BÀI 3:THỰC HÀNH KỸ THUẬT ĐỔ MÔI TRƯỜNG THẠCH ĐĨA VÀ KỸ THUẬT CẤY THẠCH NGHIÊN, THẠCH ĐỨNG Chuẩn bị, dụng cụ I -Đĩa petri trùng -Nước muối sinh lý (0,85%NaCl) -Cá -Môi trường lỏng: PCA -Ống nghiệm chứa thạch nghiêng (2 ống), thạch đứng (2 ống) -Que cấy thẳng, que cấy vòng -Nguồn vi sinh vật (xanh lá) -Dụng cụ: đèn cồn, ống nghiệm, pipette, dao, thớt, cân kỹ thuật, đầu coin, II Phương pháp tiến hành, kết quả, đánh giá kết Kỹ thuật đỗ môi trường vào đĩa petri Cách tiến hành: -Vô trùng dụng cụ -Dùng dao cắt cân 1g thịt cá cho vào 9ml dung dịch nước muối sinh lí, dùng máy lắc đảo dung dich, thu dung dịch có nồng độ 10-1 -Tiếp tục dùng pipet hút 1ml dung dich có nồng độ 10-1 cho vào ống nghiệm chứa 9ml dung dịch nước muối sinh lí, dùng máy lắc đảo dung dịch, thu dung dịch có nồng độ 10 -2 -Tiến hành đổ đĩa: • • Hút 1ml dung dịch có nồng độ 10-1 cho vào đĩa, sau đổ khoảng 15 – 20 ml môi trường PCA vào đĩa, đậy nắp, xoay đĩa theo vòng số khoảng vòng, đợi cho đĩa khô lặt úp đĩa lại Hút 1ml dung dịch có nồng độ 10-2 cho vào đĩa, sau đổ khoảng 15 – 20 ml môi trường PCA vào đĩa, đậy nắp, xoay đĩa theo vòng số khoảng vòng, đợi cho đĩa khô lặt úp đĩa lại -Đổ hết môi trường, tiến hành đặt đĩa vào tủ ấm để ủ Sau 24h đem quan sát Kết quả: Nồng độ 10-1: Nồng độ 10-2: Đánh giá kết quả: • Với nồng độ 10-1 vi sinh vật dày đặc, chúng xếp chồng lên nhau, khó đếm • Với nồng độ 10-2 vi sinh vật thưa dần, tượng xếp chồng lên vi sinh vật hạn chế, chưa đếm xác • Nên pha loãng thịt cá đến nồng độ 10-4 để đếm xác số vi sinh vật đĩa • Một số đĩa bị nhiễm vi sinh vật từ không khí thao tác sai • Kỹ thuật cấy thạch Cách tiến hành: Đối với thạch nghiêng: chấm que cấy vào nguồn (cấy hình chữ Z, từ • Đối với thạch nguội, sau đứng que cấy vào nhẹ nhàng tránh Kết quả: Đối với thạch nghiêng: Đánh giá kết quả: đếm trường không nhìn rõ vi sinh vật khí, thao tác vô trùng chưa nghiêng, thạch đứng Đốt 2/3 que cấy vòng, đợi cho que cấy nguội, sau vi sinh vật, cấy nguồn vi sinh vật lên bề mặt thạch ngoài) Ảnh minh họa: đứng: Đốt 2/3 que cấy thẳng, đợi cho que cấy chấm que cấy vào nguồn vi sinh vật, đâm thẳng phần thạch (sâu khoảng ½ độ dày thạch ), đâm bể thạch số lượng vi sinh vật, số ống môi bị nhiễm vi sinh vật từ môi trường không xác