khảo sát hiệu quả của thuốc hóa học đối với nấm colletotrichum sp gây bệnh thán thư trên hành tím (allium ascalonicum l )

TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA NÔNG NGHIỆP & SINH HỌC ỨNG DỤNG Luận văn tốt nghiệp đại học Ngành: BẢO VỆ THỰC VẬT Tên đề tài: KHẢO SÁT HIỆU QUẢ CỦA THUỐC HÓA HỌC ĐỐI VỚI NẤM Colletotric

NGUYỄN KHÁNH DUY

KHẢO SÁT HIỆU QUẢ CỦA THUỐC HÓA HỌC

ĐỐI VỚI NẤM Colletotrichum sp GÂY BỆNH

THÁN THƯ TRÊN HÀNH TÍM

(Allium ascalonicum L.)

Luận văn tốt nghiệp đại học Ngành: BẢO VỆ THỰC VẬT

TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ

KHOA NÔNG NGHIỆP & SINH HỌC ỨNG DỤNG

Cần Thơ, 2014

TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ

KHOA NÔNG NGHIỆP & SINH HỌC ỨNG DỤNG

Luận văn tốt nghiệp đại học Ngành: BẢO VỆ THỰC VẬT

Tên đề tài:

KHẢO SÁT HIỆU QUẢ CỦA THUỐC HÓA HỌC

ĐỐI VỚI NẤM Colletotrichum sp GÂY BỆNH

THÁN THƯ sTRÊN HÀNH TÍM

(Allium ascalonicum L.)

Giáo viên hướng dẫn: Sinh viên thực hiện:

PGS TS Trần Thị Thu Thủy Nguyễn Khánh Duy MSSV: 3103591 Lớp: TT1073A1

Cần Thơ, 2014

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO

TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA NÔNG NGHIỆP & SINH HỌC ỨNG DỤNG - Chứng nhận luận văn tốt nghiệp với đề tài:

“KHẢO SÁT HIỆU QUẢ CỦA THUỐC HÓA HỌC

ĐỐI VỚI NẤM Colletotrichum sp GÂY BỆNH

THÁN THƯ TRÊN HÀNH TÍM

(Allium ascalonicum L.)”

Do sinh viên Nguyễn Khánh Duy thực hiện và đề nạp

Kính trình Hội đồng chấm luận văn tốt nghiệp xem xét

Cần Thơ, ngày tháng năm 2014

Cán bộ hướng dẫn

PGs Ts Trần Thị Thu Thủy

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO

TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA NÔNG NGHIỆP & SINH HỌC ỨNG DỤNG -

Hội đồng chấm luận văn tốt nghiệp đã chấp nhận luận văn tốt nghiệp Kỹ sư Bảo

vệ thực vật với đề tài: “KHẢO SÁT HIỆU QUẢ CỦA THUỐC HÓA HỌC ĐỐI

VỚI NẤM Colletotrichum sp GÂY BỆNH THÁN THƯ TRÊN HÀNH TÍM (Allium ascalonicum L.)”

Do sinh viên Nguyễn Khánh Duy thực hiện và bảo vệ trước Hội đồng, ngày tháng năm 2014

Luận văn được hôi đồng đánh giá ở mức: ………… điểm

TIỂU SỬ CÁ NHÂN

Họ và tên sinh viên: Nguyễn Khánh Duy Giới tính: Nam

Nơi sinh: Trần Đề - Sóc Trăng

Quê quán: Thạnh Nhãn 1, Thạnh thới Thuận, Trần Đề, Sóc Trăng

Cha: Nguyễn Văn Giờ

Mẹ: Nguyễn Thị Út Chót

Quá trình học tập:

Năm 1998 – 2003: Trường tiểu học Thạnh Nhãn 1

Năm 2003 – 2007: Trường THCS Tham Đôn

Năm 2007 – 2010: Trường THPT Mỹ Xuyên

Năm 2010 – 2014: Trường Đại học Cần Thơ

Tốt nghiệp tú tài năm 2010 tại trường THPT Mỹ Xuyên Trúng tuyển ngành Bảo

vệ thực vật Khóa 36 - Khoa Nông nghiệp & sinh học ứng dụng, Trường Đại học Cần Thơ năm 2010

Tốt nghiệp kỹ sư ngành Bảo vệ thực vật năm 2014

LỜI CAM ĐOAN

Tôi xin cam đoan đây là công trình nghiên cứu của bản thân Các số liệu, kết quả trình bày trong luận văn tốt nghiệp là trung thực và chưa từng được ai công bố trong bất kỳ công trình luận văn nào trước đây

Tác giả luận văn

Nguyễn Khánh Duy

LỜI CẢM TẠ

Kính dâng: Cha me người đã nuôi dạy, chăm sóc và lo cho con đến tận ngày hôm

nay

Chân thành biết ơn:

Cô Trần Thị Thu Thủy và Thầy Lê Thanh Toàn đã tận tình hướng dẫn và giúp đỡ trong suốt quá trình làm Luận văn tốt nghiệp

Thầy Cố vấn học tập Lê Văn Vàng đã giúp đỡ, chăm lo, động viên và tạo điều kiện thuận lợi cho em suốt khóa học

Quý thầy cô và toàn thể Cán bộ Bộ môn Bảo vệ thực vật, Khoa Nông nghiệp & sinh học ứng dụng đã tạo điều kiện thuận lợi cho em hoàn thành tốt luận văn tốt nghiệp

Quý thầy cô Khoa Nông nghiệp & sinh học ứng dụng, Trường Đại học Cần Thơ

đã truyền đạt kiến thức cho em trong suốt khóa học

Cám ơn các anh, chị, các bạn cùng nhóm và các bạn làm luận văn chung phòng thí nghiệm đã luôn giúp đỡ tôi trong suốt quá trình làm luận văn

Thân ái gởi về:

Tất cả các bạn trong lớp Bảo vệ thực vật K36 và toàn thể sinh viên Khoa Nông nghiệp & sinh học ứng dụng, Trường Đại học Cần Thơ những lời chúc tốt đẹp và thành đạt nhất

NGUYỄN KHÁNH DUY

NGUYỄN KHÁNH DUY, 2013 Đề tài “KHẢO SÁT HIỆU QUẢ CỦA THUỐC

HÓA HỌC ĐỐI VỚI NẤM Colletotrichum sp GÂY BỆNH THÁN THƯ TRÊN HÀNH TÍM (Allium ascalonicum L.)”

Luận văn tốt nghiệp ngành Bảo vệ thực vật, Khoa Nông nghiệp & sinh học ứng dụng Trường Đại học Cần Thơ Cán bộ hướng dẫn PGS TS Trần Thị Thu Thủy

TÓM LƯỢC

Đề tài “Khảo sát hiệu quả của thuốc hóa học đối với nấm Colletotrichum sp

gây bệnh thán thư trên hành tím (Allium ascalonicum L.) được thực hiện từ tháng 10

năm 2013 đến tháng 2 năm 2014 tại Bộ môn Bảo vệ thực vật, Khoa Nông nghiệp & Sinh học ứng dụng, trường Đại học Cần Thơ nhằm mục tiêu: (1) Xác định tác nhân gây bệnh

thánh thư trên hành tím (Allium ascalonicum L ) (2) Tìm được loại thuốc hóa học có hiệu quả ức chế sự phát triển khuẩn ty và sự hình thành bào tử của nấm Colletotrichum

sự phát triển khuẩn ty tương đương nhau với hiệu quả ức chế lần lượt là 36,56% và 31,67%

Đối với khả năng ức chế sự hình bào tử, thuốc Amistar 250EC và Man 80WP lại

có khả năng ức chế sự hình thành bào tử cao nhất với mật số bào tử là 36,8-37,8 x104 bt/ml, kế đến thuốc Score 250SC và thuốc Binhnomyl 50WP có mật số bào tử là 120-139,6 x104 bt/ml

MỤC LỤC

Trang

TIỂU SỬ CÁ NHÂN iii

LỜI CAM ĐOAN iv

LỜI CẢM TẠ v

TÓM LƯỢC vi

MỤC LỤC vii

DANH SÁCH BẢNG x

DANH SÁCH HÌNH xi

MỞ ĐẦU 1

CHƯƠNG I LƯỢC KHẢO TÀI LIỆU 2

1.1 BỆNH THÁN THƯ TRÊN HÀNH TÍM 2

1.1.1 Thiệt hại và sự phân bố 2

1.1.2 Tác nhân 2

1.1.3 Triệu chứng 2

1.1.4 Điều kiện phát triển của bệnh 3

1.1.5 Biện pháp phòng trị bệnh thán thư 3

1.2 TÁC NHÂN GÂY BỆNH THÁN THƯ TRÊN HÀNH TÍM 4

1.2.1 Phân loại 4

1.2.2 Đặc điểm hình thái và sinh học của nấm Colletotrichum 4

1.2.2.1 Đặc điểm hình thái của nấm Colletotrichum 4

1.2.2.2 Đặc điểm sinh học của nấm Colletotrichum 5

1.2.3 Sự lưu tồn và lan truyền của nấm Colletotrichum 5

1.2.4 Đặc điểm phân loại đến loài của nấm Colletotrichum 5

1.3 MỘT SỐ NGHIÊN CỨU VỀ ỨNG DỤNG THUỐC HÓA HỌC TRONG PHÒNG

TRỊ NẤM 6

1.4 ĐẶC ĐIỂM CỦA MỘT MỘT SỐ LOẠI THUỐC HÓA HỌC DÙNG TRONG THÍ NGHIỆM 7

1.4.1 Amistar 250EC 7

1.4.2 Score 250SC 7

1.4.3 Binhnomyl 50WP 8

1.4.4 Man 80WP 8

CHƯƠNG II PHƯƠNG TIỆN VÀ PHƯƠNG PHÁP 10

2.1 PHƯƠNG TIỆN THÍ NGHIỆM 10

2.1.1 Địa điểm và thời gian thí nghiệm 10

2.2.2 Vật liệu thí nghiệm 10

2.2.3 Dụng cụ thí nghiệm 11

2.2 PHƯƠNG PHÁP BỐ TRÍ THÍ NGHIỆM 11

2.2.1 Thu mẫu bệnh và định danh nấm Colletotrichum sp gây bệnh thán thư trên cây hành tím tại Vinh Châu 11

2.2.2 Thí nghiệm 1 Khảo sát ảnh hưởng hiệu quả của năm loại thuốc hóa học đến sự phát triển và tạo bào tử của nấm Colletotrichum sp trong điều kiện phòng thí nghiệm 12

CHƯƠNG III KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 15

3.1 BỆNH THÁN THU DO NẤM Colletotrichum sp 3.1.1 Triệu chứng bệnh 15

3.12 Đặc điểm phát triển của tản nấm 16

3.13 Đặc Triệu điểm bào tử, gai cứng và đĩa áp của nấm 16

3.2 ẢNH HƯỞNG CỦA THUỐC HÓA HỌC ĐẾN SỰ PHÁT TRIỂN KHUẨN TY VÀ KHẢ NĂNG HÌNH THÀNH BÀO TỬ CỦA NẤM Colletotrichum sp 18

3.2.1 Khả năng ức chế sự phát triển khuẩn ty của thuốc hóa học đối với nấm

Colletotrichum sp……… 18

3.3.2 Khả năng ức chế sự hình thành bào tử của thuốc hóa học đối với nấm Colletotrichum sp 22

CHƯƠNG IV KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 24

4.1 KẾT LUẬN 24

4.2 ĐỀ NGHỊ 24

TÀI LIỆU THAM KHẢO 25 PHỤ CHƯƠNG

3.1 Đường kính khuẩn ty (mm) của nấm Colletotrichum sp sau

khi xứ lý với thuốc hóa học

30

3.2 Hiệu quả ức chế (%) sự phát triển khuẩn ty nấm

Colletotrichum sp sau khi xử lý với thuốc hóa học

32

3.3 Ảnh hưởng của thuốc hóa học đến khả năng hình thành bào

tử của nấm Colletotrichum sp ở thời điểm 20 NSKC

33

DANH SÁCH HÌNH

1.1 Sơ đồ bố trí thử nghiệm hiệu quả của thuốc hóa học đối với

nấm Colletotrichum sp gây bệnh thán thư trên hành tím

19

3.1 Triệu chứng thán thư trên hành tím do nấm Colletotrichum sp

sau khi lây bệnh nhân tạo

20

3.2 Đặc điểm hình thái của nấm Colletotrichum sp gây bệnh thán

thư trên hành tím

22

3.4 Hiệu quả ức chế sự phát triển khuẩn ty và hình thành bào tử

nấm Colletotrichum sp của 4 loại thuốc hóa học ở thời điểm

216 GSKC

34

MỞ ĐẦU

Hành tím là một trong những cây trồng chủ lực của thị xã Vĩnh Châu (Sóc Trăng) có chất lượng và giá trị kinh tế cao, là mặt hàng xuất khẩu được các nước trên thế giới ưa chuộng Năm 2012, toàn thị xã Vĩnh Châu có 6975 hecta trồng hành tím với sản lượng 130000 tấn, năng suất trung bình 14-15 tấn/hecta (Dương Vĩnh Hảo, 2012; Nguyễn Thị Phượng, 2012) Tuy nhiên, những năm gần đây do việc mở rộng diện tích đất canh tác cùng với việc thâm canh liên tục dẫn tới dịch bệnh phát sinh

nhiều, trong đó bệnh thán thư do nấm Colletotrichum gây ra xuất hiện ngày càng phổ

biến và gây hại nghiêm trọng

Bệnh thán thư thường xuất hiện ngoài đồng trước khi thu hoạch và tiếp tục phát triển trong thời gian tồn trữ nên việc phòng trị bệnh thán thư trên cây hành tím gặp nhiều khó khăn Bệnh có thể gây hại trên tất cả các bộ phận của cây như lá, thân, củ làm ảnh hưởng năng suất và chất lượng của sản phẩm (Đặng Thị Cúc, 2008) Hiện nay, để phòng trị bệnh thán thư một cách tốt nhất cần phải phối hợp nhiều biện pháp với nhau Trong đó, biện pháp sử dụng thuốc hóa học là một trong những biện pháp không thể thiếu trong phòng trị bệnh thán thư gây hại trên hành tím nhằm đảm bảo năng suất và ngăn chặn dịch bệnh lây lan Bên cạnh đó, việc ứng dụng các biện pháp

an toàn với môi trường và sinh vật đang được quan tâm trong sản xuất nông nghiệp Trong đó, việc ứng dụng dịch trích thực vật đã đem lại nhiều kết quả khả quan, thân thiện với môi trường và đây cũng là hướng phát triển bền vững trong sản xuất nông nghiệp trong tương lai

Do đó, đề tài “Khảo sát hiệu quả của thuốc hóa học đối với nấm

Colletotrichum sp gây bệnh thán thư trên hành tím (Allium ascalonicum L.)”

nhằm mục tiêu:

(1) Xác định tác nhân gây bệnh thán thư trên hành tím (Allium ascalonicum L.)

(2) Tìm được loại thuốc hóa học có hiệu quả ức chế sự phát triển khuẩn ty và

sự hình thành bào tử của nấm Colletotrichum sp

CHƯƠNG I LƯỢC KHẢO TÀI LIỆU

1.1 BỆNH THÁN THƯ TRÊN HÀNH TÍM

1.1.1 Thiệt hại và sự phân bố

Nấm Colletotrichum xuất hiện rộng rãi ở nhiều nơi trên thế giới nhưng phổ biến nhất là ở vùng nhiệt đới Bệnh do nấm Colletotrichum gây ra làm ảnh hưởng xấu đến

nền sản xuất nông nghiệp, gây thất thu năng suất trên một số hoa màu quan trọng như trái cây, rau cải, ngũ cốc… (Waller, 1992)

Trên thế giới, bệnh thán thư do nấm Colletotrichum gây hại trên cây hành tím

xuất hiện rộng rãi ở Java và Madura (ICALTD, 1973) Bệnh làm thất thu năng suất

từ 20-50% trên hành lá ở Trung Quốc (Shi và Tông, 1997) Bệnh thán thư do nấm

Colletotrichum được báo cáo xuất hiện đầu tiên tại Georgia năm 2007, bệnh gây hại trên củ hành giống Ngoài ra, nấm Colletotrichum gây bệnh thán thư còn làm thất thu

năng suất 30% trên hành tây ở đảo Gangwha, Hàn Quốc (Kim và ctv., 2008) Bệnh

thán thư do nấm Colletotrichum được ghi nhận đầu tiên tại miền nam Benin (West

Africa) năm 1995, có khoảng 55% diện tích trồng hành bị nhiễm bệnh thán thư (Sikioru và ctv., 2011) Bệnh cũng được báo cáo lần đầu xuất hiện đầu tiên tại miền

nam Agentina do nấm Colletotrichum circinans (Kiehr, 2012)

Tại Việt Nam, năm 2012 toàn thị xã Vĩnh Châu có khoảng 50% diện tích hành sớm không thể thu hoạch do bị bệnh thán thư (Đặng Thị Cúc, 2008) Vụ Đông-xuân năm 2012, Vĩnh Châu có khoảng 621,5 hecta hành tím bị thiệt hại do bệnh thán thư chiếm 8,91% tổng diện tích hành tím của vùng (Nguyễn Thị Phượng, 2012)

1.1.2 Triệu chứng

Bệnh có thể gây hại trên tất cả các bộ phận của cây như lá, thân và củ (Đặng

Thị Cúc, 2008) Triệu chứng gây hại trên lá hành tím của hai loài nấm Colletotrichum cicirnans và Colletotrichum gloeosporioides có sự khác nhau Nấm Colletotrichum gloeosporioides triệu chứng là những điểm lõm bị hoại tử với những khối bào tử màu

da cam đến màu đen làm cho lá bị bệnh do cong và cuộn tròn, khi bệnh nặng lá có triệu chứng héo khô (Alberto và ctv., 2001) Củ hành bị nhiễm bệnh thường mảnh mai với cổ thân thon dài, rễ ngắn và thưa thớt dẫn đến chết cây (Sikirou, 2011) Đối

với nấm Colletotrichum cicirnans có triệu chứng là những đốm nhỏ bất dạng, màu

đen hoặc xanh đen phát triển trên bẹ lá và làm cho bẹ lá bị cháy, các đốm này phát triển thành những vòng đồng tâm và tạo ra khối bào tử có màu xám (Kim và ctv., 2008)

1.1.3 Điều kiện phát triển của bệnh

Các yếu tố tự nhiên như sương mù, lượng mưa, ẩm độ và nhiệt độ là các yếu tố quan trọng ảnh hưởng đến sự phát triển của bệnh thán thư (Nguyễn Văn Đông, 2002;

Đặng Thị Cúc, 2008 và Monique and Anna, 2009;)

Nhiệt độ thích hợp cho nấm gây bệnh là 20-300C (Vũ Triệu Mân, 2007) Trong

đó, nhiệt độ thích hợp cho sự xâm nhiễm của nấm là 23,9-29,40C (Monique và Anna, 2009) Nấm sẽ ngừng phát triển nếu nhiệt độ dưới 30C (Lê Hoàng Lệ Thủy, 2004) Trên đồng ruộng, bệnh xuất hiện và gây hại nhiều vào vụ hành sớm hoặc vụ hành chính Đặc biệt những năm có mùa đông ấm hơn, nhiệt độ khoảng 25-280C thì bệnh gây hại càng nặng hơn (Vũ Triệu Mân, 2007) Điều kiện thời tiết nóng, ẩm độ cao khoảng 80% rất thích hợp cho sự phát triển và gây hại của bệnh thán thư Nước mưa hoặc sương giúp bào tử phát triển và phát tán nhanh làm bệnh xuất hiện nhiều và lây lan rộng (Lê Hoàng Lệ Thủy, 2004)

Ngoài ra, biện pháp canh tác cũng góp phần tạo điều kiện cho bệnh phát triển như bón phân không cân đối (thừa đạm), chế độ chăm sóc kém, mật độ gieo trồng cao (Đặng Thị Cúc, 2008)

1.1.4 Biện pháp phòng trị bệnh thán thư

Đối với bệnh thán thư thì việc phòng bệnh là rất quan trọng Để giảm thiểu tối

đa thiệt hại do bệnh thán thư gây ra cần phải phối hợp nhiều biện pháp như biện pháp canh tác, biện pháp sinh học và biện pháp hoá học (Trần Khắc Thi, 1993)

Biện pháp canh tác, nên sử dụng giống có tiêu chuẩn tốt, độ đồng đều cao, phát huy ưu điểm của giống, sức sống khỏe, năng suất cao, sạch sâu bệnh Luân canh cây trồng với cây trồng khác họ nhằm cắt đứt nguồn bệnh lưu tồn Thu dọn sạch tàn dư cây bệnh để tiêu hủy khi thu hoạch xong Trước khi trồng mới phải thu gom sạch sẽ tàn dư của những cây trồng ở vụ trước đưa ra khỏi ruộng tiêu hủy để hạn chế nguồn bệnh ban đầu, làm sạch cỏ dại trên ruộng Cày, xới xáo cho đất tơi xốp, khô ráo, không trồng hành những nơi kém thoát nước Cắt bỏ những lá ở thấp, ngắt bỏ lá bị bệnh nhằm hạn chế sự xâm nhập của nấm bệnh (Đặng Thị Cúc, 2008)

Ưu tiên sử dụng các loại thuốc thảo mộc, thuốc có nguồn gốc sinh học như các

chế phẩm sinh học của Chaetomium, Penicillium và Trichoderma để kiểm soát bệnh thán thư do nấm Colletotrichum sp gây ra Không nên sử dụng thuốc hóa học khi

chưa cần thiết, chỉ nên sử dụng các loại thuốc có phổ tác động hẹp, ít độc đối với thiên địch nhưng hiệu quả đối với các loài sâu, bệnh hại (Đặng Thị Cúc, 2008)

1.2 TÁC NHÂN GÂY BỆNH THÁN THƯ TRÊN HÀNH TÍM

Nấm Colletotrichum là nấm đa ký chủ gây hại trên nhiều loại cây trồng như

hành tím, ớt, cà chua, dưa, đậu, hành, xoài, đu đủ, chuối, cam quýt, táo, dâu, cà phê

và nhiều loại hoa kiểng (Agrios, 2005) Bệnh thán thư trên hành tím đã được xác định

do nấm Colletotrichum circinans (Kim và ctv., 2008; Võ Hoàng Nghiệm, 2013) và nấm Colletotrichum gloeosporioides gây ra (Alberto và ctv., 2001; Sikirou, 2011)

1.2.1 Phân loại

Nấm Colleottrichum thuộc bộ nấm đĩa đài (Malanconiales), chi Colletotrichum

(Phạm Văn Kim, 2000; Agrios, 2005)

1.2.2 Đặc điểm hình thái và sinh học của nấm Colletotrichum

1.2.2.1 Đặc điểm hình thái của nấm Colletotrichum

Chi Colletotrichum có dạng đĩa đài tròn hoặc dạng gối, có sáp, màu đen, có gai

cứng ở mép rìa đĩa đài hoặc giữa các cành bào đài Cành bào đài đơn giản, thon dài, bào tử trong suốt, một tế bào, dạng trứng hoặc dạng thon đến dạng liềm Nấm sống

ký sinh và là giai đoạn bất toàn của chi Glomerella Chi nấm này khác với Gloeosporium vì nó có gai cứng Trong môi trường nuôi cấy, gai cứng có thể không

xuất hiện (Bartnet và Hunter, 1998 trích dẫn bởi Lê Hoàng Lệ Thuỷ, 2004) Dưới đây

là đặc điểm hình thái của Colletotrichum gloeosporioides và Colletotrichum circinans gây bệnh thán thư trên hành tím

Colletotrichum gloeosporioides: tản nấm có màu màu xám trắng đến xám đen

trên môi trường khoai tây (PDA) và sinh ra các sợi nấm khí sinh phân tầng theo vòng đồng tâm Bào tử đơn bào, có dạng hình trụ, một đầu hẹp lại ở đế, một đầu nhọn; hình trụ hai đầu cùn; dạng thẳng một đầu hẹp lại ở đế, một đầu cùn, vùng giữa hẹp lại như dạng thắt eo Kích thước 7,5-20 x 2,5-5 μm (Sutton, 1980; Litz, 1997) Có hạch nấm

Nhiệt độ thích hợp cho nấm Colletotrichum gloeosporioides phát triển là 28-30°C

(Kanapathipillai, 1996)

Colletotrichum circinans: tản nấm phát triển trên môi trường khoai tây (PDA)

có màu nâu tối với những sợi nấm khí sinh màu xám nhạt Những hạch nấm có hình cầu hoặc bất dạng, có nhiều gai được hình thành trên bề mặt môi trường Gai được hình thành trên vết bệnh có màu nâu tối đến đen, 1 đến 5 vách ngăn và có kích thước: 32,5-177,5 x 3,0-7,0 μm Bào tử hình lưỡi liềm hoặc hình thoi, thon dần về phía 2 đầu và có kích thước trong khoảng 16,5-27,5 x 3,0 -4,5 μm Đĩa áp có màu nâu đến nâu sẫm, có dạng hình cầu, hình chùy hoặc dạng xẻ thùy và có kích thước 6,5-15,0 x 5,0-7,5 μm Phạm vi nhiệt độ và nhiệt độ tối ưu cho sự phát triển sợi nấm của nấm trên môi trường PDA lần lược là 10-350C và 26-280C (Kim và ctv., 2008)

1.2.2.2 Đặc điểm sinh học của nấm Colletotrichum

Vòng đời của nấm Colletotrichum bao gồm cả hai giai đoạn sinh sản hữu tính

và sinh sản vô tính Ở giai đoạn sinh sản vô tính cho ra các bào tử đính đơn bào, có dạng hình thoi, hình liềm hoặc hình trụ, không màu và đôi khi có vách ngăn Đĩa đài

có gai cứng sẫm màu, nhọn ở đầu và có vách ngăn (Phạm Văn Kim, 2000) Giai đoạn

sinh sản hữu tính của nấm Colletotrichum có tên gọi là Glomerella, ít được tìm thấy trong tự nhiên Chỉ có 11 trong 20 loài Colletotrichum spp có giai đoạn sinh sản hữu tính, bào tử nang đơn bào (Barnet và Hunter, 1998 trích dẫn bởi Lê Hoàng Lệ Thủy;

Agrios, 2005)

Nấm Colletotrichum thuộc loại bán ký sinh bắt buộc (hemibitroph), giai đoạn

đầu là dạng ký sinh bắt buộc (biotroph) và giai đoạn sau là giai đoạn hoại sinh

(necrotroph) Nấm Colletotrichum xâm nhập của các mô kí chủ bằng đĩa áp Ở giai

đoạn đầu, sau khi xâm nhiễm vào cây ký chủ nấm sống bên trong dưới lớp cutin của cây ký chủ và phát triển trong vách tế bào biểu bì để lấy dinh dưỡng, sau đó chúng phát triển trên mô tế bào chết để sống theo kiểu hoại sinh (necrotroph) (Mendgen và Hahm, 2002) Ngoài ra, sự tồn tại của nấm bệnh thuộc loại hemibiotroph trong giai đoạn phát triển dưới dạng necrotroph phụ thuộc vào sự chết của tế bào cây ký chủ

Tế bào chết sẽ cung cấp dinh dưỡng và nơi ở cho mầm bệnh để có thể phát triển và lây lan Đây là điều kiện quyết định cho sự xâm nhiễm thành công của mầm bệnh (Kumar và ctv., 2001)

1.2.3 Sự lưu tồn và lan truyền của nấm Colletotrichum

Bào tử lây lan chủ yếu do mưa, sương mù, các tác nhân gây bệnh thông qua nước mưa, sương hoặc thông qua không khí Ngoài ra, mầm bệnh có thể được lây lan bởi con người hoặc bằng con đường cơ học (Wharton và Diéguez-Uribeondo, 2004).Nấm lưu tồn trong đất, trong tàn dư cây bệnh trong đất, bộ phận được làm giống Mầm bệnh có thể lưu tồn trong xác bã thực vật hay bám trên bề mặt hạt giống (CABI, 2007; Vũ Triệu Mân, 2007)

1.2.4 Đặc điểm phân loại đến loài của nấm Colletotrichum

Đặc điểm của bào tử: hình dạng bào tử của những loài Colletotrichum có thể

phân chia thành hai nhóm chính, dạng bào tử thẳng và dạng bào tử hình liềm và đã

có hơn 20 loài Colletotrichum đã được công nhận (Skipp và ctv., 1995) Những loài

có dạng bào tử hình liềm thì rất dễ phân biệt, nhưng với những dạng bào tử hình trụ thì có thể bị nhầm lẫn (CABI, 2007) Hình dạng của bào tử là một tiêu chuẩn đáng

tin cậy để phân biệt một cách chắc chắn giữa các loài Colletotrichum gây bệnh trên

dâu tây (Denoyes và Baudry, 1995 trích dẫn bởi Lê Hoàng Lệ Thuỷ, 2004) Tuy nhiên

đối với những trường hợp khác, sự giám định có thể phức tạp bởi vì bào tử của các loài nấm có dạng thẳng rất giống nhau về hình thái và những đặc điểm của khuẩn lạc thì rất đa dạng (Adskavg và Hartin, 1997 trích dẫn bởi Lê Hoàng Lệ Thuỷ, 2004)

Dựa trên hình dạng của bào tử để phân biệt giữa Colletotrichum gloeosporioides và Colletotrichum acutatum Nấm Colletotrichum gloeosporioides có dạng bào tử hình trụ, còn nấm Colletotrichum acutatum có dạng bào tử hình thoi (Sutton, 1980)

Đặc điểm của đĩa áp: kích thước và hình dạng của đĩa áp được sử dụng rộng rãi

trong nghiên cứu phân loại của toàn thể chi nấm Colletotrichum (Vinnere, 2004 trích dẫn bởi Lê Hoàng Lệ Thuỷ, 2004) Đĩa áp của loài Colletotrichum gloeosporioides hơi rộng hơn loài Colletotrichum acutatum Tuy nhiên, trong thực thế rất khó để phân

biệt giữa những loài nấm này mà chỉ dựa trên đặc điểm về hình thái đĩa áp (Smith và Black, 1990 trích dẫn bởi Lê Hoàng Lệ Thuỷ, 2004)

Đặc điểm của gai cứng: không phải tất cả các loài nấm thuộc chi Colletotrichum

đều sinh ra gai cứng (Von Arx, 1957 trích dẫn bởi Lê Hoàng Lệ Thủy, 2004) Vì thế,

có hay không có sự hiện diện của gai cứng cũng xem như là một đặc điểm để hỗ trợ

sự phân biệt những loài sau này với Colletotrichum gloeosporioides (Smith và Black,

1990; Vander và ctv., 1990 trích dẫn bởi Lê Hoàng Lệ Thủy, 2004) Sự sinh ra gai

của nấm Colletotrichum chịu ảnh hưởng của ẩm độ không khí, gai được sinh ra nhiều

ở điều kiện ẩm độ không khí tương đối thấp (Frost, 1964 trích dẫn bởi Lê Hoàng Lệ

Thủy, 2004) Theo Kim và ctv (2008), gai cứng Colletotrichum circinans có màu

nâu sậm, có từ 1-5 vách ngăn, kích thước 32,5-177,3 µm x 3,0-7,0 µm Nấm

Colletotrichum gloeosporioides hình thành gai cứng trên môi trường PDA dưới điều

kiện chiếu sáng liên tục trong 10 ngày, còn trên mô sống thì gai cứng sẽ được hình thành sau 15 ngày khảo sát (Agostini và ctv., 1992 trích dẫn bởi Lê Hoàng Lệ Thủy, 2004)

1.3 MỘT SỐ NGHIÊN CỨU VỀ ỨNG DỤNG DỊCH TRÍCH THỰC VẬT VÀ THUỐC HÓA HỌC TRONG PHÒNG TRỊ NẤM

Theo Haddad và ctv (2003), hoạt chất Benomyl có thể kiểm soát sự phát triển

của sợi nấm Colletotrichum gloeosporioides gây bệnh thán thư trên hành lá

Hoạt chất Mancozeb (75%) cho hiệu quả cao thông qua hạn chế sự phát triển

khuẩn ty nấm Colletotrichum gloeosporioides trong điều kiện phòng thí nghiệm

(Kumar và ctv., 2007

Dịch trích từ nhân hạt neem trong ethanol, methanol và nước đều có tác dụng

ức chế như nhau đối với 3 loại nấm gây bệnh cây là Rhizoctinia solani, Slerotium rolfsii và Fusarium oxyporum (Vũ Đăng Khánh và ctv., 2007)

Thuốc Cure Supe 300EC chứa hoạt chất Difenoconazole và Propiconazole có

khả năng làm giảm chiều dài vết bệnh thán thư do nấm Colletotrichum spp gây hại

trên hoa hồng (Nguyễn Quốc Thái, 2010)

Nguyễn Quốc Khánh (2011) đã nghiên cứu Amistar 250EC, Binhnomyl 50WP,

Score 250SC đều thể hiện khả năng ức chế sự phát triển khuẩn ty nấm Colletotrichum

sp ST2 gây bệnh thán thư trên ớt trong điều kiện phòng thí nghệm trong đó thuốc Score 250SC và Binhnomyl 80WP có hiệu quả nhất

1.4 ĐẶC ĐIỂM CỦA MỘT SỐ LOẠI THUỐC HÓA HỌC DÙNG TRONG THÍ NGHIỆM

1.4.1 Amistar 250EC

Thuốc Amistar 250EC có hoạt chất là Azoxystrobin Tên khoa học là Metyl 2-{2-[6-(2-xiano-phenoxi) pyrimidin-4-ylxi] phenyl}-3-methixiacrylat Công thức hóa học là C22H17N3O5 (Trần Quang Hùng, 1999)

(E)-Đặc tính: Azoxystrobin là hợp chất tổng hợp hóa học có cấu trúc đồng đẳng với strobilurins và oudemansins là chất chuyển hóa nấm có trong tự nhiên Thuốc nguyên chất kỹ thuật ở dạng chất rắn, màu trắng, tan rất ít trong nước, hòa tan tốt trong etylaxetat, axetonitril, diclomethan

Công dụng: thuốc tác động theo dạng tiếp xúc và nội hấp, ức chế bào tử nẩy mấm và sợi nấm phát triển, ức chế sự hình thành bào tử nấm Thuốc có phổ tác dụng rất rộng, dùng phòng và trừ nhiều loại bệnh như thán thư trên xoài, đạo ôn, khô vằn hại lúa, đốm vòng trên cà chua, lở cổ rễ trên khoai tây (Trần Quang Hùng, 1999) Thuốc thuộc nhóm độc III, có LD50 qua miệng >5000 mg/kg, LD qua da >2000 mg/kg, ADI là 0,2 mg/kg, rất ít độc đối với ong mật, cá và các loài ký sinh có ít (Trần Quang Hùng, 1999)

một số loại gây bệnh thuộc lớp nấm đảm, nấm bất toàn như Colletotrichum, Alternaria, Ascochyta, Cercospora, Cercosporidium, Guignarrdia,…Thuốc dùng để

phòng trị bệnh phấn trắng, sương mai, khô vằn, lem lép hạt (Trần Quang Hùng, 1999,

Đặc tính: Benomyl tinh khiết ở dạng tinh thể không màu, tan trong nước ở nhiệt

độ phòng (Lê Trường và ctv., 2005), tan ít trong dung môi hữu cơ, phân hủy trong môi trường axít, kiềm mạnh và trong điều kiện bảo quản ẩm, không ăn mòn kim loại, phân hủy ở 1400C (Phạm Văn Biên, 2000; Lê Trường, 2005)

Công dụng: thuốc tác dụng theo dạng nội hấp, phổ tác dụng rộng, thuốc trừ nấm

có tác dụng bảo vệ và diệt trừ Thẩm thấu qua rễ và lá, vận chuyển chủ yếu hướng ngọn (Lê Trường và ctv., 2005) Thuốc phòng trừ được nhiều loại nấm bệnh như thán thư, đốm lá, đốm vòng, sương mai, đạo ôn, lem lép hạt,… (Trần Quang Hùng, 1999; Phạm Văn Biên, 2000)

Thuốc thuộc nhóm độc IV, LD50 qua miệng là >10000 mg/kg, LD50 qua da thỏ

là > 10000 mg/kg, ADI là 0,02 mg/kg Ít độc đối với cá và ong (Trần Quang Hùng, 1999; Lê Trường và ctv., 2005)

1.4.4 Man 80WP

Thuốc Man 80WP có hoạt chất chính là Mancozeb Tên hóa học là etylenbis (dithioccacbamat) (polimeric) phức hợp với muối kẽm (Trần Quang Hùng, 1999; Lê Trường và ctv., 2005)

Mangan-Đặc tính: Hoạt chất Mancozeb là một phức chất của kẽm va Manzeb gồm 20% muối mangan và 2,55% muối kẽm Là loại bột màu vàng hung, không tan trong nước

và trong nhiều dung môi hữu cơ, bền trong môi trường khô nhưng thủy phân trong môi trường nóng, ẩm, và axit, phân hủy ở nhiệt độ từ 192-2040C (Lê Trường và ctv., 2005)

Công dụng: thuốc tác động theo dạng tiếp xúc, có phổ tác dụng rộng Thuốc trừ được nhiều loại nấm bệnh như thán thư trên cà phê, xoài, đạo ôn, lem lép hạt trên lúa, đốm lá trên đậu tương, sương mai trên khoai tây, rỉ sắt trên cà phê (Trần Quang Hùng, 1999) Dùng để trừ bệnh cháy sớm và sương mai trên cà chua, khoai tây, bệnh lở cổ

rễ, phấn trắng,…(Lê Trường và ctv., 2005)

Thuốc thuộc nhóm độc IV, LD50 qua miệng 8000-11200 mg/kg, LD50 qua da chuột >15000 mg/kg, ADI là 0,05 mg/kg (Trần Quang Hùng, 1999; Phạm Văn Biên

và ctv., 2000)

CHƯƠNG II PHƯƠNG TIỆN VÀ PHƯƠNG PHÁP

2.1 PHƯƠNG TIỆN THÍ NGHIỆM

2.1.1 Địa điểm và thời gian thí nghiệm

Thí nghiệm được thực hiện từ tháng 9/2013 đến 2/2014

Thí nghiệm được thực hiện tại phòng thí nghiệm Phòng trừ sinh học, bộ môn Bảo vệ thực vật, Khoa Nông nghiệp & Sinh học ứng dụng, Trường Đại học Cần Thơ

2.2.2 Vật liệu thí nghiệm

Nguồn nấm Colletotrichum sp được phân lập trên cây hành tím tại thị xã Vĩnh

Châu tỉnh Sóc Trăng năm 2013

Bốn loại thuốc hóa học gồm:

1 Amistar 250EC (Công ty Syngenta)

2 Score 250SC (Công ty Syngenta)

3 Binhnomyl 50WP (Công ty CPTM và DV Ngọc Tùng)

4 Man 80WP (Công ty Tiến Nông)

Môi trường sử dạng trong thí nghiệm là Water Agar (WA) và Potato Dextrose