Nghiên cứu đặc điểm thực vật, thành phần hóa học và một số tác dụng sinh học của cây gạo

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƢỜNG ĐẠI HỌC DƢỢC HÀ NỘI HỒ THỊ THANH HUYỀN (Bombax malabaricum DC., LUẬN ÁN TIẾN SĨ DƢỢC HỌC HÀ NỘI, NĂM 2014 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƢỜNG ĐẠI HỌC DƢỢC HÀ NỘI HỒ THỊ THANH HUYỀN (Bombax malabaricum DC. ) LUẬN ÁN TIẾN SĨ DƢỢC HỌC CHUYÊN NGÀNH: Dƣợc học cổ truyền MÃ SỐ: 62.72.04.06 Ngƣời hƣớng dẫn khoa học: PGS.TS. Nguyễn Thái An PGS.TS. Thái Nguyễn Hùng Thu HÀ NỘI, NĂM 2014 ii LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan Luận án này là công trình nghiên cứu của riêng tôi dưới sự hướng dẫn của PGS. TS. Nguyễn Thái An và PGS. TS. Thái Nguyễn Hùng Thu. Các kết quả trình bày trong luận án là trung thực và chưa từng được công bố trong bất kỳ công trình nào khác. Tác giả luận án Hồ Thị Thanh Huyền iii LỜI CẢM ƠN Trong quá trình thực hiện luận án, tôi đã nhận được sự ủng hộ và tạo điều kiện của Đảng ủy, Ban giám hiệu Trường Đại học Dược Hà Nội và Bộ môn Dược liệu nơi tôi học tập, nghiên cứu. Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới PGS.TS. Nguyễn Thái An và PGS.TS. Thái Nguyễn Hùng Thu, là những người Thầy đã hướng dẫn và truyền đạt nhiều kinh nghiệm quý báu trong nghiên cứu khoa học cho tôi. Tôi xin chân thành cảm ơn GS.TS Phạm Thanh Kỳ, PGS. TS. Nguyễn Trọng Thông, PGS. TS Phan Văn Kiệm, PGS. TS Trần Huy Thái, PGS. TS Nguyễn Khắc Khôi, TS. Phạm Thị Vân Anh đã góp ý cho tôi trong quá trình nghiên cứu và hoàn thiện luận án. Trong quá trình thực hiện luận án, tôi đã nhận được sự hợp tác nghiên cứu của các cơ quan: Viện Sinh thái và Tài nguyên sinh vật, Viện Hóa học các hợp chất thiên nhiên, Viện Hàn lâm Khoa học và Công nghệ Việt Nam, Bộ môn Dược lý trường Đại học Y Hà Nội, Trung tâm Kiểm nghiệm thuốc. Đồng thời, tôi cũng nhận được sự đóng góp quý báu của các Thầy Cô giáo, các nhà khoa học thuộc nhiều lĩnh vực. Nhân dịp này tôi cũng xin trân trọng cảm ơn sự giúp đỡ nhiệt tình của các thầy cô, các anh chị em đồng nghiệp tại bộ môn Dược liệu, bộ môn Dược học cổ truyền và bộ môn Thực vật, các phòng ban trong trường đã luôn tạo điều kiện tốt nhất để tôi hoàn thành luận án.Cảm ơn các học trò đã luôn sát cánh cùng tôi trong suốt quá trình nghiên cứu vừa qua. Lời sau cùng, xin được bày tỏ lòng biết ơn chân thành tới những người bạn, người thân trong gia đình và nhất là bố, mẹ, đã luôn kịp thời động viên và tạo mọi điều kiện thuận lợi nhất để tôi hoàn thành luận án. Xin cảm ơn người chồng thân yêu đã luôn giúp đỡ, chia sẻ với tôi trong những năm tháng qua. Xin trân trọng cảm ơn tất cả sự giúp đỡ quý báu này. Hồ Thị Thanh Huyền iv MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN ii LỜI CẢM ƠN iii DANH MỤC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT vii x Ẽ xii 1 CHƢƠNG 1 TỔNG QUAN 3 1.1. ĐẶC ĐIỂM THỰC VẬT 3 1.1.1. Họ Gạo (Bombacaceae L.) 3 1.1.2. Chi Bombax L. 4 1.1.3. Bombax malabaricum DC. (Bombax ceiba L.) 8 1.2. THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA MỘT SỐ LOÀI THUỘC CHI Bombax L. 13 1.2.1. Loài Bombax anceps Pierre. 13 1.2.2. Loài Bombax costatum Pellegr & Vuillet 16 1.2.3. Loài Bombax malabaricum DC. 16 1.3. TÁC DỤNG SINH HỌC VÀ CÔNG DỤNG 28 1.3.1. Độc tính 28 1.3.2. Tác dụng sinh học 29 1.3.3. Công dụng 35 CHƢƠNG 2 NGUYÊN VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 40 2.1. NGUYÊN VẬT LIỆU NGHIÊN CỨU 40 2.1.1. Nguyên liệu nghiên cứu 40 2.1.2. Động vật thí nghiệm 41 2.1.3. Hóa chất và thiết bị 41 2.1.4. Địa điểm nghiên cứu 43 2.2. PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 43 v 2.2.1. Nghiên cứu về thực vật 43 2.2.2. Nghiên cứu thành phần hóa học 43 2.2.3. Phƣơng pháp đánh giá độc tính cấp và tác dụng sinh học 44 2.2.4. Phƣơng pháp xử lý số liệu 51 CHƢƠNG 3 KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 53 3.1. NGHIÊN CỨU VỀ THỰC VẬT 53 3.1.1. Mô tả đặc điểm hình thái thực vật và giám định tên khoa học cây Gạo 53 3.1.2. Đặc điểm vi học và cấu tạo giải phẫu 55 3.2. NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HÓA HỌC 58 3.2.1. Định tính các nhóm chất thƣờng có trong dƣợc liệu 58 3.2.2. Chiết xuất và phân lập các hợp chất từ lá và vỏ thân cây Gạo 60 3.2.3. Nhận dạng các hợp chất phân lập từ các bộ phận của cây Gạo 64 3.2.4. Xây dựng phƣơng pháp xác định hàm lƣợng một số hợp chất có trong cây Gạo 94 3.3. ĐÁNH GIÁ ĐỘC TÍNH CẤP VÀ THỬ TÁC DỤNG SINH HỌC 104 3.3.1. Đánh giá độc tính cấp của cao nƣớc vỏ thân, lá và hoa cây Gạo 104 3.3.2. Tác dụng giảm đau 107 3.3.3. Tác dụng chống viêm cấp 109 3.3.4. Tác dụng chống viêm mạn 112 3.3.5. Tác dụng cầm máu qua đánh giá thời gian chảy máu, đông máu 113 3.3.6. Tác dụng bảo vệ gan và chống oxy hóa 115 CHƢƠNG 4 BÀN LUẬN 121 4.1. VỀ THỰC VẬT 121 4.2. VỀ THÀNH PHẦN HÓA HỌC 123 4.2.1. Về kết quả định tính 124 4.2.2. Về kết quả phân lập các hợp chất 124 4.2.3. Về kết quả xác định hàm lƣợng một số hợp chất 129 vi 4.3. VỀ ĐỘC TÍNH VÀ TÁC DỤNG SINH HỌC 132 4.3.1. Độc tính 133 4.3.3. Về tác dụng chống viêm 136 4.3.4. Về tác dụng cầm máu 140 4.3.5. Về tác dụng bảo vệ gan và chống oxy hóa 142 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 146 CÁC CÔNG TRÌNH ĐÃ CÔNG BỐ LIÊN QUAN ĐẾN LUẬN ÁN TIẾN SĨ DƢỢC HỌC TÀI LIỆU THAM KHẢO DANH MỤC CÁC PHỤ LỤC CỦA LUẬN ÁN vii DANH MỤC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT Độ dịch chuyển hóa học 1 H-NMR Proton nuclear magnetic resonance – Phổ cộng hƣởng từ proton 13 C-NMR Carbon (13) nuclear magnetic resonance – Phổ cộng hƣởng từ hạt nhân 13 C AGC Apigenin 7-O- -D-glucuronopyranosid ALAT Alanin aminotransfera APG Angiosperm Phylogeny Group As Ánh sáng AST Ánh sáng thƣờng ASAT Aspartat aminotransfera BBL Cắn toàn phần chiết xuất từ lá cây Gạo BBL-H Cắn phân đoạn n-hexan chiết xuất từ lá cây Gạo BBL-C Cắn phân đoạn cloroform chiết xuất từ lá cây Gạo BBL-E Cắn phân đoạn ethyl acetat chiết xuất từ lá cây Gạo BBL-W Cắn phân đoạn nƣớc chiết xuất từ lá cây Gạo BBV Cắn toàn phần chiết xuất từ vỏ thân cây Gạo BBV-H Cắn phân đoạn n-hexan chiết xuất từ vỏ thân cây Gạo BBV-C Cắn phân đoạn cloroform chiết xuất từ vỏ thân cây Gạo BBV-E (VGE) Cắn phân đoạn ethyl acetat chiết xuất từ vỏ thân cây Gạo BBV-W Cắn phân đoạn nƣớc chiết xuất từ vỏ thân cây Gạo B. Bombax BHA Butyl hydroxylanisol CTCP Công ty cổ phần CTHH Công thức hóa học CTPT Công thức phân tử viii CTSK Chƣơng trình sắc ký d Doublet – đỉnh đôi dd Doublet of doublet dl Dƣợc liệu DĐVN Dƣợc điển Việt Nam DEPT Distortionless Enhancement by Polarization Transfer DMSO Dimethyl sulfosid DPPH 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl ESI-MS Electron Spray Ionization Mass Spectrometry EtOAc Ethyl acetat GSH Glutathion Glc Glucose HCNKST Hồng cầu nhiễm kí sinh trùng HG Hoa cây Gạo HMBC Heteronuclear Multiple Bond Correlation HSQC Heteronuclear Single Quantum Coherence IC 50 Nồng độ ức chế 50% (Haft maximal inhibitory concentration) IR Phổ hồng ngoại (Infrared Spectroscopy) LD 50 Liều gây chết 50% (Lethal Dose, 50%) LG Lá cây Gạo LOD: Giới hạn phát hiện (Limit of Detection) LOQ: Giới hạn định lƣợng (Limit of Qualification) m Multiplet m/z Tỷ lệ số khối/điện tích ion MDA Malonyl dialdehyd Mp Điểm nóng chảy MS Mass spectrometry – Phổ khối ix NAPQI N-acetyl parabenzoquinon-imin NMR Nuclear Magnetic Resonance p. page PAR Paracetamol PG Prostaglandin s Singlet- đỉnh đơn SKC Sắc ký cột SKC-RP Sắc ký cột pha đảo SKLM Sắc ký lớp mỏng s.c Tiêm dƣới da t Triplet- đỉnh ba TLTK Tài liệu tham khảo TT Thuốc thử TW Trung ƣơng UV254nm UV365nm Ultra violet– Ánh sáng tử ngoại Ultra violet - Ánh sáng tử ngoại (bƣớc 365nm) VG Vỏ thân cây Gạo WHO World Health Organization -Tổ chức Y tế thế giới [...]... sử dụng cây Gạo trong dân gian, hƣớng đến việc tìm kiếm các hợp chất có hoạt tính sinh học, xây dựng phƣơng pháp phân tích các hợp chất có trong dƣợc liệu với bƣớc đầu thực hiện trên cây Gạo và góp phần nâng cao giá trị tiềm năng của cây Gạo trong kho tàng cây thuốc Việt Nam, luận án Nghiên cứu đặc điểm thực vật, thành phần hóa học và một số tác dụng sinh học của cây Gạo Bombax malabaricum DC., họ Gạo. .. những mục tiêu sau: 1 Nghiên cứu đặc điểm thực vật loài Bombax malabaricum DC thu hái tại Hà Nội 2 Nghiên cứu thành phần hóa học mẫu nghiên cứu 3 Đánh giá độc tính cấp và thăm dò một số tác dụng sinh học của mẫu nghiên cứu Để đạt đƣợc mục tiêu đề ra, luận án đƣợc tiến hành với các nội dung sau: 1  Về thực vật: - Mô tả đặc điểm hình thái và giám định tên khoa học loài nghiên cứu thu hái tại Hƣơng Sơn,... Cấu trúc hóa học và một số tƣơng tác HMBC của BBV3 71 Hình 3.17 Ảnh chụp tinh thể BBV4 (dƣới KHV vật kính 10) 72 xii Hình 3.18 Cấu trúc hóa học của BBV4 73 Hình 3.19 Cấu trúc hóa học và một số tƣơng tác HMBC của BBV5 75 Hình 3.20 Một số mảnh phân tử chính trên phổ khối của BBV5 75 Ảnh chụp tinh thể 76 Hình 3.22 Cấu trúc hóa học của BBV6 77 Hình 3.23 Một số tƣơng tác HMBC... Bắc Cây Gạo cao tới 15m, vào mùa xuân, lá Gạo rụng hết, hoa bắt đầu nở đỏ tƣơi khiến cả cây bừng hoa, vỏ thân và rễ đều có thể dùng làm thuốc chữa bệnh Tuy nhiên, những nghiên cứu về loài cây này còn rất ít, đặc biệt chƣa tìm thấy nhiều những nghiên cứu về thành phần hóa học của cây Gạo ở Việt Nam Do vậy việc tiến hành nghiên cứu cây Gạo Bombax malabaricum DC., họ Gạo Bombacaceae, mang tính thời sự và. .. giải phẫu, mô tả đặc điểm cấu tạo của lá, hoa, vỏ thân và đặc điểm vi học bột lá, hoa, vỏ thân mẫu nghiên cứu  Về hóa học: - Định tính sự có mặt của các hợp chất thƣờng gặp trong dƣợc liệu ở hoa, lá và vỏ thân mẫu nghiên cứu - Chiết xuất, phân lập và nhận dạng một số hợp chất tinh khiết từ lá và vỏ thân mẫu nghiên cứu - Xây dựng phƣơng pháp phân tích để có thể xác định hàm lƣợng một số hợp chất phân... lập đƣợc  Về tác dụng sinh học: - Đánh giá độc tính cấp của cao nƣớc vỏ thân, lá và hoa mẫu nghiên cứu - Thử tác dụng giảm đau, chống viêm, cầm máu và tác dụng bảo vệ gan của cao nƣớc các bộ phận của loài nghiên cứu và cắn phân đoạn ethyl acetat chiết xuất từ vỏ thân 2 CHƢƠNG 1 TỔNG QUAN 1.1 ĐẶC ĐIỂM THỰC VẬT 1.1.1 Họ Gạo (Bombacaceae L.) 1.1.1.1 Vị trí, phân loại  Về phân loại: Họ Gạo là họ tƣơng... 14 Bảng 1.2 CTHH của một số hợp chất có trong hoa của cây Gạo 19 Bảng 1.3 CTHH của một số hợp chất có trong rễ của cây Gạo 22 Bảng 1.4 Bảng tóm tắt thành phần hóa học của loài Bombax malabaricum DC 25 Bảng 3.1 Kết quả định tính các nhóm chất hữu cơ trong lá, hoa và vỏ thân cây Gạo 59 Bảng 3.2 Kết quả xác định độ ẩm bột vỏ thân, lá, hoa cây Gạo 60 65... chiết xuất từ vỏ thân cây Gạo lên số cơn quặn đau của chuột nhắt trắng 107 x Bảng 3.21 Tác dụng của cao nƣớc và cắn phân đoạn ethyl acetat chiết xuất từ vỏ thân cây Gạo lên thời gian phản ứng với nhiệt của chuột 108 Bảng 3.22 Tác dụng của cao nƣớc và cắn phân đoạn ethyl acetat chiết xuất từ vỏ thân cây Gạo trên mô hình gây phù chân chuột 109 Bảng 3.23 Tác dụng của cao nƣớc và cắn phân đoạn ethyl... 96 Hình 3.38 Sắc ký đồ của hỗn hợp 7 hợp chất phân lập từ lá cây Gạo 97 Hình 3.39 Sắc ký đồ của mẫu thử chuẩn bị từ lá cây Gạo 97 Hình 3.40 Sắc ký đồ của một số hợp chất phân lập đƣợc từ vỏ thân cây Gạo 97 Hình 3.41 Sắc ký đồ của một số hợp chất phân lập đƣợc từ lá cây Gạo 98 Hình 3.42 So sánh phổ khối lƣợng tƣơng ứng với pic một số hợp chất trên sắc ký đồ (trái) và khi đo để nhận dạng cấu... 56 Hình 3.6 Đặc điểm bột hoa cây Gạo 57 Hình 3.8 Đặc điểm bột vỏ thân cây Gạo 58 Hình 3.9 Sơ đồ phân lập các hợp chất từ vỏ thân cây Gạo 61 Hình 3.10 Sơ đồ phân lập các hợp chất từ lá cây Gạo 63 64 Hình 3.12 Cấu trúc hóa học của BBV1 (lupeol) 66 ụ 67 Hình 3.14 Cấu trúc hóa học của BBV2 (friedelin) 69 Hình 3.15 Ảnh chụp kết tinh của BBV3 . chống viêm mạn 11 2 3.3.5. Tác dụng cầm máu qua đánh giá thời gian chảy máu, đông máu 11 3 3.3.6. Tác dụng bảo vệ gan và chống oxy hóa 11 5 CHƢƠNG 4 BÀN LUẬN 12 1 4 .1. VỀ THỰC VẬT 12 1 4.2. VỀ THÀNH. vii x Ẽ xii 1 CHƢƠNG 1 TỔNG QUAN 3 1. 1. ĐẶC ĐIỂM THỰC VẬT 3 1. 1 .1. Họ Gạo (Bombacaceae L.) 3 1. 1.2. Chi Bombax L. 4 1. 1.3. Bombax malabaricum DC. (Bombax ceiba L.) 8 1. 2. THÀNH PHẦN. Bombax L. 13 1. 2 .1. Loài Bombax anceps Pierre. 13 1. 2.2. Loài Bombax costatum Pellegr & Vuillet 16 1. 2.3. Loài Bombax malabaricum DC. 16 1. 3. TÁC DỤNG SINH HỌC VÀ CÔNG DỤNG 28 1. 3 .1. Độc