Tài liệu hạn chế xem trước, để xem đầy đủ mời bạn chọn Tải xuống
1
/ 18 trang
THÔNG TIN TÀI LIỆU
Thông tin cơ bản
Định dạng
Số trang
18
Dung lượng
5,14 MB
Nội dung
146 Nhưng vì MRiRi ttt −= ' và MRiRi VVV −= ' Nên ta có: )1( iMRi ktt + = (9.5 e) )1( iMRi kVV + = (9.5 f) Hai công thức 9.5e và 9.5f cho ta biết mối quan hệ giữa thời gian lưu và hệ số dung tích của một chất tan I trong một hệ sắc ký. 9.3.5 Hệ số chọn lọc (Seletivity Factor ) Hệ số dung tích chỉ mới cho ta biết khả năng bị lưu giữ của môt chất ở trên cột tách, nhưng chưa cho ta biết hai chất khi qua cột tách chúng có được tách ra không. Để đặc trưng cho vấn đề này, người ta dùng hệ số chọn lọc α và nó được xác định hoặc theo ' i k (hệ số dung tích) hoặc theo K (hệ số phân bố), tức là: ' ' / B A BA K K r == α hay B A K K = α (9.6a) Trong đó ' A K , ' B K là hệ số dung tích của chất A và chất B; còn K A , K B là hệ số phân bố. Nhưng như trên chúng ta đã biết: )1( ' iMRi ktt += hay M MR i t tt k )( ' − = Nên ta cũng có: )( )( )( )( MBR MAR tt tt − − = α (9.6b) Như vậy từ biểu đồ sắc ký ta xác định được t Ri , t M và xác định được giá trị α của hai chất A và B và nếu: α = 1 : không có sự tách sắc ký α ≠ 1 : có sự tách sắc ký và nếu t A >t B và α khác 1 càng lớn. thì sự tách của hai chất A và B càng rõ rang, tức là hai pic sắc ký tách biệt nhau hoàn toàn. Song cũng từ công thức 1.6a, nếu biết hệ số dung tích ' i k hay hệ số phân bố K của hai chất A và B, thì chúng ta cũng có thể dự đoán được α . 9.3.6 Chiều cao của đĩa, số đĩa Nếu cột sắc ký có độ dài là L, và H là chiều cao của một đĩa lý thuyết của cột tách thì tổng số đĩa lý thuyết N của một cột sắc lý sẽ là: H L N = (9.7a) Nhưng theo lý thuyết đĩa và quy luật Gaoxo chiều cao một đĩa lý thuyết của cột sắc ký là: 147 L H 2 σ = ((9.7b) trong đó σ là độ lệch chuẩn. Mặt khác: R t WL 4 . = σ (9.7c) Do đó 2 2 ).(16 . R t WL H = (9.7d) 2 .16 = W t N R (9.7e) Như vậy từ biểu đồ sắc ký chất tan I, sau khi đo R t và W chúng ta có thể dễ dàng tính được số đĩa lý thuyết N của một cột tách. 9.3.7. Độ phân giải Độ phân giải là đại lượng cho ta biết khả năng tách của 2 pic sắc ký của 2 chất kề nhau như thế nào. Nếu hai chất A và B có pic sắc ký như hình 9.5 thì ta có độ phân giải R S của nó là: )( 2 )2/2/( / BABA BA WW Z WW Z R + ∆ = + ∆ = (9.8a) Hay là: )( )(2 ' )( ' )( / BA BRAR BA WW tt R + − = (9.8b) Trong đó W A , W B là đáy của các pic sắc ký. Một cách gần đúng, ở đây có thể xêm (W A +W B ) ≈ 2W A , do đó ta có giá trị của độ phân giải R là: A BA BA W tt R '' / − = (9.8c) Nhưng như trên chúng ta đã biết theo t R . Do đó ta lại có: N k k R A A BA ⋅ + ⋅ − ⋅= )1( )1( 4 1 ' ' / α α (9.8d) 148 Hay: efBA NR ⋅ − ⋅= α α )1( 4 1 / (9.8e) Từ công thức này, để đạt được độ phân giải BA R / nhất định theo yêu cầu, và các giá trị ' A k , ' B k , ta có thể tính được số đĩa tối thiểu N cho một cột sắc ký, sau đó tìm chiều dài L của cột theo công thức: H L N = . 9.3.8. Nồng độ của chất theo pic sắc ký Nếu chất phân tích I trong mẫu có nồng độ là C 0 , thể tích mẫu được nạp vào cột sắc ký là V si , thì lượng mẫu q i đã được nạp vào là: 0 CVq sii ⋅ = (9.9a) và trong quá trình tách, chất I sẽ được rửa giải ra khỏi cột tách, tại đỉnh của pic sắc ký sẽ có nồng độ là: 2/1 (max) )2.( πσ v i i q C = (9.9b) Đồng thời trong quá trình sắc ký, nó đã bị pha loãng ra một số lần là: Hình 9 .5. Độ phân giải của hai chất tan A và B 149 2/1 )2.( πσ v si l V D = (9.9c) Gía trị l D luôn lớn hơn 1, và nếu l D càng lớn, thì giá trị (max)i C càng giảm. Độ pha loãng l D phụ thuộc vào: - Chiều dài của đường dẫn trong hệ thống HPLC (tức là từ van bơm mẫu đến flowcell của detector). Do đó muốn giảm l D thì đường dẫn phải ngắn. - Tốc độ của pha động. 9.3.9 Quan hệ giữa chiều dày đĩa và tốc độ của pha động (H-u) Chiều cao của đĩa và tốc đọ dich chuyển của đĩa (u) có liên quan chặt chẽ với nhau. Mối quan hệ này được chỉ ra bởi phương trình Van Deemter: uCuCuC u B AH 321 ++++= (9.10a) Trong đó: dpA λ 2 = là hằng số của chất nhồi cột (pha tĩnh), nên A phụ thuộc vào đường kính dp của pha tĩnh. Nó là hợp phần chính quyết định chiều cao của đĩa H; i DB γ 2 = và là hằng số, D i là tốc độ khuếch tán của chất tan trong pha động. Vì thế B là yếu tố ảnh hưởng của pha động đến H, nó là yếu tố thứ 2 đóng góp đáng kể cho H. Các giá trị của C 1 , C 2 , C 3 là như sau: { } sii DdlkkC /.)1/(3/2 2'' 1 += (9.10b) [ ] iii DdkkqC /).()1/()(. 2 2 2'2' 12 += (9.10c) i DdpqC /)( 2 23 = (9.10d) Trong đó: d 1 , q 1 , q 2 là các hằng số; D S là độ khuếch tán chất tan trong pha tĩnh và nó là ảnh hưởng của pha tĩnh đến chiều cao H. Trong thực tế của phân tích sắc ký, C 2 .u và C 3 .u rất nhỏ (dưới 5% của H), vì thế ta có thể viết phương trình Van Deemter như sau: uC u B AH . 1 ++= (9.10e). Và mối quan hệ H – u được biểu diễn như trong hình 9.6 150 Ở đây u 0 là tốc độ tối ưu nhất của hệ sắc ký, và ở tốc độ u 0 này chiều cao H là nhỏ nhất, có nghĩa số đĩa N trong cột sắc ký là lớn nhất. - Nếu u<u 0 chiều cao H tăng khi giảm u - Nếu u>u 0 chiều cao H cũng tăng theo u Do đó trong phân tích chúng ta cố gắng chọn tốc độ chảy F m của pha động qua cột sao cho giá trị u gần bằng u 0 hoặc bằng u 0 là điều lý tưởng nhất để có hiệu quả tách cao nhất. Vì thế muốn tìm được tốc độ pha động phù hợp ta phải xây dựng đường cong H – u, qua các giá trị thực nghiệm ỏ những tốc độ chảy F m khác nhau, rồi tính theo công thức: ' Ri t L u = Và H theo công thức: 2' 2 ).(16 . Ri t WL H = Sau đó từ các cặp giá trị của u và H ta sẽ dựng được đường cong Van Deemter, rồi tìm u từ đường cong này, sau đó suy ra F m . Hình 9.6. Quan hệ giữa H và u (đường cong Van Deemter) 151 Tóm lại một số thông số đặc trưng cơ bản cho quá trình sắc ký chúng ta có thể xem trong bảng 9.2 dưới đây. Bảng 9.2 . Tóm tắt các đại lượng đặc trưng của sắc ký Important Derived Quantities and Relationships Name Calculation of Devired Quantities Relationship to Other Quantities Linear mobile phase velocity M t L u = Volume of mobile phase FtV MM = Capacity factor M MR t tt k )( ' − = M S V KV k = ' Partition coefficient S M V Vk K ' = M S C C K = Selectivity fartor MAR MBR tt tt − − = )( )( α A B A B K K k k == ' ' α Resolution BA ARBR S WW tt R + − = ))()((2 + − = ' ' 1 1 4 B B S k kN R α α Number of plates 2 16 = W t N R 2 ' ' 2 2 1 1 16 + − = B B S k k RN α α Plate height N L H = Retention time 2' 3' 2 2 )( )1( 1 16 )( B B S BR k k u HR t + − = α α 9.4. Detector của sắc ký Detector là một bộ phận rất quan trọng trong hệ thống máy sắc ký. Nó ghi nhận sự tách xảy ra ở trong cột sắc ký. Vì thế, nếu nó ghi nhận không trung thực thì chúng ta sẽ không hiểu đúng được sự tách sắc ký. Mỗi loại detector ghi nhận chất phân tích theo những đặc trưng hóa lý nhất định, ví dụ như: 1. Sự hấp thụ bức xạ UV, VIS 2. Độ huỳnh quang của chất phân tích 152 3. Sự thay đổi dòng điện, điện thế, độ dẫn điện 4. Độ dẫn nhiệt 5. Sự biến thiên chiết suất, v.v… Mặc dù có nhiều lọai khác nhau, nhưng yêu cầu chung của một detector để dùng trong máy sắc ký phải có: Có độ nhạy cao để phát hiên chất phân tích, thường là 10 -8 -10 -15 g/g, và nhạy hơn thì càng tốt. Phải ổn định, phải lặp lại tốt các giá trị đo, bền vững theo thời gian, để đảm bảo phép đo đạt độ chính xác cao. Có vùng tuyến rộng, thường 10 3 đến 10 4 . Vùng làm việc ở khoảng nhiệt độ rộng (khoảng 400 0 C). Yêu cầu này là do GC. Thời gian đáp tuyến phải ngắn, để nhạy cảm kịp thời với các qua trình xảy ra của sự tách trong cột sắc ký. Có tính linh hoạt cao và sử dụng dễ dàng, để chọn các tham số đo cho các yêu cầu phân tích khác nhau. Thích hợp được cho nhiều loại nhóm chất để theo dõi được nhưng hỗn hợp mẫu có thành phần phức tạp. Trong quá trình phát hiện nó không làm ảnh hưởng hay làm sai nồng độ chất phân tích, hay ảnh hưởng cấu trúc của chất. Detector nào thỏa mãn tốt các yêu cầu đó được gọi là lý tưởng. Tất nhiên trong thực tế sự thỏa mãn hoàn toàn cao là khó. Tùy loại mẫu tách mà yêu cầu nào được đặt lên hàng đầu. Có nhiều kỹ thuật sắc ký khác nhau và cũng có nhiều cách phân chia và phân loại, song cách phân loại theo bản chất chính của quá trình sắc ký ở trong cột tách hiện nay được sử dụng nhiều hơn và hợp lý hơn. Theo cách phân loại này chúng ta có 4 loại sắc ký: Sắc ký khí : là loại sắc ký sự tách các chất xảy ra ở trạng thái khí. Sắc ký lỏng : là loại sắc ký sự tách của các chất xảy ra ở thể lỏng. Pha động là chất lỏng. Trong nhóm sắc ký này lại được chia thành: sắc ký hấp phụ pha thường, sắc ký hấp phụ pha ngược, sắc ký trao đổi ion, sắc ký phân bố, sắc ký rây phân tử. Trong nhóm sắc ký lỏng, lại có sắc ký lỏng áp suất thấp (cổ điển) và sắc ký lỏng áp suất cao (HPLC). 153 Sắc ký giấy : là loại sắc ký sự tách xảy ra trên nền, giấy sắc ký nguyên liệu tách (pha tĩnh). Sắc ký lớp mỏng : là loại sắc ký mà sự tách của chất xảy ra trên lớp màng mỏng silica hay oxit nhôm có tính chất sắc ký, nó là pha tĩnh. Trên đây là cơ sở lý thuyết chung của sắc ký, song trong giáo trình này chúng ta chỉ nghiên cứu đi sâu vào hai loại sắc ký đầu tiên. Đó là sắc ký lỏng cao áp (HPLC) và sắc ký khí (GC) . 9.5. PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG 9.5.1. Nguyên tắc của sắc ký lỏng Sắc ký lỏng là quá trình tách một hỗn hợp các chất ở trong cột tách sắc ký ở trạng thái lỏng. Vì thế các chất mẫu phân tích phải hòa tan trong một chất lỏng nào đó, thường là pha động của quá trình sắc ký. Nó thường thích hợp cho cả các chất có nhiệt độ sôi cao cũng như thấp (trừ các chất ở điều kiện thường là khí). Sắc ký lỏng có hai loại: Sắc ký lỏng áp suất thường (cổ điển) Sắc ký lỏng áp suất cao – HPLC. Chúng đều giống nhau ở pha động là chất lỏng, có thể là một dung môi đơn, hay hỗn hợp của 2 hoặc 3 dung môi theo những tit lệ nào đó. Pha tĩnh trong sác ký lỏng có thể là chất rắn hay chất lỏng. Pha tĩnh rắn được nhồi vào cột tạo thành cột chất nhồi có dạng của cột sắc ký. Pha tĩnh lỏng được giữ trong cột sắc ký nhờ chất mang trơ, nó là một màng (lớp) mỏng (1-3 µm bám xung quanh hạt chất mang. Loại pha tĩnh này có dung tích nhỏ hơn loại pha tĩnh rắn xốp toàn phần. Do trạng thái của pha như thế nên có tên: sắc ký lỏng – lỏng (LLC), sắc ký lỏng – rắn (LSC). Trong thực tế loại LSC được sử dụng nhiều hơn. Với sắc ký lỏng, việc thực hiện quá trình tách sắc ký có thể theo hai kĩ thuật sau: Kĩ thuật giữ thành phần và tốc độ pha động là hằng số. Kĩ thuật gradient pha động. Ở đây có thể gradient từng bậc (tăng hoặc giảm), hay gradient liên tục thành phần pha động, để chọn thành phần pha động trong quá trình tách sắc ký để rửa giải các chất. Trong sắc ký lỏng áp suất thường, thời gian tách lâu, tốn nhiều chất nhồi và pha động, hiệu suất tách lại kém, việc tách các chất không gọn như sắc ký lỏng áp suất cao (HPLC). Nó là kĩ thuật tách cổ điển. Do đó ở đây chúng ta chỉ bàn đến sắc ký lỏng áp suất cao. 154 Trong HPLC, mẫu được bơm vào cột nhừ một van bơm mẫu, sau đó nhờ một bơm cao áp bơm pha động chảy qua cột với một tốc độ xác định từ đầu đến cuối cột tách. Qúa trình tách sắc ký của một hỗn hợp gồm hai chất A và B có thể được minh họa như hình 1.1. Lúc đầu 2 chất A và B cùng trong một vùng trên cột, nhưng theo thời gian chạy sắc ký hai chất dần đàn tách ra khỏi nhau, để đến cuối cột tách 2 chất tách thành hai vùng riêng biệt và trên sắc đồ sắc ký chúng ta sẽ thu được hai pic sắc ký riêng biệt. 9.5.2. Máy sắc ký lỏng cao áp Máy sắc ký lỏng cao áp là một hệ thống trang bị để tực hiện quá trình sắc ký. Nó bao gồm các bộ phận cơ bản sau đây: 1. Van bơm mẫu (sample injection valve): Van bơm mẫu có chứa vòng mẫu với thể tích nhất định, ví dụ 20, 50, hay 100 µl, dùng để bơm mẫu phân tích vào cột Hình 9.7. Ví dụ về sự tách sắc ký hai chất A và B. 155 tách. Có nhiều loại van, nhưng loại van 6 chiều được sử dụng nhiều hơn, vì nó thuận lợi hơn các loại khác. 2. Cột sắc ký: Cột sắc ký HPLC làm bằng thép hay thủy tinh thạch anh có vỏ thép để chịu áp suất cao. Cột HPLC thường có kích thước bình thường là 250 × 4mm; 150 × 4mm; 125 × 4mm; hay 250 × 1mm; 150 × 1mm, hoặc 50 × 1mm hay 50 × 2mm. Các loại cột có kích thước nhỏ hơn 5 cm (chiều dài) và 1 mm đường kính gọi là microbore. Tất nhiên chiều dài của cột phụ thuộc vào cỡ hạt chủa chất nhồi. Hạt càng to thì cột phải dài, để đảm bảo đủ số đĩa lý thuyết tối thiểu cho một cột tách sắc ký. Chất nhồi đường kính hạt 5 µm, cần cột dài 125-150 mm là đủ, nhưng nếu chất nhồi đường kính 7 – 10 mm, phải dùng cột dài 250 – 300 mm. Chất nhồi đường kính 2-3 µm, chỉ cần cột dài 3-5 cm. Cột tách là một bộ phận kết quả tách của một hỗn hợp chất mẫu là tốt hay xấu, và với mỗi loại chất mẫu phải chọn một loại cột tách riêng cho nó. Đó là loại chất nhồi – pha tĩnh (stationary phase). 3. Bơm cao áp Là dụng cụ để bơm pha động qua cột tách với tốc độ xác định, phục vụ quá trình rửa giải các chất ra khỏi cột sắc ký. Nó phải có độ ổn định và lặp lại cao của tốc độ bơm. Có bơm 1 kênh, có bơm 2 kênh song song hoặc 2 kênh nối tiếp, và làm việc trong vùng áp suất từ 0 – 400 bar. Nhưng bơm 2 kênh cho tốc độ ổn định hơn. 4. Bộ gradient pha động Bộ này chỉ cần khi thực hiện kĩ thuật tách với gradient pha động. Nó được đặt trước bơm cao áp, để chuẩn bị gradient pha đọng với thành phần phụ hợp theo yêu cầu để cho bơm cao áp bơm vào cột tách. 5. Detector Là bộ phận để thu nhận vàn phát hiện tín hiệu của chất phân tích, theo một tính chất nào đó của nó, ví dụ như: Sự hấp thụ quang phân tử vùng UV-VIS Sự hấp thụ hay phát xạ của nguyên tử Tính chất phát huỳnh quang của phân tử hay nguyên tử Độ dẫn điện của các chất Sự biến thiên của dòng điện giữa 2 điện cực Độ dẫn điện của chất Sự biến thiên chiết suất của dung dịch mẫu. [...]... v i tB thì ta nói ch t chưa bi t ó là ch t B 9. 5.8 Phân tích nh lư ng Nguyên t c c a phân tích nh lư ng trong HPLC là d a trên cơ s trong m t ph m vi nh t nh c a ch t phân tích thì chi u cao hay di n tích c a pic s c ký là có quan h t l thu n v i nông c a nó trong m u theo bi u th c: H = k.C Hay là (9. 9a) S = k.C (9. 9b) Trong ó H là chi u cao và S là di n tích c a pic s c ký c a ch t Trong hai bi u... nguyên t c c a phương pháp phân tích nh theo kĩ thu t HPLC l : Chu n b m t dãy m u chu n cùng v i các m u phân tích trong cùng m t i u ki n 161 Ch n m t quy trình phù h p ch y s c ký dãy m u chu n và các m u phân tích Th s c thu ư c, xác nh giá tr H (hay S) c a các ch t phân tích trong các m u và các m u phân tích tương ng Ví d như trong b ng sau: Dãy các chu n M u phân tích M u C1 C2 C3 C4 C5 CX1... n 1 59 phát hi n ch t phân tích Trong s c ký h p ph pha thư ng (NP-HPLC), vì pha tĩnh là ch t phân c c, nên pha ng là nh ng ch t không phân c c hay ít phân c c Ví d n-hexan, nheptan, benzene, tetrachlocacbon, chloroform, …Nói chúng ó là các dung môi h u cơ Các dung môi này thư ng k nư c H s c ký này thư ng ư c s d ng tách và phân tích các h n h p hi rocacbon, các ch t h u cơ không phân c c hay ít phân. .. nguyên t c c a phân tích nh tính theo HPLC l : Trong i u ki n s c ký ã ch n, dùng các ch t chu n xác nh th i gian lưu c a các ch t phân tích theo s c bơm m u riêng c a tưng ch t như th ta l p ư c th i gian lưu c a m i ch t, ví d như i v i các ch t A, B, C, D,…ta có các th i gian lưu tương ng là tA, tB, tC, tD, … Do ó n khi phân tích m u chưa bi t, ta cũng bơm m u và ghi s c c a m u phân tích và n u có... cao ( nh y và ch n l c cao) phát hi n ch t phân tích v i 4 Lư ng m u bơm vào c t tách 5 Nhi t 6 Ch c a c t tách trong quá trình s c ký gradient có c n không?, … Th c hi n nghiên c u ch n ư c các i u ki n nói trên phù h p, t c là công vi c t i ưu các i u ki n s c ký Nghĩa là xây d ng m t quy trình tách s c ký các ch t trong m t h n hơp m u phân tích 9. 5.7 Phân tích nh tính trong HPLC Chúng ta bi t r ng... i s c ký c trang b t ti n hơn i n, thì kĩ thu t HPLC c n có các Các lĩnh v c ã và ang s d ng HPLC nhi u l : Công nghi p hóa h c, hóa d u Công nghi p th c ph m, nông nghi p, thu c tr sâu Y h c, lâm sàng Hóa sinh và hóa h p ch t t nhiên Công ngh dư c ph m, … 9. 6 PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH S C KÝ KHÍ 9. 6 1 Nguyên t c S c ký khí là quá trình tách các ch t trong c t tách tr ng thái khí, ch t mang m u là ch t... các ư ng chu n này Và các giá tr Hx hay Sx chúng ta d dàng phát hi n ư c n ng c a ch t phân tích 9. 5 .9 Vài ng d ng c a HPLC Hi n nay s c ký l ng cao áp ư c áp d ng r t r ng rãi trong nhi u lĩnh v c khác nhau Vì nó có nhi u ưu vi t hơn s c ký c i n, ví d nh : nh y cao Kh năng tách ư c nhi u lo i h n h p ch t T c phân tích l n Nhanh chóng cho k t qu T n ít m u Song v m t trang b so v i s c ký c trang b... vòng, h p ch t t nhiên, các phenol, các amin, amino-axit, …Ph m vi s d ng c a RP-HPLC phong phú và a d ng hơn nhi u lo i NP-HPLC 9. 5.5 S lưu gi trong c t Các ch t phân tích ư c lưu gi trong c t tách bao lâu là ư c quy t các y u t : nh b i B n ch t c a ch t phân tích, như c u trúc phân t , các nhóm th và v trí c a chúng, … B n ch t và các kích thư c l x p, … c trưng c a pha tĩnh trong c t tách, như c h t,... ư ng kính 0,25-1 mm 9. 6.2.4 H lò nung c t tách và h i n t i u khi n lò nung: có nhi m v làm nóng c t ho c theo ch nhi t không i hay ch gradient nhi t c a s tách s c ký yêu c u 9. 6.2.5 Detector: là n ph n phát hi n, nh n bi t các ch t phân tích d a theo nh ng tính ch t v t lý hóa h c nào ó, và ng v i m i m t tính ch t c a s phát hi n, ngư i ta có m t lo i detector nh t nh, ví d : 163 ... b n: th c hi n quá trình s c ký Nó 9. 6.2.1 H th ng cung c p khí cho quá trình s c ký, g m các regulator, flow meter, gas valves H th ng này ph i c p ư c dòng khí n nh c n thi t theo yêu c u c a quy trình phân tích s c ký 9. 6.2.2 B xylanh bơm m u vào c t (sample Valve), có th bơm ư c m t lư ng m u chính xác vào c t trong vùng th tích t 5-100 l, và l p l i ư c t t 9. 6.2.3 C t tách s c ký ây là ph n quan . mẫu phân tích. Thừ sắc đồ thu được, xác định giá trị H (hay S) của các chất phân tích ở trong các mẫu và các mẫu phân tích tương ứng. Ví dụ như trong bảng sau: Dãy các chuẩn Mẫu phân tích. c : )1( iMRi ktt + = (9. 5 e) )1( iMRi kVV + = (9. 5 f) Hai công thức 9. 5e và 9. 5f cho ta biết mối quan hệ giữa thời gian lưu và hệ số dung tích của một chất tan I trong một hệ sắc ký. 9. 3.5. loại NP-HPLC. 9. 5.5. Sự lưu giữ trong cột Các chất phân tích được lưu giữ trong cột tách bao lâu là được quyết định bởi các yếu t : Bản chất của chất phân tích, như cấu trúc phân tử, các nhóm