Giáo trình Hoá Sinh c06.pdf

Giáo trình Hoá Sinh

101 Chương Enzyme Enzyme protein có khả xúc tác đặc hiệu cho phản ứng hóa học Chúng thúc đẩy phản ứng xảy mà mặt sản phẩm cuối Enzyme có nhiều đối tượng sinh học thực vật, động vật môi trường nuôi cấy vi sinh vật.Hiện người ta thu nhiều loại chế phẩm enzyme khác sử dụng rộng rãi nhiều lãnh vực y học , nông nghiệp, công nghiệp… 6.1 Bản chất hóa học enzyme Ngoại trừ nhóm nhỏ RNA có tính xúc tác, tất enzyme protein Tính chất xúc tác phụ thuộc vào cấu tạo protein Nếu enzyme bị biến tính hay phân tách thành tiểu đơn vị hoạt tính xúc tác thường bị đi, tương tự thân protein enzyme bị phân cắt thành amino acid Vì cấu trúc bậc 1, 2, 3, protein enzyme cần thiết cho hoạt tính xúc tác chúng Enzyme, protein khác, có trọng lượng phân tử khoảng 12.000 đến 1000.000.Một số enzyme cấu tạo gồm toàn phân tử L amino acid liên kết với tạo thành, gọi enzyme thành phần Đa số enzyme protein phức tạp gọi enzyme hai thành phần Phần protein gọi nhóm ngoại hay coenzyme Một coenzyme kết hợp với apoenzyme khác (phần protein) xúc tác cho q trình chuyển hóa chất khác chúng giống kiểu phản ứng Một số enzyme cần ion kim loại cho hoạt động như: Cu2+ Cytochrome oxidase 2+ 3+ Cytochrome oxidase, catalase, peroxidase Fe Fe + K Pyruvate kinase 2+ Mg Hexokinase, glucose 6-phosphatase, pyruvate kinase Mn2+ Arginase, ribonucleotide reductase Mo Dinitrogenase Ni2+ Urease Se Glutathione peroxidase 2+ Zn Carbonic anhydrase , alcohol dehydrogenase, carboxypeptidase A B 102 Một số coenzyme chức vận chuyển nhóm tương ứng chúng sau: Biocytin Coenzyme A 5’- Deoxyadenosylcobalamin (coenzyme B12) Flavin adenine dinucleotide Lipoate Nicotinamide adenine dinucleotide Pyridoxal phosphate Tetrahydrofolate Thiamine pyrophosphate CO2 Nhóm Acyl Nguyên tử H nhóm alkyl Điện tử Điện tử nhóm acyl Ion Hydride (:H-) Nhóm Amino Nhóm Carbon Aldehyde 6.2 Cơ chế tác dụng Những quan điểm nhằm giải thích chế tác dụng enzyme cho enzyme (E) tưong tác với chất (S) làm giảm lựợng hoạt hóa phản ứng hóa sinh Muốn làm giảm lượng hoạt hóa phản ứng enzyme cần trải qua nhiều giai đoạn trung gian tạo thành phức chất định E S Khi kết hợp với phân tử enzyme, kết cực hóa, chuyển dịch electron biến dạng mối liên kết tham gia trực tiếp vào phản ứng làm thay đổi động nên phân tử chất trở nên hoạt động dễ dàng tham gia phản ứng Việc tạo thành phức hợp E-S giai đoạn đầu xảy nhanh khơng bền Do sau thời gian dài chứng minh thực nghiệm Bằng chứng rõ ràng tồn phức hợp E-S thành cơng hai nhà hóa sinh Nhật Bản K Iaglu T Ozava tách phức E-S phản ứng khử amin cách oxy hóa (loại trừ nhóm amine) amino acid dãy D oxydase xúc tác Nhìn chung ta hình dung chế tác dụng enzyme lên chất tạo sản phẩm phương trình tổng quát sau: E+S E–S P+E Giai đoạn 1: E kết hợp với S để tạo thành E-S Giai đoạn xảy nhanh, nhờ liên kết không bền liên kết hydro, tương tác tĩnh 103 diện, tương tác Van der Waals… Mỗi loại liên kết đòi hỏi điều kiện khác chịu ảnh hưởng khác có nước Giai đoạn 2: Sau tạo phức, chất có biến đổi định mật độ điện tử, cấu hình làm chất trở nên hoạt động hơn, phản ứng dễ dàng để tạo thành sản phẩm P Trong nhiều phản ứng enzyme xúc tác có hay nhiều lọai chất, ví dụ hexokinase xúc tác phản ứng: ATP + glucose hexokinase ADP + glucose phosphate Cơ chế enzyme xúc tác cho phản ứng chất sau: a/ Cơ chế tạo phức thành phần S2 b/ Cơ chế không tạo phức thành phần Đây trường hợp chất thứ 2(S2) kết hợp vào enzyme ( trạng thái E’) sau P1 tạo thành 6.3 Trung tâm hoạt động (TTHĐ) enzyme Từ kết nghiên cứu chất hoá học, cấu trúc trung tâm hoạt động , chế tác động, trung tâm hoạt động có số nhận xét chung trung tâm hoạt động sau: - Là phận dùng để liên kết với chất - Chỉ chiếm tỉ lệ bé so với thể tích tồn enzyme - Gồm nhóm chức amino acid ngồi có ion kim loại nhóm chức coenzyme 104 Đối với E thành phần: TTHĐ gồm nhóm chức amino acid nhóm hydroxy serin, carboxy glutamic, vịng imidazol… Các nhóm chức amino acid xa chuỗi polypeptide nhờ cấu trúc không gian nên gần mặt khơng gian Đối với E hai thành phần: TTHĐ trên, nhóm chức amino acid tham gia tạo thành TTHĐ liên kết với liên kết hydro Ngồi TTHĐ loại cịn có tham gia coenzyme ion kim loại Theo Fisher TTHĐ có cấu trúc cố định, kết hợp với chất để tạo phức E-S ta hình dung giống chìa khóa ổ khóa Ngày người ta chứng minh rằng: TTHĐ enzyme có cấu tạo hồn chỉnh có tương tác với chất (thuyết tiếp xúc cảm ứng Koshland) 6.4 Tính đặc hiệu enzyme Người ta chia tính đặc hiệu làm kiểu: + Đặc hiệu phản ứng + Đặc hiệu chất + Đặc hiệu không gian a/ Đặc hiệu phản ứng: Đó biểu enzyme thường xuyên xúc tác cho kiểu phản ứng định, ví dụ vận chuyển hydro từ chất cho (rượu bậc hay rượu bậc hai) đến chất nhận (NAD+ hay NADP+) hay chuyền nhóm amin từ amino acid đến ceto acid Các phản ứng loại thứ dehydrogenase xúc tác, phản ứng loại thứ hai aminotransferase xúc tác 105 b/ Đặc hiệu chất: Tuỳ mức độ người ta chia thành: đặc hiệu tương đối đặc hiệu tuyệt đối + Đặc hiệu tuyệt đối: Enzyme tác dụng lên chất định, ví dụ có tính chất kinh điển chun hố tuyệt đối urease, enzyme phân giải ure: Hằng trăm thí nghiệm dẫn xuất ure cho thấy chúng không bị phân giải tác động urease Thực người ta phát khả phân giải chất hydroxyure với tốc độ bé khoảng 120 lần + Đặc hiệu nhóm tuyệt đối: Các enzyme tác dụng lên chất có kiểu cấu trúc phân tử, liên kết có yêu cầu xác định nhóm nguyên tử đối vơi nhóm nguyên tử gần liên kết chịu tác dụng ví dụ : maltase phân giải liên kết glucosidic tạo thành từ glucoside glucose với -OH monose khác + Đặc hiệu nhóm tương đối: Các enzyme khơng có u cầu đối vơi nhóm chức gần liên kết chịu tác dụng ví dụ lipase thuỷ phân lipid c/ Đặc hiệu không gian: Các enzyme xúc tác cho dạng đồng phân dạng L hay dạng D, dạng cis hay trans mà 6.5 Các yều tố ảnh hưởng đến tốc độ phản ứng enzyme 6.5.1 Ảnh hưởng nồng độ enzyme Trong điều kiện dư thừa chất, nghĩa [S] >>>[E] tốc độ phản ứng phụ thuộc vào [S], v= K[E] có dạng y = ax Nhờ người ta đo [E] cách đo vận tốc phản ứng enzyme xúc tác Có nhiều trường hợp mơi trường có chứa chất kìm hãm hay hoạt hố vận tốc phản ứng enzyme xúc tác không phụ thuộc tuyến tính với [E] v [E] Hình 6.1: Sự phụ thuộc vận tốc phản ứng vào [E] 6.5.2 Ảnh hưởng nồng độ chất [S] Ta khảo sát trường hợp đơn giản : chất 106 E S (1) Gọi v1 vận tốc phản ứng tạo thành phức chất ES Gọi v-1 vận tốc phản ứng phân ly phức chất ES để tạo thành Gọi v2 vận tốc phản ứng tạo thành E P (sản phẩm) v1 = k1[E][S] v-1 = k-1[ES] v2 = k2[ES] Khi hệ thống đạt trạng thái cân ta có: k-1[ES]+k2[ES] = k1[E][S] (k-1+k2)[ES] = k+1[E][S] (2) Gọi E0 nồng độ ban đầu: [E0]=[E]+[ES]=>[E]=[E0]-[ES] (3) Thay trị số [E] từ (3) vào (2) ta có: (k-1+k2)[ES] = k1([E0]-[ES]) [S] k1 [E0] [S] [ES] = -k-1+ k2+k1[S] Nếu đặt Km= k-1+k2/ k1 (Km: gọi số Michaelis Menten) Ta có : [ES] = [E0][S]/ Km+[S] Mặt khác vận tốc phản ứng tạo thành sản phẩm P là: V = k2[ES] Thay [ES] giá trị ta thu được: k2[E0] [S] v = - (4) Km + [S] 107 Qua ta thấy nồng độ enzyme cao vận tốc phản ứng enzyme lớn Vận tốc đạt cực đại toàn enzyme liên kết với chất, nghĩa là: Vmax= k2[E0] Thay vào phương trình (4) ta được: [S] v = Vmax -(5) Km+ [S] Phương trình (5) gọi phương trình Michaelis Menten Km gọi số Michaelis Menten đặc trưng cho enzyme Km đặc trưng cho lực enzyme với chất, Km có trị số nhỏ lực enzyme với chất lớn, nghĩa vận tốc phản ứng enzyme xúc tác lớn [S] Hình 6.2 Biến thiên vận tốc phản ứng theo nồng độ chất Khi tăng [S] v phản ứng tăng, tăng [S] đến giá trị v đạt đến giá trị vmax không tăng ta tiếp tục tăng [S] Khi Km=[S] v =1/2 Vmax Năm 1934 Lineweaver Burk, sở phương trình (5) nghịch đảo để biến thành dạng đường thẳng y=ax+b, có ý nghĩa lớn việc nghiên cứu kìm hãm enzyme 108 1/v 1/Vmax -1/Km 1/[S] Hình 6.3: Sự phụ thuộc tốc độ phản ứng vào nồng độ chất theo Lineweaver-Burk 6.5.3 Ảnh hưởng chất kìm hãm (inhibitor) Là chất có tác dụng làm giảm hoạt độ hay làm enzyme không khả nâng xúc tác biến chất thành sản phẩm Kìm hãm enzyme thực nhiều cách khác (thuận nghịch hay không thuận nghịch) Thuận nghịch có: Cách 1: Kìm hãm cạnh tranh (competitive inhibition) Trong trường hợp kìm hãm cạnh tranh chất chất kìm hãm tác dung lên trung tâm hoạt động enzyme, Chất kìm hãm chốn chổ chất enzyme Hình 6.4 Kiểu kìm hãm cạnh tranh Khi chất dư thùa, nồng độ chất kìm hãm thấp loại bỏ tác dụng chất kìm hãm, cịn nồng độ chất thấp nồng độ chất kìm hãm cao lại có tác dụng kìm hãm hồn tồn 1/v= (αKm/Vmax) 1/S +1/Vmax α = 1+[I]/KI 109 1/v [I] 1/Vmax Khơng có chất kìm hãm 1/[S] Hình Sự phụ thuộc tốc độ phản ứng vào nồng độ chất theo Lineweaver-Burk có kìm hãm cạnh tranh Người ta thấy kìm hãm phần lớn xẩy chất kìm hãm chất có tương đồng mặt hố học ví dụ: malic acid có cấu trúc gần giống với succinic acid nên kìm hãm cạnh tranh enzyme succinatedehydrogenase, enzyme xúc tác cho biến đổi succinic acid thành acid fumaric acid Trường hợp đặc biệt kìm hãm cạnh tranh kìm hãm sản phẩm Trường hợp xẩy sản phẩm phản ứng tác dụng trở lại enzyme chốn vị trí hoạt động phân tử enzyme Đường thẳng có chất kìm hãm có độ xiên lớn cắt trục tung điểm 1/Vmax Cách 2: Kìm hãm phi cạnh tranh (uncompetitive inhibition) Đặc trưng kiểu kìm hãm chất kìm hãm liên kết với phức hợp ES, mà không liên kết với enzyme tự 110 Hình 6.6 Kiểu kìm hãm phi cạnh tranh 1/v=(Km/Vmax)1/[S] + α’/Vmax 1/v [I] -1/Km khơng có chất kìm hãm 1/[S] Hình 6.7 Sự phụ thuộc tốc độ phản ứng vào nồng độ chất theo Lineweaver-Burk có kìm hãm phi cạnh tranh 111 Cách 3: Kìm hãm hỗn tạp( mixed inhibition ) Hình 6.8 Kiểu kìm hãm hỗn tạp Trong đó, chất kìm hãm khơng liên kết với enzmye tự mà liên kết với phức hợp ES tạo thành phức hợp EIS không tạo sản phẩm P Tương tự ta có phương trình : 1/v= (αKm/Vmax)1/[S] +α’/vmax 1/v [I] 1/Vmax khơng có chất kìm hãm 1/[S] Hình 6.9 Sự phụ thuộc tốc độ phản ứng vào nồng độ chất theo Lineweaver-Burk có kìm hãm hỗn tạp 112 Các giá trị α ,α’ định nghĩa Trường hợp α = α’ gọi kìm hãm khơng cạnh tranh (noncompetitive inhibition) Một trường hợp kìm hãm cịn gặp kìm hãm enzyme nồng độ cao chất gọi “kìm hãm chất” kìm hãm urease nồng độ ure cao, ngồi cịn có enzyme khác lactatdehydrogenase, carboxypeptidase, lipase, pyrophotphatase, photphofructokinase (đối với ATP) Nguyên nhân tượng cón chưa biết rõ Đó là: + Tồn nhiều trung tâm liên kết với chất lực khác Khi nồng độ chất thấp enzyme liên kết với phân tử chất, nồng độ chất cao liên kết với nhiều chất dẫn đến hình thành phức hợp ES khơng hoạt động + Cơ chất liên kết nhờ vị trí đặc biệt enzyme Đó nhóm enzyme quan trọng (enzyme dị lập thể) bên cạnh trung tâm xúc tác cịn có trung tâm điểu chỉnh + Cơ chất liên kết với chất hoạt hố cách tách khỏi E + Cơ chất chốn chổ (ngăn cản) cofactor ( đồng yếu tố ) hay coenzyme + Cơ chất ảnh hưởng đến ion lực mơi trường qua làm tình chun hố enzyme 6.5.4 Ảnh hưởng chất hoạt hóa (activator) Là chất làm tăng khả xúc tác nhằm chuyển hóa chất thành sản phẩm Thông thường cation kim loại hay hợp chát hữu vitamin tan nươc Ví dụ: Mg++ hoạt hóa enzyme mà chất phosphoryl hóa pyrophosphatase (cơ chất pyrophosphate), adenosinetriphosphatase (cơ chất ATP) Các cation kim loại có tính đặc hiệu, tính đối kháng tác dụng tuỳ thuộc vào nồng độ 6.5.5 Ảnh hưởng cuả nhiệt độ Ta tăng vận tốc phản ứng hóa học cách tăng nhiệt độ mơi trừơng, tượng tuân theo quy luật Vant’-Hoff Điều có nghĩa tăng nhiệt độ lên 100C tốc độ phản ứng tăng lên khỏang lần Đối với phản ứng enzyme xúc tác áp dụng quy luật phạm vi định,vì chất enzyme protein.Khi ta tăng nhiệt độ lên 40-500C xảy trình phá huỷ chất 113 xúc tác Sau nhiệt độ tối ưu tốc độ phản ứng enzyme xúc tác giảm Nhờ tồn nhiệt độ tối ưu người ta phân biệt phản ứng hoá sinh với phản ứng vơ thơng thường Mỗi enzyme có nhiệt độ tối ưu khác nhau, phần lớn phụ thuộc nguồn cung cấp enzyme, thông thường khoảng từ 40-600C , có enzyme có nhiệt độ tối ưu cao enzyme chủng ưa nhiệt Các chủng vi sinh vật ưa nhiệt, đăc biệt vi khuẩn chịu nhiệt có chứa enzyme chịu nhiệt cao Họat độ nhiệt độ Hình 6.10 Ảnh hưởng nhiệt độ lên họat độ enzyme 6.5.6 Ảnh hưởng pH Sự phân li khác phân tử protein giá trị pH khác làm thay đổi tính chất trung tâm liên kết với chất tính chất hoạt động phân tử enzyme.Điều dẩn đến giá trị xúc tác khác phụ thuộc vào giá trị pH Như biết enzyme có pH tối ưu,mỗi enzyme có đường biểu diễn ảnh hưởng pH lên vận tốc phản ứng chúng xúc tác Đường biểu diễn có dạng hình sau: Họat độ Hình 6.10 Ảnh hưởng pH lên họat độ enzyme 114 Ảnh hưởng giá trị pH đến tác dụng enzyme sở sau: a/ Enzyme có thay đổi không thuận nghịch phạm vi pH cực hẹp b/ Ở hai sườn pH tối ưu xảy phân ly nhóm prosthetic hay coenzyme c/ Làm thay đổi mức ion hoá hay phân ly chất d/ Làm thay đổi mức ion hoá nhóm chức định phân tử enzyme dẫn đến làm thay đổi lực liên kết enzyme với chất thay đổi hoạt tính cực đại Nhờ xác định Vmax Km phụ thuộc giá trị pH cho phép nhận định lại chất nhóm tham gia vào liên kết chất trình tự xúc tác 6.5.7 Các yếu tố khác + Ánh sáng: Có ảnh hưởng khác đến loại enzyme, bước sóng khác có ảnh hưởng khác nhau, thường ánh sáng trắng có tác động mạnh nhất, ánh sáng đỏ có tác động yếu Ánh sáng vùng tử ngoại gây nên bất lợi, enzyme trạng thái dung dịch bền kết tinh dạng tinh thể, nồng độ enzyme dung dịch thấp bền, tác động tia tử ngoại tăng lên nhiệt độ cao Ví dụ tác động tia tử ngoại nhiệt độ cao enzyme amylase nhanh chóng hoạt tính + Sự chiếu điện: Điện chiếu với cường độ cao tác động phá huỷ mạnh Tác động mạnh dịch enzyme có nồng độ thấp Có thể tạo thành gốc tự do, từ cơng vào phản ứng enzyme + Sóng siêu âm: Tác động khác loai enzyme, có enzyme bị hoạt tính, có enzyme lại không chịu ảnh hưởng Nhận xét chung: Độ bền phụ thuộc vào trang thái tồn enzyme, tinh khiết enzyme bền, dịch lỗng độ bền kém, tác động số ion kim loại dịch với nồng độ khoảng 10-3M Ca++ làm tăng tính bền Enzyme allosteric ( Enzyme dị lập thể, dị không gian) Cho đến nay, người ta mơ tả enzyme mà họat tính enzyme phụ thuộc nồng độ chất khơng có dạng hyperbol mà có dạng sigmoid enzyme allosteric (Hình 6.11 ): 115 Hình 6.11 Biến thiên vận tốc phản ứng theo nồng độ chất Đối với enzyme này, nồng độ chất thấp tốc độ phản ứng tăng chậm, sau tiếp tục tăng nồng độ tốc độ nhanh chóng đạt giá trị cực đại Như ta biết, enzyme tuân theo động học Michaelis-Menten hay nhiều chất liên kết vào vị trí phân tử enzyme, điều dẫn đến enzyme bão hịa chất Cịn enzyme có đường cong tốc độ sigmoid xuất enzyme oligomer, nên liên kết với nhiều phân tử chất Điều có nghĩa enzyme allosteric có nhiều trung tâm liên kết, monomer có trung tâm liên kết Người ta cho rằng, trường hợp có tính hợp tác vị trí liên kết chất phân tử enzyme oligomer Các enzyme oligomer Monod gọi allosteric enzyme dị lập thể (allosteric enzyme) Đường cong tốc độ sigmoid bị chất điều hịa (modulator) đẩy phía trái hay phải Chất điều hòa dương tức làm tăng lực enzyme allosteric với chất, ngược lại chất điều hịa âm Các chất điều hịa làm ảnh hưởng khác đến thông số động học, làm thay đổi giá trị riêng lẻ hai giá trị Km hay Vmax Hình 6.12 Minh họa có modulator 116 6.6 Cách gọi tên phân loại enzyme Như ta biết enzyme xúc tác cho kiểu phản ứng hoá học (như oxy hoá kiểu chất định, thuỷ phân kiểu liên kết định,vận chuyển nhóm chất định từ chất chất nhận có địa chỉ, có việc biến đổi chất nhất), mặt khác cịn có kiểu phản ứng hố sinh định xúc tác enzyme khác Dựa vào tính đặc hiệu phản ứng enzyme, năm 1961 tiểu ban enzyme học quốc tế trình bày báo cáo, có đề nghị nguyên tắc định tên phân loại enzyme Người ta chia enzyme làm lớp: Oxydoreductase: enzyme xúc tác cho phản ứng oxi hoá-khử Transferase: enzyme xúc tác cho phản ứng chuyển vị Hydrolase: enzyme xúc tác cho phản ứng thủy phân Lyase: enzyme xúc tác cho phản ưng phân cắt không cần nước Isomerase: enzyme xúc tác cho phản ứng đồng phân hoá Ligase (synthetase): enzyme xúc tác cho phản ứng tổng hợp có sử dụng liên kết giàu lượng ATP v.v Mỗi lớp chia thành nhiều tổ (dưới lớp), tổ chia thành nhiều nhóm (siêu lớp) Tên enzyme thường gọi: Tên chất đặc hiệu - loại phản ứng xúc tác cộng thêm tiếp vĩ ngữ ase Đứng trước tên enzyme thường có số: số thứ lớp, số thứ hai tổ, số thứ ba nhóm, số thứ tư số hạng enzyme nhóm Ví dụ: (2.6.1.1) L.aspartate: α-cetoglutarate aminotransferase Enzyme xúc tác cho phản ứng chuyển nhóm amine từ L.aspartate đến α-cetoglutarate L.aspartate +α-cetoglutarate oxaloacetate + glutamate 6.7 Các coenzyme quan trọng Nicotinamide adenine dinucleotide 117 Flavine adenine dinucleotide Lipoic acid Coenzyme A Biotin 118 Thiamin diphosphate (Nhóm ε- amino protein, Schiff base) Pyridoxal phosphate Tetrahydrofolic acid 119 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tiếng Việt Phạm Thị Trân Châu, Trần thi Áng 1999 Hoá sinh học, NXB Giáo dục, Hà Nội Đỗ Q Hai 2004 Giáo trình Hóa sinh đại cương, Tài liệu lưu hành nội Trường ĐHKH Huế Trần Thanh Phong 2004 Giáo trình Hóa sinh đại cương, Tài liệu lưu hành nội Trường ĐHKH Huế Lê Ngọc Tú (chủ biên), Lê Văn Chứ, Đặng Thị Thu, Phạm Quốc Thăng Nguyễn Thị Thịnh, Bùi Đức Hợi, Lưu Duẫn, Lê Dỗn Diên, 2000 Hóa sinh Công nghiệp, Nxb KH&KT, Hà Nội Tài liệu tiếng Anh Bergmeyer H U 1968 Methods of enzymatic analysis, translated from the third German edition, Acanamic, New York Copeland R A 2000 Enzymes, copyright by Wiley-VCH, Inc Lehninger A L 2004 Principles of Biochemistry, 4th Edition W.H Freeman Mikkelsen S R 2004 Bioanalytical chemistry, copyright by John Wiley & Sons, Inc  ... Trần thi Áng 1999 Hoá sinh học, NXB Giáo dục, Hà Nội Đỗ Q Hai 2004 Giáo trình Hóa sinh đại cương, Tài liệu lưu hành nội Trường ĐHKH Huế Trần Thanh Phong 2004 Giáo trình Hóa sinh đại cương, Tài... ứng hoá học (như oxy hoá kiểu chất định, thuỷ phân kiểu liên kết định,vận chuyển nhóm chất định từ chất chất nhận có địa chỉ, có việc biến đổi chất nhất), mặt khác cịn có kiểu phản ứng hố sinh. .. liên kết với chất, nghĩa là: Vmax= k2[E0] Thay vào phương trình (4) ta được: [S] v = Vmax -(5) Km+ [S] Phương trình (5) gọi phương trình Michaelis Menten Km gọi số Michaelis Menten đặc trưng