THỰC HÀNH kỹ THUẬT đổ đĩa

BÀI 3:THỰC HÀNH KỸ THUẬT ĐỔ MÔI TRƯỜNG THẠCH ĐĨA VÀ KỸ THUẬT CẤY THẠCH NGHIÊN, THẠCH ĐỨNG Chuẩn bị, dụng cụ I -Đĩa petri trùng -Nước muối sinh lý (0,85%NaCl) -Cá -Môi trường lỏng: PCA -Ống nghiệm chứa thạch nghiêng (2 ống), thạch đứng (2 ống) -Que cấy thẳng, que cấy vòng -Nguồn vi sinh vật (xanh lá) -Dụng cụ: đèn cồn, ống nghiệm, pipette, dao, thớt, cân kỹ thuật, đầu coin, II  Phương pháp tiến hành, kết quả, đánh giá kết Kỹ thuật đỗ môi trường vào đĩa petri Cách tiến hành: -Vô trùng dụng cụ -Dùng dao cắt cân 1g thịt cá cho vào 9ml dung dịch nước muối sinh lí, dùng máy lắc đảo dung dich, thu dung dịch có nồng độ 10-1 -Tiếp tục dùng pipet hút 1ml dung dich có nồng độ 10-1 cho vào ống nghiệm chứa 9ml dung dịch nước muối sinh lí, dùng máy lắc đảo dung dịch, thu dung dịch có nồng độ 10 -2 -Tiến hành đổ đĩa: • • Hút 1ml dung dịch có nồng độ 10-1 cho vào đĩa, sau đổ khoảng 15 – 20 ml môi trường PCA vào đĩa, đậy nắp, xoay đĩa theo vòng số khoảng vòng, đợi cho đĩa khô lặt úp đĩa lại Hút 1ml dung dịch có nồng độ 10-2 cho vào đĩa, sau đổ khoảng 15 – 20 ml môi trường PCA vào đĩa, đậy nắp, xoay đĩa theo vòng số khoảng vòng, đợi cho đĩa khô lặt úp đĩa lại -Đổ hết môi trường, tiến hành đặt đĩa vào tủ ấm để ủ Sau 24h đem quan sát  Kết quả: Nồng độ 10-1: Nồng độ 10-2:  Đánh giá kết quả: • Với nồng độ 10-1 vi sinh vật dày đặc, chúng xếp chồng lên nhau, khó đếm • Với nồng độ 10-2 vi sinh vật thưa dần, tượng xếp chồng lên vi sinh vật hạn chế, chưa đếm xác • Nên pha loãng thịt cá đến nồng độ 10-4 để đếm xác số vi sinh vật đĩa • Một số đĩa bị nhiễm vi sinh vật từ không khí thao tác sai  • Kỹ thuật cấy thạch Cách tiến hành: Đối với thạch nghiêng: chấm que cấy vào nguồn (cấy hình chữ Z, từ • Đối với thạch nguội, sau đứng que cấy vào nhẹ nhàng tránh  Kết quả: Đối với thạch nghiêng:  Đánh giá kết quả: đếm trường không nhìn rõ vi sinh vật khí, thao tác vô trùng chưa nghiêng, thạch đứng Đốt 2/3 que cấy vòng, đợi cho que cấy nguội, sau vi sinh vật, cấy nguồn vi sinh vật lên bề mặt thạch ngoài) Ảnh minh họa: đứng: Đốt 2/3 que cấy thẳng, đợi cho que cấy chấm que cấy vào nguồn vi sinh vật, đâm thẳng phần thạch (sâu khoảng ½ độ dày thạch ), đâm bể thạch số lượng vi sinh vật, số ống môi bị nhiễm vi sinh vật từ môi trường không xác