Báo cáo y học: "NGHIÊN CỨU NHÓM CÁC HỢP chÊt ANTHRANOID TỪ CÂY CHÚT CHÍT " pptx

NGHIÊN CỨU NHÓM CÁC HỢP chÊt ANTHRANOID TỪ CÂY CHÚT CHÍT Trần Văn Quang*; Triệu Duy Điệt* Nguyễn Tuấn Quang*; Vũ Thị Hồng Vân* TÓM TẮT - Về thực vật: xác định Chút chít có tên khoa học Rumex wallichii Meisa, thuộc họ Rau răm (Polygonaceae) - Đã xác định thành phần hoá học rễ Chút chít gồm có acid hữu cơ, đường khử, tanin anthranoid, hàm lượng anthranoid cao - Bằng sắc ký lớp mỏng xác định chất anthranoid, có acid chrysophanic physcion - Định lượng hàm lượng anthranoid toàn phần rễ Chút chít 0,23 ± 0,1 (%) * Từ khố: Cây Chút chít; Anthranoid Study of anthranoid from rumex wallichii meisa Tran Van Quang; Trieu Duy Diet Nguyen Tuan Quang; Vu Thi Hong Van SUMMARY - The scientist name of Chut chit is Rumex wallichii Meisa, Polygonaceace - The major chemical compositions were determinated, including anthranoid, tanin, organic acid The anthranoid content is the hightest of all - By thin layer chromatography, we determinated anthranoids - The content of anthranoid of tree root of Chut Chit is about 2.3 ± 0.10 (%) - We also determinated anthranoids in Chut chit The preliminary determination anthranoids showded that there are acid chrysophanic and physcion * Key words: Rumex wallichii Meisa; Anthranoid ĐẶT VẤN ĐỀ Cây Chút chít hay cịn gọi Dương đề, Lưỡi bò, Ngưu thiệt, loại mọc hoang khắp nơi nước ta, nhiều vùng ven sông, bờ ao, ruộng Theo kinh nghiệm, nhân dân ta thường dùng Chút chít sát vào chỗ hắc lào, dùng rễ sắc lấy nước rửa vết mụn ghẻ dùng uống để chữa táo bón Nhằm mục đích tách riêng hoạt chất để điều trị bệnh da nhuận tràng, tiến hành nghiên cứu đề tài với mục tiêu sau: - Chiết xuất, phân lập nhận dạng hợp chất anthranoid Chút chít - Định lượng anthranoid Chút chít * Học viện Quân y Phản biện khoa học: PGS.TS Nguyễn Văn Minh NGUYấN LIU V PHNG PHP NGHIấN CU Nguyên liệu Cây Chút chít thu hái Cầu Đơ, Thị xã Hà Đông, Hà Tây vào tháng 6-7 năm 2004, sấy khơ 50 600C Hố chất, dung mơi: ether ethylic, chloroform, benzen, alcohol ethylic 900 đạt tiêu chuẩn p.a Phương pháp nghiên cứu 2.1 Xác định dược liệu: Dựa vào tiêu chuẩn Dược điển Việt Nam (DĐVN), tài liệu thuốc vị thuốc Việt Nam, Từ điển thuốc Việt Nam 2.2 Định tính: - Định tính thành phần hố học phản ứng hố học - Định tính nhóm anthraquinon sắc ký lớp mỏng với hệ dung môi: (I) Chlorofom: methanol (4:1) (II) Bezen: ethylacetat ( 4:1) (III) Bezen: EtOH: AcOH (75:24:1) (IV) Bezen: EtOH: AcOH (75:20:5) (V) Bezen: EtOH: AcOH (7:2:1) 2.3 Chiết xuất: Bằng dung dịch ethanol 90o, thu hồi dung môi chuyển sang môi trường acid thu tủa thơ, tinh chế thu anthranoid tồn phần 2.4 Phân lập: Bằng phương pháp sắc ký lớp chế hố Dùng mỏng Silicagel G kích thước 20×20 cm, dày 0,5 cm hoạt hoá 1100C 1h, chạy với hệ dung môi chloroform: methanol (4:1), cạo lấy vết, chiết phân lập thu anthranoid toàn phần 2.5 Nhận dạng chất: - Dùng sắc ký lớp mỏng để xác định độ tinh khiết - Đo phổ tử ngoại máy Cintra 40 (Australia) - Đo điểm chảy tinh thể máy Boetius HMK (Đức) 2.6 Định lượng: Theo phương pháp đo quang Nguyên tắc: dựa vào phản ứng tạo màu đỏ anthranoid với hỗn hợp dung dịch NaOH- amoniac; so sánh với dung dịch chuẩn coban chlorid (CoCl2 1%) Với mật độ quang dung dịch CoCl2 1% mật độ quang dung dịch 0,36mg (1,8dihydroxy anthraquinon ) 100ml hỗn hợp dung dịch NaOH- amoniac kÕt QUẢ NGHIÊN CỨU Về thực vật Dựa vào tiêu chuẩn DĐVN, từ điển thuốc Việt Nam, thuốc vị thuốc Việt Nam, xác định Chút chít thu hái có tên khoa học Rumex wallichii Meisa, thuộc họ Rau răm (Polygonaceae) Thành phần hố học Chiết xuất bột dược liệu (Chút chít) dung mơi ether, cồn sau nước Định tính phản ứng hố học thu kết theo bảng Bảng 1: Thành phần hoá học Chút chít Nhãm chÊt Alkaloid thc thư Mayer kÕt qu¶ - Dragendoff - Bouchardat - Bertrand - Acid picric - bão hoà Acid hữu - Xanh + Bromocresol Đường khử - Felhing A + +B Anthraquinon - KOH 10% +++ Flavonoid - NaOH 10% - - Shinoda - - FeCl3 5% + - DD gelatin + Tanin 2% Saponin - Phản ứng - sinh bọt Phytosterol - Libermann - Kết sắc ký lớp mỏng Bằng hệ dung môi, thuốc thử màu dung dịch amoniac dung dịch KOH 10% ethanol, kiểm tra anthranoid kết thu có vết anthranoid với Rf là: 0,15; 0,30; 0,40; 0,50; 0,60; 0,80 0,88 Như Chút chít có chất anthranoid Kết chiết xuất phân lập anthranoid Sau chiết xuất theo giai đoạn, phân lập phương pháp sắc ký lớp chế hoá Dịch chấm dung dịch 0,1g anthranoid hoà tan 1ml cồn 90o, chấm thành dải cách mép mỏng khoảng cm Sau triển khai hệ dung môi chloroform: methanol (4:1), che mỏng để hở dải bên cạnh phun thuốc màu dung dịch KOH 10% Các vết chạy anthranoid bắt màu đỏ, chúng tơi nhận thấy có vết ký hiệu từ A1 đến A7 từ xuống mỏng sắc ký Tiến hành 10 sắc ký chế hoá cạo lấy phần bột thu Silicagel G, phần bột chứa hợp chất anthranoid khác Chiết phần cồn 90o hết màu vàng thu dịch chiết cồn ký hiệu từ A1 đến A7 Thu hồi cồn máy cất quay 50oC, thu hợp chất có màu vàng Tiến hành kết tinh thấy hợp chất A1 cho tinh thể vảy mỏng màu vàng, hợp chất cịn lại bột vơ định hình màu vàng 5 Nhận dạng chất + Hợp chất A1: - Kiểm tra độ tinh khiết sắc ký lớp mỏng với hệ dung môi khác nhau, kết cho vết nhất, chứng tỏ A1 chất tinh khiết Thuỷ phân dung dịch H2SO4 20% cồn, chiết cloroform, kết tinh ta thu tinh thể vảy mỏng Phần dịch thuỷ phân làm phản ứng với thuốc thử Fheling A, B cho kết âm tính, chứng tỏ khơng có đường, nên A1 aglycon a: Vết chấm chuẩn acid chrysophanic b: Vết chấm hỗn hợp dịch thử dịch chiết c: Vết chấm dịch thử (phần aglycon chất A1) Hình 1: Kết sắc ký so với chuẩn acid chrysophanic Sắc ký vết A1 so với mẫu chuẩn acid chrysophanic song song có giá trị Rf - Đo điểm chảy chất A1: mp = 126oC - Đo phổ tử ngoại cho đỉnh cực đại: lmax = 223nm; 256nm; 287nm 431nm So sánh với tài liệu cho thấy số lý hoá phù hợp với chất chuẩn, sơ nhận dạng A1 acid chrysophanic + Hợp chất A2: - Kiểm tra độ tinh khiết sắc ký lớp mỏng với hệ dung môi khác nhau, kết cho vết nhất, chứng tỏ A1 chất tinh khiết Thuỷ phân dung dịch H2SO4 20% cồn, chiết cloroform, kết tinh thu tinh thể màu vàng sẫm Phần dịch thuỷ phân làm phản ứng với thuốc thử Fheling A, B cho kết dương tính, chứng tỏ A2 tồn dạng glycosid - Sắc ký phần aglycon A2 thu vết, A2 tồn dạng glycosid gồm có aglycon - Phân lập aglycon sắc ký lớp chế hoá thu chất ký hiệu A2a A2b - Tiến hành nhận dạng A2a A2b + A2a: tinh thể hình vảy màu vàng, nhận dạng tương tự chất A1 thu kết A2a acid chrysophanic + A2b: tinh thể hình kim màu vàng Kiểm tra độ tinh khiết sắc ký lớp mỏng với hệ dung môi khác nhau, kết cho vết nhất, chứng tỏ A2b chất tinh khiết Đo điểm chảy chất A2b: mp = 207oC 24,5nm; 265,3nm; 287,1nm 436,9nm Dựa vào tài liệu nhận thấy A2b physcion Tiến hành nhận dạng tương tự với hợp chất lại từ A3 đến A7, kết cuối thu c nh sau: hợp dạng tồn số chất hóa học đà đ-ợc chất aglycon xác định A1 t Acid chrysophanic A2 glycosid Acid chrysophanic physcion A3 glycosid Acid chrysophanic, physcion chất chưa xác định A4 glycosid Acid chrysophanic A5 glycosid Acid chrysophanic A6 glycosid Acid chrysophanic physcion A7 glycosid Acid chrysophanic physcion Kết định lượng anthranoid toàn phần dược liệu Xây dựng đường chuẩn dung dịch coban chlorid (CoCl2) + Coban chlorid chuẩn cân xác hồ tan hỗn hợp dung dịch NaOH- amoniac với nồng độ: 1,0 – 1,5 – 2,0 – 2,5 mcg/ml; đo độ hấp phụ E dung dịch bước sóng 513 nm (ở bước sóng khác bị ảnh hưởng dung môi tá dược) Ở nồng độ tiến hành đo mẫu, lấy giá trị trung bình E, giá trị nằm từ 0,2 - 0,8 phù hợp cho việc áp dụng định luật Lamber- beer Bảng 2: Mật độ quang (E) dung dịch CoCl2 nồng độ C (mcg/ml) C (mcg/ml) 1,0 1,5 2,0 2,5 E E1 0,3041 0,4570 0,6056 0,7593 E2 0,3063 0,4582 0,6079 0,7617 E3 0,3043 0,4566 0,6106 0,7611 E4 0,3052 0,4569 0,6089 0,7607 E5 0,3044 0,4568 0,6095 0,7609 E 0,3050 0,4569 0,6089 0,7608 RSD 0,4887 0,2975 0,1383 0,3111 r 0,9999 Phương trình tuyến tính từ đường cong chuẩn có dạng: E = a.C + b là: E= 0,3038.C + 0,0012 Tỷ lệ phần trăm anthranoid Chút chít tính theo cơng thức: E% anthranoid dược liệu 0,36 x k 0,0011 x = 0,3039 x Mx (100- 100% C) x 10 Kiểm tra mẫu, tính tốn theo cơng thức ta có kết theo bảng sau: Bảng 3: Kết định lượng anthranoid rễ Chút chít Số mẫu Kết 2,2 X SD 2,6 2,3 2,0 2,4 2,3 0.10 (%) Vậy hàm lượng anthranoid toàn phần rễ Chút chít 2,3 ± 0,10 (%) tạp chí y - d-ợc học quân số 1- 2007 kÕt luËn Từ kết thu được, rút số kết luận sau: - Tên khoa học Chút chít thu hái Rumex wallichii Meisa, thuộc họ Rau răm (Polygonaceae) - Thành phần hố học Chút chít, nhiều nhóm anthranoid - Đã chiết xuất phân lập Chút chít có anthranoid, acid chrysophanic physcion, anthranoid chưa xác định - Hàm lượng anthranoid rễ Chút chít 2,3 ± 0,10 (%) TÀI LIỆU THAM KHẢO Võ Văn Chi Từ điển thuốc Việt Nam, NXB Y học, 1997 Bộ môn Dược liệu, Trường Đại học Dược Hà Nội Bài giảng dược liệu, NXB Y học, tập 1- 2005, tr 215230 Dược điển Việt Nam III 26 tạp chí y - d-ợc học quân số 1- 2007 Nguyễn Văn Đàn, Nguyễn Viết Tựu Phương pháp nghiên cứu hoá học thuốc NXB Y học, 1985 Đỗ Tất Lợi Những thuốc vị thuốc Việt Nam NXB Khoa học kỹ thuật, 1994 Pharma indochina II Anthraquinone content of casia surattensis leaves- Tài liệu hội thảo, 20-23-102002, Hà Nội, Việt Nam 27 ... nhận dạng hợp chất anthranoid Chút chít - Định lượng anthranoid Chút chít * Học viện Quân y Phản biện khoa học: PGS.TS Nguyễn Văn Minh NGUYấN LIU V PHNG PHP NGHIấN CU Nguyên liệu C? ?y Chút chít thu... mỏng xác định chất anthranoid, có acid chrysophanic physcion - Định lượng hàm lượng anthranoid toàn phần rễ Chút chít 0,23 ± 0,1 (%) * Từ khố: C? ?y Chút chít; Anthranoid Study of anthranoid from... aglycon xác định A1 tự Acid chrysophanic A2 glycosid Acid chrysophanic physcion A3 glycosid Acid chrysophanic, physcion chất chưa xác định A4 glycosid Acid chrysophanic A5 glycosid Acid chrysophanic