Sản xuất và quy trình thu hồi của một ngoại tế bào lipase từ nấm men Yarrowia Lipolytica

ỨNG DỤNG LIÊN QUAN • [0001] Các ứng dụng đệ ứng dụng không tạm ứng dụng sáng chế Mỹ số 61 / 157.945, đệ trình ngày 06 tháng ba, năm 2009 Toàn văn ứng dụng nói kết hợp tài liệu tham khảo toàn LĨNH VỰC CỦA SÁNG CHẾ • [0002] Sáng chế cung cấp quy trình để tập trung huyền phù vi sinh vật chứa Trong số phương án ưu tiên, quy trình bao gồm bước ly tâm bước lọc Quá trình đặc biệt thích hợp cho việc tập trung huyền phù vi sinh vật chứa (ví dụ, lactic acid bacteria huyền phù) quy mô công nghiệp BỐI CẢNH CỦA SÁNG CHẾ • [0003] Trước tiêm vào sản phẩm, vi sinh vật nuôi để cung cấp hệ thống treo có chứa lượng lớn vi sinh vật Hệ thống treo sau thường tập trung sử dụng bước tập trung ly tâm, lọc, chưng cất, bồi lắng keo tụ Bước Nồng độ thường theo sau đông lạnh đông khô lưu trữ hệ thống treo vi sinh vật nitơ lỏng để bảo tồn / lưu trữ vi sinh vật.Ngoài việc cung cấp hệ thống treo vi sinh vật mong muốn, bước tập trung làm giảm khối lượng hệ thống treo điều trị bảo tồn / lưu trữ Bằng cách giảm khối lượng hệ thống treo tăng nồng độ vi sinh vật lợi giảm chi phí hệ thống treo thu • [0004] Các bước tập trung quan trọng vào trình quy mô công nghiệp, nồng độ hiệu hệ thống treo vi sinh vật cần thiết để giảm thiểu chi phí liên quan đến bảo tồn văn hóa, lưu trữ vận chuyển Theo phương pháp lọc thường không khả thi mặt kinh tế, ly tâm truyền thống sử dụng cho nồng độ hệ thống treo vi sinh vật quy mô công nghiệp Tuy nhiên, lọc áp lực tìm thấy số sử dụng Ngoài ra, số bị đình khó khăn để tập trung sản xuất đủ nồng độ sinh vật việc đình thức có hiệu Sử dụng lực hấp dẫn cao sử dụng để tăng nồng độ • [0005] Ngoài ra, ly tâm lọc hai có giới hạn họ, đặc biệt áp dụng vào sản xuất quy mô công nghiệp Ly tâm cung cấp gia tăng hạn chế nồng độ vi sinh vật Ngoài ra, quy mô công nghiệp, tập trung phải đủ chaûy cho phép xử lý giải pháp Do đó, hoạt động vi sinh vật nồng độ giới hạn mật độ tương đối sinh vật phương tiện sử dụng Lọc khối lượng lớn tốn Ngoài ra, không gian chết lĩnh vực lọc lớn cần kết số thiệt hại vi sinh vật trình lọc • [0006] Do đó, cần thiết phải nâng cao hiệu phương pháp nồng độ thích hợp để tập trung huyền phù vi sinh vật có chứa tỷ lệ nồng độ cao mát hạn chế hoạt động (ví dụ, mát hạn chế vi sinh vật hữu hiệu) Những phương pháp cần phải có tính khả thi quy mô, đặc biệt quy mô công nghiệp, nơi mà lượng lớn hệ thống treo tập trung TÓM LƯỢC CỦA SÁNG CHẾ • [0007] Sáng chế cung cấp quy trình để tập trung huyền phù vi sinh vật chứa Trong số phương án ưu tiên, quy trình bao gồm bước ly tâm bước lọc Quá trình đặc biệt thích hợp cho việc tập trung huyền phù vi sinh vật chứa (ví dụ, lactic acid bacteria huyền phù) quy mô công nghiệp • [0008] Sáng chế cung cấp cho trình bao gồm bước sau đây: (a) ly tâm đình vi sinh vật chứa để cung cấp tập trung vi sinh vật có chứa chất lỏng bề mặt; (B) lọc tinh vi sinh vật có chứa đầu tiên, để cung cấp thấm nhập tập trung vi sinh vật có chứa thứ hai • [0009] Trong số biểu diễn, trình trình dòng chảy liên tục bao gồm: (1) ly tâm đình vi sinh vật chứa để cung cấp tập trung vi sinh vật có chứa chất lỏng bề mặt; (2)liên tục thu hồi vi sinh vật có chứa tinh ly tâm đầu tiên; (b) lọc tinh vi sinh vật có chứa cung cấp thấm nhập tập trung vi sinh vật có chứa thứ hai Trong số biểu bổ sung, trình bao gồm bước (c) khôi phục tinh vi sinh vật có chứa thứ hai Trong số biểu chưa bổ sung, ly tâm thực lực ly tâm từ khoảng 400 đến khoảng 65.000 × g Trong số biểu thay thế, ly tâm thực lực ly tâm từ khoảng 4000 đến khoảng 20.000 × g • [0010] Trong số biểu chưa bổ sung, bước lọc bao gồm vi lọc Trong số biểu tiếp tục, bước lọc sử dụng màng lọc có kích thước lỗ khoảng 0,1 đến khoảng 10 micromet Trong số biểu bổ sung, bước lọc bao gồm siêu lọc Trong số biểu tiếp tục, bước utrafiltration sử dụng màng lọc có trọng lượng phân tử cắt khoảng đến khoảng 200 kDa Trong số biểu thay thế, lọc bao gồm lọc tiếp tuyến • [0011] Trong số biểu bổ sung, bước ly tâm trực sau bước lọc Trong số biểu thêm, trình chứa thêm bước lọc bổ sung, bước lọc bổ sung thực tinh vi sinh vật có chứa thu sau bước (b) • [0012] Trong số biểu chưa bổ sung, trình chứa thêm bước giặt Trong số phương án ưu tiên, bước rửa không thực bước ly tâm (a) bước lọc (b) Trong số phương án ưu tiên thay thế, bước rửa thực / sau bước lọc (b) • [0013] Trong số biểu thêm, trình tiếp tục bao gồm bước khôi phục viên / thấm thu sau bước ly tâm / bước lọc • [0014] Trong số phương án ưu tiên, việc đình vi sinh vật có chứa hệ thống treo vi khuẩn chứa Trong số biểu diễn đặc biệt ưa thích, vi khuẩn việc đình vi khuẩn có chứa bao gồm Acetobacter, Bifidobacterium, Carnobacterium, Enterococcus, Lactococcus, Lactobacillus, Leuconostoc, Pediococcus, Oenococcus, Propionibacterium, / Streptococcus Trong phương án ưu tiên chưa bổ sung, vi khuẩn hệ thống treo vi khuẩn có chứa phải có loại vi khuẩn chi axit lactic Trong số phương án ưu tiên nữa, vi khuẩn axit lactic gồm Lactococcus, Lactobacillus, Leuconotoc, Camobacterium, Pediococcus, / Streptococcus Trong số phương án ưu tiên bổ sung, vi khuẩn axit lactic bao gồm loài gồm Leuconostoc spp., Bifidobacterium ssp, Lactococcus lactis, Lactococcus cremoris, Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus casei, Lactobacillus kefir, Lactobacillus bifidus, Lactobacillus brevis, Lactobacillus helveticus, Lactobacillus paracasei, Lactobacillus rhamnosus, Lactobacillus salivarius, Lactobacillus curvatus, Lactobacillus bulgaricus, Lactobacillus sake, Lactobacillu reuteri, Lactobacillus lactis, Lactobacillus delbreuckii, Lactobacillus plantarum, / Streptococcus thermophilus • [0015] Sáng chế cung cấp quy trình để tập trung đình vi sinh vật chứa Sáng chế cung cấp chất cô đặc vi sinh vật có chứa thu trình đặt Trong số phương án ưu tiên, nồng độ vi sinh vật từ khoảng 10 từ đến 10 12 cfu / ml MÔ TẢ SƠ LƯỢC VỀ MỘT SỐ QUAN ĐIỂM CỦA VẼ • [0016] SUNG cho thấy số lượng tế bào tương đối hệ thống treo -containing Streptococcus thermophilus vàStreptococcus thermophilus -containing tập trung sau bước ly tâm bước lọc, so với giá trị lý thuyết • [0017] SUNG cho thấy việc đo lường hoạt động vi khuẩn Streptococcus thermophilus -containing cô đặc • [0018] SUNG cho thấy số lượng tế bào tập trung Lactobacillus acidophilus • [0019] SUNG cho thấy số lượng tế bào tương đối Lactococcus lactis -containing tập trung sau bước ly tâm lọc • [0020] SUNG cho thấy việc đo lường hoạt động Lactococcus lactis -containing cô đặc MÔ TẢ CỦA SÁNG CHẾ • [0021] Sáng chế cung cấp quy trình để tập trung huyền phù vi sinh vật chứa Trong số phương án ưu tiên, quy trình bao gồm bước ly tâm bước lọc Quá trình đặc biệt thích hợp cho việc tập trung huyền phù vi sinh vật chứa (ví dụ, lactic acid bacteria huyền phù) quy mô công nghiệp • [0022] Mỹ Pat Số 5.716.615 mô tả tác phẩm chế độ ăn uống dược phẩm chứa vi khuẩn lactic đông khô nồng độ cao cho gram sản phẩm Các tác phẩm thường chế tạo quy mô phòng thí nghiệm cách ly tâm vi khuẩn lactic có chứa thành phần Trong phương án, bước ly tâm trước vi lọc Tuy nhiên, trình tự vi lọc tiếp cách ly tâm không khả thi quy mô công nghiệp khối lượng lớn hệ thống treo cần điều trị Quả thực vi lọc thực đầu tiên, diện tích lọc lớn bắt buộc Như vậy, trình đắt để sử dụng quy mô công nghiệp Hơn nữa, quy mô công nghiệp, tập trung thu sau vi lọc khó khăn để tiếp tục tập trung cách ly tâm quy mô công nghiệp, tập trung dày Cuối cùng, tỷ lệ nồng độ cuối không tốt so với thu thông qua việc sử dụng bước ly tâm • [0023] Sáng chế cung cấp phương pháp để nâng cao hiệu tập trung, suất chi phí liên quan đình xử lý vi sinh vật Thật vậy, yếu tố thông số cần thiết ứng dụng quy mô công nghiệp Đáng ý, phương pháp sáng chế cung cấp tỷ lệ tập trung cải thiện, mát hạn chế hoạt động vi sinh vật Những phương pháp sử dụng ly tâm lọc • [0024] Trong số phương án, sáng chế cung cấp trình bao gồm bước: o  (A) ly tâm đình vi sinh vật chứa, để cung cấp tập trung vi sinh vật có chứa chất lỏng bề mặt;  (B) lọc tinh vi sinh vật có chứa đầu tiên, để cung cấp thấm nhập tập trung vi sinh vật có chứa thứ hai Trong số phương án ưu tiên, bước lọc vi lọc bước siêu lọc • [0027] Trong số phương án, bước ly tâm (a) thực sau hoàn thành, bước lọc (b) • [0028] Trong số biểu bổ sung, trình trình dòng chảy gồm liên tục: o  (1) ly tâm đình vi sinh vật chứa để cung cấp tập trung vi sinh vật có chứa chất lỏng bề mặt; liên tục rút tập trung vi sinh vật có chứa bước ly tâm;  (2)  (B) filtrating tập trung vi sinh vật có chứa cung cấp thấm nhập tập trung vi sinh vật có chứa thứ hai • [0032] Một lợi sáng chế thứ tự bước ly tâm lọc Do lệnh này, trình sáng chế cho phép loại bỏ nhanh chóng số lượng lớn bước ly tâm trước tiến hành tập trung hệ thống treo vi sinh vật bước lọc Quá trình có hiệu so với phương pháp biết nghệ thuật, đặc biệt áp dụng quy trình quy mô công nghiệp Ngoài ra, khu vực nhỏ lọc cần thiết cho phương pháp sáng chế, tiết kiệm chi phí cung cấp Hơn nữa, phương pháp tạo điều kiện đạt tỷ lệ nồng độ cao tổn thất hoạt động vi sinh vật (ví dụ, khối lượng treo thức nhỏ cung cấp với khoảng mức độ hoạt động vi sinh vật), so với phương pháp mà sử dụng ly tâm • [0033] Các phương pháp sáng chế cung cấp phương tiện cho tập trung nhanh chóng hiệu hệ thống treo vi sinh vật chứa Những phương pháp cung cấp cho tỷ lệ nồng độ cao vi sinh vật mát hạn chế hoạt động Quan trọng hơn, phương pháp sáng chế tìm sử dụng quy mô công nghiệp, khối lượng đáng kể hệ thống treo vi sinh vật chứa điều trị Trong số phương án, phương pháp sáng chế tìm thấy ứng dụng điều trị đình khoảng 500 L khoảng 100.000 L Trong số phương án, đình dao động từ khoảng 10.000 L khoảng 50.000 L, phương án khác, phạm vi từ khoảng 10.000 L khoảng 25.000 L Tuy nhiên, ý định sáng chế giới hạn khối lượng này, dự tính khối lượng phù hợp hệ thống treo vi sinh vật chứa tìm thấy sử dụng phương pháp sáng chế • [0034] Ngoài ra, sáng chế cung cấp phương tiện mà nồng độ cuối liên tục / xác định trước vi sinh vật thu Vì vậy, sản xuất bị đình cuối vi sinh vật với mức độ hoạt động liên tục Trong số phương án, bước sửa đổi, cho nồng độ mong muốn vi sinh vật thu (ví dụ, cách điều chỉnh tốc độ dòng chảy thông qua phương tiện lọc màng) • [0035] Hơn nữa, phương pháp sáng chế tạo điều kiện kinh tế hiệu thêm xử lý hệ thống treo thức Ví dụ, hàm lượng nước hệ thống treo thức (ví dụ, tập trung) thấp nồng độ vi sinh cao so với hệ thống treo sản xuất phương pháp khác, đông khô làm khô lạnh hệ thống treo thực nhanh hiệu so với sử dụng phương pháp chuẩn Như vậy, cách cung cấp phương tiện nhanh chóng, hiệu kinh tế để bảo tồn lưu giữ văn hóa, sáng chế cung cấp cho giảm lượng, vật liệu chi phí vận chuyển • [0036] Như nêu trên, sử dụng phương pháp sáng chế cung cấp phương tiện để đạt nồng độ cuối mong muốn vi sinh vật Mức độ hoạt động hệ thống treo vi sinh vật có liên quan trực tiếp đến số lượng vi sinh vật hữu hiệu Trong số phương án, hoạt động vi sinh vật (ví dụ, mức độ hoạt động vi sinh vật) xác định cách đánh giá số lượng chất chuyển hóa (s) văn hóa sản xuất thời gian định sử dụng loại hình cụ thể chất Ví dụ, vi khuẩn axit lactic, để xác định mức độ hoạt động cách liên tục ghi lại độ pH cho thời gian định, pH dịch khuẩn axit lactic liên kết trực tiếp với nồng độ vi khuẩn hữu hiệu Trong số biểu diễn, so sánh phép đo pH ghi đến giá trị pH lý thuyết dự kiến dựa giả định tất vi khuẩn hệ thống treo khả thi, cung cấp mức độ tập trung hoạt động hệ thống treo Như vậy, độ pH đo gần với giá trị lý thuyết, hệ thống treo trải qua mát hoạt động hạn chế trình CÁC ĐỊNH NGHĨA • [0037] Trừ định nghĩa khác tài liệu, tất điều kiện kỹ thuật khoa học sử dụng có nghĩa tương tự thường hiểu kỹ thông thường nghệ thuật mà sáng chế liên quan Mặc dù phương pháp vật liệu tương tự tương đương với mô tả tài liệu ứng dụng thực tiễn sáng chế nay, phương pháp vật liệu ưa thích mô tả tài liệu Theo đó, điều khoản xác định mô tả đầy đủ cách tham chiếu đến kỹ thuật toàn thể Ngoài ra, sử dụng tài liệu này, từ ngữ số "một", "một", "" bao gồm tài liệu tham khảo số nhiều trừ bối cảnh rõ ràng cách khác Nó phải hiểu sáng chế không giới hạn phương pháp đặc biệt, giao thức, thuốc thử mô tả, chúng khác nhau, tùy thuộc vào bối cảnh họ sử dụng kỹ nghệ thuật • [0038] Đó dự định mà giới hạn số tối đa cho toàn đặc điểm kỹ thuật bao gồm giới hạn số thấp hơn, giới hạn số thấp rõ ràng văn tài liệu Mọi giới hạn số tối thiểu cho suốt đặc điểm kỹ thuật bao gồm giới hạn số cao, hạn chế số cao rõ ràng văn tài liệu Mỗi dãy số cho toàn đặc điểm kỹ thuật bao gồm phạm vi số hẹp nằm phạm vi số rộng hơn, thể dãy số hẹp rõ ràng văn tài liệu Hơn nữa, trích dẫn tài liệu để hiểu thừa nhận nghệ thuật trước sáng chế với • [0039] Khi sử dụng đây, thuật ngữ "ly tâm" đề cập đến phương pháp tách chất lỏng chất rắn immiscible từ chất lỏng thông qua ứng dụng lực ly tâm Trong số phương án ưu tiên, phương pháp tách liên quan đến việc phải chịu hỗn hợp chất lỏng chứa tới lực hấp dẫn cao (g) Khi ứng dụng lực ly tâm (thông thường nhiều lần lực hấp dẫn [xg]), thành phần khác có hỗn hợp tách Trong số phương án ưu tiên, sáng chế, ly tâm áp dụng cho chất lỏng có chứa tế bào vi sinh vật Sau hoàn tất trình ly tâm, tế bào vi sinh vật nằm "cô đặc" (tức là, "rắn" phần sản phẩm) chất lỏng "nổi" (hoặc "rửa giải") Trong số phương án ưu tiên, phần chất lỏng có chứa vi sinh vật Trong khối lượng quy mô công nghiệp, tập trung thường chứa từ khoảng 5% khoảng 20% chất rắn Trong phương pháp sáng chế, ly tâm sử dụng để sản xuất "đầu tiên tập trung vi sinh vật chứa." • [0040] Trong số phương án ưu tiên, ly tâm thực máy ly tâm cung cấp lực hấp dẫn từ khoảng 400 đến khoảng 65.000 × g (tức là, lần trọng lực), phương án khác, lực hấp dẫn từ khoảng 4.000-20.000 × g, phương án khác, lực hấp dẫn từ khoảng 6000 đến khoảng 10.000 × g Tuy nhiên, ý định sáng chế giới hạn máy ly tâm đặc biệt hay lực hấp dẫn Trong số biểu sáng bước ly tâm lặp lặp lại khoảng hai khoảng bốn lần Trong số biểu diễn đặc biệt ưa thích, bước ly tâm lặp lại hai lần Tuy nhiên, ý định sáng chế giới hạn số lượng cụ thể lần lặp lại bước ly tâm, số lượng thích hợp lần lặp lại thấy sử dụng Trong số phương án, tập trung thu được đặt dung dịch trước bước ly tâm (ví dụ, cách thêm chất lỏng thích hợp, chẳng hạn nước thực phẩm lớp đệm) Nó dự định mà sáng chế giới hạn dung dịch • [0041] Khi sử dụng đây, thuật ngữ "lọc" trình tách bao gồm việc qua giải pháp thông qua màng lọc để tách thành phần bên chất lỏng, dựa vào kích thước thành phần Màng lọc có lỗ chân lông kích thước định thiết kế để giữ lại thành phần lớn kích thước lỗ chân lông, cho phép thành phần nhỏ kích thước lỗ chân lông để vượt qua màng Như vậy, số phương án ưu tiên, giải pháp có chứa yếu tố rắn (ví dụ, vi sinh vật) có dung lượng lớn so với lỗ màng lọc Trong phương án, vi sinh vật có mặt "cô đặc" (hoặc "retentate") pha lỏng qua màng tế bào gọi "thấm" "lọc" Ngoài việc có chứa chất lỏng, số phương án, thấm nhập chứa thành phần khác Trong phương pháp sáng chế, kết bước lọc sản xuất "tinh vi sinh vật có chứa thứ hai" Trong "lọc thông thường" tách biệt thực áp lực hấp dẫn tự nhiên, "lọc áp lực," áp lực bổ sung (ví dụ, áp lực lớn phía cô đặc / trầm cảm phía thấm nhập) giúp đẩy nhanh trình lọc Bất kỳ phương pháp lọc thích hợp tìm thấy sử dụng sáng chế, bao gồm không giới hạn để vi lọc siêu lọc Tuy nhiên, số biểu ưu tiên đặc biệt, siêu lọc sử dụng • [0042] sử dụng đây, thuật ngữ "vi lọc" đề cập đến phương pháp lọc liên quan đến việc sử dụng màng lọc vi xốp.Các kích thước lỗ màng vi lọc thường khoảng 0,1 mm khoảng 10 micromet Các màng vi lọc sử dụng phương pháp sáng chế thường có trọng lượng phân tử cắt khoảng 200 kDa đến khoảng 000 kDa • [0043] Khi sử dụng đây, thuật ngữ "siêu lọc" đề cập đến phương pháp lọc màng lọc có kích thước lỗ chân lông nhỏ so với người sử dụng để vi lọc, thường khoảng 0,01 mm đến 0,1 mm Các màng siêu lọc sử dụng phương pháp sáng chế thường có trọng lượng cắt phân tử khoảng kDa khoảng 200 kDa • [0044] Trong số phương pháp sáng chế nay, bước lọc thực sử dụng vi lọc với màng vi lọc có kích thước lỗ từ khoảng 0,1 đến khoảng 10 mm, phương án khác kích thước lỗ chân lông từ khoảng 0,1 đến khoảng mm, phương án khác, kích thước lỗ từ khoảng 0,1 đến mm Trong số phương án ưu tiên, màng vi lọc có trọng lượng phân tử cắt khoảng 200 kDa đến khoảng 000 kDa, phương án khác, trọng lượng phân tử cut-off khoảng 250 kDa khoảng 000 kDa, khác phương án, trọng lượng phân tử cut-off khoảng 500 kDa • [0045] Trong số phương pháp thay sáng chế nay, bước lọc thực siêu lọc với màng siêu lọc có kích thước lỗ từ khoảng 0,01 mm đến 0,1 mm, phương án khác, kích thước lỗ từ khoảng 0,02 đến 0,1 mm, thân khác, kích thước lỗ chân lông từ khoảng 0,05 đến 0,1 mm.Trong số phương án, màng siêu lọc có trọng lượng phân tử cắt khoảng kDa khoảng 200 kDa, phương án khác, trọng lượng phân tử cut-off từ khoảng 30 kDa khoảng 200 kDa, thân tiếp tục , trọng lượng phân tử cut-off khoảng 150 kDa • [0046] Nó dự định phương pháp lọc phù hợp tìm thấy sử dụng sáng chế, bao gồm không giới hạn phương pháp lọc thông thường (ví dụ, cách sử dụng vũ lực hấp dẫn) phương pháp lọc tiếp tuyến qua dòng chảy Thuật ngữ "dòng chảy chéo lọc" "lọc tiếp tuyến" sử dụng thay cho Bản tham chiếu đến phương pháp lọc tập trung liên tục tiếp tuyến chảy qua bề mặt màng lọc dòng chảy thấm nhập trough màng lọc • [0047] Trong số biểu diễn sáng chế nay, trình tập trung huyền phù vi sinh vật có chứa bao gồm bước ly tâm hệ thống treo vi sinh vật có chứa kết tập trung vi sinh vật có chứa mặt, bước siêu lọc áp dụng cho vi sinh vật -containing tập trung để sản xuất thấm nhập tập trung vi sinh vật có chứa thứ hai Trong số phương án, bước siêu lọc sử dụng siêu lọc tiếp tuyến Trong số biểu diễn, phần vi sinh vật diện tinh vi sinh vật có chứa / thứ hai thu hồi Trong số biểu thay thế, phần vi sinh vật diện tinh vi sinh vật có chứa / thứ hai sử dụng trực tiếp sản xuất thực phẩm / mặt hàng khác (ví dụ, thêm vào hỗn hợp sữa để sản xuất sữa chua) • [0048] Thật vậy, phương pháp lọc phù hợp phát sử dụng sáng chế, số biểu ưu tiên đặc biệt, siêu lọc sử dụng Như nêu tài liệu này, thí nghiệm cho thấy kích thước lỗ nhỏ tạo điều kiện tập trung nhanh vi sinh vật Nó ngạc nhiên phát số lỗ chân lông màng vi lọc phạm lỗi cho vi sinh vật, làm giảm hiệu vi lọc Khi màng siêu lọc có kích thước lỗ nhỏ hơn, tượng không xảy trình siêu lọc Như vậy, hiệu siêu lọc không bị ảnh hưởng ô nhiễm Siêu lọc tạo điều kiện cho việc trì thông lượng (tức là, tốc độ lọc) chất lỏng thông qua lọc • [0049] Trong số phương án, phương pháp sáng chế sử dụng xử lý hàng loạt, bước ly tâm lọc thực riêng rẽ, phương án khác, phương pháp sử dụng "liên tục, chảy chế biến".Trong xử lý dòng chảy liên tục, máy ly tâm tiếp tục cho ăn với việc đình vi sinh vật có chứa cung cấp dòng chảy liên tục đầu tập trung vi sinh vật chứa, mà sau trực tiếp liên tục xử lý qua bước lọc • [0050] Như vậy, số biểu trình dòng chảy liên tục, phương pháp sáng chế bao gồm bước (1) ly tâm đình vi sinh vật chứa để sản xuất tập trung vi sinh vật có chứa chất lỏng bề mặt; (2) liên tục thu hồi vi sinh vật có chứa tinh ly tâm đầu tiên; (b) lọc tinh vi sinh vật có chứa để sản xuất thấm nhập tập trung vi sinh vật có chứa thứ hai Trong số phương án, bước ly tâm trực sau bước lọc • [0051] Trong số biểu bổ sung, phương pháp tiếp bao gồm bước lọc thêm thực tập trung vi sinh vật có chứa thu sau bước (b) Như vậy, số phương án, tập trung vi sinh vật chứa phải chịu nhiều "chu kỳ" lọc Mục đích để cung cấp tập trung nhiều tập trung cao độ (tức là, cô đặc có chứa nồng độ cao vi sinh vật) Bất kỳ phương pháp lọc phù hợp phát sử dụng bước lọc bổ sung Hơn nữa, bước lọc thích hợp cho nhiều lần lặp lại mong muốn MÔ TẢ CHI TIẾT CỦA SÁNG CHẾ • [0052] Sáng chế cung cấp quy trình để tập trung huyền phù vi sinh vật chứa Trong số phương án ưu tiên, quy trình bao gồm bước ly tâm bước lọc Quá trình đặc biệt thích hợp cho việc tập trung huyền phù vi sinh vật chứa (ví dụ, lactic acid bacteria huyền phù) quy mô công nghiệp • [0053] Sáng chế cung cấp quy trình để tập trung huyền phù vi sinh vật chứa Những phương pháp bao gồm ly tâm hệ thống treo vi sinh vật chứa để sản xuất tập trung vi sinh vật có chứa mặt, sau lọc tập trung vi sinh vật có chứa đầu tiên, để sản xuất thấm nhập tập trung vi sinh vật có chứa thứ hai Trong số biểu diễn đặc biệt ưa thích, bước ly tâm lọc theo sau phục hồi phần vi sinh vật từ hai hai vi sinh vật có chứa tinh / thứ hai Trong số biểu diễn nữa, phần vi sinh vật lần / tập trung vi sinh vật có chứa thứ hai bảo quản sử dụng phương pháp thích hợp biết đến nghệ thuật (ví dụ, đông lạnh, đóng băng khô làm khô lạnh, vv) Trong số biểu bổ sung, tập trung vi sinh vật có chứa thứ hai sử dụng trực tiếp sản xuất thực phẩm sản phẩm khác (ví dụ, giới thiệu cô đặc thành hỗn hợp sữa để sản xuất sữa chua) • [0054] Việc tập trung vi sinh vật có chứa chứa phần lớn tất vi sinh vật có huyền phù ban đầu Các bước lọc phục vụ để tập trung vi sinh vật tập trung cách loại bỏ chất lỏng dịch lọc kết • [0055] Trong số phương án, phương pháp sáng chế liên quan đến bước giặt Bất kỳ giải pháp phù hợp phát sử dụng bước rửa (ví dụ, chất lỏng nước thực phẩm cấp vùng đệm) Sử dụng bước rửa tiếp tục loại bỏ thành phần chứa việc đình vi sinh vật chứa (s) Tuy nhiên, số phương án ưu tiên, bước rửa không thực bước ly tâm (s) bước lọc (s) Trong số biểu diễn đặc biệt ưa thích, bước rửa thực / sau bước lọc Trong số phương án, bước rửa thực bước lọc bổ sung • [0056] Trong số biểu diễn nữa, gạn lấy sau bước ly tâm (s) / thấm nhập thu sau bước lọc (s) phục hồi Những thân tìm thấy ứng dụng đặc biệt phân tử quan tâm vào gạn / thấm nhập Một số ví dụ phân tử quan tâm bao gồm, không giới hạn bacteriocins, enzym acid lactic Trong số phương án, thu sau bước ly tâm (s) / thấm nhập thu sau bước lọc (s) chịu nhiều ly tâm / bước lọc (s) trước phục hồi phân tử (s) quan tâm • [0057] Như nêu trên, số phương án, phương pháp sáng chế có chứa thêm bước bảo quản / lưu trữ Trong số biểu diễn, đông khô, sấy khô, đóng băng / làm mát find sử dụng Bất kỳ phương pháp thích hợp phát sử dụng sáng chế Ví dụ, sấy khô thực trống khô, sấy phun, sấy tầng sôi, khay sấy, phương pháp thích hợp khác Nó dự định mà sáng chế giới hạn bảo quản đặc biệt / bước lưu trữ • [0058] Các phương pháp sáng chế tìm sử dụng việc cung cấp hệ thống treo tập trung cao độ vi sinh vật thích hợp, bao gồm không giới hạn vi khuẩn, virus, nấm (ví dụ, khuôn mẫu nấm men), sinh vật đơn bào tảo • [0059] Trong số phương án, đình vi sinh vật chứa nước dùng lên men có chứa vi khuẩn Trong số phương án ưu tiên, vi khuẩn bao gồm nhiều chi Acetobacter, Bifidobacterium, Carnobacterium, Enterococcus, Lactococcus, Lactobacillus, Leuconostoc, Pediococcus, Oenococcus, Propionibacterium vàStreptococcus Tuy nhiên, ý định sáng chế giới hạn chi loài vi khuẩn đặc biệt • [0060] Trong số phương án ưu tiên, việc đình vi sinh vật chứa, (ví dụ, nước dùng lên men), có chứa vi khuẩn axit lactic Trong số phương án, vi khuẩn axit lactic chi Bifidobacterium, Lactococcus, Lactobacillus, Leuconostoc, Carnobacterium, Pediococcus, Streptococcus Trong số biểu diễn đặc biệt ưa thích, vi khuẩn axit lactic thuộc loài Leuconostoc spp.,Bifidobacterium ssp, Lactococcus lactis, Lactococcus cremoris, Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus casei, Lactobacillus kefir, Lactobacillus bifidus, Lactobacillus brevis, Lactobacillus helveticus, Lactobacillus paracasei, Lactobacillus rhamnosus, Lactobacillus salivarius, Lactobacillus curvatus, Lactobacillus bulgaricus, Lactobacillus sake, Lactobacillu reuteri, Lactobacillus lactis, Lactobacillus delbreuckii, Lactobacillus plantarum Streptococcus thermophilus Tuy nhiên, ý định sáng chế giới hạn loài cụ thể, phân loài, căng thẳng, vv, vi khuẩn • [0061] Như nêu tài liệu này, phương pháp sáng chế đặc biệt hữu ích hiệu chi phí để tập trung huyền phù vi sinh vật có chứa quy mô công nghiệp, nơi mà lượng lớn hệ thống treo điều trị (ví dụ, khoảng 500 đến khoảng 100.000 L) Trong phương pháp sáng chế bước ly tâm làm giảm đáng kể khối lượng giải pháp, kết tập trung mà sau tiếp tục tập trung vào bước lọc Vì vậy, số biểu trình kết sáng chế mức nồng độ cao khoảng 1,2 đến 10 lần hiệu so với ly tâm, phương án khác, mức độ tập trung hiệu khoảng 1,2 đến lần so với ly tâm mình, thân khác, khoảng 1,8 đến 2,5 lần hiệu so với ly tâm Hơn nữa, phương pháp sáng chế có xu hướng tốn kém, so với lọc mình, hoạt động vi sinh vật trì thông qua trình • [0062] Trong số biểu diễn đặc biệt ưa thích, tập trung vi sinh vật chứa thức (ví dụ vi sinh vật có chứa tinh thứ hai) tập trung vào số tiền từ khoảng 22 lần gấp 80 lần so với nồng độ việc đình vi sinh vật có chứa ban đầu, khác phương án, phạm vi nồng độ khoảng 30 lần khoảng 65 lần, thân khác, phạm vi nồng độ khoảng 40 lần khoảng 55 lần so với nồng độ vi sinh vật việc đình vi sinh vật có chứa ban đầu Như vậy, số phương án, đình vi sinh vật chứa thức có chứa số lượng lớn vi sinh vật lượng, khoảng 10 đến 10 12 cfu / ml, phương án khác, nồng độ cuối khoảng · 10 đến khoảng · 10 11 cfu / ml • [0063] Do đó, sáng chế cung cấp chất cô vi sinh vật chứa Những cô đặc sử dụng ứng dụng khác nhau, bao gồm, không giới hạn để sản xuất thực phẩm, sản xuất thức ăn, vv Như nêu trên, sáng chế phát sử dụng việc cung cấp chất cô đặc vi sinh vật thích hợp thực nghiệm • [0064] Các ví dụ sau cung cấp để chứng minh minh hoạ thêm số phương án ưu tiên khía cạnh sáng chế không hiểu giới hạn phạm vi • [0065] Trong công bố thử nghiệm mà sau, chữ viết tắt sau áp dụng: ° C (độ C); rpm (vòng phút); xg (lần trọng lực); H O (nước); kD (kilodalton); gm (gram); mg ug (microgram); mg (milligram); ng (nanogam); ml ul (microliters); ml (ml); mm (mm); nm (nanomet); mm um (micromet); M (mol); mM (millimolar); mM um (micromolar); kDa (kilodalton); U (đơn vị); V (V); MW (trọng lượng phân tử); sec (giây); (s) (phút / phút); hr (s) (giờ / giờ); CFU (đơn vị khuẩn lạc hình thành); Alfa Laval (Alfa Laval, Richmond, Va.); t, MI); Gibco BRL Gibco BRL (Life Technologies, Inc., Gaithersburg, Md.); PTI nâng cao lọc (PTI nâng cao lọc Inc., Brooklyn Park, Minn.); Westfalia (Westfalia Separator, Inc., NORTHVALE, NJ; Tami (Tami Industries, Nyons, FR); Coors (Coors Gốm sứ, Denver, Colorado) Ví dụ • [0066] Trong ví dụ này, văn hóa Streptococcus thermophilus, trồng môi trường tiêu chuẩn có chứa chất rắn sữa, nấm men carbohydrate lên men, điều kiện tiêu chuẩn, biết nghệ thuật tập trung sử dụng phương pháp sáng chế • [0067] Đầu tiên, 2500 L nước dùng lên men từ văn hóa thermophilus Streptococcus làm lạnh xuống đến 5-10 ° C tập trung thông qua ly tâm sử dụng Alfa Laval đĩa chồng ly tâm lực hấp dẫn 8304 × g Các cô đặc thu được thu thập trì mức 510 ° C • [0068] A 100 kg mẻ tập trung thu từ bước ly tâm tập trung sử dụng hệ thống vi lọc Alfa Laval, với màng polymer kích thước lỗ 0,2 micron (Alfa Laval) Các bước lọc dẫn đến 45,8 kg thấm nhập (ví dụ, yếu tố nồng độ 1,8 ×) Tuy nhiên, yếu tố nồng độ tổng thể xác định khoảng 46 ×, bảng Trong suốt thời gian, thấm nhập thu tinh thể rõ ràng, cho thấy lối tế bào qua màng Các mẫu thức ăn tinh chụp suốt chạy, đông lạnh để đo số lượng tế bào hoạt động Các mẫu trồng M17 trung bình ngày 37 ° C., biết nghệ thuật, trước đo đếm tế bào thực Kết phân tích thể trongFIGS Rõ ràng, lọc màng cho thấy tác dụng có hại số lượng tế bào hoạt động trình axit hóa dòng Staphylococcus thermophilus Ví dụ • [0069] Một văn hóa Lactobacillus acidophilus trồng điều kiện tiêu chuẩn, môi trường tiêu chuẩn có chứa chất rắn sữa, nấm men carbohydrate lên men, biết nghệ thuật tập trung sử dụng phương pháp sáng chế • [0070] Đầu tiên, 1600 L nước dùng lên men chủng Lactobacillus acidophilus làm lạnh xuống đến 5-10 ° C., tập trung qua ly tâm, lưu trữ mô tả Ví dụ • [0071] Sau đó, 72 kg cô đặc thu sau ly tâm tập trung sử dụng hệ thống siêu lọc (Tami) với màng gốm kích thước lỗ 150 kDa (Tami) Các bước lọc sản xuất 40 kg thấm nhập, đại diện cho yếu tố nồng độ 2,3 × Trong suốt thời gian, thấm nhập thu tinh thể rõ ràng, cho thấy lối tế bào qua màng • [0072] Các mẫu cô đặc thực cuối chạy, đông lạnh để đo số lượng tế bào hoạt động • [0073] Các mẫu sau trồng MAS trung cho ngày 37 ° C., biết nghệ thuật, trước đo đếm tế bào thực Các kết thử nghiệm số lượng tế bào thể SUNG Rõ ràng, lọc màng dẫn đến tác dụng có hại số lượng tế bào thông qua tất bước trình nuôi cấyLactobacillus acidophilus thể Bảng 1, yếu tố nồng độ tổng thể 50 × • [0074] Các cô đặc thu sau rửa nước phải chịu bước lọc bổ sung, mô tả trên.Các yếu tố nồng độ tổng thể cuối xác định 40 × Ví dụ • [0075] Một văn hóa Lactococcus lactis trồng điều kiện tiêu chuẩn môi trường có chứa chất rắn sữa, nấm men carbohydrate lên men, biết nghệ thuật, tập trung sử dụng phương pháp sáng chế • [0076] Đầu tiên, 2400 L nước dùng lên men có chứa lactis Lactococcus làm lạnh xuống đến 5-10 ° C tập trung thông qua ly tâm đĩa ly tâm Westfalia ngăn xếp, sử dụng lực hấp dẫn 9300 × g Việc tập trung kết thu thập lưu trữ 5-10 ° C • [0077] tập trung sau tiếp tục tập trung sử dụng hệ thống vi lọc PTI, với màng gốm kích thước lỗ 0,2 micron (Coors) Các thấm nhập kết thu thập đo, với yếu tố nồng độ 3,1 × Trong suốt thời gian, thấm nhập thu tinh thể rõ ràng, cho thấy lối tế bào qua màng • [0078] Các mẫu thức ăn tinh chụp suốt chạy, đông lạnh để đo số lượng tế bào hoạt động tiếp theo.Các mẫu trồng MAS trung cho ngày 30 ° C., biết nghệ thuật, trước đo đếm tế bào thực Kết phân tích thể FIGS Các liệu từ thí nghiệm vi lọc dẫn đến tác dụng có hại số lượng tế bào hoạt động trình axit hóa văn hóa Lactococcus lactis [...]... tiên và nổi trên mặt, sau đó lọc của tập trung vi sinh vật có chứa đầu tiên, để sản xuất một thấm nhập và một tập trung vi sinh vật có chứa thứ hai Trong một số biểu diễn đặc biệt ưa thích, các bước ly tâm và lọc được theo sau bởi sự phục hồi của ít nhất một phần các vi sinh vật từ một trong hai hoặc cả hai vi sinh vật có chứa tinh đầu tiên và / hoặc thứ hai Trong một số biểu diễn hơn nữa, ít nhất là một. .. tế bào hoặc hoạt động quá trình axit hóa của dòng này của Staphylococcus thermophilus Ví dụ 2 • [0069] Một nền văn hóa của Lactobacillus acidophilus trồng trong điều kiện tiêu chuẩn, trong một môi trường tiêu chuẩn có chứa chất rắn sữa, nấm men và carbohydrate lên men, như đã biết trong nghệ thu t đã được tập trung sử dụng các phương pháp của sáng chế • [0070] Đầu tiên, 1600 L của nước dùng lên men của. .. 5-10 ° C và tập trung thông qua ly tâm sử dụng một Alfa Laval đĩa chồng ly tâm tại một lực hấp dẫn của 8304 × g Các cô đặc thu được đã được thu thập và duy trì ở mức 510 ° C • [0068] A 100 kg mẻ tập trung này thu được từ bước ly tâm được tập trung sử dụng một hệ thống vi lọc Alfa Laval, với một màng polymer của kích thước lỗ 0,2 micron (Alfa Laval) Các bước lọc dẫn đến 45,8 kg thấm nhập (ví dụ, một yếu... chất rắn sữa, nấm men và carbohydrate lên men, như đã biết trong nghệ thu t, được tập trung sử dụng các phương pháp của sáng chế • [0076] Đầu tiên, 2400 L của nước dùng lên men có chứa các lactis Lactococcus được làm lạnh xuống đến 5-10 ° C và tập trung thông qua ly tâm trên một đĩa ly tâm Westfalia ngăn xếp, sử dụng một lực hấp dẫn của 9300 × g Việc tập trung kết quả được thu thập và lưu trữ tại 5-10... tâm là hiện nay vào gạn và / hoặc thấm nhập Một số ví dụ về các phân tử quan tâm bao gồm, nhưng không giới hạn bacteriocins, enzym và acid lactic Trong một số phương án, nổi thu được sau khi bước ly tâm (s) và / hoặc thấm nhập thu được sau khi bước lọc (s) đang chịu nhiều ly tâm và / hoặc bước lọc (s) trước sự phục hồi của các phân tử (s) của quan tâm • [0057] Như đã nêu ở trên, trong một số phương án,... tiếp và liên tục được xử lý qua các bước lọc • [0050] Như vậy, trong một số biểu quá trình dòng chảy liên tục, các phương pháp của sáng chế bao gồm các bước (1) ly tâm đình chỉ vi sinh vật chứa để sản xuất một tập trung vi sinh vật có chứa đầu tiên và một chất lỏng nổi trên bề mặt; (2) liên tục thu hồi các vi sinh vật có chứa tinh trong ly tâm đầu tiên; và (b) lọc tinh vi sinh vật có chứa đầu tiên để sản. .. gồm, nhưng không giới hạn để sản xuất thực phẩm, sản xuất thức ăn, vv Như đã nêu ở trên, các sáng chế phát hiện sử dụng trong việc cung cấp các chất cô đặc của bất kỳ vi sinh vật thích hợp thực nghiệm • [0064] Các ví dụ sau đây được cung cấp để chứng minh và minh hoạ thêm một số phương án ưu tiên và các khía cạnh của sáng chế hiện tại và không được hiểu như giới hạn phạm vi của nó • [0065] Trong công... Industries, Nyons, FR); và Coors (Coors Gốm sứ, Denver, Colorado) Ví dụ 1 • [0066] Trong ví dụ này, một nền văn hóa của Streptococcus thermophilus, được trồng trong môi trường tiêu chuẩn có chứa chất rắn sữa, nấm men và carbohydrate lên men, điều kiện tiêu chuẩn, như đã biết trong nghệ thu t đã được tập trung sử dụng các phương pháp của sáng chế • [0067] Đầu tiên, 2500 L của nước dùng lên men từ các nền văn... tiếp tục tập trung sử dụng một hệ thống vi lọc PTI, với một màng gốm kích thước lỗ 0,2 micron (Coors) Các thấm nhập kết quả được thu thập và đo, với một yếu tố nồng độ 3,1 × Trong suốt thời gian, sự thấm nhập thu được tinh thể rõ ràng, cho thấy không có lối đi của các tế bào qua màng • [0078] Các mẫu thức ăn tinh được chụp trong suốt chạy, và đông lạnh để đo số lượng tế bào và các hoạt động tiếp theo.Các... sự thấm nhập thu được tinh thể rõ ràng, cho thấy rằng không có lối đi của các tế bào qua màng Các mẫu thức ăn tinh được chụp trong suốt chạy, và đông lạnh để đo số lượng tế bào và các hoạt động tiếp theo Các mẫu được trồng trên M17 trung bình trong 2 ngày ở 37 ° C., như đã biết trong nghệ thu t, trước khi đo đếm tế bào đã được thực hiện Kết quả của các phân tích được thể hiện trongFIGS 1 và 2 Rõ ràng,