Công nghệ trích ly collagen và ứng dụng collagen

TÀI LIỆU THAM KHẢO MỤC LỤC 48 TÔng quan vê collagen DANH MỤC HÌNH Các loại collagen cấu tạo chúng Hình 1-1: .cấu trúc lớp hạ bì da Tính chất collagen Hình 1-2: Các 4.1 Tácliên dụng kếtvới sợi nuớc collagen .5 Thành phần acid amin có collagen 4.2 Hình Tác2-1: dụng vớitrúc acid, kiềm 10 cấu phân tử collagen 4.3 Hình Các2-2: tínhTrật chấttựkhác xếp collagen .11 acid amin collagen 4.3.1 KhảTừng năngbậc tạo cấu nhũtrúc tuông .11 Hình 2-3: chuỗi collagen 4.3.2 KhảTô hòa Hình 2-4: chức bótan .11 sợi collagen 4.3.3 Sự biến tính 11 Hình 6-1: .Quy trình chiết collagen acid acetic .14 Tính kị nước 12 Hình 6-2: điện di SDS-PAGE collagen loại I 4.3.5 Tính chất dung dịch sắckí keo 12 da heo collagen da cá (Điện di 4.3.6 Tính chất điện ly lưỡng tính 12 5% gel chứa urea 3,5M) (A) Da heo; (B) Cá Pecca; (C) Cá mập; (D) Cá thu .15 Các nguồn nguyên liệu có chứa collagen 12 Quy trích ly collagen từ da cá tra 13 Hìnhtrình 6-3:công Ọuy nghệ trình chiết collagen bàng pepsin .16 4.3.4 6.1 Hình Phương pháp hóa học .13 7-1: HANAMAI COLLAGEN: sản phẩm dạng bột, đuợc trộn chung với đậu hủPhương hay pháp dùng enzyme 16 6.2 phụ nữ Nhật 18 7.natto Cácdùng ứngtrong dụng bữa ăn collagen 18 Hình 7-2: Tóc bị hư tổn phục hồi sau sử dụng sản phẩm chăm sóc tóc có 7.1 Trong công nghiệp thực phấm 18 chứa collagen Hình 8-6: So sánh phóng thích FITC-dextran hydrogel collagen - PEOPPO-7.2 Trong mỹ phâm .19 PEO (EO 30%) chuẩn bị với nồng độ polymer 1,5, 10 15% 34 7.3 Trong y học dược phẩm .19 Hình 8-7: So sánh phóng thích FITC-dextran hydrogel collagen 8.PEO-PPOThành tụn 21 PEO (EO 80%) chuẩn bị với nồng độ polymer 1,5, 10 15% 34 8.1 Nghiên cún trích ly collagen .bằng enzyme collagenase kết họp với acid Hình 8-8: So sánh phóng thích FITC-dextran hydrogel collagen 21 PEO-PPOPEO 80%) chuẩn bị với nồng độ polymer 1, 5, 10% .35 8.1.1(EO 30% Mở đầu .21 Hình 8-9: Tế bào K562 A) Ma trận collagen - PEO-PPO-PEO (EO 80%) B) Ma Cách tiến hành 21 trận 8.1.2 8.1.3 Kết 23 Hình 8-10: A) Tế bào K562 ma trận hydrogel C-F108 (1%) sau tuần B) Hình ảnh SEM tế bào K562 C-F108 (1%) sau liên kết với glutaraldehyde (2%) (độ phóng đại 2500) 36 Hình 8-11: Hình ảnh điện di BSA tinh khiết BSA-PPG diglycidyl ether liên kết dọc môi trường thời điểm khác 36 Hình 8-12: Hình ảnh điện di collagen tinh khiết collagen diglycidyl ether môi trường nhừng thời điểm khác 37 Hình 8-13: Hình ảnh SEM collagne tinh khiết độ phóng đại khác 37 Hình 8-14: Hình ảnh SEM PG-COLc20 độ phóng đại khác 38 Hình 8-15: A) Đường cong TGA PPG diglycidyl ether tinh khiết; B) Đường cong TGA gel tổng hợp 38 Hình 8-16: Đồ thị DSC PPG diglycidyl ether tinh khiết; Tg = -76,7°c 38 Hình 8-17: Đường cong nhiệt collagen tinh khiết,, PG-COLc5 PGCOLc20 A) Quét lần B) Quét lần .39 Hình 8-18: Đường NMR A) PPG diglycidyl ether B) Collagen tinh khiết C) Gel tổng hợp T 39 DANH MỤC BẢNG Bảng 3-1: Sự phân bố amino acid chuồi polypeptide Bảng 8-1: Các loại polymer dùng để tổng hợp hydrogel .27 Bảng 8-2: Phương pháp chuẩn bị mẫu hydrogel 30 Bảng 8-3: Vật liệ sử dụng để sản xuất hydrogel tổng họp bàng phương pháp thủy phân .31 Bảng 8-6: Độ hấp thu tia uv hỗn họp BSA nồng độ khác 40 Bảng 8-7: sổ luợng nhóm amin tự dung dịch tổng hợp tỉ lệ polymer khác .7 40 Bảng 8-8: .Phần trăm phát triển tế bào gel tổng hợp so với mẫu chuẩn Tổng quan collagen Collagen loại protein cấu trúc thê động vật Nó phân bố phận da, cơ, gân, sụn, dây chằng xương Collagen loại protein chiếm tới 25% lượng protein thể người, có chức kết nối mô thể lại với Ví dụ sợi collagen chiếm chủ yếu sợi dây chằng, ảnh hưởng đến khả nén khóp sụn tính linh động mạch máu da Nó coi chất keo dính phận thê người thành khối hoàn chỉnh, collagen người phần rời rạc Chỉ riêng điều đủ tầm quan trọng collagen với sống người Trong thành phần da, lóp bì chứa nhiều collagen tạo hệ thống nâng đỡ, hồ trợ cho đặc tính học da sức căng, độ đàn hồi, trì độ ấm Dưỡng bào Nguyên bào sỢi SỢi đản hôi SỢi lưđi Đai thưc bào SỢi thân kinh Lymphô SỢi Collagen Bạch cầu trung tính Huyết tương Tê bào mổ Mao mạch Hình 1-1: cấu trúc lớp hạ bì da Collagen protein có cấu trúc bậc điển hình, đon vị tropocollagen cấu trúc bậc tổ hợp theo hướng dọc ngang làm collagen có nhiều mức cấu trúc (hình 1-2) Trong cấu Hình 1-2: Các liên kết sợi collagen Theo quan điêm y sinh, collagen đóng vai trò quan trọng phát triên, hàn gắn vết thuơng, thành phần hoạt hoá tiếu cầu máu hình thành mạch Thêm vào phát triển số bệnh di truyền đuợc xác định đột biến cấu trúc gen collagen Những rối loạn trình tổng hợp phân giải collagen đuợc ghi lại nguyên nhân nhiều bệnh phức tạp chứng viêm khóp, xơ gan, bệnh đái Các loại collagen cấu tạo chúng • Collagen tồn nhiều phận thể Đã có 29 loại collagen tìm thấy công bố tài liệu khoa học Trên 90% collagen thể loại I, II, III IV • Collagen loại I: có da, gân, mạch máu, quan, xương (thành phần xương) • Collagen loại II: có sụn xương (thành phần sụn) Collagen loại III: có bắp (thành phần bắp), tìm thấy bên cạnh collagen I • • Collagen loại IV: thành phần cấu tạo màng tế bào • Collagen loại V: có dây chằng, giác mạc, kê hở mô • Collagen loại VI: có gan, thận, màng sụn • Collagen loại VII: có nối liền da biểu bì • Collagen loại VIII: có tế bào màng • Collagen loại IX: có sụn cấu trúc phân tử collagen, phân tử collagen hay gọi tropocollagen cấu trúc dạng sợi hình ống chiều dài khoảng 300nm, đường kính l,5nm Mỗi sợi collagen cấu tạo từ ba chuỗi polypeptide (alpha peptide) nối với bàng liên kết hydro xoắn lại với giống sợi dây thừng (hình 2-1) Mỗi vòng xoắn có độ dài 3,3 gốc 1.5 nm 300 nm *- Hình 2-1: cấu trúc phân tử collagen Mỗi chuỗi polypeptide collagen cấu tạo từ amino acid theo trật tự, thông thường Gly - Pro - Y, Gly - X - Hyp (hình 2-2) Trong đó, X, Y đơn vị amino acid khác Proline (Pro) hydroxyproline (Hyp) chiếm khoảng 1/6 chuỗi, glycine chiếm khoảng 1/3 chuỗi Tổng cộng riêng proline, hydroxyproline, glycine chiếm 1/2 Glycine Hydroxyproline Proline — Alanine Hydroxyproline Proline Hình 2-2: Trật tự xếp acid amỉn collagen Phần lớn collagen mạng lưới ngoại bào tìm thấy dạng sợi, bao gồm sợi mảnh nhỏ Đầu tiên ba sợi collagen xoắn lại theo kiểu xoắn ốc xung quanh sợi hình thành nên ba tropocollagen Sau tropocollagen liên kết với theo kiểu đầu nối đuôi Bộ ba aniỉno aci(l Tỉ lệ Gly - X - X 0,44 Gly - X -1 0,2 Gly -1 - X 0,27cấu trúc có trật tự, độ bền vốn có chuỗi xoắn ốc chuyến sang Nhờ vào sợi Gly -1 -1 collagen, 0,09 cung cấp cho mô độ cứng, độ đàn hồi đặc tính co học riêng Vì collagen chắc, dai bền Thành phần acid amin có collagen Mồi loại collagen gồm có hàng nghìn cấu trúc amino acid, chủ yếu gồm có glycine, proline, hydroxyproline Collagen không chứa tryptophan, số protein chứa Hình 2-3: Tùng bậc cẩu trúc chuỗi collagen Trong I amino acid (proline hydroxyproline), X amino acid khác Glycine chiếm gần 1/3 tổng số amino acid phân bố cách đặn vị trí 1/3 xuyên suốt phân tử collagen Do glycine có nhánh phụ nhỏ nên lặp lại cho phép chuỗi polypeptide kết hợp chặt chẽ với tạo thành đường xoắn ốc với khoảng trống nhỏ phần lõi Trong collagen không chứa tryptophan, cystine loại protein khác, tyrosin, histidin, acid amin chứa lưu huỳnh loại diện không 1%, điều làm cầu nối disulíur (-S-S) cấu trúc collagen xuất nguyên nhân cho tính mềm dẻo so với keratin, chứa nhiều hydroxyproline Hydroxyproline Hình 2-4: collagen Tố chức bó acid amin đặc trưng màsợi cáccollagen loại protein khác Trong collagen Các chuồi collagen xếp song song theo chiều dọc liên kết với liên chứa kết đến 30% glycine, 10% hydroxyproline, 12% proline, 11% alanine ngang tạo thành sợi theo chu kỳ định Chúng xếp so lc khoảng 67nm Tính chất collagen Nhiệt độ phân giải collagen nguyên liệu chua xử lý tương đối cao Khi nguyên liệu khử hết chất khoáng, nhiệt độ phân giải giảm xuống 4.2 Tác dụng với acidy kiềm Collagen có thê tác dụng với acid kiềm, mạch collagen có gốc carboxyl amin Hai gốc định hai tính chất Trong điều kiện có acid tồn tại, ion tác dụng với gốc amin, điện tích carboxyl bị ức chế (hình thành acid yếu có độ ion hóa thấp) Trái lại gốc amin bị ion hóa tạo NH3+ NH3+ CT COOH NH3+ cr COOH Mòi trường OH COO' NH2 NH2 COO' NH2 COO' NH2 cocr Trong điều kiện có nước, nước tác dụng với nhóm gốc có mang điện kết cấu protide ion Na1" cr làm tăng tính hấp phụ nước collagen môi trường acid kiềm tính trương nỏ' collagen tăng lên Ngoài acid kiềm gây số biến đổi : Cắt đút mạch muối (liên kết -NH31 COO") làm đút mạch peptide mạch Làm đứt liên kết hydrogen gốc -CO, NH- mạch xung quanh Làm acid amin bị phân hủy giải phóng ammoniac có Cùng với biển đổi điểm đẳng điện collagen hạ xuống thấp, acid kiềm thể t° ;xt c 102H149N31O38 + H20 (Collagen) (Gelatiii) Neu xử lý điều kiện nhiệt độ cao có nước keo dễ tiếp tục biến đổi thành t° C102ỈỈ151N31 O39 + 2H2O ^ C55 H35 N17O22 + C47 H70O19 + 7N2 (Gelstose) (Gletone) Do muốn sản xuất gelatin ta phải khống chế nhiệt độ thích họp cho chất lượng gelatin đảm bảo 4.3 Các tính chất khác collagen 4.3 ỉ Khả tao nhũ tương - Là protein không tan, collagen có thê có dấu hiệu cho thấy chất nhũ hóa Tuy nhiên, thực collagen có nguồn gốc từ da sống xử lý biến tính mức độ khác chất nhũ hóa tốt sữa gầy 4.3.2 Khả hòa tan Collagen tan glycerin, acid acetic, ure không tan nước lạnh Collagen phân chia thành bốn lớp sở tính hòa tan dung dịch đệm khác nhau: tan muối trung tính, tan acid, tan kiềm, không tan kiềm Các phần tan acid thường bao gồm hai tập hợp khác bên cạnh tiêu phân tử chuỗi a Một có tên Ị32 pi bao gồm hai chuỗi al, thứ hai pi p 12 bao gồm chuỗi al chuỗi a2 liên kết liên kết cộng hóa trị kiểu este Collgagen hòa tan muối tìm thấy bao gồm 90% chuỗi chuỗi a số dạng p (10%), collagen hòa tan acid khoảng 10% chuỗi a 90% dạng p Chỉ có 50% nhóm ion acid hòa tan có collagen hòa tan muối Các nhóm lại tham gia vào mối liên kết chéo Mặt khác, phần tan kiềm không hòa tan kiềm đại diện cho collagen trưởng thành 4.3.3 Sư biến tính cấu trúc bậc bốn giúp cho protein có khả hydrat hóa tạo thành màng hydrat bao quanh Khi biến tính làm cấu trúc bậc bốn khả hydrat hóa không Vì protein giữ nước • Hoạt tính sinh học ban đầu Điều hiển nhiên hoạt tính sinh học protein định cấu trúc bậc hai, bậc ba bậc bốn Khi cấu trúc đi, protein polypeptide, hoạt tính sinh học • Tăng độ nhạy công enzyme protease làm xuất liên kết peptide ứng với trung tâm hoạt động protease Tăng độ nhớt nội • Mất khả kết tinh Protein có khả kết tinh môi trường muối, cồn điều kiện pH định dung dịch protein không bền kết tủa, gọi pH đăng điện Khi bị biến tính, điềm đẳng điện protein không còn, chúng khó thể kết tinh • Tỉnh ki nước Do gốc kị nước acid amin chuồi polypcptide protein hướng ngoài, gốc liên kết với tạo liên kết kị nước Độ kị nước có thê giải thích acid amin có chứa gốc R- không phân cực nên khả tác dụng với nước Tính kị nước ảnh hưởng nhiều đến tính tan protein 4.3.4 Tính chất dung dich keo Khi hòa tan protein thành dung dịch keo không qua màng bán thấm Hai yếu tố đảm bảo độ bền dung dịch keo là: 4.3.5 • Sự tích điện dấu protein Hydrogel Collagen Tạo Hỗn liên kêt nước,trong sử dụng chuđêkìtạo rã đông đê tạo Vpolymer bảo•8.2.4.3 quản họp1này ủớ ởdạng nhiệtngậm độ phòng khoảng cấu trúc gel ât licu tinh Bảng 8-4: Vật liệ sử dụng đê sản xuất hydrogeỉ tông hợp hăng phương pháp thủy phân bền vững the polymer (ví dụ tan băng PVA [poly(vinyl alcohol)] dung dịch ngậm Saunước) đề yên khảng giờ, dung dịch chuyển thành hydrogel có dạng gel mờ tolylene 2.4-diisocyanate terminated Làm PPG giảm pH để tạo gel liên kết hydro giừa polymer Mw dung dịch / PPG ngậm 2300* nước Media (ví dụConjugate PEO poly(acrylic buffer of acid)) Na2C03 & NaHC03 pH 9.5 / * BSA Xwas utiliied to conduct the first few trial runspH in different buffers PBS with different pH values Sam BSA PBS H p PPG NaOH Conjugate • *Trộn dungtodịch polycation đề tạo gel phức hợp (ví Due its low polyanion solubility,vàPPG ple H coacervateterminated (0.1 tolyleneCI2,4-diisocyanate buffer dụ8.2.4.2.1 was (Na.ÓO^NaH later abandoned in favor M) Phương pháp diglyc Hình 8-4: Lược đồ phương pháp chế tạo hydrogel tông hợp sodium alginate + polylysine) BSA / Vitrogen 100 hòa tan đệm kết họp / PBS / NaOH đá trộn • Gel dung dịch hỗn polyelectrolyte vớibảng: ion đa hóa trị ngược dấu (ví dụ Thành phầnhóa pH dung hợp cho Sample Vitrogen (initial M M pH PPG Naalginate' NaOH Bảng 8-5: A) Tỉdiglycidyl lệ BSA & PPG HCI môi trường có pH khác B) Tỉ lệ concentratio n =+ Ca2 + 20')ether Vitrogen 3.2 mg/ml) 100 & PPG NaOH pH khác Gel hỏa hoc Polymer • Hình 8-5: Mau hydrogeỉ C-F108 (1%) vị trí khác • Tạobi liên kết dọctri-block cáccopolvmer polymer ởhvdrogel dạng rắn chứa FITC-dextran dung dịch với Chuẩn collagen • Chất xạ (ví dụ PEO bị nhiễm xạ H2O) •B Chất hóa họclấy tạo liên dọcli (ví dụThuốc collagen xử lý với hay Hydrogel từ kết máy tâm FĨTC-dextran đượcglutaraldehyde cho vào ma trận bishydrogel epoxide) bàng cách hòa tan lớp mỏng thuốc (0,5%) vào dung dịch collagen trước cho vào polymer chất đệm nhiều choứng thành Hydrogel+chuân chuân tương tự • Họp tâmđêphản (vígel dụ collagen diisocyanate = PƯbịhydrogel) trên• Copolymer hóa monomer + chất tạo liên kết dọc dung dịch (ví dụ HEMA thay (hydroxyethyl methacrylate) + GDMA (ethylene glycol dimethacrylate)) • Copolymer hóa monomer + macromer nhiều chức (ví dụ PLA-PEO-PLA kết thúc bis-methacrylate + photosensitizer + ánh sáng nhìn thấy) Polymer hóa monomer polymer rắn khác đe tạo thành gel IPN (ví dụ acrylonitrile + tinh bột) 8.2.4.2 Liên kết dọc poỉymer tông hợp phương pháp thủy phân Phương pháp bao gồm liên kết dọc polymer tổng họp vào phẩn tử collagen qua • Biến đổi hóa học polymer kị nước thành hydrogel (ví dụ poly(vinyl acetate) pahrn thủy phân ứng nhừng nhóm chức protien, tức nhóm amino nhóm phản ứng phân tử • polymer lên sợi trớ nên dày lồ tạo thành Khi sử dụng dung dịch 5% F108, ma trận ảnh SEM với sợi ngắn đường kính lớn với lớp bọc dày biến lỗ hình 8-5 G cấu trúc sợi dường bị đảo PPG diglycidyl ether sau cho vào dung dịch Hồn họp trộn sử dụng máy khuấy từ nhiệt độ thấp ( r CH2-CH-CH2-(CH2-CH-0)nCH2-CH-CH2 \1/ I R COLL - ẤY/, CH2-CH-CH2-(CH2-CH-0)n-CH2-CH-CH2 Ã7/, - COLL H -Õ- COLL-N+-CH,-CHH-O-H I T'XA H ỌH CO/.L-NH-CHrCH-CH2-R-CH2-CH-CHrNH-CO/./ OH OH Aíter crosslinking Hình 8-25: Cơ chế phản ứng nhóm epoxy với nhóm s-amino ỉysine pH~l Liên kết collagen với diglycidyl ether tạo pH cao, trường hợp giá pH = 12 tìm thấy yêu cầu tối thiểu để bắt đầu phản ứng nhân với nhóm epoxy dẫn đến thay đổi thuộc tính thể gia tăng trọng lượng phân tử thí nghiệm điện di gel (xem hình 8-12) Phản ứng điều kiện với pH 12 tiến hành chứng minh cho thấy thay đồi không trình bày thiếu tài liệu Bằng chứng xuất phản ứng hỗ trợ thêm thí nghiệm khác NMR TNBS, đồ thị tương ứng dừ liệu minh họa (xem hình 8-18 bảng 8-7) Từ quang phổ NMR, nhóm chức PPG diglycidyl ether E Sample Control nhiệt độ biên tính, phân tích băng cách sử dụng máy quét nhiệt vi sai tiên hành biêu đô mô tả (xem hình 8-17) Nhiệt độ biến tính cần thiết đê phá vỡ liên kết hydro cấu trúc xoắn ba collagen biến thành cấu hình cuộn ngẫu nhiên Đó Sessile drop báo cho contact angle liên kết dọc với xoắn ba ổn định so với duỗi cần thiết để sản xuất cuộn ngẫu 61.1 ±3.1 nhiên kU X2.500 10 »m collagen 09 25tinh SEkhiết I Nhiệt độ biến tính PG-COLc5 mẫu tương tự Điều Hình 8-26: A) Bề mặt collagen-PPG có diglycidyl B) Bể mặt coỉỉagen tinh thể khiếtra xuất liên kết dọc collagen phân nhánh Nhánh có nghĩa phản ứng cố Hóa góc tiếp xúc gel có liên kết dọc thấp so với collagen nguyên chất định với nhóm amin đơn, kết nhánh đến từ acid amin phản ứng (xem bảng 8-5 đây), có khả ưa nước cao, từ giải thích gắn kết Thông mạnh độ biến tính thấp so với collagen tế thường nhánh chứng minh có nhiệt bào Table 6-1 Water contact angle of Nhưng Td the không đáng kể, điều cócontrol giảm thể yếu tố nhỏ Tuy nhiên, liên and conjugate film The test kết dọc không cho thấy vắng mặt tương tác polymer collagen Có thể che chắn phản ứng nhóm amin cổ định với nhóm hoạt động khác Trong thực tế, nghiên cứu Tuy Tu cho tỷ thấy che chắn khálàphổ tiếngiahành pH cao nhiên, lệ phát triển tế bào biến thấp đặc sổbiệt lượng tế bào chết tăngởtheo thời Liên kết gian dọc với họp polyepoxy biíunctional tham thích phản ứng sản hai phẩm bước Điều nàycollagen có thề quy chất cho epoxy lại gây độc hoặcgia phóng tuần tự, gây độc vớiMức phảnđộứng đầu thuộc tiên với nhóm amin, tiếp họa phảntrong ứng tế độccủa đốicác vớinhóm tế bàoepoxy phụ vàomột nồng độ polymer nhưtheo minh nhóm hình 8epoxy hai polymer với nhóm amin vùnglớn lânhơn cận15đểmg, hình liên kết chéo 20 Khithứ lượng bổ sung vàotrong collagen thành tăng trưởng tế bào giảm Trong mạnh trung Đôgian xốp hai bước này, nhóm epoxy thứ hai chưa phản ứng hợp chất polyepoxy bị Ma trận collagen nguyên chất có nhiều lỗ hông ma trận collagenngừng hoạt động phản ứng phụ, liên kết ngang tạo thành Sự chấm polymer tông dứt cồng kềnh với lồ bị bao phủ bới lớp lồ hình 8-14 Tuy nhiên hoạt họp động trung gian có nhiều khả xảy ra, phản ứng phụ với ion hydroxyl pH hình ảnh cao hình 8-22 cho thấy ma trận sau gieo tế bào cho thấy giảm đáng kể kích SEM bị ảnh hưởng giá trị pKa tương đối loại acid amin môi trường dung thước lỗ dịch Điều CO rút collagen nguyên bào sợi, đâyVì vậy, có nhiều che chắn khác môi trường kiềm Các bàng chứng củahiện che tượng công nhận rộng rãi Sự co rút ma trận collagen đê đáp ứng cytokinechắn / hydrogel có chất collagen Ma trận hydrogel có khả tương thích sinh học với tế bào sử dụng polymer với 80% EG với nồng độ 5% Trong trường hợp tổng hợp copolymer PPG diglycidyl ether-collagen, kết nghiên cứu cho thấy việc tạo liên kết dọc thành công với lượng liên kết tăng nồng độ polymer tăng [1] [2] [3] [4] [5] TÀI LIỆU THAM KHẢO Bae, I., Osatomi, K., Yoshida, A., Osako, K., Yamguchi, A., Hara, K Biochemical properties o/ acid-soluble collagen extracted /rom the skỉns of underutilised f ìshes Food chemistry, 108, 49-54, 2008 Hwang, J H., Mizuta, s., Yokoyama, Y., & Yoshinaka, R Puri/ication and characterization ọ/ moỉecidar species o/ cơllagen in the skin o/skate (Raja kenoịeì) Food Chemistry, 100, 921-925, 2007 Kittiphattanabawon, p., Benjakul, s., Viessanguan, w., Nagai, T., Tanaka, M Characterisation of acỉd-soỉnhỉe coỉìagen from skin and hone of higeye snapper (Priacanthns tayenus) Food chemistry, 89, 363-372, 2005 Kunardi, L Synthetic poỉymer-coỉỉagen composite hydrogeì for drug delivery & tissue engineerìng National University of Singapore, 2003 Losso, J, N., Ogawa, M., Potier, R, J Extraction ọ/ coỉỉagen from caỉcifìed tissues Patent application publication No us 2005/0267292 Al, 2005 [6] Nagai, T., Araki, Y., & Suzuki, N Colỉagen of skin of ocelỉate puffer fish (Takifugu rubripes) Food Chemistry, 78, 173-177, 2002 [7] Nalinanon s., Benjakul s., Visessanguan w., Kishimuratuna H Pepsin: Characteristics and Its Use for Collagen Extraction from the Skin o/ Threadfìn Bream (Nemipterus spp.) dournal offood Science Vol 73, Nr 5, 2008 Nhan Hong Thi Le, Anh Thy Bui Isoỉation ọ/ cơỉlagen from the skin ọ/ basa fỉsh (Pangasiiỉs Bocourti), 2008 Pati F., Adhikari B., Dhara s Isuỉation and characteriiatiơn o/ fìsh scale coỉỉagen [8] [9] [14] Villanueva, p, A., McNulty, A, K., Beniker, H, D., Kieswetter, K Method for quantitation of coỉỉagen tissues Patent application publication No us 2009/0142799 Al [15] Zhang, M., Liu, w., Li, G Isolation and characterisation of coỉlagens [...]... (± crosslinkers) Polyesters: PEG-PLA-PEG [poly(ethylene glycol)-poly(lactic acid)poly(ethylene glycol)], PEGPLGA-PEG [poly(ethylene glycol)-poly(lactic-co-glycolic acid)], PEG-PCLPEG [poly(ethylene glycol)-polycaprolactone-poly(ethylene glycol)], PLA-PEG-PLẢ, PHB [poly(hydroxy butyrate)], p ly( propylene fumarate-co-ethylene glycol)]±acrylate end groũps, poly(poly(ethylene glycol)/poly(butylene- oxide)...So sánh collagen giữa da cá tra và gia súc: Collagen từ cá có nhiều đặc điếm tốt hơn cho việc ứng dụng trong y học và mỳ phấm Mỹ phẩm trên nền collagen từ gia súc có tốc độ hấp thụ rất chậm trên da người Đe giải quyết vấn đề này người ta sử dụng biện pháp tiêm collagen vào da, tuy nhiên những bất lợi của phương pháp này là đắt tiền, đau đớn và đi kèm với nó là những rủi ro Do đó việc trích ly collagen. .. khô) Vì vậy, sự pH kiềm kết họp Collagenases từ cả hai giống được sử dụng để chiết xuất collagen từ da cá hồi Sự kết của collagenase từ CNA1 và CNL3 với acid tạo ra năng suất collagen cao hơn (54,6% hợp của và 53,0% tương ứng) so với chỉ sử dụng acid (36,5%) Các mẫu điện di của collagen được chiết xuất từ da cá hồi của collagenases từ CNA1 và CNL3 được phân tích trong P-ME và không có P-ME (hình 8-26)... 8-1: Hình ảnh điện di của mâu collagen từ da cá hôi trong điều kiện khử và không khử Đường 1: protein củ MW cao; đường 2: collagen loại I; đường 3-5:; đường 6-8: coỉỉagen chiết 8.2 Nghiên cứu ứng dụng của collagen trong lĩnh vực y khoa: Tong hợp polymer -collagen hydrogeỉ đế làm chất tải thuốc và dùng trong công nghệ mô 8.2.1 Mớ đầu Hydrogel tạo bởi polymer tổng hợp hoặc polymer tự nhiên có khả năng biến... effects of collagenase of Collagen được chiết xuất trực tiếp từ da cá đã khử protein và khử chất bco của cá hồi 8.1.4 Kết luân bằng Hai vi khuẩn sản xuất collagenase, Gram duơng B cereus CNA1 và Gram âm K collagenases pneumonìae từ CNA1 và CNL3 (bảng 2) Sản lượng của collagen tương ứng chiết xuất được được phân lập tại tương ứng pH kiềm 7,5 và pH acid 4,8 Các collagenases từ rất CNL3, thấp ớ 3,7% và 2,3%... thế lóp màng cứng của não Nó còn được dùng cho việc tái tạo dây Viên thuốc với vỏ bao collagen đảm bảo cho bệnh nhân có thê nuốt viên thuốc một cách dễ dàng Collagen còn đuợc sử dụng để làm ra các gạc vô trùng sử dụng trong giải phẩu Trong phẫu thuật nội soi, collagen hydrolysate đuợc ứng dụng để bôi vào các ổng nội soi, có tác dụng bôi tron, vì thế các bác sĩ dễ dàng đưa các ống này vào cơ thể bệnh... kiện kiềm và acid Việc sản xuất collagenase của hai loại vi khuân đã được tối im Glycerol là nguồn carbon phù hợp đế sản xuất collagenase cho cả hai chủng Các giá trị pH ban đầu tối ưu cho collagenase sản xuất bới CNA1 và CNL3 tương ứng là 7,5 và 6,0, và nhiệt độ tối un là 37°c cho cả hai chủng Hoạt tính tối đa của collagenase tinh chế một phần từ CNA1 là ớ pH 7,0 và 45°c Sự ôn định của pH và nhiệt... cá được đưa vào nghiên cún và sử dụng Khác với những loại collagen thu được theo các phương pháp trước đây, collagen từ cá được hấp thụ hoàn toàn trên da người Cá sống trong phạm vi rộng lớn với các điều kiện về nhiệt độ, độ sâu và áp suất khác nhau, do đó collagen trích ly từ cá có một sức chống chịu đặc biệt với các phá hủy lý và hóa học Đối với các thuốc hay thức uống có chứa collagen, collagen từ... proteolysis Hiệu suất chiết bàng enzyme (44,7%) cao hơn chiết bàng acid acetic (10,7%) Có thể cho rằng việc bổ sung enzyme giúp cho sự phá vờ các màng tế bào nhanh hơn và mạnh hơn Vì thế collagen càng dễ dàng được tách ra và cho hiệu suất tách chiết cao 7 Các ứng dụng của collagen Trong các ngành công nghiệp thực phẩm, mỹ phẩm, cũng như y học, dược phẩm, collagen thường được sử dụng dưới dạng collagen. .. phút, collagen sẽ tan hủy trong cơ thể bệnh nhân mà không gây hại gì- Hình 7-4: CoIIagen hydroỉysate trong các mảnh bọt biên sử dụng trong nha khoa 8 Thành tưu 8.1 Nghiên cứu trích ly collagen bằng eniyme collagenase kết hợp với acid Mớ đầu Hai vi khuẩn sản xuất collagenolytic protease (collagenase), một Gram dương Baciỉliỉs cereus và CNA1 một Gram âm Kỉebsieỉỉa pneumoniae CNL3, đã được cô lập tương ứng ... PEG-PLA-PEG [poly(ethylene glycol)-poly(lactic acid)poly(ethylene glycol)], PEGPLGA-PEG [poly(ethylene glycol)-poly(lactic-co-glycolic acid)], PEG-PCLPEG [poly(ethylene glycol)-polycaprolactone-poly(ethylene... mạnh Vì collagen dễ dàng tách cho hiệu suất tách chiết cao Các ứng dụng collagen Trong ngành công nghiệp thực phẩm, mỹ phẩm, y học, dược phẩm, collagen thường sử dụng dạng collagen thủy phân Collagen. .. collagen vào da, nhiên bất lợi phương pháp đắt tiền, đau đớn kèm với rủi ro Do việc trích ly collagen từ cá đưa vào nghiên cún sử dụng Khác với loại collagen thu theo phương pháp trước đây, collagen