi tiểu Lá Cà phê chè đƣợc dùng điều trị bệnh hen xuyễn, nhiễm độc atropin, cúm, đau đầu, nhiễm độc thuốc phiện Ngoài ra, đồng bào dân tộc Dao, huyện Đông Triều, tỉnh Quảng Ninh sử dụng Cà phê chè để chữa bệnh sỏi thận Đây thuốc độc vị cổ truyền độc đáo Mặc dù vậy, có công trình nghiên cứu thành phần hoá học dƣợc lí Cà phê chè Với mục đích nghiên cứu tìm hiểu thành phần hoá học nhƣ hoạt tính sinh học Cà phê chè góp phần làm tăng thêm kho tàng tri thức thuốc cổ truyền Việt Nam [28-36] Với lý trên, Cà phê chè (Coffea arabica) đƣợc chọn làm đối tƣợng cho luận văn nghiên cứu với tên đề tài là: “ Nghiên cứu thành phần hoá học Cà phê chè (Coffea arabica)” Nhằm xác định thành phần cấu trúc hoá học hợp chất có Cà phê chè Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn Chƣơng I TỔNG QUAN 1.1 CHI COFFEA VÀ THÀNH PHẦN HOÁ HỌC CỦA CHÚNG 1.1.1 Giới thiệu chi Coffea Theo tác giả Phạm Hoàng Hộ, chi Coffea Việt Nam có năm loài là: Coffea arabica L (Cà phê chè), Coffea canephora Pierre ex Froehner (Coffea rubusta - Cà phê vối), Coffea dewevrei (Coffea excelsa - Cà phê mít), Coffea liberica Bull ex Hiern (Cà phê dâu da), Coffea tetrandra P Chev in Herbier (Cà phê tứ hùng) Hiện nay, nƣớc ta trồng cà phê vối tập trung chủ yếu Tây Nguyên [1], [3] 1.1.2 Những nghiên cứu thành phần hoá học Từ phận loài cà phê, ngƣời ta phân lập đƣợc số lớp chất nhƣ: glycosit (este), ancaloit, aminoaxit, tecpenoit amit [9], [20] Ancaloit: H N O H N NH2 OH H3C CH3 CH3 1.1 Axit allantoic O 1.2a 3-Metylindolin-2-on 1.2b 2-Hydroxy-3-metyl-1H-indol CH3 O H3C N N O H N N O N N O OH O NH2 O N NH O H3C N O N N N H3CO CH3 N CH3 H3CO N CH3 CH3 1.3 Caffein 1.4 Liberin Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên 1.5 Methylliberin http://www.lrc-tnu.edu.vn Glycosit: O O OH OH O OH O O O O OH Acylsucroz¬-6-O-(3-Methylbutanoyl) O OH 6-O--D-Apiofuranosyl1-O-3-Methyl-2-butenoyl-D-glucoz¬ 1.7 1.8 OH O HO HO O OH OH O HO OH 6-O--D-Apiofuranosyl1-O-3-Methylbutanoyl-D-glucoz¬ 1.6 OH O HO HO HO OH O O HO OH O OH OH OH O HO O OH HO O HO O O O O OH O HO OH OH HO OH 1.9 Mascaroside 1.10 Mozambioside Terpenoit 17 OH 16 15 18 19 O 13 14 21 10 O 12 11 20 O 1.11 Bengalensol (3,19-Abeo-11,16-diepoxy-17-hydroxy-3,18-kauradien-2-on) Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn Amit O OH O N H HN N H OH O HN O H N HO R O N H HO OH N-Caffeoyltryptophan HO N-coumaroyltryptophan 1.13 R=C19H39 Eicosanoylserotonin R=C23H45 Tetracosanoylserotonin 1.14 1.12 Hiện ngƣời ta biết nhiều hạt cà phê nhƣng thành phần hoá học tác dụng Cà phê chè (Coffea arabica) chƣa thấy có tài liệu, báo cáo đề cập 1.2 CÂY CÀ PHÊ CHÈ VÀ SỬ DỤNG TRONG Y HỌC CỔ TRUYỀN 1.2.1 Mô tả thực vật Cây Cà phê chè có tên khoa học Coffea arabica, thuộc chi Coffea, họ Rubiacea, lớp Magloniopsida, ngành Magloniophta, giới Platae Cà phê chè tên gọi theo tiếng Việt, loài cà phê có nhỏ, thƣờng để thấp giống chè loại công nghiệp phổ biến Việt Nam Phân bố địa lí: Cây cà phê chè (Coffea arabica) có nguồn gốc từ Ethiopia Cây cà phê chè đƣợc đƣa vào Ả Rập trƣớc kỉ XV đƣợc trồng đảo Java Indonesia vào năm 1690 Sau đó, đƣợc trồng rộng rãi nhiều nơi giới nhƣ: Suriman, Jamaica, Tây Ấn, Trung Mỹ, Yemen, Việt Nam …[39] Ở nƣớc ta, cà phê chè đƣợc trồng lần vào năm 1984, lấy giống từ Cuba Cho đến phát triển rộng rãi tỉnh Quảng Ninh, Đắk Lắk, Đắk Nông, Gia Lai, Kon Tum, Lâm Đồng…[6], [45], [46] Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn Đặc điểm sinh trƣởng phát triển: Cây có tán lớn màu xanh đậm, hình bầu dục chiều dài 12cm rộng cm Cây trƣởng thành cao từ - m, để mọc hoang dã cao tới 15 m Hoa màu trắng, nhị vàng, hoa thƣờng nở đêm nở hết vào - sáng, cà phê chè có khả tự thị phấn cao khoảng 90% Quả hình oval, chứa hai hạt cà phê Hình 2.1: Cây Cà phê chè (Coffea arabica) Cây Cà phê chè đƣợc trồng chủ yếu nƣớc có khí hậu nhiệt đới Tuy nhiên điều kiện thuận lợi cho phát triển Cà phê chè vùng đất cao từ 1375-1830 m khô Nhiệt độ thích hợp từ 16-25 0C, lƣợng mƣa khoảng 1000 mm Cà phê chè sau trồng khoảng đến năm bắt đầu cho thu hoạch 25 năm dừng lại Thực tế sống đƣợc khoảng 70 năm [1], [5], [6], [38-44] Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn Đây loài có giá trị kinh tế loài cà phê, chiếm 61% sản phẩm cà phê toàn giới Colombia Brasil hai nƣớc xuất hai loại cà phê Việt Nam nƣớc xuất cà phê lớn thứ hai giới nhƣng chủ yếu cà phê vối Năm 2003, Việt Nam giảm 15% diện tích (khoảng 40.000 ha) cà phê vối để chuyển đổi sang cà phê chè nhằm đem lại giá trị kinh tế cao Trên thực tế, không trồng thử nghiệm trƣớc mà trồng diện rộng vấp phải nhiều khó khăn nhƣ sâu bệnh nấm phá hoại, điều kiện tự nhiên không phù hợp nên xuất thấp [41] 1.2.2 Một số thuốc chữa bệnh sỏi thận Y học cổ truyền Cho đến nay, Y học dân gian Việt Nam sử dụng nhiều thuốc, dƣợc liệu để điều trị bệnh sỏi thận Dƣới số thuốc dƣợc liệu để điều trị sỏi thận * Giáng Thạch Thang: Cam thảo tiêu 30g, Đông quỳ tử 10g, Giáng hƣơng 3g, Hải kim sa: 10g, Hoạt thạch: 10g, Kê nội kim 10g, Kim tiền thảo: 30g, Ngƣ não thạch: 10g, Xuyên ngƣ đằng: 10g Sắc uống Tác dụng: nhiệt, lợi thấp, trị hạ tiêu có thấp nhiệt, sỏi đƣờng tiết niệu * Tang Căn Tam Kim Nhị Thạch Thang: Hải kim sa: 30g, Hoạt thạch: 30g, Kê nội kim(rang với cát): 10g, Kim tiền thảo: 30g, Ngƣ đằng: 10g, Tang phụ căn: 30g, Thạch vi: 16g, Tỳ giải: 10g, Vƣơng bất lƣu hành: 10g Sắc uống Tác dụng: nhiệt, lợi thấp, thông lâm, thống, trị thận hƣ, thấp nhiệt uẩn kết, sỏi đƣờng tiểu * Thông Phao Thang: Bại tƣơng thảo: 16g, Biển súc: 6g, Cát cánh: 4g, Cù mạch: 6g, Lậu lô: 10g, Mông hoa: 16g, Thanh bì: 10g, Vƣơng bất lƣu hành: 15g Sắc uống Tác dụng: Hành ứ, thông lâm Trị thấp nhiệt bàng quang, ứ trệ hạ tiêu, sỏi đƣờng tiểu Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn * Trân Kim Thang Gia Giảm: Hải kim sa: 16g, Kê nội kim: 12g, Lộ lô thông: 16g, Mạch môn: 10g, Tiểu hồi: 10g, Trạch tả: 12g, Trân châu: 60g, Ty qua lạc: 12g, Vƣơng bất lƣu hàng: 12g Sắc uống Tác dụng: Thanh nhiệt lợi thấp, thông lâm, thạch Trị thấp nhiệt hạ chú, uất kết lâu ngày làm cho tạp chất nƣớc tiểu đọng lại thành sỏi, đƣờng tiểu có sỏi * Niệu Lộ Bài Thạch Thang: Biển súc: 24g, Chi tử: 20g, Chỉ xác: 10g, Chích thảo: 10g, Cù mạch: 15g, Đại hoàng: 12g, Hoạt thạch: 15g, Kim tiền thảo 30g, Mộc thông: 10g, Ngƣ tất 15g, Thạch vi: 30g, Xa tiền sử: 24g Sắc uống Tác dụng: Tiêu sỏi, thông lâm, hành khí, hoá ứ, lợi thấp nhiệt Trị thấp hạ chú, sỏi đƣờng tiểu Bài thuốc thích hợp với chứng sau: + Sỏi có đƣờng kính ngang nhỏ 1cm, đƣờng kính dài nhỏ 2cm + Hệ tiết niệu dị dạng giải phẫu biến đổi bệnh lý * Liệu Lộ Kết Thạch Thang: Bạch vân linh: 10g, Hải kim sa: 15g, Hoạt thạch: 12g, Hổ phách: 3g, Kim tiền thảo: 15g, Mộc thông: 6g, Thanh bì: 10g, Xa tiền tử: 10g Sắc uống Tác dụng: lợi thấp, hoá ứ, trị sỏi bàng quang * Thược Dược Cam Thảo Thang Gia Vị: Bạch thƣợc, Trân châu mẫu: 30g, Cam Thảo, Đàn hƣơng, Nga truật, Nguyên hồ, Hồi hƣơng đều: 10g, Điền sâm, Mạch môn, Bạch vân linh 12g Sác uống Tác dụng: Hoãn cấp, thống Trị thận hƣ, lƣng đau, khí âm suy, khí nghịch, sỏi niệu quản * Phụ Kim Thang: Kim tiền thảo: 30g, Phụ tử 12g, Thục địa: 20g, Trạch tả 10g Sắc uống Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn Tác dụng: Ôn thận, hành thuỷ Trị thận khí hƣ tổn, sỏi đƣờng tiểu [28-36] Hầu hết thuốc trị sỏi thận gồm nhiều vị thuốc phổ biến có mặt Kim tiền thảo, điều trị kéo dài Riêng thuốc cổ truyền dân tộc Dao, thuộc loại độc vị, thuốc cổ truyền độc đáo sử dụng loại thảo dƣợc cà phê chè, tác dụng sỏi thận với kích thƣớc nhỏ 10mm tốt thời gian ngắn 20 - 30 ngày Bài thuốc đƣợc đồng bào dân tộc Dao sử dụng có hiệu nhƣ sau: + Thu hái thuốc: Thu hái quanh năm, thời gian thu hái thích hợp ngày từ - 12 sáng, thu hái bánh tẻ già + Sơ chế bảo quản thuốc: Sau thu hái, cà phê đƣợc hong khô sấy nhiệt độ 600C, tránh ánh nắng tốt Khi đủ khô đƣợc đem thái nghiền nhỏ (giống nhƣ chè cám) bảo quản nơi khô thoáng mát + Cách sử dụng: Lấy 15 - 20g cà phê chè sấy khô nghiền nhỏ cho vào x 250 ml nƣớc sôi (giống nhƣ pha trà) chiết đƣợc khoảng 700 ml dịch dùng uống hết ngày (4-5 lần: sáng, trƣa, chiều tối giống nhƣ uống trà) Khoảng thời gian điều trị từ 20 - 30 ngày, tuỳ thuộc vào kích cỡ viên sỏi + Tác dụng: Có tác dụng sỏi thậnvới kích cỡ nhỏ 10 mm tốt thời gian ngắn 20 - 30 ngày Hiện ngƣời ta biết nhiều hạt cà phê nhƣng thành phần hoá học tác dụng Cà phê chè (Coffea arabica) chƣa thấy có tài liệu, báo cáo đề cập 1.3 MỘT SỐ ANCALOIT QUAN TRỌNG SỬ DỤNG TRONG Y HỌC 1.3.1 Giới thiệu chung ancalnoit Ngày nay, khái niệm ancaloit đƣợc hiểu hợp chất tồn giới thực vật (thƣờng hợp chất vòng) chứa nitơ, có tính kiềm yếu phần lớn số chúng có hoạt tính sinh học mạnh, liều cao chất độc, với liều thấp chúng lại dƣợc phẩm vô hữu ích tên “alcaloids” nghĩa có tính kiềm yếu Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 10 Các hợp chất ancaloit nhóm dƣợc phẩm dị vòng chứa nitơ quan trọng nhất, cho dù năm gần có nhiều dƣợc phẩm dị vòng chứa nitơ đƣợc tổng hợp đƣa chữa bệnh Trong thực vật, ancaloit thƣờng có cấu trúc hóa học gần giống Ancaloit tự nhiên phần lớn thƣờng dạng liên kết (dạng muối) với axit hữu đơn giản (axit axêtic, axit oxalic, axit sữa, táo, axit 2,3-dihydroxisuccinic, axit chanh, ), vài thực vật (đặc biệt thực vật giàu ancaloit) ancaloit liên kết với axit hữu đặc chƣng với chúng nhƣ: axit fumaric, axit cevadinic, axit meconic, Phần lớn ancaloit hợp chất tinh thể rắn, vài hợp chất số chúng dạng lỏng làm phƣơng pháp chƣng cất mà không bị phân hủy (coniin, arecolin, nicotin ) nhiệt độ phòng Các ancaloit rắn thƣờng có vị đắng ancaloit lỏng thƣờng có vị cay Các hợp chất ancaloit dạng bazơ tự hầu hết không tan nƣớc, nhiên tan tốt chloroform Trong ancaloit thƣờng chứa cacbon bất đối, hoạt động quang học (αD) thƣờng tồn thực vật dạng định [21], [22] 1.3.2 Phƣơng pháp phân tích 1.3.2.1 Phân tích định tính Ngƣời ta sử dụng nhiều thuốc thử để xác nhận có mặt ancaloit thực vật Do sở phản ứng hóa học ancaloit phần lớn không rõ ràng, nên ngƣời ta phân biệt phản ứng phản ứng màu phản ứng tạo tủa 1.3.2.1.1 Các phản ứng tạo tủa  Thuốc thử Mayer (1865): K2HgI4 [kali-thủy ngân (II) iodua kaliumiodomercurat]: Là thuốc thử ancaloit thông thƣờng cho tủa màu trắng (vàng trắng) không tan kể dung dịch axit loãng Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 11  Thuốc thử Dragendorff hay Kraut (1881): KBiI4 [Kali-bizmut-iodua]: Thuốc thử ancaloit cho tủa kết tinh màu vàng cam (đỏ)  Thuốc thử Bouchardat (1839) hay Wagner (1863): KI3 [dung dịch kali-iodua 0,1N + I2]: cho tủa kết tinh màu nâu đỏ sẫm với ancaloit  Thuốc thử Sonnenchein (1857): H3[P(Mo3O10)4], axit phosphormolibdenic: Tạo tủa tƣơng đƣơng mol với hầu hết ancaloit Đặc biệt nhạy quinin strychnin  Thuốc thử Godeffroys: K4[Si(W3O10)4], axit silicowonframic: Ngƣời ta sử dụng dung dịch nƣớc 5% muối natri nó, cho phản ứng nhạy với ancaloit cho tủa màu trắng  Axit cheric (tannin): Tạo tủa vô định hình không màu trắng vàng  Muối Reinecke: NH4[Cr(SCN)4(NH3)2], Amoni-tetrarodanato-diammincromat(III): Ban đầu, ngƣời ta sử dụng nhƣ tác nhân tạo tủa với amin bậc II amin tercier Rosenhaler sử dụng để xác nhận có mặt ancaloit cho tinh thể đặc trƣng  Natri-tetraphenyl-borat (Kalignost), Na[B(C6H5)4]: Ban đầu, ngƣời ta sử dụng nhƣ tác nhân thử kali, sau đƣợc sử dụng thử ancaloit thông thƣờng, cho tủa màu trắng axit axêtic Cần lƣu ý rằng: amin tổng hợp tercier quaternary amin thƣờng cho phản ứng tủa ancaloit [21], [22] 1.3.2.1.2 Các phản ứng tạo màu Trong số phản ứng ancaloit, phản ứng ancaloit với axit khoáng đặc cho khả phân biệt Các phản ứng cho kết tốt ancaloit có độ cần thiết Đặc biệt phản ứng tạo màu với axit H2SO4 đậm đặc dựa sở khả hút nƣớc ôxy hóa [21], [22] Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn