Nghiên cứu Đặc Điểm hình thái giải phẫu và hoạt tính kháng khuẩn của một số loài thuộc họ cà phê rubiaceae Ở huyện tân hưng tỉnh long an

TRUONG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM THÀNH PHÓ HỎ CHÍ MINH Nguyễn Thị Thanh Tháo NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM HÌNH THÁI, GIẢI PHẪU VÀ HOẠT TÍNH KHÁNG KHUẢN CỦA MỘT SÓ LOÀI THUỘC HỌ CÀ PHÊ RUBIACEAE Ở HUYỆN TÂ

BO GIAO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRUONG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM THÀNH PHÓ HỎ CHÍ MINH

Nguyễn Thị Thanh Tháo

NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM HÌNH THÁI, GIẢI PHẪU VÀ HOẠT TÍNH KHÁNG KHUẢN CỦA MỘT SÓ LOÀI THUỘC HỌ CÀ PHÊ

(RUBIACEAE) Ở HUYỆN TÂN HƯNG, TINH LONG AN

LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC

Thanh phé Hé Chí Minh - 2023

BO GIAO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRUONG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM THÀNH PHÓ HỎ CHÍ MINH

Nguyễn Thị Thanh Thảo

NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỀM HÌNH THÁI,

GIẢI PHẪU VÀ HOẠT TÍNH KHÁNG KHUẢN CỦA MỘT SÓ LOÀI THUỘC HỌ CÀ PHÊ

(RUBIACEAE) Ở HUYỆN TÂN HƯNG,

LỜI CAM ĐOAN

Tôi cam đoan luận vin nà là công rnh nghiên cứu của riêng tôi đi sự hướng cần Khoa học của TS Phạm Viăn Ngọt và TS Đăng Thị Ngọc Thanh Kết quủ trình bày trong lưện văn là trung thực và chưa được cúc tác giả công

bổ trong bắt kì công trình nào

Cúc trích dẫn về bảng biễu, kết quả nghiên cứu của những tác giả thác; tà liệu tham khảo rong luận văn đầu có nguồn gốc rõ rằng và theo ding quy định

Thành phổ Hà Chỉ Minh, ngày 15 thẳng 11 năm 2023 TÁC GIÁ LUẬN VĂN

Nguyễn Thị Thanh Thio

Tôi in chân thành căm ơn sâu sắc TS Phạm Văn Ngọt và TS Đặng Thị Ngọc Thanh đã luôn quan tâm, khích lệ, động viên tôi trong suốt quả trình học tập và thực Tiện nghiên cửu, cũng như chia sẻ kính nghiêm và các tải liệu bồ ch Nhờ sự hướng năng bổ ich căng như hoàn thành được đề tài nghiên cửu này Tot xin chin thành cảm ơn Trường, Phòng Sau Đại học, các thấy cô trong Khoa Sinh học - Trường Đại học Sư phạm Tp Hô Chỉ Minh đã giúp đồ, chỉa sẻ những phương pháp nghiên cửu và hỗ tự cúc thế bị, dụng cụ cu tht tạo điu kiện thuận lợi cho chúng tôi hoàn thành luận văn này

Tôi cũng xin gửi lôi cảm ơm cô Nguyễn Thị Thu Ty, thầy Nguyễn Văn Duy, ede bạn nhôm nghiên cứu khoa học trường Đại học s phạm Thành phố HỖ Chỉ Minh và trường Đại học Sài Gòn đã giúp đỡ tận tình về việc thực địa thu mẫu, hỗ trợ thực nghiện trong phòng thí nghiệm trong quả trình nghiên cửu hoàn thành luận vẫn này: Tôi xin chân thành cảm ơn Ban quản lí Khu Bảo tổn đắt ngập nước Lắng Sen, tinh Long An đã tận tình hưởng dẫn các đu điễn và ụo mọi điều kiện thuận lợi cho tôi thực hiện đề tài nghiên cứu này

ua a

bà đã giúp đỡ tôi trong suất thời gian thực hiện để tài nghiên cửu này

"Minh, ngày 15 tháng I1 năm 2023

LỠI CAM ĐOAN

“Chương I TONG QUAN

1.1 ĐẶC ĐIÊM TỰ NHIÊN CỦA HUYỆN TAN HUNG LLL Vị trí địa

1.1.2 Điễu kiện tự nhiên

1.2 TINH HINH NGHIÊN CỨU TRONG VÀ NGOÀI NƯỚC THUỘC LĨNH 'VỰC ĐÈ TÀI

1.2.1 Trên thể giới

1.2.2 Tại Việt Nam

1.3 THONG TIN VE HO CA PHE (Rubiaceae)

“Chương 2 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỬU

3.1 THỜI GIAN VA DIA DIEM NGHIÊN CỨU

211.1 Thời gian nghiên cửa

2.1.2 Địa điền nghiên cứu

3.2 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU.

-3.22 Phương pháp nghiền cứu tài liệu

2.2.3 Phương pháp nghiên cứu ngoài thực địa -3.2.4 Phương pháp nghiền cửu trong phòng thí nghiêm -32.3 Định loại các mẫu thực vật

2.2.6 Mi ti cic mau the vit

-3.27 Phương pháp khảo sắt hoạt tinh King Mhuẩn

`"

ong 3 KET QUA NGHIEN CUU

BAC DIEM MOI TRUONG SONG CUA THYC VAT

3.1L Đặc điễn môi trường sing cia Nhau (Morinda citrfotia) 3.1.2, Đặc diém mot tring sông của Nhàu nước (Morinda persiejflia) 3.1.3 Đặc điểm môi trường sống của Mơ tròn (Pacderia foetida L) ĐẶC ĐIÊM VỀ HÌNH THÁI, GIẢI PHẪU LOÀI NHÀU 3.2.1 Đặc điểm hình thái

3.22 Đặc điển cầu tạo giải phẫu

ĐẶC ĐIÊM HỈNH THÁI, GIẢI PHẪU LOÀI NHÄU NƯỚC 3.3.1 Đặc điểm hình thái

3.3.2, Bae diễn edu tạo giải phẫu

DAC ĐIÊM HÌNH THÁI VÀ GIẢI PHẪU CỦA MƠ TRÒN -34,1 Đặc điểm hình thái

3.4.2 Đặc điểm cầu tạo giải phẫu

HOAT TINH KHANG KHUAN CUA 3 LOÀI TRONG HỌ CA PI 3.5.1 Hoat tinh khang khuẩn của loài Nha

3.5.2 Hoại tính kháng khuẩn của loài Nhảu nước

KẾT LUẬN VÀ KIÊN NGHỊ

DANH MỤC CÔNG TRÌNH NGHIÊN CỨU CỦA TÁC GIẢ

‘TAI LIEU THAM KHAO

PHU LUC

TP [Thanh pho

TP.HCM | Thành phố Hồ Chí Minh

VQG Í Vườn quốc gia

WETTI Minh (Water and Environmental Technology Institute)

Hình L.1 Bản đồ hành chính huyện Tân Hưng, nh Long An Hình L2 Vị trí Khu Bảo tồn đất ngập nước Láng Sen tron vùng Đồng Tháp Mười,

hạ lưu châu thé sông Mekong, Việt Nam

Hình 2.1 Các vị trí thụ mẫu cây

Hình 3.1 Cây Nhàu phân bổ ở khu vực cảng Apia (Samoa) Hình 3.3 Đặc điểm hình thái hoa của Nhàu

Hình 3.5 Hạt Nhàu nỗi trên mặt nước

Hình 36 Lát cắt ngang l/2 cuống lá Nhâu

Hình 3.7 Cấu tạo đại thể phiến lá Nhâu cắt ngang

Hình 3.8 Cấu tạo gân chính lá Nhàu

Hình 3.9 Cát

Hình 3.10 Biểu bì ở 2 mặt lá Nhàu

Hình 3,11, Lông che chờ đa bảo ở

tạo một phần phiến lá chính thức của lá Nhàu

bì dưới gân chính và phiến lá Nhà chính 14M citrifolia Hình 3.13, Cấu tạo đại thể thân thứ cấp Nhàu

Hình 3.12, Một phần mặt cắt ngang gâ

Hình 3.14 Cấu tạo một phần thân thứ cắp Nhàu,

Hình 3.15, Cấu tạo rễ thứ cắp cây Nhàu

Hình 3.16, Đặc điểm hình thải co quan sinh dưỡng của Nhàu nước Hình 3.17, Đặc điểm hình thái hoa của Nhâu nước

Hình 3.19, Lát cắt ngang cuồng lá Nhàu nước

Hình 3.20, Cầu tạo đại thể phiến lá Nhàu nước cắt ngang

Hình 3.21, Cấu tạo gân chính lá Nhau nước

Nình 3.22, Cấu tạo một phần phiển lá chính thức của lá Nhàu nước Hình 3.23,

Hình 3.24, Vị phẫu lá Nhàu nước jéu bì ở 2 mặt lá Nhàu nước

5 19

"Đặc điểm hinh thai co quan sinh dưỡng của Mơ tròn “

Cu tgo đại thể phiến lá Mơ trên cắt ngang 68

“Cấu tạo một phần phiến lá chính thức của lá Mơ trồn 69

‘Vong v6 khuan cia cao ethanol trén vi Khun Bacillus cereus +8 Vong vô khuẩn của cao ethanol trên vi khuẩn Bacillus subiilit 80

‘Vong v6 khuiin eta eao ethanol trén vi Khun Pseudomonas aeruginosa

82

‘Vong vô khuẩn của cao cthanol trên vi khuẩn Bacillus cereus 84

‘Vong vé khun cita cao ethanol trén vi khuin Bacillus subtilis 86 'Vòng vô khuẩn của cao ethanol trên vi khuẩn Pseudomonas aeruginosa

88 Vong vô khuẩn của cao ethanol trên vi khuẩn Bacillus cereus a

‘Vong v6 khuain cia eao ethanol trén vi Khun Bacillus subtilis x

‘Vong vô khuan ciia cao cthanol trên vĩ khuẩn P aeruginosa 9

Bảng 2.1 Tọa độ địa lí 3 địa điểm thụ mẫu cây 20 Bảng 2.2 Đánh giá mức độ của đường kính vòng vô khuẩn a Bảng 3.1 Một số chỉ tiêu í hóa của 3 mẫu đắt 29 Bảng 3.2 Độ dày các lớp mô của gân chính lá Nhàu 40 Bảng 3.3 Độ dày các lớp mô ở phiên lá Nhàu 41 Bảng 3.4 Độ dày các lớp mô ở thân thứ cắp Nhàu 45 Bảng 3.5, Độ dày các lớp mô ở rễ ths ep Nhàu 4 Bang 3.6 Độ dày các lớp mô ở gân chính lá Nhâu nước 5s Bảng 3.7 Độ dày các lớp mô của phiển lá Nhằu nước 56 Bảng 3.8, Độ dày các lớp mô của rễ thứ cắp Nhâu nước 39 Bảng 3.9 Độ dày các lớp mô của thân sơ cắp Nhàu nước 60 Bảng 3.10 Độ dày các lớp mô ở gân chính lá Mơ tròn 6T

Bảng 3.11 Độ dày các lớp mô của phiến lá Mơ tròn 0

Bảng 3.12 Độ dày các lớp mô của thân sơ cấp Mơ tròn 7 Bang 3.13 Dặc điểm về cấu tạo giải phẫu lá của 3 loài nghiên cứu 15 Bảng 3.14 Đặc điểm về cầu tạo giải phẫu thân của 3 loài nghiên cứu 76 Bảng 3.15 Đặc điểm khác biệt về cầu ạo giải phẫu rễ của 3 loài nghiên cứn 16

Bảng 3.16 Giá trị đường kính vòng vô khuẩn trên chủng Bacillus cereus thir

Bảng 3.22 Giá trị đường kính vòng vô khuẩn trên chủng Bacillus cereus 90

nghiệm om Bảng 3.24 Giá trị đường kính vòng vô khuẩn trên ching Pseudomonas aeruginosa

MỠ ĐẦU

1.LÍ ĐO CHỌN ĐẺ TÀI

Rubiaceae à một họ Thực vật có ho thường được gọi họ Cà phê hoặc Thiền thảo, bao gằm khoảng 13.500 loài với 620 chỉ phân bổ khắp nơi trên th giới Tuy nhiên, đa số các loài tập trung ở vùng nhiệt đổi và cận nhiệt đới [1] Rubiaeeae rất

phong phú về đạng sống: cây thảo, cây leo, cây bụi hoặc cây cổ lớn, cây phụ sinh đến loài thuộc 90 chỉ khác nhau, nhiều cây có giá trị kinh tế cao như Cà phê (Coffea arabica), Canb-kiva (Cinchona spp), Danh dink (Gardenia foetida) [2]

\Vé cia ec tod thuge chi Cinchona fi ngun cung cp quinin — mot rong những chất điều trị bệnh sétrét Glium odoratum, Mitragyna speciosa va Morinda citifolia được sử dụng như các cây thuốc nhờ những tác dụng của chúng rong y học [3] CChi Nha (Morinda) bao gm 80 loài thân

loài Morinda đều mang quả phức, mọng nước hoặc khô [4] Trong y học cổ truyễ

Nhật Bản, Hàn Quốc và Trung Quốc, Morinda cirjflia đều được coi là một loại thảo

ethanol lên Escheria coli va S aureus é ndng độ 5 mg/ml lần lượt là 9 mm và 8 mm; đối với chiết xuất sử dụng dung môi là nước, đường kính vùng ức chế tương ứng đạt

6 mm và 18 mm (6),

Rivera A và cộng sự (2011) đã tiền hành khảo sát tác dụng kháng khuẩn của cdịch chiết trái cây Morinda cirifolia lêt loài trong chi Mycoplasma, bao gồm Mycoplasma fermentans, Mycoplasma penetrans, Mycoplasma pneumoniae và

Mycoplasma fermentans ATCC 19989, Két qui cho thấy dich chit réi M citrifoia

cho thấy tiềm năng ứng dụng của rấ cây M citrifolia ong chế tạo thuốc kháng khuẩn có nguồn gốc từ tự nhiên [7Ì

Theo Koffi và cộng sự (2010), chiết xuất ethanol 70% từ trấ cây M morirdoides ở nồng độ 5 mgJml có hiệu quả tích cực nhất trong việc chống lại sự 1c quan lí bệnh địch tà [8]

Puff va cộng sự (1995) đã mô tả đặc điểm hình thái, giải phẫu nhị hoa của các

An được tiến hành,

I.MỤC TIÊU NGHIÊN CỨU

- Xác định được đặc điểm hình thái, giải phẫu và hoạt ứnh kháng khuẩn của ba loài thục vậtthuộc họ Cả phê (Rubiaceae) là Nhầu (Morinda cirifolia L.), Nhâu nước Hung, tinh Long An

IIL, ĐÔI TƯỢNG NGHIÊN CỨU

"Để tài nghiên cứu 3 loài thực vật thuộc họ Cà phê (Rubiaceac): Nhâu (Morirda cimifolia L.), Nhàu muse (Morinda persicifolia Buch, Ham.) vi Mo tron (Pacderia foetida L.) ở huyện Tân Hung, tinh Long An

1V NỘI DUNG NGHIEN CUU

~ Khảo sắt nhân tổ inh thái môi trường của nơi thu mẫu thực vật

cây nghiên cứu

Nghiên cứu đặc điểm cấu tạo giải phẫu lá, thân, rễ của 3 loài ong họ Cà phê (Rubiaceae)

= Khio sit hoat tính Kháng khuin (Bacillus subtilis, Bacillus cereus, Pseudomonas aeruginosa) cita 3 loai cây thuộc họ Cà phê (Rubiaceae) ở khu vực nghiên cứu là Nhàu (Morinda citifolia 1), Nhu nude (Morinda persicfolia Buch

~Ham.) và Mơ tròn (Paederia foetida L.)

PHẠM VI NGHIÊN CỨU

Nghiên cứu một số đặc điểm về hình thái và cấu tạo giải phẫu các cơ quan sinh

dưỡng của 3 loài thực vật thuộc họ Cà phê (Rubiaceae): Nhàu (Morinda cirifolia L.), hoạt tính kháng khuẩn của 3 loài với cao chiết từ ethanol tại 3 xã Vĩnh Lợi, Vĩnh Đại

và Vĩnh Châu B thuộc huyện Tân Hưng, tỉnh Long An

VI Ý NGHĨA KHOA HỌC VÀ THỰC TIỀN CUA NGHIÊN CỨU Gép phin cung cấp dẫn liệu về một số đặc điểm bình thái giải phẫu và hoạt tính kháng khuẩn của 3 loài thuộc họ Cà phê (Rubiaceae): Nhâu (Morinda citrifolia L.), các nghiên cứu tiếp theo

Tạo cơ sở khoa học cho việc sử dụng bền vững 3 loài thuộc họ Cả phê

(Rubiaceae) vio img dng trong y học, duge iệu và đi sống

1.1 DAC DIEM TY NHIEN CUA HUYEN TAN HUNG 1.1.1 Vị trí địa lí

inh Long An thuộc khu vực Đồng bằng sông Cửu Long có tổng diện tích đất

tự nhiên là 4.491,87 khẺ, Trên địa bàn tính có 1 thi xa va 13 huyện với 6 huyện nằm, Mộc Hoá, Tân Thạnh, Thạnh Hoá và Đức Huệ Trong đó, Tân lưng là một huyện nằm ở phía Tây Bắc của tỉnh Long An có tọa độ là 10'50'14” Bắc đến 105'39°39”" Đông với diện tích tự nhiên 49.670,8 ha bao gầm 11 xã và | thi trấn Phía Bắc Tân

Mình 1.1 Bản đồ hành chính huyện Tân Hưng, tỉnh Long An [10]

Hình 1.2 Vị trí Khu Bảo tồn đắt ngập nước Láng Sen trong vùng Đằng Tháp

"Mười, hạ lưu châu thổ sông Mekong, Việt Nam [10] 'Khu Bảo tồn nằm trong phạm vi tọa độ địa lí từ 10145100" đến 1195000 vĩ độ

ấc và từ 10594500 đến 1055000" kinh độ Đông, là một trong các hệ sinh thái đất ngập nước quan trọng còn sót lại của Đồng Tháp Mười, tọa lạc trên địa bàn 3 xã Vĩnh Lợi, Vĩnh Đại và Vĩnh Châu B thuộc huyện Tân Hưng, tỉnh Long An cách Thành phố

Hỗ Chí Minh khoảng 150 km theo hướng Nam [I0)

Nim trong khu vực rung tâm và là được xem như một bồn trăng nội địa của vũng Đồng Thấp Mười trong hạ lưu châu thổ sông Mekong, Khu Bảo tồn đắt ngập,

"Đẳng Thấp Mười trước đây [10]

1.1.2, Điều kiện tự nhiên

Địa hình, thổ nhưỡng

“Địa lành: Nhìn chung Tân Hưng có địa hình bằng, thấp, địa hình huyện Tân Hưng có mỗi quan hệ chặt chế với điều kiện độ sâu và thời gian ngập lũ Địa hình thấp dẫn từ Tây sang Đông và từ Bắc xuống Nam Thị

Campuchia về kênh Cái Ngang i dn theo hướng từ biên giới

nước biển dao động từ 0,7 đến 1,2 m nên khu vực này được xem như một vùng đầm lầy ngập nước chịu ảnh hưởng trực tiếp chế độ thủy văn của sông Cửu Long và chịu ngập lũ hằng năm [I0]

Khu vực Láng Sen có địa mạo khá điển hình của vùng Đồng Tháp Mười với điều kiện địa hình thấp trững cộng với hệ thống sông rạch dảy đặc và xen lẫn bên trong là những gò phù sa, lồng cát, cùng các đặc trưng: gồ phủ sa cổ, tring ngập, nước ven sông, đồng bằng thấp ngập nước, đồng bằng phẳng ngập nước và trùng nội địa [10]

Thổ nhường: Đắt đai huyện Tân Hưng hình thành trên hai loại trằm tích là trim, tich phit sa non tré (Holocene) va trim tich phù a (Pleistocene) Trong d6 chi yéu

là ầm tích phù sa non trẻ Có thể chia các loại đắt ở trong huyện thành các nhói

Nhóm đất xám: có 3 đơn vị bản đồ đất đó là đất xám điển hình, đất xám có ting loang lỗ đỏ vàng, đất xám gley Nhóm đất xám này có điện tích 16.001,49 ha, chiếm 32,50% diện tích tự nhí „ phần bổ ở các xã: Hưng Hà, Hưng Diễn B, Hưng

Điền, Thạnh Hưng, Hưng Thạnh Nhóm đất xám tuy có chất lượng không cao nhưng

có khả năng sử dụng khá đa dạng như trồng lúa, đay

Nhóm đắt phền: có điện tích là 30.435,03 ha, chiếm 66,02% diện tíh tự nhiên

Phân bố chú yếu ở dọc sông Vàm Có Tây và các xã như: Vĩnh Đại, Vĩnh Châu A,

Vĩnh Lợi, Vĩnh Thạnh, Vĩnh Châu B Thạnh Hưng, Hung Thạnh Đắi với nhóm này nếu có chế độ cải tạo tốt thì hiệu quả đạt được Không kém nhiều so với đắt phù xa

“Theo kết quả nghiên cứu của Viện Nước và Công nghệ môi trường Thành phố

Hồ Chí Minh (2010), các nhóm đắt chính hiện diện trong khu bảo tồn Láng Sen thuộc huyện Tân Lưng bao gồm:

Nhóm đắt phủ sơ cổ: Là nhóm đắt chiếm điện tích ít nhất trong vùng và phân bổ

ở những nơi có địa hình khá cao, từ 0,8 m đến 1,2 m

ANHám đẫt phù sa có tằng sinh phèn: Đặc trưng của nhóm đắt này là vậ liệu phù

xa phủ lên trên một tằng sinh phèn (sulfdic) Phần lớn đất thuộc nhóm này giữ ấm

tốt, ngập nước oxy không xâm nhập sâu vào bên trong đất nên có giá tị pH > 5,5

hồa khoáng Pyrie trong điều kiện thoát thủy và tạo thành khoáng larosie mầu vàng (sxlfmic) đặc trưng của đất phèn hoạt động Tầng phèn có giá tỉ pH < 3.5, làm tăng

độ chua trong đất và hạn chế sự phát triển của các loài sinh vật

Nhóm đất phèn tiềm tàng: Đặc trưng bởi tang sinh phen (sulfidic) cách mặt

50 em với khoảng Pyrite được bình thành trong điều kiện khử nhờ hoạt động của vỉ khuấn, Đắt phèn tiểm tàng thưởng phân bổ ở những khu vực ngập nước thưởng xuyên trong năm

Khí hậu, thủy văn

Khí hậu: Toàn tỉnh Long An và huyện Tân Hưng kể cả khu bảo tồn Láng Sen

.đều nằm tong vùng khí hậu nhiệt đới gió mùa, âm Do tiếp giáp giữa 2 vùng Đông Nam Bộ và Tây Nam Bộ nên vừa mang các đặc tính đặc trưng cho vùng đồng bằng sông Cửu Long lại vừa mang những đặc tính riêng biệt của vàng miễn Đông Nam

Bộ Nhiệt độ trung bình hàng tháng vào khoảng 27,2 - 27,7°C Nhiệt độ trung bình cao nhất là vio thang 4 (28,9°C) và thấp nhất vào tháng 1 (25.2°C) [10] Lượng mưa hàng năm dao động từ 966 đến 1.325 mm Độ ẩm trung bình năm

là R0 đến 82 2 Trung bình thi gian chiếu sáng mỗi ngày từ 6,8 đến 75 giờ ngày động từ 2= 4PC, Mùa mưa kéo dài từ tháng 5 tến tháng 10, có gió Tây Nam với tần suất 10% Mùa khô từ thng 11 đến thắng 4 năm sau, có gió Đông Bắc, tần suit 60 -

0%, Mùa mưa chiếm trên T0 - 82% tổng lượng mưa cả năm [10],

Thủy văn: Tân Hưng là huyện nằm ở đầu nguồn nước từ phía sông Tiền dẫn vào

địa phận của tỉnh Long An nên có nhiễu thuận lợi hơn so với các huyện phía Nam

của tỉnh Nguồn nước ngằm tong khu vực sâu, là vàng đất ngập nước thuộc lưu vực sông Mekong, thể hiện rõ nét hàng năm chỉ có 2 mùa là mùa mưa và mùa khổ

“Theo kết quả nghiên cứu của Viện Nước và Công nghệ môi trường Thành phố

Hồ Chí Minh (2010) chế độ thủy văn của khu bảo tn Láng Sen chịu ảnh hưởng trực tiếp của sông Cửu Long mà còn thay đổi do ảnh hưởng từ sự thay đổi của chế độ dòng

chảy trong toàn vùng Tân Hưng, Vĩnh Hưng Mạng lưới sông rạch tự nhiên trong khu

nước cũng cấp chủ yếu cho Khu vục Láng Sen thông qua à kênh 79 và rạch Bông Đông theo chế độ bín nhật tiểu và lớn nhất vào mùa khô Tuy nhiên, biên độ dao

động mực nước lớn nhất trong khoảng < 0,5 m Biên độ này giảm dần tới khi đỉnh lũ

xuất hiện

Nhập lũ: vàng ngập sâu trung bình khoảng 2.5 - 3,5 m trong các năm cổ lũ lớn (tương đương với lũ ở các năm 1996 vả 2000) Thời gian ngập đao động từ 3 đến 4 tháng Với sự mở rộng của các mạng lưới ỉnh mương như hiện may, thời sian ngập giảm đi khoảng I thắng so với trước đây, Những nơi bằu trũng như Láng Sen, Cái

He, rach Cai Nỗ các khu vực chịu ngập sâu nhất (WETTI, 2010) Chất lượng nguồn

yến kênh 79

nước thay đổi theo mùa và có sự khác biệt khác trong từng khu vực 1

đi qua vùng đất phèn nặng nên nước bị chua phèn và độ đục thấp, độ pH thưởng thấp

dưới 4.5 Chất lượng nước chỉ được cải thiện vào mùa lũ và độ đục cũng tăng lên rất

n định và cao hơn Vào mùa khô, khả năng trao đổi nước từ 2 nguồn nước là kinh T9 và sông Bông Súng hạn chế nên có sự khác biệt đáng kẻ về độ pH nước trong các kinh và vùng trung tâm Láng Sen - Cái He Chất lượng nước trong vùng trung tâm Láng Sen ít biến động [10]

“Theo số liệu tỉ \g kế đến năm 2019 toàn huyện có hơn 3000 ha rừng, chủ yếu

là rừng Tràm, tập rung nhiều ở khu bảo tồn đắt ngập nước Láng Sen Do có nhiều hệ

động thực vật trong khu vực Láng Sen, và đây cũng là những loài đặc trưng cho của vùng đất ngập nước Đồng Tháp Mười

Hệ thực vật: Theo nghiên cứu của Viện Nước và Công nghệ môi trường Thành phổ Hồ Chí Minh (2010) và nghiên cứu của tác giả Đặng Văn Son và cộng sự (2018),

Khu Bảo tổn đất ngập nước Láng Sen có 220 loài, 174 chỉ, 74 họ và thuộc hai ngành

thực vật bậc cao đố là ngành Duong xi (Polypodiophyta) và ngành Ngọc lan

(Magnoliophyta) Trong đó, các họ chiếm nhiều nhất là họ Hoa ban (Poaceae), ho

(Clic (Asteraceae), ho Diu (Fabaceae), ho Dén (Amaranthaceae), ho Réy (Araceae),

họ Diệp hạ châu (Phyllanth:

ae), họ Bông (Malvaceae), họ Ô rô (Acanthaceae)

Ngoài ra, Khu Bảo tốn đắt ngập nước Láng Sen có hệ thực vật nỗi rit da dang vi

114 loài, 37 họ, 25 bộ thuộc 6 ngành Với tảo Lụe là ngành chiếm tu thể, iếp đến là

lượng ít nhất Khu vực có

tảo Silic, táo Lam, tảo Mắt, tảo Vàng và tảo Giáp chiém

3 loài trong Sách đỏ Việt Nam (2007) là: Cà na (Elacocarpus hygrophilus), Lau vôi (Hemisorghum mekongense) va Lila ma (Oryza rufipogon) {10}, (11)

‘Theo Đặng Văn Sơn và cộng sự (2018), nơi đây có 4 kiểu sinh cảnh thực vật,

bao gồm: Sinh cảnh rừng Trầm, sinh cảnh đồng cỏ ngập nước theo mùa với 6 kiểu

“quần hợp, sinh cảnh thực vật kênh rạch với kiểu quần hợp và sinh cảnh lung trắp với 3 kiểu quản hợp [11]

Hệ động vật: Theo nghiên cứu của Viện nước và Công nghệ môi trưởng Thành phố Hồ Chí Minh (2010) thì hệ động vật ở Khu Bảo tồn đt ngập nước Láng Sen bao gồm: Dộng vật nỗi 68 loài, Động vật đáy có 11 loi

số 17 loài, Chim có 122 loi, Thú có 6 loi Chính vì sự phong phú, da Cá có 36 loài, Luding cư có 4 dang va gid tito lớn của hệ động, thực vật nén Khu Bảo tổn đắt ngập nước Láng Sen thể giới và à khu Ramsar thứ 7 của Việt Nam vào ngày 05 thắng 06 năm 2015 [H1]

12, TÌNH HÌNH NGHIÊN CỨU TRONG VÀ NGOÀI NƯỚC THUỘC LĨNH

ỨC ĐÈ TÀI

'Cho đến nay đã ghi nhận được một số công trình nghiên cứu về đặc điểm hình thái, giải phẫu và hoại tính kháng khuẩn của các loài thuộc họ Cà phê

nhân giống cây dược liệu quý này Kết quả cho thấy có sự khác biệt về hình thái của

.các mẫu Nhàu giữa hai quần đáo: ở quân đáo Andaman, quả Nhàu có kích thước lớn, trong khi các quả thu được ở quần đảo Nieobar có kích thước nhỏ hơn Thông qua đánh giá bằng chỉ thị phân tử RAPD và ISSR, 33 mẫu Nhàu được chia thành 2 nhóm chính với mức tương đồng dĩ truyền là 74 [14]

Kadir va cộng sự (2015) đã ghỉ nhận được 116 loài thực vật thuộc 4š ho thường

được người bản địa ở khu vực đổi Chitagong, Bangladesh sử đụng để điễ trị vết rắn

cắn Trong đó cây Nhau nước thuộc họ Cả phê được nhiễu người để cập hơn so với

những cây thuốc khác, chiếm 2,06% Cao chiết tử lá cây được dùng để bôi bên ngoài vết thương hai lẫn một ngày trong 3= ngày [15]

Năm 2016, Paula và cộng sự đã nghiên cứu đặc điểm hình thái, thành phần hóa học và sự huy động các chất dự trữ trong quá tình náy mằm của 100 hạt Nhàu khô

(Morinda cùtrifolia L.) được chọn ngẫu nhiên Qua đó ghi nhận được một số đặc điểm như hạt có nội nhũ và có lớp v6 hat diy, gi lignin Céc thé lipid va protein duge lượng đường hòa tan lạ ít hơn 5% Axitlinoleie là axit phd biển nhất chiếm 68.1:

Nguồn dự trữ chính cia hat la lipid va protein được huy động trong quá trình này

để cung cấp năng lượng, nguyên liệu cho phôi phát triển và tổng hợp các hợp chất phúc tạp hơn Đây là những đặc điểm rất quan trong trong việc m hiểu sự hình thành của các loài bản địa và ngoại lai [16]

1.2.2 Tei Vigt Nam

'Ở nước ta đã ghỉ nhận được một số công trình nghiên cứu về đặc điểm hình thái

và giải phẫu của các loài trong họ Cả phê Năm 2002, Trương Thị Đẹp và Nguyễn (Rubiaceae Juss 1789), Hai tác giả cũng đã cung cấp cơ sở về đặc điểm thực vật học nước (Morinda persicifolia Buch.-Ham.) [ITIII8]

Phạm Hoàng Hộ (2003) đã khảo sắt và mô tả đặc điểm hình thái, sinh th

5 lodi thuộc chỉ aedevid (chi M) và 10 loài thuộc chí Morind (chí Nhàn) phân bổ tại Việt Nam, trong đó có các loài đã được ghỉ nhận tại Khu Bảo tồn Đắt ngập nước Nhau (Morinda citrfotia L.), Nhiu nude (Morinda persiifolia Buch -am., (19)

Đặc điểm hình thái và git phiu cia Nhu (Morinda citriflia L.) mat

được đề cập trong nghiên cứu của Trần Phương Thủy (2004) Tác giả đã nghiên cứu

đặc điểm và thành phần hóa học của cây Nhàu núi và cây Nhàu ở tỉnh Ninh Thuận Đặc biệt, tác giả đã gí nhận được một số hợp chất có hoạt tính sinh học trong các bộ thu), tanin, alkaloid, saponin, Trong khảo sát thực tễ, tác giả nhận thấy tại Ninh

“Thuận và một tỉnh miền Trung, người dân đã sử dụng Nhàu nói thay thể Nhàu Kết

‘qua của đề tài là dẫn liệu quan trọng giúp phân biệt giữa hai loài này và làm tiền đề

cho việc ứng dụng ha loài rong đôi sống, đặc biệt tong y học [20

Đến năm 2005, Nguyễn Tiến Bản và cộng sự đã ghỉ nhận ở nước ta có 5 loài thuộc chỉ Paederia (chi Mo) va 9 lodi thudc chi Morinda (chỉ Nhàu) — ít hơn 1 loài điểm hình thái, sinh thái cơ bản làm cơ sở cho việc phân loại các loài [21] Năm 2007, Trương Thị Đẹp đã khảo sát đặc điểm hình thái, giải phẩu và bột

Chi Minh, qua đó đã ghỉ nhận được

một số đặc điểm thích nghỉ như lá mẫu xanh bóng đậm ở mặt tên giúp phản chiều

được liệu của cây Nhàu thu hái tại thành pÏ

bớt ánh mặt trời; sự xuất hiện của các tỉnh th calei oxala hình kim trong mô mễm ở thân, lá ễ giúp tăng độ bằn vững của cơ quan 22]

Nguyễn Thị Nga (2014) đã định danh, mô tả đặc điểm hình thái, ảnh học, sinh thái và phân bố của 32 loài thuộc 18 chi tong ho Ca phé (Rubiaceae Juss) thu thap chỉ và 16 loài chưa được ghi nhận trong danh lục thực vật của Vườn Quốc gia Lò Gò

Xa Mat, góp phần nâng tổng số loài ong danh lục từ 694 loài lên 710 loài: có thể

kế đến một số loài như Ba kích lông (Morinda cochinchinensis DC.), Bướm bạc một hon (Aplidenandra unjfiora (WalL.x G.Don) Bremek,) [23]

“Trong những năm gần đây, hằng loạt các cây trong họ Cà phê phân bổ tại Việt

am được ghỉ nhận là loài mới góp phần làm tăng sự đa dạng và cung cắp thêm dẫn

và mô tả đặc điểm hình thái, sinh thái của một loài mới thuộc chi Xú hương la Xt hương Yahara (Lasiantlus yalarae V.S Dang, Tagane & H Tran) phân bỗ ở Hồn

Bà Năm 2019, thêm bai loài Xú hương mới lần lượt được phát hiện tại Vườn Quốc gia Ba Vi là Xú hương thúy an (Lasianthus thuyanae V.S.Dang & Naikj) và Xú hương

Tam Bao (Lasianthus tamdavensis V.S.Dang) tai Vườn Quốc gia Tam Đảo Trong cùng năm, tại Vườn Quốc gia Bidoup — Núi Bà ghi nhận thêm I loài Xú hương mới nhiệm vụ quan trọng của nước ta hiện nay chính là bảo vệ sự da dang sinh học, đặc

24] [25] 26] Các loài trong chỉ Nhàu (Morinda) phân bổ rất đa dạng và phong phú ở Việt biệt là nhân giống và phát triển các loài trong họ Ca pl

Nam, Vũ Hương Giang và cộng sự (2015) đã ghi nhận được 9 loài gồm Morirdz

“officinalis, M cochinchinensis, M, villosa, M lomentosa, M citrifolia, M parvifolia,

30 m so với mật nước biển như Khánh Hòa, Ninh Thuận, Quảng Ninh đến các vùng mặt nước biển Ngoài ra, chúng còn có khả năng tái sinh mạnh mẽ, đặc biệt là tái sinh

từ gốc hoặc rễ Qua đó, cho thấy tiém năng lớn trong công tác nhân giống, bảo tổn và phát triển các loài này ở nước ta [27]

Năm 2021, Lê Văn Út và Đỗ Thị Anh Thư đã khảo sát đặc điểm

giải phẫu củn 6 loài thuộc họ Cà phê (Rubiaceae) ở Việt Nam, bao gồm Cà phê thấi và

(Coffea arabica L.), Danh dan (Gardenia jasminoides Bllis), Bong trang vang (xora tam thé (Paederia lanuginosa Wall.) nhằm cung cắp những đẫn liệu góp phần xây

dạng sống giữa các loài: Cà phê, Nhàu có dạng thân gỗ; thân bụi gặp ở Bông rang,

Dành đành; thân cỏ dạng leo ở Mơ tam thé và đạng bò ở Lưỡi rắn [28]

Whin cuns,các dẫn iệu nên ten chi raring ti Vi + Nam và trên Thể giới đã

số nhiều công trình nghiên cứu về hình thấ, giải phẫu và hoạt ính kháng khuẩn cũa

các loài thuộc họ Cả phê Tuy nhí các để tài thuộc lĩnh vực hình thái, giải phẫu thích nghỉ của những loài này tương đối còn ít khi sơ sánh với tổng số loài vô cùng lớn của họ Cả phê (13500 loài) Qua đó thé thấy rằng vẫn cẳn thêm rất nhiều nghiên cửu về những loài tiểm năng của họ nhằm xác định và nhân giống ngày càng nhiều những giống cây có ích, phục vụ cho đời sống con người

1.3 THONG TIN VE HO CA PHE (RUBIACEAE)

Đặng Văn Sơn và cộng sự (2018) đã nghiên cứu về đa dạng hệ thực vật ở Khu Bảo tồn đất ngập nước Láng Sen, huyện Tân Hưng, tỉnh Long An và ghỉ nhận được (Polypodiophyta) và ngành Mộc lan (Magnoliophyta) Trong đó, họ Cà phê

(Rubiaccae) khá đa dạng với 13 loài (chiém 5⁄7), gồm một số loài nỗi bật như Nhàu (Paederia foetida L.), Mo long (Paederia lanuginosa Wall) [11]

Định loại

“Tên loài: Nhàu

“Tên khoa hoc: Morinda citrfotia L

Tên ding danh: Morinda aspera Wight & Am.; Morinda citrifolia vat posteri

©.Deg.; Morinda citrfolia £ potteri (O.Deg.) H.St, John

“Tên khác: Nhàu lớn, Nhàu núi

“Campuchia, Lào, Ấn Độ, Indonesia Philippines và Việt Nam Ở nước ta, Nhàn được

tìm thấy chủ yếu ở các tỉnh miễn Nam Ngoài ra, người dân ở một số tỉnh ven biển miễn Trung (Khánh Hòa, Bình Định) và vùng trung du phía Bắc (Ba Vì ~ Hà Tây) nhau [31] [32]

Tại Án Đị „ nước ép Nhâu được sử dụng cho các tình trạng bệnh lí hen suyễn

cđến đậu mùa, hội chứng tiễn mãn kính và bệnh phong [3]

"Nhiều nghiên cứu đã được tiến hành nhằm chứng mình các đặc tính chống oxy hóa, chống loát, kháng viêm và chẳng ung thư vả tiểu đường tuýp 2 ở người [34]

Cy Nhàu là một loài thảo được quý được ứng dụng ở nhiễu lĩnh vực trong cuộc

ống, đặc bit là tron y học Theo Vỡ Văn Chỉ rễ cây Nhà có tác dụng nhuận trăng

nhẹ và kéo dài, lợi tiểu nhẹ, làm êm dịu thần kinh trên thần kinh giao cảm, chữa bệnh

cao huyét áp do gây giãn mạch Quá cũng có tính nhuận tràng, lợi tiểu và chữa

ly, Lá có tác dụng tăng lực và hạ sắt lầm dịu và điều kảnh [32] Ngoài ra, có thể dùng lá Nhảu giã nát để đắp lên vết thương, chữa mụn nhọt giáp chóng lên da non; lá phơi khô chữa sốt rất, kiết ly [51] 'Phân tích thành phần hóa học cho thấy rễ Nhàu có chứa morindin (CasHsøO¡s)

ất 'Còn có một hỗn hợp anthraglucosid như damnacantal, chất ]-metoxyrubiazin, c morindon và chất I-oxy-2,3-dimetoxy-amthraquinon Lá cũng chứa chất morindin [31] Trong đó, anthraquinon là một hợp chất có tác dụng miễn dịch và chống ung thư [36]

"Ngoài ra, rễ Nhâu nhuộm mâu đỏ cho quin áo, vải lụa hoặc thái nhỏ, ngâm rượu uống trị đau nhức,

1.3.2 Loài Nhầu nước

Định loại

Tên loài: Nhau nước,

“Tên khoa hoc: Morinda persicifolia Buch -Ham

‘Tén ding danh: Morinda lanceolata Wall., Morinda talmyi Pierre ex Pit Morinda longifolia Craib, Morinda pandurifolia Kuntze, Morinda pandurifolia var tenuifolia Craiby

“Tên khác: Nhàu rừng

Họ Cà phê: Rubiaceae

Phân lớp Hoa môi: Lamiidae

Ngành: Mộc lan: Magnoliophyta [29], [30),

[hit nue thuémg mọc ải rc hay thinh dim đọc theo các bờ so, bờ rộng ven Kênh rạch hoặc đường đi Khi này toàn bộ phần rễ và gốc cây đều chìm trong nước

Do đó, cây có khả năng sống trong môi trường ngập ông Tuy nhiền, cây thường nước Khi hạt bám vào bờ đắt mới sẽ nảy mằm Ngoài ra, cây còn có Khả năng tái

sinh mạnh mẽ từ gốc và rễ [37]

Công dụng

RỄ Nhâu nước được sử dụng ở miền Tây Nam Bộ dễ thuy thể rễ Nhàu chữa huyết áp cao Rễ cây được thái nhỏ, ao vàng ngâm rượu uống chữa đau lưng, nhức mỗi, ê thấp Ngoài m còn sử dụng cho người mắt ngủ, hồi hộp, tìm đập không đền

Giống với Nhàu (ðorinda cirdfolia L.), rễ Nhàu nước thường được chiết suất

_ tà thuốc và được người dân

sử dụng để chữa bệnh cao huyết áp [37] Theo Võ Văn Chỉ (1997), rong rễ Nhàu

thành dạng cao lỏng, cao mềm, thuốc viên, thuốc nướ

nước chứa morindin và 2 dẫn xuắt khác của anthraquinon có điểm sôi theo thứ tự là

222°C va 270°C Céc hợp chất quinon, đặc biệt là anthraguinon có tác dụng miễn địch, chống ung thư [32], [36]

13.3 Loài Mơ tròn

Định loại

“Tên loài: Mơ tròn

‘Ten khoa hoc: Paederia foetida L

Tên đồng danh: Paederia barbulata Mig, Paederia chinensis Hance, Gentiana scandens Lour., Apocynum foetidum Burm.£., Paederia scandens (Lour:) Mer, Paederia tomentosa Blume

“Tên khác: Mơ leo, Thúi địt

‘Ten Mo thi bit ngubn tr mi da tnmg ea carbon bisulphide khi li bi nghiỄn nát [38]

"Mơ tròn thuộc loài cấy nhiệt đối, ưa sắng và ưa âm, có khả năng chịu bóng khỉ mọc xen lẫn với những loài cây bụi khác Cây chỉ có quả hằng năm nếu không bị thu bái lá thường xuyên Có khả năng tái sinh vô tính khoẻ bằng cách mọc chổi sau khi

bị cất hay đem nhân giống bằng từng đoạn thân hoặc cảnh Cây thường được trồng

cạnh bờ rào, bở ao để có chỗ leo, đôi khi gặp ở những nơi đắt ruộng hoang hoá hoặc kênh rạch Cây có nguồn gốc từ vùng Ấn Độ, Malaysia hin may phn bd rng ti

Đông Nam Á và Nam Trung Quốc Tại Việt Nam, cây gặp ở hầu hỗt các tỉnh trừ các vùng núi cao trên 1600 m [37]

Công dụng

"Người dân Ấn Độ thường dùng nước sắc Mơ tròn để uống và xoa bóp trị đau, nhức, tê thấp

Tại Philippines, lá Mơ tròn được sử dụng để chữa sỏi thận, bí tiểu Bishal và

công sự (2017) đã nghiên cứu sử dụng Mơ tròn như một nguồn cung cấp hợp chất triển mạnh của loài này Các hạt nano Âu và Ag được khử bởi dịch lá Mơ tròn thể (17.46%), Staphylococus aureus (16,6%), Exchercia coli (17.34%) va Aspergillus

niger (13.4%) [39]

Lá Mơ tròn được dùng chữa trực khuẩn Lấy lá Mơ tròn lau sạch, thái nhỏ trộn

ới trứng gà, nướng trong Lá chuỗi đến khi thom, ngiy hing 20~ 40 g Thời gian điều trị trung bình 7 ngày, lá Mơ tròn còn có thể được sử dụng để tị giun kim và giun đũa

“Theo tài liệu nước ngoài nhân dân một số vàng An Độ đùng lá rơi nấu canh và cho bệnh đường ruột Mo tròn có tác dung ting thải trừ chất độc tích luỹ trong cơ thể khi dùng các chất có hgi như rượu, thuc lá hoặc do rấ loạn chuyển hoá [37]

HUNG VI KHUAN THU NGHIEM

"Nguồn gốc các chùng vi khuẩn: Bacillus cercus, Bacillus subtilis, Pseudomonas

‘aeruginosa hiện đang lưu trữ tại phòng thí nghiệm Vi sinh vật, Đại học Sài Gòn 14.1 Bacillus cereus và Bacillus subtilis

Bacillus fa nhom vi khudin am dương chiếm số lượng lớn gồm 268 loài va 7 phân loài, có hình que, xếp thành cặp hoặc chuỗi thường xuất hiện trong môi trường dắt ph

sy nhiễm trùng ở người [40] ý thí nghiệm và trong nhiề loại thực phẩm sống một số loài có khả năng BBaellue cereus Tà nhóm vi khuẩn hiểu khí hay ky khí thy ý, có thể tạo ra nội bào từ bảo vệ dụng hình que, kích thước 1 x3 — 4m Chúng phát tiển tối tu ở nhiệt con người, gây ngộ độc thực phẩm và có khả năng kháng ponilin, ong khi các chúng khác có thể có lợi như chế phẩm sinh học cho động vật [40] BBaelius subile được gọi là trực khuẩn thường m thy trong cô, rơm hay ở

trong đắt, dạng hình que, có catalase đương tính, kích thước nhỏ hơn 1 um, có khả

năng hình thành bảo tử hoặc tú bio tr elip Bacillus subtilis Ek những vỉ khuẩn hiểu

khí và ky khí tùy nghỉ Bacillus subtilis duge ding trong phòng và trị các bệnh về rồi chứng còn được sử dụng trong các ứng dụng công nghệ sinh học như lên men thực

n xuất enzyme, các hợp chất hoạt tính sinh bọc khác [40] phẩm,

1.4.2, Pseudomonas aeruginosa

Pseudomonas aeruginosa thuộc nhóm vi khuẩn Gram âm, là vi khuẩn hiểu hình que, gây ra nhiều loại bệnh nhiễm trùng ở người và động vật, được tìm thấy trong đất, nước, tiên da |4]

‘Chong 2, PHUONG PHAP NGHIEN CUU 2.1 THỜI GIAN VÀ ĐỊA ĐIÊM NGHIÊN CỨU:

2.1.1 Thời gian nghiên cứu

š tải được iến hành từ tháng 12/2022 - 9/2023, bao gồm thời gian: nghiên cứu: tải liệu thụ mẫu 2 đợt vào mùa mưa và mùa khô, phân tích mẫu, giải phẫu mẫu, định danh tại phỏng thí nghiệm Sinh thái - Thực vật, Khoa Sinh học, Trường Đại học Sư phạm Thành phố Hồ Chi Minh; khảo sát hoạt tính kháng khuẩn ti phòng thí nghiệm

Vi sinh, Trường Đại học

đôn

“Thời gian thực địa và thụ mẫu 2 đợt:

= Bot | (thing 12/2022): thu 2 Kin, mdi fin thu mẫu từ 2 ~ 3 ngày, khảo sát đặc điểm địa hình, nh cảnh, hình thái cây, thụ mẫu cây, thu mẫu đắt và chụp hình

= Dt 2 (thing 3 - 4/2023): thu 2 lẫn, mỗi lần thu mẫu 2 ngày, bổ sung các mẫu

cây còn

2.1.2 Địa điễm nghiên cứu

Mẫu được thù tại 3 điểm thuộc huyện Tân Hưng, tỉnh Long An theo Bang 2.1

Bang 2.1 Ta d9 dja If3 dja diém thu mẫu cây

Xã Vĩnh Châu A, huyện Tân Nhàu 10574239." /10°44368°N lun Long An

Xã Vĩnh Châu A, huyện Tân Nhàu nước | 105°42003.5"E | 10°45'30.6"N Hung, Long An

Mo tron 105°4312.7"E | 10°4717.9°N ‘Xa Vinh Loi, huyện Tân Hung,

Long An

3.2 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

3.2.1 Quy trình nghiên cứu (Quan sit, chụp hình và ghỉ nhận đặc

điển hình thải sinh thi của cây

Khảo sắt một số chỉ iê sinh

“Thu thập các tài liệu có liên quan đến đẻ tài và tìm hiểu vẻ đặc điểm hình thái giải phẫu, hoạt tính kháng khuẩn của các cây trong họ cà phê

khí hậu của huyện Tân Hưng

Quan sát và nghiên cứu bản đồ tự nhiên, điều

trà khảo sát và hú

để định hướng cho việc đi

2.2.3 Phương pháp nghiên cứu ngoài thực địa

"Khảo sát một số yếu tố môi trường

Xée dink toa d6 vi ti thu mẫu bằng máy định vị GPS Lấy mẫu đất ở tổng 0 - 30 em dé phan tich mar sb tinh chit eta dt, Cée mit đất cho vào bao xốp ghỉ rõ độ sâu, địa điểm, ngây lấy mẫu và đem về phỏng thí nghiệm để đo chỉ tiêu sinh thái

‘Thu miu thực vật

Khảo sắt về dạng sống và hệ rễ của cây

Quan sat, mô tả các cơ quan sinh đường vả cơ quan sinh sản của những loài thực vật nghiên cứu Đo đếm các bộ phận liên quan,

“Chụp ảnh các đối tượng nghiên cứu trong điều kiện tự nhiên,

* Thụ mẫu cơ quan sinh dưỡng

"Đổi với mẫu lá: thụ 15 mẫu lá bánh ẻ (lá thứ 3, ính từ ngọn) ngoài sáng cùng hướng từ những cây khác nhau của mỗi loài; phân tích hình thái lá, sử dụng thước chỉa nhỏ nhất là 1 mm đo đạc các chỉ số kích thước lá (chiều đả lá, chiều rộng lá chiều dài cuống lá)

ĐÃI với mẫu thân: tha L5 mẫu từ những cây khác nhau của mỗi loài đ tiến bảnh nghiên cứu hình thái và cầu tạo giải phẫu thân

Đổi với mẫu rễ thu 15 mẫu từ những cây khác nhau của mỗi loài để tiền hành nghiên cứu hình thái, giải phẫu rễ

‘Cac miu lá, thân, rễ được ngâm trong ethanol T0° và được đưa về phòng thí nghiệm Sinh thái - Thực vật, Khoa Sinh học, Trường Đại học Sư phạm Thành phổ 'Hồ Chí Minh để tiến hành nghiên cứu đặc điểm cấu tạo giải phẫu + Thu miu co quan sinh sin

inh thai, ede thanh phin edu tao hoa

Hoa: thu mau dé tién hanh nghién ett

Qua: th miu, bao gdm quả chưa chín và quả lúc chín để tiễn hành quan sắt

bình thái Quan sát quả chín, rụng và nảy mầm trong tự nhiên

-33.4 Phương pháp nghiên cứu trong phòng thí nghiệm Phân tích đất

"Phân tích độ thành thục của đắt, pH đất, độ

thái - Thực vật Trường Đại học Sư phạm Thành phổ H Chí Minh điện tại phòng thí nghiệm Sinh

-# Xác định thành phần cơ giới đắt và hảm lượng chất h sỡ Mẫu đắt được gửi cho Viện Khoa học Kỹ thuật Nông nghiệp Miễn Nam phân tích thành phần cơ giới theo TCVN 8567:2010 [42] va him lượng chất hữu cơ theo

“TCVN 8941:2011 [43]

* Xée định độ pHụ,o và pHạa của mẫu đất [37]

'Cân 20 g đất mịn khô không khí cho vào bình có dung tích 100 mÌ miệng rộng

“Thêm 50 ml dung dich KCI (hay nude cit

Lắc xoáy bằng tay cho phân tán đất và

Đị yên trong 2 giờ (không quá 3 giờ), ếp tục lắc trên máy 30 phút Lắc xoáy lại 2 - 3 lần bằng tay cho phân tin huyền phù

Sau đó đo ngay bằng pH métđiện cực thủy tỉnh Vịt bằu điện cụ ở vít trừng

âm và trung điểm độ sâu của dung dích tong huyền phù

"Đọc số đo sau khi kim chỉ ồn định 30 giây

.%_ Xác định độ dẫn điện (EC) [44]

Can 30 g đắt mịn khô không khí cho vào bình có dung tích 250 mÍ miệng rộng

“Thêm vào 150 ml nước cắt

Lắc xoáy nhẹ bằng tay cho phân tán đắt và tiếp tục lắc trên máy 2

Để yên trong một giờ

Lọe qua giấy lọc chậm và mịn Nếu đục phải ọe lại hoặc tiễn hành li tâm

Đo EC trong dung địch đã lọc

.$ Xác định độ âm và hệ số khô kiệt của mẫu [44]

Cân khối lượng mẫu đất rước và sau khi sấy (đến khối lượng không đổi), tính

tì lệ % giữa hàm lượng nước có trong đất với %4 cc thểrấn cũa đất

Phan trăm độ im được tính theo công thức:

Sau đó đánh giá độ thành thục của đắt qua hệ số K K

Phương pháp nghiên cứu cầu tạo giái phẫu

-+ Phương pháp dém khí khổng

Chon 15 lá bánh tẻ từ những cây khác nhau, rửa sạch, lâu khô vả quét một lớp

eollodion lên mặt trên và mặt đưới Khi collodion khô, gỡ ra quan sắt trên kính hiển

vi với buồng đếm khí khổng Chụp hình biểu bì với lỗ khí trong một ö (1 mm?) dưới vật kính x10 và đếm số lượng lỗ khí có trong ô,

Xác định loại khí không theo Nguyễn Nghĩa Thìn (207) [45]

++ Phương pháp nghiên cứu cấu tạo giải phẫu

Dùng dao lam cắt lát mỏng các lá bánh tẻ, rễ cây và đoạn thân của các loài nghiên cứu Mỗi loài cắt 15 lá, 15 rễ cây và 15 thân cây từ những cây khác nhau Các mẫu lá và thân được nhuộm kép theo phương pháp của Trần Công Khánh (1981) 146}

Mẫu được ngẫm vio Javel trong 1Š phút để tẩy sạch nội chất của tế bảo; Rửa sạch mẫu bằng nước cất,

1% khoảng Š phút;

Sau đồ rửa lại bằng nước cất,

Ngắm mẫu vio acid ac

Nhudm miu v6i dung dich carmine 4% trong khoảng 10 phút; Rita Iai bang nước cất;

"Nhuộm xanh bằng dung djch xanh methylen 01% trong Khoding 10 gi

Rita sạch bằng nước cắt, Lên mẫu tiêu bản bằng nước cất hoặc glycerin, Phuong pháp đo trên kính hiển vĩ

Sử dụng phương pháp đo gián tiếp bằng cách so sánh kích thước của vật cẳn đo với một thước đo thị kinh được lắp thêm vào kính hiển vi Từ giá tị của mỗi khoảng cách trên thước đo này (đã được tính trước nhờ thước đo vật kính) sẽ suy ra kích

“Thước do vật kính trông g

tạ như phiến kính, ở chính giữa có khắc một thước

nhỏ Thước dài 1 mm, được chia thành 100 phần bằng nhau, mỗi khoảng cách trên

đồ đãi 10 mm,

Thước đo thị kính được lắp ở đầu ống mang thị kinh của kính hiển vị, trên có

100 vạch chỉa nhỏ

Trước hết xác định giá tỉ của mỗi vạch trên thước đo thị kính đinh bằng mm)

ở mỗi độ phóng to Khác nhau của kính hiển vỉ Mi ìn vậy ta đặt thước đo vật kính lên

bản kính rồi điều chỉnh để thấy rõ các vạch Lắp thước đo thị kính vào sao cho một

vạch trên thước đo thị kính trùng với một vạch trên thước đo vật kinh Tìm một vạch thứ hai no cũng trùng như vậy Ti số một vạch trên thước do tị kính lề

b

Trong đó đ: Trị số một vạch trên thước đo thị kính

a Số vạch cña thước đo vật kinh

b: Số vạch của thước đo thị kính

10: Giá trị một khoảng cách trên thước đo vật kính (mm) Bằng cách này xác định được trị số mỗi vạch trên trắc vỉ thị kính ở vậtính x40: mỗi vạch đài 3,5 mm

Bỏ thước đo vật kính ra và thay vào đồ tiêu bản của mẫu vit cin do

Vi tí đo độ dày các lớp mô của lá cắt ngang tùy thuộc vào kích thước lá, đo cách gân chính một khoảng a mm

Độ ly của các lớp mô trong cấu tạo thân cây được đo từ ngụ 'vào đến tâm lát cất ngang (chỉ đo bán kính)

ya vio ti liệu chuyên ngành để định loại các mẫu thực vật thu được [37], [32]

2.2.7 Phương pháp khảo sát hoạt tinh kháng khuẩn

Điều chế cao ethanol [52]

Mẫu lá và quả cây Nhàu và cây Nhâu nước, mẫu toàn thân Mơ tròn (mẫu cây) được thu hái tại khu vực huyện Tân Hưng, tỉnh Long An

"Mẫu cây (tách riêng lá, quả) sau khi thụ được đem rửa sịch và phơi cho rio

nước Sấy mẫu trong tủ sấy ở nhiệt độ 50°C đến khi mẫu khô đòn hoàn toàn, đem xay

thành bột mịn Ngâm 100 g bột mẫu trong 1000 mi dung dich ethanol 96% Sau

48 gids, dich chiết được lọc và loại bỏ cặn qua gidy loc Phan bot mau cdn lai tiép tue được ngâm trong dung dich ethanol 96° vi cing lệ như trên Quá tỉnh lặp lại 3 lần

(ti lệ khối lượng: thể tích tương đương 1:10)

Tình 2.3 Mẫu bột cây được ngâm tạo cao chiết ethanol

Các địch chiết

Sau 3 lần lọc, thu được tổng lượng dịch chiết mẫu là 500 ml thu được duổi kiệt dung môi bằng mấy cô quay chân không ở nhiệt độ 40*C — 55 sau cô quay phần dịch chiết được ip tục đỗ vào becher để trong tủ héa chit cho bay

.Vï khuẩn thử nghiệm gồm 2 nhóm: vi khuẩn Gram (+) va Gram (-) được phòng

„ Trường Đại học Sai Gan thí nghiệm Vĩ Sinh, Khoa Sư phạm Khoa học Tự Nhiê

Bacillus subtilis, Bacillus cereus, Nhom thit hai

cung cắp, Nhôm đầu tiên bao

chứa Pseudomonas aeruginosa Vì khuẩn được nuôi cấy trên môi trường LB ling va xác định mật độ tế bào bằng máy đo quang phổ ở bước sóng 600 nm và được điều chỉnh theo tiêu chuẩn MeEarland 0,5 tương ứng véi 1,5 x 108 CFU/mLva gọi là địch huyền phù vi khuẩn tiêu chuẩn dùng cho các thí nghiệm sau này [52]

"ảnh giá hoạt tính kháng khuẩn của dịch chiết lon [53]

Phương pháp khuếch tán giếng thạch được ấp dụng để xác định hoạt tính kháng

khuẩn của các dịch chiết ethanol,(heo quy tình sau

1 Hút 10 mÌ trộn đều vào crlen chứa 190 ml môi trường LB (nhiệt độ từ 40 - SỨC, thạch còn Ấm khi chạm tay vào, vẫn còn ở trạng thái lông); khi đó mật độ tế

LB đã trộn khuẩn Chở thạch đông lại

2 Dang ống thủy tỉnh đã tiệt trùng có đường kính 6 mm khoan vào lớp thạch đông tạo các giếng, mỗi địa gồm 4 giống

3, Bơm vào lỗ thạch 20 dung dịch cao chiết methanol ở các nằng độ khác nhau (200 myfml; 400 mefml; 600 mg/ml; S00 mgiml; 1000 mefml với ong mỗi là ethanol 70) Gidng a ứng âm Ta 20 pil ethanol 70; đối chứng dương là 10 yl kháng sinh Tetracycline va Gentamicin 1 mg/ml (hoa tan trong nude cat vô trùng)

“Thử nghiệm hoat tinh kháng khuẩn của cao ethanol đối với từng loại vi khuẩn được nín =3)

4 Gối giấy bảo các địa Pci và cho vào tủ lạnh ở nhiệt độ 5'C trong 3 giờ để

Kĩ thuật đo: Chụp hình đĩa Petri véi thước kế trên phông nền đen, do đường kính vòng vô khuẩn bằng phần mềm IMagef V, 1.52P

Băng 2.2 Đánh giá mức độ của đường kính vòng vô khuẩn J48]

Mite dj tie dng Đường kính vòng vô khuẩn

"Mình 2.5 Mô tả cách do vòng kháng khuẩn 2.2.8 Xử lí thắng kê

Sử dụng các phẫn mềm Excel, Siagraphics Centurion XV, SPSS vi phần mềm TMage) V 1.52P để xử lí các s