Tài liệu hạn chế xem trước, để xem đầy đủ mời bạn chọn Tải xuống
1
/ 23 trang
THÔNG TIN TÀI LIỆU
Cấu trúc
Slide 1
Slide 2
1. Giới thiệu tổng quát
Slide 4
Slide 5
Vi khuẩn đất A.tumefaciens
Slide 7
Slide 8
Slide 9
Mô hình phân tử quá trình xâm nhiễm của A .tumefaciens
Slide 11
Quy trình chuyển gen nhờ vi khuẩn A.tumefaciens
Slide 13
Slide 14
Slide 15
Slide 16
Slide 17
Slide 18
Slide 19
Slide 20
Slide 21
Slide 22
Slide 23
Nội dung
9: Giáo viên hướng dẫn: Nhóm thực hiện: !"#$%&'()* +&,) -./01 23401 5 6 7 8 )01 9 • Trong thập niên của những năm 1880 mở ra kỷ nguyên của cây trồng chuyển gen khi con người đã phát hiện ra khả năng chuyển gen của vi khuẩn Agrobacterium tumefaciens. • A.tumefaciens là loại vi khuẩn gây bệnh khối u ở thực vật sống trong đất, trong lĩnh vực biến nạp gen nó được sử dụng làm vectơ đặc biệt để chuyển các gen ngoại lai vào thực vật nhằm tạo ra những thực vật mang gen có các đặc tính mong muốn. :"' ; * < :< ('= >?( >? Agrobacterium Tumefaciens Proteobacteria =()* Hình thái !" ##$ %&'( )!" # * )' +,- !'. /+0 )12 3 4"56!789',:;<=>?>@<>ABC +D1EF" !+0 2 1G5"C!H!7I J! +%$ !'. '.=:+0K Vi khuẩn đất A.tumefaciens Ti Plasmid bộ gen của vi khuẩn CẤU TẠO E%!L10 +M1 N:OPH PC QR S:"C H T 0 E# ;U>> 4! +EE4"O4V4! SD:>>1+ !H! J#* 7 1.!.JW"X+M1"YN 'V+"Z/C2[ P4""\]H !Z 1)E#$ ^+0"W! _15`" N:X9 " 4<\] a ! Oa +0 b S ! H E a / "a &!/C"a cE d7PPVK%C)" PP4<\]"0+C \]E9', :;1* / e E 8/ !7T Q/ ]f#$ T Q/_1)JW1cE$ !'. !2 X1T Z/%+3H$ !'. P:g"/1%'f O2 E! 217'f S+'Q 5G& ' N'( O N!1DS+# E h#%)a0"5+'Q8+c 1. 4 " ]- ) 4 / / C 4 "/eE#%/C / d7P:VK%!LC P=ia !=><U>11 N9%j!8!Y O!!h!K!\!k!6S:!2 8!Y O!l!dS KmE:!19"!!6eE0%!L:X!<!69CJ^)/ !/K/a ! !h!\!6+E !H__! JW4<\]a !K!k EX"$ b8#)8/!7 -@- ABCD ED-FG HIJKAJK L-M Bản chất tự nhiên của vi khuẩn A.tumefaciens là xâm nhập vào những vị trí tổn thương trên cây hai lá mầm và gây ra khối u tại những vị trí tổn thương đó. Vi khuẩn xâm nhiễm vào chỗ vết thương, kích thích hình thành các chất độc có bản chất phenolic (Acetosyringon, Hydroxyl acetosyringon). Chất này có tác dụng làm lành vết thương, vừa là kết hợp chất dẫn dụ vi khuẩn xâm nhập , lại có vai trò như một chất kích hoạt vùng gen vir thuộc Ti-plasmid kích thích cho sự cắt đoạn T-ADN (tại vùng bờ trái và bờ phải) để gắn vào genom thực vật. Trong T-ADN có chứa 3 vùng gen quan trọng quy định sự hình thành khối u. Đó chính là vùng gen iaam và iaah kích thích cho sự hình thành IAA và vùng gen ipt kích thích cho sự hình thành xytokinin. Tỷ lệ auxin/xytokinin kích thích sự hình thành callus tạo lên các khối u. n27G8/!7) [...]... của Ti plasmid có trong vi khuẩn Agrobacteriatumefaciens Kết luận Qua quá trình tìm hiểu về vi khuẩn A tumefaciens , chúng ta biết được những đặc điểm tổng quan và ứng dụng của chúng trong nông nghiệp , bên cạnh đó cũng thấy được khả năng gây hại của vi khuẩn này Vi c nghiên cứu về vi khuẩn A tumefaciens mở ra nhiều triển vọng trong vi c phát triển giống cây trồng Tên thành vi n trong nhóm 1 Lê Xuân... đạo ôn vào hai giống lúa DT 22 và lúa KDĐB nhờ vi khuẩn Agrobacterium tumefaciens Tạo ra giống lúa mang gen kháng bệnh đạo ôn Chủng vi khuẩn Agrobacterium tumefaciens LBA 4404 – AA3 có chứa plasmid pBI333 - EN4 - RCC2 mang gen chitinase phá hủy thành tế bào của nấm gây bệnh đạo ôn và gen HPT kháng hygromicin Ứng dụng vi khuẩn agrobacterium tumefaciens vào vi c tạo ra giống hoa hồng xanh: Màu sắc của... và gene DFR từ hoa iris cũng được chèn vào để hỗ trợ quá trình tạo sắc tố xanh (các gene này được gắn chèn vào plasmid và chuyển nạp vào gene của hoa bằng vi khuẩn Agrobacterium tumefaciens) Tác hại của vi khuẩn agrobacterium tumefaciens Vi khuẩn A .tumefaciens gây bệnh u sùi ở rễ cây hoa Bệnh xuất hiện ngay ở giai đoạn cây con trong vườn ươm , dặc biệt có nguồn bệnh sẵn trên rễ cây giống nhập khẩu ,... nhờ vi khuẩn agrobacterium tumefacines: Tạo cây trồng mang gen kháng sâu, bệnh bằng phương pháp chuyển gen nhờ vi khuẩn Agrobacterium tumefaciens là phương pháp nhanh nhất it tốn kém và đã đạt được kết quả trên nhiều đối tượng cây trồng như thuốc lá, cà chua, hoa cúc, đậu xanh, lúa và nhiều giống cây trồng khác Ngiên cứu chuyển gen kháng sâu cryIAb vào cây cà chua bằng phương pháp sử dụng vi khuẩn agrobacterium. .. có thể tác hại đến người tiêu dùng Bằng phương pháp sủ dụng vi khuẩn vi khuẩn A .tumefaciens , người ta tiến hành chuyển gen cryIAb vào cây cà chua và với sự biểu hiện của gen chuyển cryIAb sẽ có tác dụng góp phần làm giảm tác hại của sâu hại cà chua Nghiên cứu tạo cây lúa chuyển gen Chitinase kháng bệnh đạo ôn nhờ vi khuẩn Agrobacterium tumefaciens: Bệnh đạo ôn là một trong những bệnh làm thiệt hại...Phương pháp chuyển gen gián tiếp thông qua vi khuẩn A .tumefaciens Kỹ thuật đĩa lá (Leaf disk technique) Để thực hiện vi c chuyển gen nhờ vi khuẩn người ta sử dụng kỹ thuật đĩa lá Tạo các đĩa lá của thực vật cần chuyển gen sau đó xử lý các đĩa lá trong dung dịch vi khuẩn A .tumefaciens mang các plasmid chứa gen mong muốn đã được thiết kế lại trong vài chục phút,... F.solani ; bệnh nặng làm cho lá vàng và cây chết tại nhiều điểm cây mới trồng từ bầu cây giống nhập nội ra ruộng đồng Khi xem xét các vi khuẩn A tumefaciens, chúng cũng giống các loại vi khuẩn thông thườngkhác là đều chứa các plasmid (một dạng DNA vòng nằm ngoài nhiễm sắc thể vi khuẩn, có khả năngnhân bản độc lập).Chắc chắn plasmid này đã chuyển vào tế bào thực vật các vật chất di truyền gây bệnh u chocây,... gen vùng vir qua đó thúc đẩy thêm quá trình chuyển gen Sau giai đoạn này rửa sạch lá bằng dung dịch kháng sinh cefotaime để diệt hết khuẩn Nuôi cấy đĩa lá trên môi trường tái sinh và tạo cây Chọn lọc các cây mang gen chuyển vào qua sự phát hiện các gen bị chỉ thị Phát hiện các gen chuyển vào qua phân tích ADN và đánh giá sự thể hiện của gen qua biotest Quy trình chuyển gen nhờ vi khuẩn A .tumefaciens. .. phân tích ADN và đánh giá sự thể hiện của gen qua biotest Quy trình chuyển gen nhờ vi khuẩn A .tumefaciens 1.Thiết kế vector mang gen 2 Nhân dòng vector nhờ vi khuẩn E.coli 3 Chuyển vector mang gen biến nạp từ E.coli sang A .tumefaciens 4 Lây nhiễm A .tumefaciens chứa gen biến nạp với tế bào, mô thực vật để tiến hành quá trình chuyển gen sang mô, tế bào đích 5 Chọn lọc các mô, tế bào được biến nạp thành... hoa cúc, đậu xanh, lúa và nhiều giống cây trồng khác Ngiên cứu chuyển gen kháng sâu cryIAb vào cây cà chua bằng phương pháp sử dụng vi khuẩn agrobacterium tumefaciens Cà chua là một lọa rau ăn quả được trồng rất phổ biến ở nhiều nước Ở Vi t Nam , vi c phát triển trồng cà chua còn có ý nghĩa quan trọng về mặt luân canh , tăng vụ và tăng năng suất trên đơn vị diện tích, do đó cà chua là loại rau quả . technique) Để thực hiện vi c chuyển gen nhờ vi khuẩn người ta sử dụng kỹ thuật đĩa lá. Tạo các đĩa lá của thực vật cần chuyển gen sau đó xử lý các đĩa lá trong dung dịch vi khuẩn A.tumefaciens. hoá gen vùng vir qua đó thúc đẩy thêm quá trình chuyển gen. Sau giai đoạn này rửa sạch lá bằng dung dịch kháng sinh cefotaime để diệt hết khuẩn. Nuôi cấy đĩa lá trên môi trường tái sinh và tạo. L-M Bản chất tự nhiên của vi khuẩn A.tumefaciens là xâm nhập vào những vị trí tổn thương trên cây hai lá mầm và gây ra khối u tại những vị trí tổn thương đó. Vi khuẩn xâm nhiễm vào chỗ vết