Báo cáo đề tài DNA marker

Kỹ thuật DNA Marker DNA MARKER 0""000""0 Nhóm thưc hiên: Trân Như Khoa Nguyễn Duy Lan Nguyễn Thị Bích Liễu Lê Hoàng Lâm Nguyễn Thị Kim Ngân • DNAMARKER chất, chuỗi mã DNA dùng đê phân biệt hai cá thế, hai dòng hai giống khác có thê xem DNA marker Các DNA marker chia thành hai nhóm: -Marker dựa sở lai DNA: RFLP, minisatellite Kỹ thuật DNA Marker Restriction íragment length polymorphỉsm (RFLP) Đinh nghĩa: Kỳ thuật phân tích RFLP (đọc / ri-flip/- viết tắt Restriction Fragment Length Polymorphism) • • RFLP định nghĩa tính đa hình chiều dài phân đoạn cắt giới hạn, biều khác kích thước phân đoạn tạo cắt DNA enzyme cắt giới hạn có thay đôi trình tự DNA nhân bào quan khác Nguyên tac Dựa độ đặc cleavage • hiêu Restriction Fragment Length Polymorphism (RFLP) DNA Extracted from bloodcells Restriction Gssnyme m enzyme căt hạn chê Radỉoactiv (RE) vị trí Fragmcnts of DNA arc nhận biết chúngĩragrrienLs separatec by e Transíer of DNA electrophoresis DNAprobe DNA gen to a mcmbrane binds to (Southern blott) speciíìc DNA • DNA gen cắt bàng enzyme cắt giới hạn, chạy điện di qua gel Membrane is X -ray fllm, sand DNA pattem is wỉchcd washed free of to the membrane to compared with pattems from detect known y .I I I I I I I I I I I I Kỹ thuật DNA Marker - denxcge oi DklA t>f ĩeitnctton ĩnryrye o ceíi exraơed 7'V™* * prol'ĩừ*iĩvgof rodiơữctV e DtiA prơb* to ĩ spvc/k rnỉrrbronr — vtứShrttềtồi ** — CcD Co) (5ZD Extract DNA ticini the conuiiuuitv f/ t1sepơMtor ofON A (ro$rrr+ntĩ try rie&roữhyr plimA umpk (U«fi / tranứẼ' tõ a memtxaiìe f'5otfh*rn bkxv m PCR vvith n Huoiepcentty TTTTTỊ-g n 1*11 I I I I I I I I I I I I I I y ?= II S’ Rccogiution ot labeled H r -RFLP method Fragnient peparation in ^ec|ueiiẽing Re^tiiction mm* Sơ đồ kỹ thuật AFLP GGGTTA Kỹ thuật thuật DNA DNAMarkcr Marker Marker Kỹ T T 14 12 13 (PSP - preselective primers) cácgam) trìnhvàtự:10i) mẫu bô trợ adapter; bônhất trợ với trình tự có trọng lượng lớn (trungPSP bìnhchứa 3,9 cóvới trọng lượngii) nhỏ (trung bình nhận 2,2 AFLP Procedure Nhừng băng AFLPgiới có hạn; tần sốiii)khác 50% hiệnmà bảng liền kề với trình biết enzyme mộtbiệt nucleotid Các đoạnthểDNA nucleotid gam) tự nhận biết enzyme giới hạn bổ trợ với nucleotid PSP nhân lên (theo xác suất Tách chiết DNA: Tô họp môi Băng phần tư số đoạn DNA nhân lên) Tương tự, DNA mà nucleotid tiếpđược theorửa liềnsạch kề DNA cá tra tách chiết chủ yếu theo Fetznercác [3].đoạn Cụ thể: khoảng 50 mg mẫu 5’ GAATTC -TTAA 3’ vớicồn trình tự nhận biếtđệm TLE enzyme trợmM với EDTA; nucleotid mồi chọn selective 0,9 ml (10 giới mMhạn Tris;bô0,1 pH 8.0) Thêm vàolọc 0,9(SP ml -đệm phá tế 54 tổ hợp mồi sử3' CTTAAG -AATT dụng để phân tích đa hình bào AFLP (10 hai nhóm cá tra có trọng lượng lớn mM Tris; 100 mM EDTA; 2% SDS, pH 8.0).vàBổ sung 5pil enzyme protease K (20 mg/ml), nhỏ.Re»tnction Mỗi tổ họpDigcat mồi tạo từ 27 đến 94 băng, trung bình ủ 55°c I EcoR 55 băng tổ hợp mồi Trong đó, 14-16 Đe mẫu nhiệt độ phòng vàỊ Mse bổ sung A (lOmg/ml), ủ 37°c 4plvàRNAase cao tổ họp mồi E-ACC/M-CAG: 94 30 băng/mẫu, thấp tổ họp mồi Etrong EcoR adapter Adaptsr Llgation ACG/M-CTG: phút Thêm vào 0,3 ml dung dịch kết tủa protein (7,5 mM Ammonium Acetate), ‘AA trộn adaptpr TAl 27 băng/mẫu Trong 54 to họp mồi nghiênủcứu, to họp mồi không tạo băng AFLP 43 trong11MSP tôI họp đá 30 phút Ly tâm lần đề loại tủa protein thu dịch DNA Ket tủa DNA 0,9 ml AATTCMN NNTTA mồi tạo 204 băng AFLP Tỷ lệ băng đaisopropanol, hình mẫu cá tra 1,35% cho thấy đa " NNAA7 hình AFLP để -20 c giờ, ly tâm thu tủa DNA Rứa DNA bàng 0,75 ml cồn 70° Hòa tan DNA TTAAGNN tooR pnmer F-ACtiếp theo cho1các thí nghiệm PCR1 100pl đệm TLE Bảo quản 4°c để sử dụng Mse pnmerM-CC I AATTCAC GGTTAỊ AAGTG CCAATI E^-ACA PCR Bảng 1: Trình tự adapter mồi sử M-CCAC dụng phân tích AFLP I -GTGGTĨt rAATTCACA ÍACCAA Phân tích sản phẩm AFLP:ÌTTAAGTGTsau PCR, thể tích íbrmamide dye thêm vào phản ứng " Mầu Hình 1.tính Đa hình lớn vàvànhóm nhỏ tố hợp mồiAFLP E- được biến bàng AFLPgiữa nhiệt 95°cnhóm trongcá phút, đặt vào đá Sản phẩm ACA/M-CAG điện Ll-Cor s*q«ier>c*r I di gel polyacrylamide biến tính (19:1 acrylamide:bisacylamide; 7,5 M urea; 0,5 X TBE buffer geỉ ) eiectrophocests Tổng cộng có 204denaturing băng AFLPpolyacrylamide tạo từ 43 tổ hợp mồi, trung bình 4,74 băng AFLP/mồi Tần suất xuất băng AFLP hai nhóm cá tra khác nên tính tần số KÉT QUẢ VÀ THẢO LUẬN DNA hệ gen từ hai nhóm cá tra có trọng lượng lớn nhỏ tách chiết Ket đánh giá ứng dung So sánhđiện đa hình AFLPcho giữathấy hai chất nhómlượng cá thếDNA cá trađạt(pangasius có tiếp trọng lượng di agarose tiêu chuấnhypophthaỉmus) cho phân tích theo phân Để chuẩn bị khuôn DNA cho AFLP, DNA hệ biệt gen cắt đồng thời enzyme giới hạn Bảng 2: Tần số khác biệt củaEcoRI băng AFLP hai nhóm cá tra có trình tự nhận biết base pair (G(AATTC) Msel có trình tự nhận biết base pair NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP (T(TAA) Thành công kỳ thuật AFLP phụ thuộc vào cắt hoàn toàn phản ứng cắt chất Kỹ thuật DNA Marker 15 - Nhươc điêm AFLP marker trội, điều làm hạn chế phân biệt cá the đồng hợp dị hợp • Random Amplỉíìcation Polymorphic DNA (RAPD) Khái niêm: • RAPD (đọc "rapid") chừ viết tắt Random Ampliíícation of Polymorphic DNA nghĩa đa hình đoạn DNA khuếch đại ngẫu nhiên William (1990), Welsh cộng (1991) phát minh • Bảng Là phương pháp AFLP dựa PCRbiệt (Polymerase 3ĩ Các băng cókỹ tầnthuật số khác 50 %.Chain Reaction) nhàm đánh giá tính đa hình đoạn DNA nhân ngẫu nhiên Ket quảtắc cho thấy, có băng AFLP có tần số khác biệt 50%, chiếm 3,92% tổng số Nguyên băng • Nguyên tắc phản ứng RAPD nguyên tắc phản ứng PCR thông thường AFLP Đe kiểm tra mức độ ổn định tin cậy băng AFLP, tiến hành Tuy nhiên, phân tích sử dụng mồi ngẫu nhiên nên nhiệt độ bắt cặp mồi thấp đế tạo điều kiện băng AFLP với số lượng mẫu lớn (18 mẫu) Ket cho thấy, băng AF 6-1bắt cặp không tổ hợp nghiêm ngặt băng AF 7-4 tổ hợp mồi E- ACC/M-CAA đạt độ chênh lệch mồi E-AGG/M-CTT • Nhiệt độ bắt cặp phản ứng 30oC-36°C RAPD sử dụng mồi oligonucleotide tổng hợp ngẫu nhiên từ 9-12 base nên dễ KẾT LUẬN dàng tìm đoạn tương đồng mạch đơn DNA gen Phân tích đa hình AFLP cá tra 54 tổ họp mồi chọn lọc cho thấy tỷ lệ đa hình loài tương thấp, 1,35% nhiên, tỷ lệ đủ tin định DNA thị Cácđối đoạn mồitrung bình bắt cặp ngẫuTuy nhiên với hainày mạch đốicậy diệntrong việc mạchxác khuôn liên quan khoảng tính trạng cókhuếch ý nghĩa đại kinhđược tế (dưới 3000bp) cho đoạn DNA có kích thước cách khác sau So sánh đa hìnhđại AFLP nhóm cá tra có trọng lượng cực cho thấy băng AFLP có tần số khuếch khác biệt 50% Tuy nhiên có băng: AF 7-4 to hợp mồi E-ACC/M- CAA AF 6-1 Tính tổ đahọp dạng mồi thuE-AGG/M-CTT nhờ RAPD cólàtính đáng ổntin định, cậy,vàvìvẫn giữ có thaytỷđổi lệ mộtkhi basc kiểm nitơtra đósố lượng ngăn mẫu cản lớn việc tiếp ETai họpbăng giữanày mồisẽvàđược DNAsửmạch dụngkhuôn để tuyển Sựchọn đoạn lại nhiễm quần sắcđàn thể thêm bớt điểm gắn mồi xen vào gen làm thay đổi kích thước đoạn Kỹ thuật DNA Marker 16 Như vậy, với mồi ngẫu nhiên có 524 vị trí bắt cặp với mồi nghĩa có thê có 262 đoạn DNA nhân bội Do kỹ thuật RAPD sử dụng loại mồi đồng cho đầu đoạn DNA cần nhân bản, hai đoạn mồi phải kết cặp sợi đơn khác chuồi DNA phải “đi” theo chiều hướng vào nên xác suất phải nhỏ nhiều Xác suất nhỏ điều kiện thông thường kỹ thuật PCR tổng hợp đoạn DNA không dài 5000 nucleotide dẫn đến việc phản ứng PCR hiệu hai đoạn mồi kết cặp với DNA genome vị trí không xa 5000 bp Trong thực tế, số lượng nhở nhiều phụ thuộc vào độ dài đoạn nhân bội xếp trình tự bắt cặp với mồi DNA genome lúa Quy trình thưc hiên • Kỳ thuật RAPD thực theo bước sau: 3’ 5' RAPDtype ♦ ƯU vả nhươc điểm • RAPD phương pháp phân tích nhanh, rẻ tiền RFLP chi sử dụng lượng mẫu DNA nhỏ (25ng) Phương pháp không đòi hỏi việc phân lập đọc trình tự, Kỹ thuật DNA Marker • 17 RAPD marker tó hiệu việc thiết lập đồ gen họ tùng bách RFLP marker dùng cho mục đích hàm lượng DNA mô giao tử lớn thấp đòi hỏi thời gian dài để thu quần thể F2 • Mỗi primer cung cấp số liệu từ nhiều vị trí genom sai khác có tần xuất xuất thấp mẫu có quan hệ gần gũi có the phát nhanh so với việc phân tích locus đơn • Phương pháp nhạy cảm với điều kiện phản ứng chất lượng DNA, nồng độ muối ví dụ Mg2+ tỷ lệ mồi đoạn mẫu (template) kết trước sau • Các RAPD marker sử dụng việc lập đồ gen so sánh nhân dòng tính đặc thù thấp không ổn định chúng • Việc so sánh genom loài có quan hệ gần gũi đòi hỏi mẫu dò (probe) có thê nhận dạng vùng đồng dạng nhóm phân loại • Tuy nhiên thiếu tính đồng dạng giừa genom lại cho phép RAPD marker dùng cho việc lập đồ gen loài đa bội, các mẫu copy đơn RFLP lại lai với nhiều trình tự tạo band phức tạp khó xác định allele thay • Việc sử dụng marker rõ ràng để xác định loci có copy cần thiết việc nhân dòng Rất nhiều trình tự nhân lên nhờ PCR có chứa đoạn lặp lại rải rác không thê dùng làm mẫu lai • Các đoạn mồi ngắn dùng đe xác định RAPD marker nhân lên vài trình tự từ Kỹ Kỹ thuật thuật DNA DNA Marker Marker Chỉ thi RAPD 21 20 18 19 kiếmgiống tra gel agaroza 0,8% 1,3% khác băng 0P019-1200bp lúa, ỌP019-1000bp chỉmạch thấyđen, giống TML, truyền nhiều loài khác đậu tương, lúa đại mạch, đậubăng hà Chỉ 0P019-800bp giống lan, hoa thi Công trình sựxuất hỗ trợ phí nhiệm vụ thường đề tài cấp Viện TTB tronghoàn nhómthành đa hệvới chỉRAPD hiệnkinh giống BM Với mồi 0P016,xuyên: băng 30()bp quan sát hồng, v.v Công nghệ 10 11 12 13 Hình 2: Sản phẩm PCR mồi OP 13 SinhMhọc giống tàm nghiên cứu ứng dung Giếng DNA Phân tích kếtM: bằngẦ/EcoRI+HindlII chương trình phần mềm NTSYS phiên 2.0 Hệ số đồng dạng di Các giếng khác: mẫu giốngtruyền tính • Sử dụng tương phương pháp đê nhận dạng mức độ phân tử, khảo sát đa dạng sinh theo công thức Nei Li năm 1979 [3] học,vàphân ứng lập gen đột biến, xác định tính trạng liên kết hay di truyền, chẩn đoán bệnh III KÉT QUẢ 1-TTB 5-TML 6-VC 8-ĐS • ứng dụng cụ11thể: nghiên cứu đa tằm hình số giống dâu tàm / Tách chiết làm DNA mẫu 9-ĐS 10-BM THT 13-từ VYD Mầu nghiền mịn sử dụng hoà tan dung dịch đệm, thành tế bàocác màngDNA nhânnhân đượcngẫu phá vỡ, giải Ngày nay, việc thị phân tử được, DNA đa hình nhiênTừ số liệu thu phânđoạn tích phóng DNA RAPD (Random mối tuơng quan di huỷ truyền cáccác giống tằmliên kết Sau đó, dùng Tiếp theo boPolymorphic sung proteinaza K đe phân hoàn toàn Amplified DNA), đa hình độ dài đoạn cắtprotein giới hạn-RFLP (Restriction nghiên cún chương trình phần mềm hỗn họp phenol: Fragment Length phiênđơn 2.0 trình bàỵ bảng Polymorphism), lặp NTSYS lại các1chuỗi giản-SSR M (Simple Sequence Repeats) hay gọi tiếu vệ tinh (Microsatellite) để phân loại, nghiên cứu đa dạng sinh học động vật,khoảng thực vật0,547 viđến sinh Bảng cho thấy, giống TTB có hệ số đồng dạng di truyền daocủa động vật ngày phổ biến giới Việt Nam [4, 5, 7, 8] So sánh với phương pháp truyền thống, phân loại nghiên cứu đa hình thị phân tử cho kết có độ tin cậy cao [2] Kỳ thuật RAPD William cs, 1990Ảnh [8] phát triểnditrên sở PCR sử dụng số đoạn mồi Điện DNA ngẫu nhiên DNAvới củamột mẫu Kỹ thuật ứng dụng kết 1-5 họp :cùng số kỳ thuật khác đế phân loại, nghiên M : DNA ^/EcoRI+HindlII cứu quan hệ di Bảngdâu Tỷ OD260nm/OD280nm nồng truyền giũa cá thê tằm [1, số 2, 5, 10,11] Ớ Việt Nam chưa có công trình đề cập độ DNA tới vấn đề này, nghề nuôi tằm nghề truyền thống đất nước, đẩy Từ bảng hệ số đồng dạng di truyền, chúng tôiphát xây dựng mạnh triển, phân loại giống tàm việc phân loại đánh giá đa hình dựabiểu vào diễn đặc điểm sinh học hình thái, có thị hạn DNA giống tàm nghiên cứu, hình Dựa sơ đồ hình biểu đa hình chếchúng định nhận thấy giống tằm khảo sát chia thành hai nhóm lớn, cụm lại mức độ 0,54, nhóm Bảng 2: Kết cáctrình giống tằm nghiên TronẸ báoquả nàyRAPD chúng xin bày số thứ kếtcứu sử dụng kỳ thuật RAPD nghiên có giống TTB, nhóm thứ hai giống còntiếp lại,theo cụmlàớkích mứcthước độ 0,79 chia [2 Cột thị RAPD: chừ số ký hiệu mồi, củavàbăng, cứu đa hìnhđoạn PCR vói DNA cuả tằm dâu thành số :phân đoạn số giống tằm dâu nuôi Việt Nam DNA nhân, 0: phân đoạn nhân Giống 1:nghiên TTB, cứu 2: TML, Chúng tôiđược tìm điềusốkiện tối ưu choDNA phản không ứng nhân gen cáctằm mồiT [6 ], 3: sàng vc, lọc 4: ĐS1, 5:ĐS2, từ 20 đoạn M II NGUYÊN LIỆU PHƯƠNG mồibăng ngẫu nhiên đếđược chọnsử raVÀ đoạn phù chothị tằm Tiếp bao theogồm thựchai PCR cácvàgiống Lloại Các nhân dụng họp cácPHÁP RAPD đơnvới hình đa tằm, kết nhận hình Băng đơn -vc Nguyên liệu hình có mặt tất giống nghiên cứu, băng đa hình xuất giống lại vắng Mầu nghiên cứu gồm tám giống tằm dùngmặt ởcác tỉnh phía 051 Bắc Việt Nam: TTB, 1—■—■—■—■ I *được ■—*—'—r—«—■—■—■ OM giống khác Trong tổng số 67 băng nhận TML, vc, có ĐS 26 1, băng đơn hình, chiếm 38,81% 41 —I—'—'—'—'—I 035 0 75 OM hình, chiếm ĐS 2, BM, THT, VYD, OÕ5 cóbăng bốn đa giống sử dụng nhiều vài năm gần đây, c o« fĩlc vm nt 66,19%, kích cờ cácHình băng1.từCây lOObp đóphát đến hai giống 35()()bp địa Trong giống tằm sinh chủng loại giống nghiên cứu có Kỹ thuật DNA Marker 22 KÉT LUẬN Đã phân tích tính đa dạng di truyền giống tằm dâu nuôi Việt Nam kỹ thuật RAPD với đoạn mồi, kết nhận 67 băng DNA nhân có 26 (38,8%) băng đon hình 41 (61,2%) băng đa hình Đoạn mồi 0P016 cho số băng đa hình phong phú nhất, mồi 101 có tỷ lệ băng đa hình thấp IV (Simple Sequence Repeat - SSR) KỸ thuât SSR • Các trình tự lặp lại đơn giản (Simple Sequence Repeat) hay biết đến microsaterlite (vi vệ tinh) đoạn ngắn DNA có chứa từ đến cặp base có trình tự lặp lại liên tiếp số trình tự lặp lại dao động từ đến 40 • Các trình tự lặp lại đơn giản phổ biến hệ gen động vật thực vật Chúng phân bố hệ gen có tính đực trung cho loài Kỹ thuật DNA Marker 23 • Kỹ thuật SSR có tiềm lớn có khả phát tính đa hình cao, phân biệt sai khác mà không xác định bàng marker khác RAPD RFLP • SSR primer có từ đến 12 locus (tuỳ vào loài) tổ hợp ống phản ứng PCR cho phép đồng thời ghi nhân kiêu gen có nhiều locus Phản ứng không tốn kém, tiêt kiệm thời gian hoá chất Kỹ thuật DNA Marker 24 Nhươc điểm: • Nhược điếm phương pháp trình thiết kế mồi đắt, loại mồi đặc trưng cho locus đa hình Đe xây dựng cặp mồi đặc hiệu cần tách dòng đọc trình tự số lượng lớn đoạn ADN genom có chứa SSR • Hiện nay, số lượng primer thiết kế cho loại trồng hạn chế, làm giảm hiệu Tài liêu tham khảo • PGS.TS.Khuất Hữu Thanh-Đại học Bách Khoa Hà Nội - Cơ sở di truyền phân tử kỳ thuật gen - Trang 151 - NXB Khoa học kỳ thuật Hà Nội [...]... RAPD marker cũng nhân lên một vài trình tự từ các Kỹ Kỹ thuật thuật DNA DNA Marker Marker Chỉ thi RAPD 21 20 18 19 kiếmgiống tra trên gel agaroza 0,8% và 1,3% các khác như băng 0P019-1200bp và lúa, ỌP019-1000bp chỉmạch thấyđen, ở giống TML, truyền ớ nhiều loài khác nhau như đậu tương, lúa đại mạch, đậubăng hà Chỉ 0P019-800bp ở giống lan, hoa thi Công trình sựxuất hỗ trợ phí của nhiệm vụ thường đề tài. .. phụ thuộc vào sự cắt hoàn toàn của phản ứng cắt và chất Kỹ thuật DNA Marker 15 - Nhươc điêm AFLP là một marker trội, điều này làm hạn chế phân biệt cá the đồng hợp và dị hợp • Random Amplỉíìcation Polymorphic DNA (RAPD) Khái niêm: • RAPD (đọc là "rapid") là chừ viết tắt của Random Ampliíícation of Polymorphic DNA nghĩa là đa hình các đoạn DNA được khuếch đại ngẫu nhiên do William (1990), Welsh và cộng... Acetate), ‘AA trộn đều và 1 adaptpr TAl 27 băng/mẫu Trong 54 to họp mồi nghiênủcứu, to họp mồi không tạo băng AFLP và 43 trong11MSP tôI họp đá 30 phút Ly tâm 2 lần đề loại tủa protein và thu dịch DNA Ket tủa DNA bằng 0,9 ml AATTCMN NNTTA mồi tạo 204 băng AFLP Tỷ lệ băng đaisopropanol, hình giữa các mẫu cá tra là 1,35% cho thấy sự đa " NNAA7 hình AFLP để -20 c trong 3 giờ, ly tâm thu tủa DNA Rứa DNA bàng 0,75... triểnditrên cơ sở PCR sử dụng một số đoạn mồi 1 Điện DNA ngẫu nhiên DNAvới củamột mẫu Kỹ thuật này đã được ứng dụng kết 1-5 họp :cùng số kỳ thuật khác đế phân loại, nghiên M : DNA ^/EcoRI+HindlII cứu quan hệ di Bảngdâu 1 Tỷ OD260nm/OD280nm nồng truyền giũa các cá thê tằm [1, số 2, 5, 10,11] Ớ Việt Nam và chưa có công trình nào đề cập độ của DNA tới vấn đề này, mặc dù nghề nuôi tằm là một trong những nghề... xếp các trình tự bắt cặp với mồi trên DNA genome của lúa Quy trình thưc hiên • Kỳ thuật RAPD được thực hiện theo các bước cơ bản sau: 3’ 5' RAPDtype ♦ ƯU vả nhươc điểm • RAPD là phương pháp phân tích nhanh, rẻ tiền hơn RFLP và chi sử dụng một lượng mẫu DNA rất nhỏ (25ng) Phương pháp này không đòi hỏi việc phân lập và đọc trình tự, Kỹ thuật DNA Marker • 17 RAPD marker tó ra rất hiệu quả trong việc thiết... thuật DNA DNAMarkcr Marker Marker Kỹ T T 14 12 13 (PSP - preselective primers) cácgam) trìnhvàtự:10i) mẫu bô trợ adapter; bônhất trợ với trình tự có trọng lượng lớn nhất (trungPSP bìnhchứa là 3,9 cóvới trọng lượngii) nhỏ (trung bình nhận 2,2 AFLP là Procedure Nhừng băng AFLPgiới có hạn; tần sốiii)khác trên 50% được hiệnmà ở bảng 3 liền kề với trình biết của enzyme mộtbiệt nucleotid Các đoạnth DNA nucleotid... mồisẽvàđược DNAsửmạch dụngkhuôn để tuyển Sựchọn mất đoạn lại trong nhiễm quần sắcđàn thể hoặc sự thêm bớt điểm gắn mồi cũng như sự xen vào của một gen nào đó sẽ làm thay đổi kích thước đoạn Kỹ thuật DNA Marker 16 Như vậy, với một mồi ngẫu nhiên có thế có 524 vị trí bắt cặp với mồi nghĩa là có thê có 262 đoạn DNA được nhân bội Do kỹ thuật RAPD chỉ sử dụng một loại mồi đồng nhất cho cả 2 đầu đoạn DNA cần... nên chúng tôi đã tính tần số KÉT QUẢ VÀ THẢO LUẬN DNA hệ gen từ hai nhóm cá tra có trọng lượng lớn và nhỏ được tách chiết Ket quả đánh giá ứng dung trên So sánhđiện đa hình AFLPcho giữathấy hai chất nhómlượng cá th DNA cá trađạt(pangasius có tiếp trọng lượng di agarose tiêu chuấnhypophthaỉmus) cho các phân tích theo phân Để chuẩn bị khuôn DNA cho AFLP, DNA hệ biệt gen được cắt đồng thời bởi 2 enzyme... cụ11thể: nghiên cứu đa tằm hình một số giống dâu tàm / Tách chiết và làm sạch DNA mẫu 9-ĐS 2 10-BM THT 13-từ VYD Mầu nghiền mịn sử và dụng hoà tan trong dung dịch đệm, thành tế bàocác và màngDNA nhânnhân đượcngẫu phá vỡ, giải Ngày nay, việc các chỉ thị phân tử được, DNA về đa hình nhiênTừ các số liệu thu chúng tôi phânđoạn tích phóng DNA RAPD (Random mối tuơng quan di huỷ truyền giữa cáccác giống tằmliên... nucleotid Các đoạnth DNA nucleotid gam) tự nhận biết của enzyme giới hạn bổ trợ với nucleotid của PSP sẽ được nhân lên (theo xác suất một Tách chiết DNA: Tô họp môi Băng phần tư số đoạn DNA sẽ được nhân lên) Tương tự, DNA mà 3 nucleotid tiếpđược theorửa liềnsạch kề DNA cá tra được tách chiết chủ yếu theo Fetznercác [3].đoạn Cụ thể: khoảng 50 mg mẫu 5’ GAATTC -TTAA 3’ vớicồn trình tự nhận biếtđệm ... vị trí Fragmcnts of DNA arc nhận biết chúngĩragrrienLs separatec by e Transíer of DNA electrophoresis DNAprobe DNA gen to a mcmbrane binds to (Southern blott) speciíìc DNA • DNA gen cắt bàng enzyme... chứng Ket báo cáo chuyên viên DNA ghi nhận, lại chứng cụ thể để xác nhận mẫu DNA sản phẩm lấy từ mẫu bệnh phâm nguyên thuỷ Điếm sau tính phức tạp kỹ thuật diêm DNA liên quan đến vấn đề đạo đức... đa hình chiều dài đoạn DNA khuếch đại chọn lọc, kỳ thuật kết hợp RFLP PCR ❖ 1975 Vos cộng phát minh kỳ thuật 10 Kỹ thuật DNA Marker Xây dựng đồ DNA marker có hiệu so với marker khác ( Vos cộng