đại cương về virus dại

Bệnh dại là một bệnh truyền nhiễm cấp tính của hệ thần kinh trung ương rất nguy hiểm do virus dại Rabies virus gây nên và dẫn đến tử vong 100% khi phát bệnh.. Họ Rhabdoviridaegây nhiễm c

VIRUS DẠI (RABIES VIRUS)

Bệnh dại là một bệnh truyền nhiễm cấp tính của hệ thần kinh trung ương rất nguy hiểm do virus dại (Rabies virus) gây nên và dẫn đến

tử vong 100% khi phát bệnh Bệnh dại là một trong những bệnh truyền nhiễm được ghi nhận từ cô xưa, cách đây hơn 3000 năm và

là một bệnh truyền nhiễm đáng sợ Bệnh gặp ở động vật máu nóng, lây qua vết cắn, vết cào, vết trầy xước trên da, niêm mạc và truyền bệnh cho người Thường bệnh mở đầu bằng các dấu hiệu báo trước như: tăng cảm giác sợ hải, đau đầu, sốt, mệt mỏi và những thay đổi cảm giác không rỏ ràng tại vết thương do súc vật cắn Thường có triệu chứng dễ bị kích động và sợ gió Bệnh tiến triển đến liệt hoặc bại liệt; cơ nuốt bị co thắt dẫn đến triệu chứng sợ nước; mê sảng sau đó là co giật và thường chết do liệt cơ hô hấp…

Phần trình bày về Virus dại gồm 6 phần chính:

1 ĐẠI CƯƠNG

Bệnh dại là một bệnh truyền nhiễm cấp tính do virut dại gây ra, bệnh chủyếu ở động vật có máu nóng (chó, mèo ) lây sang người qua đường da và niêmmạc Khi phát bệnh, tử vong là 100% Được ghi nhận cách đây hơn 3000 năm

Theo các số liệu thống kê, có 97% trường hợp bị bệnh dại hiện nay ở ViệtNam là do chó và 80% các trường hợp mắc bệnh trên thế giới xảy ra ở châu Á.Năm 2003 có sự gia tăng bệnh dại trở lại ở Trung Quốc: trong 9 tháng năm 2003

đã có tới 1.300 người tử vong so với cả năm 2001 chỉ có 854 người Nguyên nhân

là do phong trào nuôi chó cảnh gia tăng, chó lang thang tăng và tỷ lệ tiêm phòngbệnh dại thấp Hàn Quốc cũng tuyên bố đã loại trừ được bệnh dại từ năm 1984nhưng đến năm 2003 xuất hiện trở lại và gây tử vong cho 2 người Hàng năm, toànthế giới vẫn còn 50.000 người tử vong vì căn bệnh nguy hiểm này

Nguyên nhân của bệnh là do virus dại (rabies virus) gây nên

Rabies virus là virus dại thuộc giống Lyssavirus, họ Rhabdovirus

Họ Rhabdoviridae gồm hơn 200 loại virus phân bố rộng rãi trong thiênnhiên, nhiễm cho động vật có xương sống và động vật không xương sống và thựcvật Nhiều côn trùng bị nhiễm rhabdo nhưng không có virus dại Họ Rhabdoviridaegây nhiễm cho động vật có vú, kể cả người được chia làm 2 giống: giốngVesiculovirus gây viêm miệng có mụn nước và giống Lyssavirus với khoảng 80virus khác nhau

Dựa vào tính chất sinh học, virus dại được chia thành 2 loại:

•Virus dại "đường phố" hay còn gọi là virus dại hoang dại: là các dòng virusmới được phân lập trực tiếp từ con vật bị nhiễm

Các dòng virus này cho thời kỳ ủ bệnh dài và thay

đổi (21-60 ngày ở loài chó), tạo thể vùi trong bào

tương, khả năng gây bệnh cao

•Virus dại cố định: Là dòng virus đã được

cấy truyền liên tiếp trong não thỏ; qua hơn 50 lần

cấy truyền Virus cố định (virus đột biến) nhân

lên rất nhanh và thời kỳ ủ bệnh rất ngắn chỉ còn

khoảng 4-6 ngày, gây bệnh cảnh dại bại liệt cho

động vật nhưng mất khả năng gây bệnh cho

người, được xử lý để sản xuất vắc-xin phòng

bệnh

2 ĐẶC ĐIỂM VI SINH VẬT HỌC CỦA RABIEVIRUS

2.1 Hình dạng, cấu trúc

Cũng như các virus khác thuộc họ

Rhabdoviridae, virus dại có hình gậy giống như

hình viên đạn, dài 130-240nm và đường kính

70-80nm và bao gồm hai cấu phần chính là lõi virus

(virus core) có cấu trúc ribonucleoprotein xoắn

(RNP) và lớp vỏ bao (virus envelop)

- Ribonuceoprotein: bao gồm RNA mang bộ

gene virus và phần nucleoprotein (N protein)

Sơ đồ cắt ngang của virus với các phần cấu tạo tương ứng Bộ gene virus (khoảng

12kb) mang leader-sequence (trình tự để trắng hay trình tự; trình tự mở đầu) cókích thước khoảng 50 nucleotide sau đó là các gene mã hóa cho 5 loại protein

Bộ gene của virus dại (12kilobase)

với đoạn trình "trắng" tại đầu 3', tiếp theo

là các gene mã hóa protein N, P, M, G và

L với kích thước tương ứng

- Lớp vỏ:

Hai loại phosphoprotein (P protein) và polymerase (L protein) liên kết vớiRNP Matrix protein (M protein) bao ngoài phần lõi, liên kết với RNP và lớp vỏngoài virus có tác dụng quan trọng trong quá trình lắp ráp tạo các virion.Glycoprotein (G protein) tạo thành khoảng 400 "gai" có kích thước khoảng 10 nmtrên bề mặt virus

2.2 Nuôi cấy

Virus dại có khả năng phát triển trong nhiều hệ thống tế bào được nuôi cấytrong phòng thí nghiệm, không chỉ những tế bào của động vật máu nóng (warmblooded animals) mà cả trong tế bào động vật biến nhiệt có xương sống(poikilothermic vertbrate) Virus phát triển trên hệ thống tế bào lưỡng bội củangười được dùng để sản xuất vaccine Virus còn được nuôi cấy thích nghi trên phôigia cầm ( Đặc biệt là tế bào phôi gà, cấy virus dại vào tế bào phôi gà ấp 7 ngày thìhiệu giá tối đa của virus được nhận thấy vào ngày thứ 9, các phô chậm phát triểnnhưng ít khi chết )

Dơi và các động vật gặm nhấm được cho là vật chủ tự nhiên của virus dại.EBV1 và EBV2 được phân lập từ dơi ở châu Âu Virus Duvenhage và EBV2 cóliên hệ mật thiết với quý trình lây nhiễm ở người, gây chết với biểu hiện giốngbệnh dại (rabies-like illness)

Một số dòng tế bào được dùng trong nuôi cấy phân lập virus bao gồm WI-38( nguyên bào sợi từ phổi), BHK-21 ( tế bào thận chuột )…

2.3 Sức đề kháng

- Sức đề kháng của virus dại yếu, kém bền vững,

nhạy cảm với các yếu tố ngoại cảnh: bị tiêu diệt nhanh

chóng bởi tia cực tím hoặc ánh sáng mặt trời Virus bị

oxy hóa và pH quá cao hoặc quá thấp

- Virus dại có thể sống được từ 1 - 2 tuần ở nhiệt độ

phòng, sống được hàng tuần khi lưu trữ ở 4oC Trong điều

kiện lạnh –400C, vi rút sống được từ vài tuần đến 12

tháng, ở nhiệt độ dưới 00C sống được từ 3 - 4 năm Trong mô não, virus dại tồn tạivài tháng ở 40oC hoặc hàng năm ở 70oC Vi rút dại được bảo tồn chủ yếu trong cơthể vật chủ Vì vậy, đồ vật dính nước bọt chó dại, người bị dại được coi là nguyhiểm

2.4 Kháng nguyên

Virus dại có 1 typ kháng nguyên duy nhất

Tuy nhiên, các loài virus phân lập từ các loài khác nhau ở các vùng địa lýkhác nhau Dùng kháng thể đơn dòng hoặc trình tự nucleotit đặc hiệu để xác địnhnhững epitop khác nhau

Ở Mỹ, đã tìm thấy 5 biến thể kháng nguyên trong động vật sống trên cạn và

8 biến thể khác trong loài dơi Dùng kháng nguyên đơn dòng kháng glycoproteinvirus để chọn các đột biến không độc của virus dại Vị trí amino acid 333 củaglycoprotein mang tính độc đóng vai trò quan trọng trong sinh bệnh học bệnh dại

và gây hòa màng tế bào nhiễm virus Các gai virus chứa glycoprotein, tạo khángthể trung hòa ở động vật Kháng huyết thanh nucleocapsid giúp chẩn đoán bệnh dạibằng phản ứng miễn dịch huỳnh quang

Virus dại gồm có các loại kháng nguyên sau:

- Kháng nguyên V: Là kháng nguyên kích thích cơ thể sinh kháng thể trunghoà

- Kháng nguyên S: Chỉ có ở hạt virions vừa tách ra khỏi tế bào, nó kích thích

- Bệnh dại truyền từ người sang người rất hiếm gặp Theo lý thuyết, bệnh dại

có thể lây từ nước bọt của bệnh nhân mang bệnh dại sang người tiếp xúc, nhưngtrên thực tế chưa ghi nhận được trường hợp này

- Một số trường hợp lâynhiễm virus dại đã xảy ra:

+ Các động vật mang virusdại cắn người hay các động vật khác(cụ thể là các vết thương trên da tiếpxúc với nước bọt của động vật mắcbệnh) Đây là trường hợp chủ yếu vàhay gặp nhất

+ Người bị nhiễm virus dạikhi vào các hang dơi có nhiễm virusdại

+ Người được cấy ghép giácmạc, nội tạng từ người có mangvirus dại

+ Nhân viên phòng thínghiệm hít phải virus dại trong khí dung

3.2 Cơ chế gây bệnh

- Virus dại từ nước bọt động vật dại xâm nhập vào cơ thể qua vết cắn, tồn tạitrong vết cắn một thời gian rồi nhân lên tại các tế bào cơ và mô, sau đó xâm nhậpsợi trục của tế bào thần kinh và di chuyển hướng tâm theo sợi trục này về trungương thần kinh cả tủy và não, chất trắng lẫn chất xám

- Tại hệ thần kinh trung ương, virus sinh sản nhanh rồi lại theo dây thần kinh

ra nước bọt và bắt đầu tản khắp hệ thống thần kinh Một số trường hợp tế bào thầnkinh của hạch giao cảm bị bong ra làm tuyến nước bọt bị nhiễm virus Tại thờiđiểm này, thần kinh chưa bị tồn thương đáng kể vì thế nhìn bề ngoài vật chủ vẫnbình thường nhưng nước bọt đã có virus dại (Virus có trong nước bọt chó dại 10ngày trước khi phát bệnh) Sau đó, virus dại gây ra hiện tượng tế bào chết theochương trình (apoptosis), hủy hoại dần các tế bào thần kinh, đặc biệt là vùng sừngamon và não Từ đó, dẫn đến các biểu hiện lâm sang điển hình Cần lưu ý, nướcbọt không phải luôn luôn nhiễm virus vì hạch giao cảm có thể không bị bong ra,điều này giải thích tại sao một số người bị chó dại cắn mà không mắc bệnh dùkhông điều trị

- Virus có thể có mặt trong nước bọt, nước tiểu, dịch não tủy và tập trungnhiều ở tiểu não, cuống não và các hạch nền sọ Ngoài ra còn có thể thấy virus ởcác mô khác trong cơ thể như cơ xương, cơ tim, thận, tủy thượng thận, tuyến tụy…

- Ngoài ra, sự nhân lên của virus dại trong tế bào thần kinh trung ương tạo ramột thể ưa eosin trong bào tương của tế bào được gọi là Negri Thể Negri đượchình thành do sự tập trung của Nucleocapsid tự do của virus dại trong bào tương tếbào thần kinh Đây là đặc điểm quan trọng của virus dại nhưng không phải tất cảcác trường hợp của bệnh dại đều tìm thấy thể Negri trong tế bào thần kinh Có 20%trường hợp không tìm thấy thể Negri

- Thời gian từ khi virus xâm nhập đến khi phát bệnh phụ thuộc vào vị trí, sốlượng, tính chất vết cắn và vào sức đề kháng của người bệnh

● Thể hung dữ

- Kéo dài 1-4 ngày

- Yếu tố thuận lợi để khởi phát bệnh thường là một stress thể chất hoặc tinhthần

- Bệnh nhân có thể sốt, đau đầu, khó chịu, đau cơ, mệt mỏi, chán ăn, buồnnôn và nôn, viêm họng, ho khan

- Triệu chứng gợi ý: dị cảm, kiến bò, đau ở khu vực vết thương rồi ngứa lankhắp người, thay đổi tính tình, bệnh nhân trông âu sầu trầm lặng, có những lúccười khóc vô cớ

- Thường bệnh nhân mất ngủ

- Bệnh nhân có thể rối loạn tiểu tiện, đái khó

c Thời kỳ toàn phát:

- Thường thì bệnh nhân tới viện trong thời kỳ này

- Bắt đầu là quá trình tăng kích thích vận động và cảm giác

+ Tri giác hoàn toàn tỉnh táo

+ Bệnh nhân trong trạng thái hưng phấn, kích động quá mức, không ngủđược cho dù dùng các thuốc an thần gây ngủ

+ Tăng cảm giác quan với ánh sáng nhẹ, tiếng ồn, sờ mó rồi ngay cả với cơngió nhẹ, nghe thính, mũi tinh

- Khám có thể có sốt và các rối loạn hệ thần kinh thực vật như giãn đồng tử,tăng tiết nước bọt, vã nhiều mồ hôi, nhịp tim nhanh

- Biểu hiện đặc trưng của bệnh là sợ nước, sợ gió:

+ Khi có kích thích, lúc đầu là kích thích tại chỗ như khi uống nước, hítmạnh rồi sau đó là các kích thích toàn thân khác, cuối cùng là các kích thíchchuyển hoán qua các giác quan khác như nghe thấy tiếng nước chảy, cảm giác gióthổi qua, hoặc chỉ nghe nói đến nước là lên cơn

+ Ngay khi có các kích thích như trên, bệnh nhân xuất hiện cơn co thắt quámức các cơ hầu họng và thanh quản, co thắt làm bệnh nhân thấy rất đau và rất sợ

+ Nước bọt tăng tiết không nuốt được nên bệnh nhân nhổ vặt liên tục và cóhình ảnh “sùi bọt mép”

- Tổn thương hạnh nhân tiểu não có thể gây cương đau dương vật và xuấttinh tự nhiên ở nam giới.

● Thể bại liệt

- Thường ở bệnh nhân đã tiêm vắc-xin sau khi bị súc vật dại cắn

- Lúc đầu dị cảm vết cắn, đau cột sống và đau chi bị cắn

- Tình trạng liệt tiến triển lan toả lên chi trên, mất phản xạ gân xương

- Bệnh nhân bí đại tiểu tiện, sau đó liệt cơ mặt, cổ, lưỡi, hầu họng và các cơ

hô hấp

- Thể bệnh này tử vong chậm hơn thể hung dữ, có thể kéo dài 2-20 ngày

- Biến chứng

+ Khó thở, ngạt thở do thiếu oxy, co thắt

+ Viêm phổi, phế quản, tràn khí màng phổi

+ Loạn nhịp tim, nhịp nhanh trên thất, block nhĩ thất

+ Hạ huyết áp, phù phổi cấp, suy tim

+ Tăng áp lực nội sọ do phù não

3.4 Miễn dịch

Kháng thể đặc hiệu với virus dại xuất hiện trễ trong huyết thanh bệnhnhân.Kháng thể trung hòa trong máu

xuất hiện khi sau khi tiêm vắcxin

phòng dại vào cơ thể 10 ngày và tồn

tại khoảng 7 tháng.Kháng thể trung

hòa không có trong máu mà có cả

trong tế bào, điều này giải thích cơ

chế tác dụng của vắc xin phòng dại

đối với người bị chó dại cắn Vì không

có người sống sót sau cơn dại nên không có nghiên cứu về miễn dịch khi bị chó dạicắn lần thứ 2.

– Chẩn đoán huỳnh quang

• Kết quả ba phương pháp bổ sung cho nhau

• Chỉ một phương pháp có kết quả dương tính được coi là mắc bệnh dại

a Tìm tiểu thể Negri

Thể Negri do nhà bác học Negri (Italia) phát hiện ra năm 1903 ở trong nãocủa súc vật chết vì bệnh Dại Thể Negri có hình dạng thay đổi (nhỏ, hình tròn hìnhtrứng, hình bầu dục, kích thước từ 0,5 - 30µm

Thường định vị trong bào tương của noron thần kinh, chủ yếu là sừngAmon, trong tế bào tiểu não ít hơn

Bản chất tiểu thể Negri vẫn chưa rõ :

Ý kiến 1 : đó là “khuẩn lạc” của virus

Ý kiến 2 : đó là bệnh tích trong tế bào TK do virus gây nên

Có thể nhuộm bằng phương pháp nhuộm Giemsa, Mann, Sellers

Thể Negri có hình đa dạng, phần lớn là hình gần tròn, kích cỡ khác nhau, cóthể nằm bên trong hoặc ngoài tế bào thần kinh

Phương pháp này không cho kết quả dương tính giả

Phương pháp cho kết quả âm tính giả

TIÊU THỂ NEGRI TRONG NÃO CHÓ BỊ BỆNH DẠI

b Phân lập virus

Bệnh phẩm là nước dãi hoặc não chó khi đang mắc bệnh, được nghiền nhỏ

và ly tâm, lấy phần nước nổi Sau đó tiêm vào chuột nhắt trắng 2-3 tuổi Nếu súcvật bị dại, thì ngày thứ 7 trở đi chuột xuất hiện liệt mềm

Một số dòng tế bào được dùng trong nuôi cấy phân lập virus bao gồm WI-38(nguyên bào sợi từ phổi), BHK-21 (tế bào thận chuột), tế bào từ phôi gia cầm(CER)

Tìm bệnh tích tế bào (cytopathic effect): Bao gồm các thay đổi hình thái(altered shape), bong tách khỏi các đĩa cấy (detachted from substrate), làm tan tếbào (lysis), khả năng gắn kết và "lai" với màng tế bào (membrane fusion), thay đổitính thấm của màng (membrane permeability), tạo thể vùi (inclusion body) và gâychết (apoptosis)

Xác định yếu tố khởi sự (initiation factor; IF) được sử dụng để phát hiện sựhiện diện của kháng nguyên virus trong môi trường nuôi cấy.

Phương pháp thường được sử dụng trong chẩn đoán virus dại là tiêm dịch

mô tuyến nước bọt và mô từ não bộ vào não chuột Nếu trong mô chứa virus dại,chuột biểu hiện triệu chứng liệt và chết khoảng 28 ngày sau khi gây nhiễm Kiểmtra não tìm virus bằng phương pháp miễn dịch huỳnh quang

c Phương pháp miễn dịch huỳnh quang.

Lấy nước dãi hoặc não của

súc vật nghi bị dại, làm tiêu bản

nhuộm bằng phương pháp miễn dịch

huỳnh quang với kháng thể đã biết

Nếu trong bệnh phẩm có virus dại

khi soi kính hiển vi huỳnh quang sẽ

thấy hiện tượng phát quang

Phương pháp này cho phép

phát hiện bệnh sớm, trước khi tiểu

thể Negri được hình thành trong

não

• Độ nhạy của phản ứng cao hơn phương pháp tìm thể Negri

• Khi phản ứng âm tính chưa thể kết luận con vật không mắc bệnh dại

do lượng virus trong não con vật quá ít

• Cần phải dùng phương pháp thử sinh học

- Phương pháp sinh học:

Dùng não vật mắc bệnh pha thành hỗn dịch 1/10, tiêm vào não chuột mới đẻ,mỗi chuột 0,05ml

HÌNH ẢNH BẮT MÀU HUỲNH QUANG

CỦA VIRUS DẠI

Theo dõi 1 tháng

Nếu chuột phát triển bình thường, phản ứng âm tính

Nếu chuột bị liệt và chết cả ổ, kết quả dương tính

Kháng thể virus dại xuất hiện chậm sau khi cơ thể bị nhiễm nhưng thường

có thể phát hiện khi bắt đầu có biểu hiện lâm sàng:

Phản ứng trung hòa trên chuột (mouse infection neutralization test: MNT) vàphản ứng ức chế điểm huỳng quang tức thì (rapid fluorescent focus inhibition test:RFFIT) có thể được dùng nhưng hiện được thay thế bằng các phương pháp miễndịch sử dụng enzyme (enzyme immunoassays: EIAs)

Chẩn đoán huyết thanh học được cho là có hiệu quả nhất trong chẩn

ấn độ, Indonesia, Mexico, Myanmar (Burma), Nepal, Pakistan, Peru, Philippines,Sri Lanka, Thái lan, Việt nam, Yemen

+ Tại Châu Âu, bệnh dại chủ yếu xảy ra ở CHLB Đức, Áo, Thụy Sỹ, Pháp,Thổ Nhĩ Kỳ, Ba Lan, Tiệp Khắc, Hungary Bệnh dại đã lưu hành rộng rãi ở loàicáo và dơi, số trường hợp mắc dại ở miền Tây Châu Âu đã giảm rất mạnh từ năm1992

+ Thú hoang dã bị bệnh dại ở Mỹ, Canada thường xảy ra ở gấu trúc, chồn,cáo, chó sói đồng và dơi ăn sâu bọ Những năm gần đây, các nước này cũng phải

sử dụng tới 1,2 triệu liều vắc xin tại các trung tâm phòng dại

+ Ở Châu Phi và Châu Á, chó là nguồn gây bệnh chủ yếu, số người chếthàng năm vì bệnh dại rất cao: Ấn Độ hàng năm có khoảng 3 triệu người phải tiêm