PHƯƠNG PHÁP NHUỘM VI SINH VẬT pdf

PHƯƠNG PHÁP NHUỘM VI SINH VẬT - Quan sát vi sinh vật trên tiêu bản cố định.. Các đặc điểm của tiêu bản cố định: Quan sát tiêu bản cố định là là một phương pháp phổ biến trong nghiên cứu

PHƯƠNG PHÁP NHUỘM VI SINH VẬT - Quan sát vi sinh vật trên tiêu bản cố định Phương pháp nhuộm đơn,

nhuộm Gram:

1 Các đặc điểm của tiêu bản cố định:

Quan sát tiêu bản cố định là là một phương pháp phổ biến trong nghiên cứu

vi sinh vật vì nó có những ưu điểm sau:

- Thao tác tuy phức tạp nhưng tiêu bản có màu sắc đẹp, giữ được lâu

- Không sợ lây nhiễm khi làm việc với vi sinh vật gây bệnh

- Cho phép ta quan sát rõ ràng hình dạng, cấu tạo của

tế bào cũng như dễ

dàng đếm số lượng tế bào

2 Cách làm tiêu bản:

a Làm vết bôi:

Đặt một giọt nước sạch vào giữa phiến kính, sau đó dùng que cấy đã khử

trùng lấy một vòng que cấy vi sinh vật cho vào giọt nước và dàn đều ra Trường hợp

nuôi cấy trên môi trường lỏng thì dùng pipet để lấy dung dịch nghiên cứu Hơ khô

phiến kính đã có vi sinh vật trên ngọn lửa đền cồn hoặc để khô tự nhiên ta được một

vết mờ trên phiến kính gọi là vết bôi

Chú ý:

- Lượng vi sinh vật lấy vừa phải

- Vết bôi tròn, gọn, thật mỏng

- Các tế bào vi sinh vật được dàn đều, dễ quan sát

b Cố định vết bôi:

- Việc cố định vết bôi nhằm các mục đích sau:

+ Giết chết vi sinh vật để chúng dễ bắt màu và an toàn khi tiếp xúc (nếu là vi

sinh vật gây bệnh)

+ Gắn chặt vi sinh vào phiến kính để lúc nhuộm

không bị rửa trôi

- Các cách cố định:

+ Cố định bằng nhiệt: dùng kẹp gỗ để kẹp phiến kính,

hơ mặt dưới của

phiến kính qua lại trên ngọn lửa đèn cồn 2 – 3 lần (chừng vài ba giây), tránh không

để tiêu bản quá nóng

+ Cố định bằng hoá chất:

* Nhúng vết bôi vào cồn 95o khoảng 10 – 15 phút rồi sấy khô

* Ngâm trong axeton 5 phút

* Sấy bằng hơi formol 10 – 15 giây

3 Phương pháp nhuộm đơn:

Nhuộm đơn là dùng 1 loại thuốc nhuộm để nhuộm Các loại thuốc nhuộm

thường dùng để nhuộm đơn là:

- Fuchsin kiềm

- Xanh metylen

- Tím gentian

- Đỏ trung tính

Phương pháp nhuộm: đặt tiêu bản đã cố định lên giá rồi nhỏ vài giọt thuốc

nhuộm phủ kín vết bôi Sau 1 – 2 phút, đổ thuốc

nhuộm đi và rửa nhẹ bằng nước

sạch tới khi nào thấy nước rửa chảy qua vết bôi

không còn màu nữa là được Để tiêu

bản khô dần hoặc thấm khô bằng giấy thấm Khi tiêu bản khô hẳn đem quan sát

dưới kính hiển vi