bià giảng công nghệ gen

1 CÔNG NGHỆ GEN Bài giảng GV: Nguyễn Thị Kim Cúc 2 Vật liệu cho công nghệ gen Chủ đề 1 3 Các loại vật chủ thu nhận  Tế bào nhân sơ (vi khuẩn)  Escherichia coli và các vi khuẩn khác (Bacillus subtilis, Bacillus thuringiensis, Pseudomonas spp. Streptomyces spp.…)  Tế bào nhân thật  Nấm men (Saccharomyces cerevisiae), nấm mốc (Aspergillus nidulans)  Sinh vật bậc cao: thực vật bậc cao, tế bào động vật (tế bào côn trùng, tế bào trứng, tế bào động vật có vú…) 4 Vector chuyển gen  Một số đặc tính bổ sung  Chứa gen vô hiệu hóa sự gắn vào của các DNA không mong muốn  Có nhiều bản sao  Có một số trình tự nucleotide cần thiết cho biểu hiện gen  Là phân tử DNA có khả năng tự tái sinh, tồn tại độc lập trong tế bào và mang được các gen cần chuyển  Yêu cầu tối thiểu:  Có trình tự khởi đầu sao chép (ori)  Có các vị trí cắt giới hạn nằm xa điểm ori  Có trình tự khởi động promoter  Đảm bảo sự di truyền bền vững của DNA tái tổ hợp  Có các gen chỉ thị (marker genes) 5 Gen LACZ  Cơ chế tác dụng của β- galactosidase 6 7 Ứng dụng của vector chuyển gen  Tạo dòng (cloning) và khuếch đại (amplification) một đoạn trình tự DNA  Nghiên cứu biểu hiện của một đoạn trình tự DNA  Chuyển gen vào các tế bào vi sinh vật, động, thực vật  Sản xuất protein từ gen được tạo dòng… 8 Các loại vector tách dòng gen (Cloning vectors)  Plasmid vector: pBR322, pUC 18, pBluescript…  Phage vector: phage λ, phage M13…  Cosmid vector  BAC vector (Bacterial Artificial Chromosome)  YAC vector (Yeast Artificial Chromosome) và các vector ở sinh vật nhân chuẩn khác 9 Plasmids  Thế hệ 1: là các plasmid tự nhiên (pSC101, ColE 1 …)  Thế hệ 2: là các plasmid được cấu tạo phức tạp hơn (pBR 322)  Thế hệ 3: là các plasmid đa năng (polycloning plasmid) và chuyên dụng có vùng polylinkers hoặc vùng multiple cloning sites (pUC19, pGEM, pBluescript…) 10 Plasmid vector pBR322 [...]... một số đặc điểm của vector tạo dòng 18 Ứng dụng của vector chuyển gen      Tách dòng nhằm khuếch đại một số lượng lớn các bản sao DNA xác định Nghiên cứu biểu hiện của một đoạn DNA chưa biết Đưa gen cần nghiên cứu vào tế bào chủ Sản xuất protein từ gen được tạo dòng Sản xuất RNA với lượng lớn từ DNA tạo dòng 19 Các enzyme tách dòng gen    Enzyme giới hạn (Restriction enzymes) Các enzyme biến...Plasmid vector pUC 19 11 Phage λ và phage M13 Bản đồ hệ gen của phage λ 13 Cosmid vector pWEB-TNC 14 Phagemid (vector M13mp18) 15 BAC vector    Dựa trên cơ sở plasmid F-factor Kích thước đoạn DNA chèn có thể lên tới 300 kb Thuận lợi trong việc xây dựng thư viện, lập bản đồ và phân tích genome 16 YAC vector   Dựa trên cấu trúc NST tự nhiên của nấm men Có thể tạo dòng... kết hợp lại  Để nối phải dùng enzym T4 DNA ligase HpaI 29 Các kiểu cắt của các enzym RE loại II Cắt tạo đầu dính (sticky ends)  Có thể tự nối lại không cần DNA ligase  Được sử dụng rất nhiều trong công nghệ tái tổ hợp EcoRI 30 Các kiểu cắt của các enzym RE 31 Trình tự nhận biết của một số enzyme cắt giới hạn 32 Một số RE sử dụng phổ biến 33 Một số RE sử dụng phổ biến 34 Một số điều kiện cần lưu ý . 1 CÔNG NGHỆ GEN Bài giảng GV: Nguyễn Thị Kim Cúc 2 Vật liệu cho công nghệ gen Chủ đề 1 3 Các loại vật chủ thu nhận  Tế bào nhân sơ (vi. truyền bền vững của DNA tái tổ hợp  Có các gen chỉ thị (marker genes) 5 Gen LACZ  Cơ chế tác dụng của β- galactosidase 6 7 Ứng dụng của vector chuyển gen  Tạo dòng (cloning) và khuếch đại (amplification). vú…) 4 Vector chuyển gen  Một số đặc tính bổ sung  Chứa gen vô hiệu hóa sự gắn vào của các DNA không mong muốn  Có nhiều bản sao  Có một số trình tự nucleotide cần thiết cho biểu hiện gen  Là phân