TỔNG QUAN
Tổng quan về mangiferin
1.1.1 Cấu tạo hoá học và tính chất lý, hoá
1.1.1.1 Công thức, tên khoa học
Hình 1.1 Công thức hoá học của mangiferin
Công thức phân tử: C19H18O11 Khối lượng phân tử: 422,2
Tên khoa học: 2-C-β-D-glucopyranozido-1,3,6,7-tetrahydroxyxanthon [3]
Trạng thái tồn tại: bột kết tinh mịn, màu vàng ánh lục, gần như không mùi
Độ tan: hơi tan trong hỗn hợp aceton - nước (1 : 1), thực tế không tan trong nước, ethanol 96% và cloroform
Nhiệt độ nóng chảy: khoảng 271 o C Hệ số phân bố dầu/nước (logP): 2,73
Mangiferin là một đa acid yếu, giá trị pKa là 6,52; 7,97; 9,44; 12,10 [22]
Dược động học của mangiferin ở người phù hợp với mô hình không ngăn Sau khi uống 0,9 g mangiferin khoảng 1 giờ thì nồng độ mangiferin trong huyết tương người đạt 38,64 ± 6,75 ng/mL và thời gian bán thải (t1/2) là 7,85 ± 1,72 giờ [23] Ở chuột, sau 0,5 giờ tiêm tĩnh mạch với liều 50 mg/kg, nồng độ mangiferin trong võng mạc đạt 5,69 ± 1,48 μg/mL và sau 5,0 giờ giảm xuống còn 0,30 ± 0,02 μg/mL [24]
Mangiferin có thể vượt qua hàng rào máu - võng mạc [24], khó vượt qua hàng rào máu não, và được phát hiện ở các cơ quan tim, ruột non, dạ dày, thận, gan, phổi và lá lách Mangiferin hấp thu kém ở ruột, phần không được hấp thu có thể bị phân hủy bởi vi khuẩn đường ruột và thủy phân bởi các enzym đường tiêu hóa Con đường thải trừ chính của MGF là chuyển hóa qua gan và thận [28] Quá trình chuyển hóa pha I gồm các phản ứng oxy hóa, khử hóa, thủy phân và quá trình chuyển hóa pha II là phản ứng liên hợp, bao gồm glycosyl hóa, sulfat hóa, glucoronid hóa, tạo thành các chất còn hoạt tính, chủ yếu là noratyriol, dihydroxyxanthon và trihydroxyxanthon [45]
Mangiferin có tác dụng kháng virus herpes, cả đối với chủng HSV-1 (AR-29) kháng acyclovir và chủng HSV-2 [39], [46] Mangiferin ức chế chọn lọc sự nhân lên của virus mà không gây độc tính đáng kể cho vật chủ Cơ chế hoạt động của mangiferin khác cơ chế hoạt động của acyclovir Tác dụng diệt virus của mangiferin liên quan đến sự biến đổi hóa học hoặc che giấu các protein vỏ thiết yếu Mangiferin cũng ức chế sự hấp phụ của virus vào các thụ thể tế bào Khi thử hoạt tính in vivo trên chuột với công thức mangiferin 0,7% bôi tại chỗ, công thức này ức chế AR-29 một cách hiệu quả, làm giảm các tổn thương, làm chậm sự phát triển và tăng cường khả năng hồi phục của tổn thương so với nhóm chứng [39] Đối với HSV-2, mangiferin không trực tiếp làm bất hoạt mà ức chế giai đoạn muộn trong quá trình sao chép HSV-2 [46]
Ngoài ra, mangiferin ngày càng được quan tâm do có nhiều tác dụng dược lý, như: chống viêm, chống oxy hóa, bảo vệ thần kinh, và đóng vai trò quan trọng trong phòng ngừa và điều trị ung thư, thoái hóa thần kinh Bên cạnh đó, mangiferin giúp giảm viêm, giảm sự di căn ở các tế bào ác tính và cải thiện rối loạn nhận thức [25], [45]
1.1.4 Một số chế phẩm trên thị trường Ở Việt Nam, một số sản phẩm chứa mangiferin đang lưu hành với các dạng bào chế và hàm lượng khác nhau: Mangoherpin (kem bôi da 2%, 2,5%, 5%; viên nang cứng
100 mg, 200 mg - NSX BV Pharma); Mangifin ext (kem bôi da 3% - NSX Medipharco); Manginozel (dung dịch vệ sinh phụ nữ, chai 100 mL - NSX SJK Pharma); Mangizeni (gel vệ sinh phụ nữ 0,5%, chai 60 ml - NSX Nature Pharma); Mydugyno (gel vệ sinh phụ nữ 0,5%, chai 120 mL, 180 mL - NSX Nature Pharma); Manginovim (gel vệ sinh phụ nữ 0,2%, chai 60 mL, 120 mL - NSX Nature Pharma)
1.2 Các đặc điểm sinh học của mắt liên quan đến điều trị bệnh tại mắt
Mắt là cơ quan nhìn rất quan trọng, gồm nhãn cầu và thần kinh thị giác Mắt được cấu tạo bởi một hệ thống quang - sinh học phức tạp Các bệnh lý có thể xuất hiện tại các bộ phận của mắt: bờ mi, giác mạc, kết mạc, võng mạc, các tuyến và dịch, Bệnh rất đa dạng và phức tạp, như: viêm, áp xe, loét và chủ yếu do virus, vi khuẩn hoặc ký sinh trùng gây ra Ngoài ra, còn có các bệnh về khúc xạ, khối u và bệnh mạch máu [1] Để điều trị bệnh tại mắt, nhiều dạng thuốc dùng tại chỗ ở mắt được nghiên cứu, phát triển và sử dụng Đây là đường dùng thuốc được ưu tiên lựa chọn do có các ưu điểm: hạn chế tác dụng không mong muốn toàn thân của thuốc, thuận tiện, dễ sử dụng và bệnh nhân có thể tự dùng thuốc theo chỉ định Tuy nhiên, thuốc có sinh khả dụng thấp, dễ bị thải trừ do hoạt động sinh lý của mắt Do đó, bệnh nhân phải tăng số lần sử dụng thuốc trong ngày Mặt khác, dược chất rất khó hấp thu đến phần sau của nhãn cầu [1]
Do vậy, để đảm bảo hiệu quả điều trị bệnh, các dạng thuốc dùng tại chỗ ở mắt cần đảm bảo các điều kiện sau:
- Có đặc tính kết dính thích hợp để cải thiện khả năng lưu giữ thuốc ở mắt, từ đó làm tăng sinh khả dụng của thuốc
- Hạn chế hấp thu toàn thân gây ra nhiều tác dụng không mong muốn
- Không gây mờ hay kích ứng mắt, đảm bảo sự thoải mái cho người bệnh
- Giảm số lần dùng thuốc để cải thiện sự tuân thủ của người bệnh [8] Đặc điểm sinh lý làm giảm sinh khả dụng khi dùng thuốc tại mắt.
Cấu tạo của mắt người nhìn chung có thể được chia thành hai phần: 1) phần trước bao gồm giác mạc, kết mạc, mống mắt, thể mi, thủy dịch và thủy tinh thể; 2) phần sau gồm có củng mạc, màng mạch, võng mạc và thủy tinh thể [10] Hiệu quả điều trị của các thuốc dùng tại chỗ ở mắt bị ảnh hưởng nhiều bởi đặc điểm cấu tạo và sinh lý ở phần trước của mắt
Kết mạc là niêm mạc nối liền mi mắt và giác mạc, gồm hai phần: phần lót trong của mi mắt và phần tương ứng với mặt ngoài của tròng mắt trắng Vùng nối của hai phần tạo nên túi cùng kết mạc Kết mạc liên quan đến việc hình thành và duy trì màng nước mắt trước giác mạc và bảo vệ mắt [1], [12] Kết mạc có nhiều mạch máu và có tính thấm tốt với nhiều dược chất Thuốc được hấp thu qua kết mạc có thể đi vào vòng tuần hoàn làm giảm sinh khả dụng của thuốc với dược chất cần thấm sâu vào các tổ chức bên trong giác mạc, trừ trường hợp đích tác dụng của thuốc chính là kết mạc [1]
Giác mạc là một mô trong suốt về mặt quang học truyền hình ảnh đến phía sau của mắt và bao phủ khoảng 1/6 tổng diện tích bề mặt nhãn cầu [12] Bề mặt giác mạc có mật độ thần kinh cao nhất trong tất cả các cơ quan của cơ thể người Do đó, giác mạc rất nhạy cảm và dễ bị kích ứng Giác mạc gồm nhiều lớp mô có tính thân dầu và thân nước khác nhau, ngoài cùng là lớp biểu mô (thân dầu) rồi đến lớp đệm (thân nước) và trong cùng là lớp nội mô (thân dầu) Mặc dù, giác mạc là hàng rào cản trở sự hấp thu dược chất, chỉ những dược chất vừa thân nước, vừa thân lipid và có độ tan phù hợp mới dễ thấm qua giác mạc [1]
Thủy dịch là phần dịch trong hố tiền phòng và hậu phòng, và là nơi tập trung dược chất sau khi hấp thu qua giác mạc để chuyển đến các bộ phận khác của mắt Vì vậy, các đặc tính của thủy dịch tác động rất lớn đến sinh khả dụng của thuốc dùng tại chỗ ở mắt
Do có thể tích khoảng 100 - 250 μL, nồng độ dược chất trong thủy dịch rất thấp nên ít chịu tác động về mặt hóa học Tuy nhiên, tốc độ thay thế thủy dịch tương đối lớn (khoảng
2 - 3 μL/phút) khiến nồng độ dược chất giảm nhanh Trong trường hợp, dược chất chậm
5 hấp thu qua giác mạc hoặc không duy trì được thuốc trước giác mạc thì sẽ hạn chế hiệu quả điều trị của thuốc [1]
Hiện tượng chớp mắt là hoạt động sinh lý của mắt Khi dùng thuốc, phản xạ chớp mắt sẽ nhanh chóng đẩy phần lớn thuốc ra ngoài hoặc đẩy xuống ống mũi lệ, làm lượng thuốc trước giác mạc giảm rất nhiều [1] Điều này khiến thời gian lưu thuốc trước giác mạc ngắn, tổng lượng thuốc lưu trữ ít, hạn chế hiệu quả hấp thu thuốc qua giác mạc [8] Đặc điểm của hệ thống nước mắt: nước mắt là một dịch trong suốt, có 98,2% là nước và các thành phần khác gồm protein, muối khoáng, đường, lipid và enzym Nước mắt có pH khoảng 7,14 - 7,82 và khả năng đệm trong khoảng pH 4 - 10 Với thành phần của dịch nước mắt chứa protein như albumin, globulin và lysogym nên rất có thể xảy ra hiện tượng tạo phức giữa dược chất - protein, dẫn tới làm giảm sự hấp thu của dược chất vào trong niêm mạc mắt do chỉ dược chất ở dạng tự do mới được hấp thu [1]
Chính vì những lý do trên, việc hấp thu dược chất theo đường dùng tại mắt là rất thấp, sinh khả dụng của dung dịch nhỏ mắt thường < 5% Việc cải thiện đặc tính lưu thuốc tại mắt là một vấn đề cốt lõi trong việc tăng hấp thu và hiệu quả điều trị bệnh Trên thực tế hiện nay có nhiều dạng bào chế được thiết kế với mục đích trên, như bào chế dưới dạng hỗn dịch, nhũ tương, hệ tiểu phân nano, mỡ hoặc gel tra mắt Tuy nhiên các biện pháp này có đặc điểm chung là gây bất tiện khi sử dụng, làm giảm tầm nhìn của bệnh nhân và khó đảm bảo mức độ tuân thủ điều trị Hệ điều trị thuốc đặt tại mắt nổi lên là một hướng đi mới giúp tăng sự lưu thuốc trước giác mạc và thấm thuốc qua giác mạc, có thể áp dụng với rất nhiều dược chất, bao gồm chất phân cực và ít phân cực, thân thiện với cơ quan mắt [1], [10], [18], [19]
1.3 Tổng quan về thuốc đặt tại mắt
Thuốc đặt tại mắt là dạng thuốc vô trùng, mỏng, chứa dược chất, dạng rắn hoặc bán rắn được đặt vào túi cùng kết mạc Dạng bào chế này có kích thước và hình dạng được thiết kế đặc biệt nhằm mục đích ứng dụng trong nhãn khoa Dược chất được kết hợp dưới dạng phân tán hoặc dung dịch trong polyme Thuốc được giải phóng với tốc độ được xác định trước và có thể dự đoán được [10], [31], [32]
1.3.2 Ưu, nhược điểm của thuốc đặt tại mắt
Mỗi loại thuốc đặt ở mắt là sự kết hợp giữa các ưu điểm của dạng bào chế và sự cố gắng hạn chế những nhược điểm [32]
1.3.2.1 Ưu điểm của thuốc đặt tại mắt
- Kéo dài thời gian lưu giữ của thuốc tại mắt, tăng sinh khả dụng của thuốc
- Giải phóng thuốc với tốc độ chậm và hằng định
- Khả năng giải phóng thuốc kéo dài, do đó có hiệu quả tốt hơn
- Liều lượng chính xác, được giữ lại hoàn toàn tại vị trí dùng thuốc
- Giảm hấp thu toàn thân, hạn chế tác dụng không mong muốn đối với thị giác và toàn thân
- Cải thiện sự tuân thủ của bệnh nhân do giảm số lần dùng thuốc
- Hạn chế sử dụng chất bảo quản, giảm nguy cơ kích ứng
- Ổn định hơn so với thuốc nhỏ mắt, tăng thời hạn sử dụng so với dạng dung dịch nước [12], [31], [32], [34]
1.3.2.2 Nhược điểm của thuốc đặt tại mắt
Tổng quan về thuốc đặt tại mắt
Thuốc đặt tại mắt là dạng thuốc vô trùng, mỏng, chứa dược chất, dạng rắn hoặc bán rắn được đặt vào túi cùng kết mạc Dạng bào chế này có kích thước và hình dạng được thiết kế đặc biệt nhằm mục đích ứng dụng trong nhãn khoa Dược chất được kết hợp dưới dạng phân tán hoặc dung dịch trong polyme Thuốc được giải phóng với tốc độ được xác định trước và có thể dự đoán được [10], [31], [32]
1.3.2 Ưu, nhược điểm của thuốc đặt tại mắt
Mỗi loại thuốc đặt ở mắt là sự kết hợp giữa các ưu điểm của dạng bào chế và sự cố gắng hạn chế những nhược điểm [32]
1.3.2.1 Ưu điểm của thuốc đặt tại mắt
- Kéo dài thời gian lưu giữ của thuốc tại mắt, tăng sinh khả dụng của thuốc
- Giải phóng thuốc với tốc độ chậm và hằng định
- Khả năng giải phóng thuốc kéo dài, do đó có hiệu quả tốt hơn
- Liều lượng chính xác, được giữ lại hoàn toàn tại vị trí dùng thuốc
- Giảm hấp thu toàn thân, hạn chế tác dụng không mong muốn đối với thị giác và toàn thân
- Cải thiện sự tuân thủ của bệnh nhân do giảm số lần dùng thuốc
- Hạn chế sử dụng chất bảo quản, giảm nguy cơ kích ứng
- Ổn định hơn so với thuốc nhỏ mắt, tăng thời hạn sử dụng so với dạng dung dịch nước [12], [31], [32], [34]
1.3.2.2 Nhược điểm của thuốc đặt tại mắt
- Ảnh hưởng tới tầm nhìn Thể chất rắn chắc gây cảm giác khó chịu trong mắt, tạo rào cản khó khăn về thể chất và tâm lý đối với sự tuân thủ của người bệnh
- Dịch chuyển tới nhiều vị trí trong mắt khiến việc loại bỏ thuốc gặp khó khăn
- Nguy cơ vô tình bị loại bỏ khi ngủ hoặc dụi mắt
- Khó khăn trong việc đặt và loại bỏ (với dạng không tan)
Một số nhược điểm có thể khắc phục bằng cách hướng dẫn và động viên tinh thần bệnh nhân [34]
1.3.3 Phân loại các dạng thuốc đặt tại mắt
Thuốc đặt tại mắt được phân loại dựa vào độ tan, bao gồm: hệ cốt không tan, hệ cốt hòa tan và hệ cốt ăn mòn sinh học [32] Việc giải phóng thuốc từ hệ cốt phụ thuộc vào sự hòa tan, khuếch tán, thẩm thấu và ăn mòn sinh học của thuốc
Dạng bào chế này được làm từ các polyme không tan trong nước Dựa vào cơ chế giải phóng thuốc, có thể phân thành hệ khuếch tán, hệ thẩm thấu và kính áp tròng mềm
- Hệ khuếch tán: bao gồm một khoang chứa thuốc đặt trong một màng bán thấm hoặc màng vi xốp được thiết kế đặc biệt để đảm bảo thuốc khuếch tán ra khỏi hệ với tốc độ được xác định chính xác Tốc độ giải phóng thuốc được kiểm soát bằng cách khuếch tán qua màng Sự giải phóng thuốc từ hệ ảnh hưởng bởi dịch nước mắt thấm qua màng
- Hệ thẩm thấu: Phần trung tâm của hệ được bao quanh bởi một phần ngoại vi Hệ được chia thành hai loại:
+ Loại 1: Phần trung tâm gồm một khoang duy nhất, có thể có hoặc không có một chất tan thẩm thấu được phân tán qua một nền polyme Do đó, thuốc được bao quanh bởi polyme dưới dạng các hạt nhỏ rời rạc Phần ngoại vi bao gồm một lớp màng polyme bán thấm không hòa tan
7 + Loại 2: Phần trung tâm gồm hai khoang riêng biệt Thuốc và các chất tan thẩm thấu được đặt trong hai khoang này Khoang chứa thuốc được bao quanh bởi một màng không thấm đàn hồi và khoang chứa chất tan thẩm thấu được bao quanh bởi màng bán thấm Phần ngoại vi tương tự loại 1
- Kính áp tròng mềm: cấu tạo bởi liên kết cộng hóa trị ưa nước hoặc kỵ nước tạo thành ma trận ba chiều có khả năng giữ nước, dung dịch chất tan trong nước hoặc chất rắn Tốc độ giải phóng thuốc khỏi hệ ban đầu rất nhanh, sau đó giảm dần theo cấp số nhân Việc thay đổi cách đưa dược chất vào dạng bào chế hoặc thêm thành phần kỵ nước có thể làm giảm tốc độ giải phóng thuốc [31], [32]
Hệ cốt hòa tan có đặc điểm là hòa tan hoàn toàn nên không cần thao tác loại bỏ cốt sau khi thuốc giải phóng hết Dựa vào loại polyme sử dụng, hệ được chia thành: hệ sử dụng polyme tự nhiên (ví dụ: collagen); hệ sử dụng polyme tổng hợp (polyvinyl alcol) hoặc bán tổng hợp (các dẫn xuất của cellulose như: HPMC, HPC, MC)
Sự giải phóng thuốc diễn ra khi nước mắt thấm vào cốt gây ra sự giải phóng thuốc bằng cách khuếch tán và tạo thành một lớp gel xung quanh hệ cốt Quá trình gel hóa này khiến thuốc tiếp tục được giải phóng, nhưng vẫn được kiểm soát bằng cơ chế khuếch tán Sự hòa tan thực sự xảy ra chủ yếu thông qua sự trương nở của polyme [31], [32]
1.3.3.3 Hệ cốt ăn mòn sinh học
Thuốc được giải phóng từ hệ cốt ăn mòn sinh học thông qua sự tiếp xúc của cốt với dịch nước mắt, gây ra sự ăn mòn sinh học bề mặt cốt Sự giải phóng thuốc được kiểm soát bằng phản ứng thủy phân hoặc phản ứng với sự xúc tác của enzym dẫn đến sự hòa tan polyme hoặc phân hủy thành các phân tử nhỏ hơn, hòa tan trong nước Sau khi sử dụng, không cần thao tác loại bỏ thuốc khỏi mắt [12], [31], [32]
Các phương pháp chính có thể được dùng để bào chế hệ đặt tại mắt là phương pháp sử dụng kĩ thuật đun chảy, phương pháp sử dụng kĩ thuật bay hơi dung môi và phương pháp in 3D [14], [26], [30], [35], [41]
Công nghệ đun chảy được xếp vào nhóm “công nghệ xanh” và ngày càng thu hút được sự quan tâm trong ngành dược do kỹ thuật này mang lại nhiều lợi ích, áp dụng được với nhiều loại dược chất có độ tan khác nhau Bản chất của phương pháp đun chảy dựa trên sự nóng chảy của polyme tạo cốt ở nhiệt độ cao và rắn hóa khi hạ nhiệt độ Đun chảy là một quy trình hiệu quả, không cần dung môi, do đó yêu cầu ít giai đoạn hơn so với các kỹ thuật khác và không gây ô nhiễm môi trường Kỹ thuật này có thể sản xuất
8 các công thức có hàm lượng thuốc cao với đặc tính giải phóng mong muốn và đạt được độ đồng đều hàm lượng tốt do sự pha trộn chặt chẽ của các thành phần Bên cạnh đó, đun chảy cho phép thay đổi dược chất sang dạng vô định hình hoặc phân tán dược chất thành các hạt rất nhỏ, điều này có thể giúp tăng cường sinh khả dụng, giảm tác dụng phụ và cải thiện sự tuân thủ của bệnh nhân Đồng thời, các dạng bào chế có hình dạng mong muốn có thể được sản xuất dễ dàng bằng quy trình này (hệ đặt, viên nén, hạt, viên, màng, mô cấy, v.v.) [9] Thêm vào đó, các công đoạn sản xuất có ít nguy cơ nhiễm khuẩn do được thực hiện ở môi trường khô và nhiệt độ tương đối cao, vì vậy có thể giảm thiểu nguy cơ nhiễm vi sinh vật trong quá trình sản xuất, không cần bước làm khô giúp tiết kiệm thời gian Ngoài ra, phương pháp này không sử dụng nước và dung môi nên có thể áp dụng với dược chất nhạy cảm với ẩm [14], [26], [41]
Phương pháp đun chảy bao gồm hai kỹ thuật cán nhiệt và đùn nóng chảy
Phương pháp cán nhiệt thích hợp với quy mô nhỏ, nhằm mục đích nghiên cứu, thường áp dụng trong sàng lọc các thành phần của công thức Đối với kỹ thuật này, hỗn hợp vật lý được trộn đều, đun nóng rồi đưa vào khuôn, tiến hành gia nhiệt và nén ép để làm nóng chảy Sau khi làm nguội, các miếng chèn được cắt, tạo hình với kích thước phù hợp [14]
NGUYÊN LIỆU, THIẾT BỊ, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
Nguyên vật liệu, thiết bị
Bảng 2.1 Các nguyên liệu và hoá chất chính sử dụng trong thực nghiệm
STT Nguyên liệu Tiêu chuẩn Xuất xứ
Công ty Cổ phần Dược Nature Việt Nam
3 Acid acetic Phân tích Trung Quốc
4 Butyl hydroxy anisol Phân tích Mỹ
5 Dinatri ethylenediamin tetraacetic acid dihydrat Phân tích Trung Quốc
6 Dinatri hydrophosphat dihydrat Phân tích Trung Quốc
7 Dinatri hydrophosphat dodecahydrat Phân tích Trung Quốc
8 Ethyl cellulose N7 USP/NF 43 Colorcon -
9 Glycerin Phân tích Việt Nam
10 Hydroxy propyl cellulose USP/NF 43 Thuỵ Sĩ
Các tá dược khác: Acid hydroclorid, natri hydroxyd đạt tiêu chuẩn phân tích, nguồn gốc Trung Quốc; castor wax đạt tiêu chuẩn nhà sản xuất, nguồn gốc BASF - Đức; cetosteryl alcol đạt tiêu chuẩn NSX, nguồn gốc Croda - Singapore; acid stearic, dibutyl phthalat, Eudragit L100, polyethylen glycol 400, triethyl citrat đạt tiêu chuẩn NSX, nguồn gốc Trung Quốc; ethanol 96% đạt tiêu chuẩn NSX, nguồn gốc Việt Nam; ethyl cellulose N14, ethyl cellulose N20 đạt tiêu chuẩn NSX, nguồn gốc Colorcon - Trung Quốc; glycerin mono stearat đạt tiêu chuẩn NSX, nguồn gốc Gattefossé - Pháp; hydroxy propyl methyl cellulose acetat succinat đạt tiêu chuẩn NSX, nguồn gốc Mỹ; mannitol, propylen glycol, sorbitan monooleat đạt tiêu chuẩn NSX, nguồn gốc Sinagapore; acid polylactic đạt tiêu chuẩn phân tích, nguồn gốc Trung Quốc
Bảng 2.2 Thiết bị, dụng cụ sử dụng trong thực nghiệm
STT Tên thiết bị Model Xuất xứ
1 Hệ thống sắc ký lỏng hiệu năng cao Agilent 1200 Agilent Technologies
2 Hệ thống thử giải phóng kiểu buồng dòng chảy Nội bộ Việt Nam
4 Máy đo áp suất thẩm thấu OSMOMAT 3000 basic Đức
5 Máy đo pH FIVE EASY FE20 Mettler Toledo -
6 Máy khuấy từ IKA RH basic 1 Malaysia
7 Máy phân tích nhiệt DSC 1 StarSystem Metler Toledo - Thụy
8 Máy phân tích nhiệt TGA TGA/DSC 1 Star
9 Thiết bị đồng nhất hóa chất dẻo Nội bộ Việt Nam
10 Thiết bị đùn ép Nội bộ Việt Nam
11 Thiết bị đùn trục vít đơn Nội bộ Việt Nam
Các thiết bị khác: bể siêu âm Wiseclean (model: WUC - A01H, xuất xứ: Đài Loan); cân phân tích (model: ES-2255M-DR, xuất xứ: Precisa - Thuỵ Sỹ); cân phân tích (model: AB204, xuất xứ: Mettler Toledo - Thuỵ Sỹ).
Nội dung nghiên cứu
- Sàng lọc polyme và chất hoá dẻo thích hợp để bào chế hệ cốt khuếch tán đặt tại mắt chứa MGF
- Lựa chọn công thức và các thông số kỹ thuật bào chế hệ cốt khuếch tán đặt tại mắt chứa MGF bằng phương pháp đùn nóng chảy
- Đánh giá ảnh hưởng của các thành phần trong công thức bào chế hệ cốt đến khả năng giải phóng in vitro và độ trương nở
- Đánh giá một số đặc tính của hệ cốt chứa MGF bào chế được.
Phương pháp nghiên cứu
2.3.1 Phương pháp bào chế hệ cốt khuếch tán đặt tại mắt chứa MGF
Hệ cốt khuếch tán đặt tại mắt chứa MGF được bào chế theo kỹ thuật đùn nóng chảy hỗn hợp dược chất - tá dược, trong đó việc sàng lọc thành phần công thức được thực hiện trên kỹ thuật cán nhiệt đã được sử dụng ở các nghiên cứu trước [5], [6], [7]
Hệ cốt chứa MGF được bào chế qua 2 giai đoạn Giai đoạn 1 là đồng nhất hoá chất dẻo sử dụng phương pháp cán nhiệt Giai đoạn 2 là đùn tạo hình sợi cho hệ cốt
- Bước 1: Trộn đồng lượng tạo hỗn hợp bột đồng nhất Tiến hành trộn các thành phần trong công thức bào chế theo nguyên tắc trộn đồng lượng bằng phương pháp chày
- cối, thực hiện liên tục trong khoảng 5 phút Hỗn hợp bột được trộn và bảo quản trong điều kiện độ ẩm thấp.
- Bước 2: Đồng nhất hóa hỗn hợp bột bằng phương pháp cán nhiệt Quá trình này được thực hiện trên thiết bị đồng nhất hóa chất dẻo (hình 2.1) Tiến hành gia nhiệt, cài đặt nhiệt độ mục tiêu cho đĩa tĩnh và nhiệt độ được giữ ổn định ít nhất 20 phút Hỗn hợp bột được đưa vào giữa hai đĩa, sau đó điều khiển tốc độ và chiều quay của mô tơ để đồng nhất hóa, hỗn hợp bột được chuyển sang thể mềm dưới tác động của nhiệt độ Việc xoay
16 ép đĩa trên được duy trì với tốc độ 150 vòng/phút trong 45 giây Sản phẩm trung gian có dạng tấm mỏng, được làm nguội tấm mỏng về nhiệt độ phòng chờ tạo hình
Hình 2.1 Sơ đồ các bộ phận chính của thiết bị đồng nhất hóa chất dẻo [5] 1 Mô tơ truyền động; 2 Đĩa xoay; 3 Đĩa tĩnh; 4 Cảm biến nhiệt; 5 Bộ gia nhiệt; 6 Rơ le tự động
- Bước 3: Đùn tạo hình cho hệ đặt tại mắt Quá trình này được thực hiện trên thiết bị đùn ép (hình 2.2) Các tấm mỏng được cắt nhỏ đến kích thước phù hợp để đưa vào trong trục vít và khoang chứa mẫu Bật thiết bị và cài đặt nhiệt độ mục tiêu, nhiệt độ được giữ ổn định trong khoảng 15 phút Khi đạt đến nhiệt độ mục tiêu, tiến hành xoay nhanh trục vít để đưa hệ cốt vào khoang chứa mẫu Khi hệ cốt được làm mềm bởi nhiệt độ và đi ra ở bộ phận tạo hình, xoay trục vít với tốc độ ổn định Đoạn cốt hình trụ tròn được làm nguội đến nhiệt độ phòng, bảo quản tránh ẩm trong túi chứa silicagel
Hình 2.2 Sơ đồ các bộ phận của thiết bị đùn ép [5] 1.Trục vít xoay; 2.Khoang chứa mẫu; 3.Khuôn, đường kính lỗ 1,5 mm; 4.Cảm biến nhiệt; 5.Bản điện trở; 6.Rơ le tự động
- Bước 4: Tạo hình cho hệ đặt tại mắt Cắt sợi đùn thành các đơn vị thuốc đặt tại mắt có hình trụ với kích thước xác định Các đơn vị hệ đặt tại mắt này sau đó được bảo quản trong bình hút ẩm.
2.3.1.2 Phương pháp đùn nóng chảy
Quá trình bào chế hệ cốt đặt tại mắt chứa MGF được tiến hành trên thiết bị đùn trục vít đơn, công suất 40 W Cấu tạo của thiết bị đùn trục vít đơn được mô tả trên hình 2.3
- Bước 1: Trộn đồng lượng tạo hỗn hợp bột đồng nhất Tiến hành trộn các thành phần trong công thức bào chế theo nguyên tắc trộn đồng lượng bằng phương pháp chày
- cối, thực hiện liên tục trong khoảng 5 phút Hỗn hợp bột được trộn và bảo quản trong điều kiện độ ẩm < 5%.
- Bước 2: Đùn nóng chảy Bật thiết bị và cài đặt nhiệt độ mục tiêu, nhiệt độ được giữ ổn định trong khoảng 30 phút Khi đạt đến nhiệt độ mục tiêu, tiến hành đưa hỗn hợp bột vào phễu chứa mẫu với tốc độ xác định Trục vít xoay với tốc độ ổn định đẩy khối
17 bột vào khoang chứa mẫu Khối bột được làm chảy bởi nhiệt và đi ra ở bộ phận tạo hình dưới dạng sợi hình trụ Thu đoạn sợi và làm nguội đến nhiệt độ phòng Bảo quản tránh ẩm trong túi chứa silicagel
- Bước 3: Tạo hình cho hệ đặt tại mắt Cắt sợi đùn thành các đơn vị thuốc đặt tại mắt có hình trụ với kích thước xác định Các đơn vị hệ đặt tại mắt này sau đó được bảo quản trong bình hút ẩm.
Hình 2.3 Sơ đồ các bộ phận của thiết bị đùn trục vít đơn 1 Mô tơ; 2 Trục vít xoay; 3 Phễu chứa bột; 4 Cảm biến nhiệt; 5 Bản điện trở; 6 Khuôn, đường kính lỗ 1,5 mm;
7 Khoang chứa bột; 8 Bộ điều khiển
2.3.2 Phương pháp khảo sát khả năng tạo cốt
- Nguyên tắc: dựa trên khả năng tạo cốt của một số polyme và chất hoá dẻo
THỰC NGHIỆM, KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN
Kết quả nghiên cứu khả năng bào chế thuốc đặt tại mắt chứa mangiferin
3.1.1 Sàng lọc polyme và chất hoá dẻo
Tiến hành khảo sát với các polyme và chất hoá dẻo khác nhau theo phương pháp đã nêu ở mục 2.3.2 và mục 2.3.3 Kết quả khảo sát khả năng tạo cốt (thông qua xác định nhiệt độ mềm hóa và đặc tính sản phẩm cán nhiệt) được trình bày trong bảng 3.1
Bảng 3.1 Kết quả khảo sát ảnh hưởng của polyme và chất hoá dẻo đến khả năng mềm hoá
Polyme Chất hoá dẻo Nhiệt độ ( o C) Chất hoá dẻo Nhiệt độ ( o C)
TEC - - + + Glycerin mono stearat - - + + Acid stearic - - + + Cetosteryl alcol - - + +
Ghi chú: + có khả năng tạo cốt polyme, - không có khả năng tạo cốt polyme
Kết quả sàng lọc cho thấy các polyme được khảo sát đều có khả năng tạo cốt khi được phối hợp với chất hoá dẻo phù hợp Tuy nhiên, Eudragit L100 và PLA chỉ tạo được cốt ở nhiệt độ cao ≥ 150 o C do đó không phù hợp cho mục đích nghiên cứu EC N7, EC N14 và EC N20 đều có khả năng tạo cốt tốt khi phối hợp với chất hoá dẻo phù hợp, có tính tương thích sinh học cao, ổn định (trong khoảng pH 3-11), có khả năng tương thích với nhiều loại tá dược và hầu hết các chất hóa dẻo Do có đặc tính kỵ nước, ethyl cellulose giúp làm giảm sự xâm nhập của nước vào hệ cốt, từ đó kéo dài giải phóng thuốc [21], [38], [44] EC cũng giúp giảm biến dạng hệ cốt đặt tại mắt dạng hòa tan [29] Với mục đích bào chế hệ đặt tại mắt chứa MGF theo cơ chế khuếch tán, ethyl cellulose được lựa chọn làm polyme tạo cốt Dựa vào kết quả khảo sát và điều kiện phòng thí
24 nghiệm, lựa chọn EC N7 và các chất hoá dẻo gồm hai chất hoá dẻo thân nước: glycerin và PEG 400, hai chất hoá dẻo thân dầu: DBP và span 80 để tiếp tục khảo sát
3.1.2 Ảnh hưởng của thành phần công thức đến khả năng giải phóng
Các chất được chọn để khảo sát khả năng giải phóng MGF từ hệ cốt khuếch tán gồm các chất hoá dẻo (glycerin, PEG 400, DPB, span 80) và tác nhân điều khiển giải phóng (HPC EF, HPMC AS, PEG 400, mannitol) (bảng 3.2) Tiến hành bào chế các mẫu theo phương pháp cán nhiệt và đánh giá khả năng giải phóng theo phương pháp kiểu buồng dòng chảy.
Bảng 3.2 Thành phần công thức khảo sát CT 1 – CT 11 có thay đổi chất hóa dẻo và chất điều khiển giải phóng
Chất hóa dẻo Chất điều khiển giải phóng
Thành phần khác Glycerin PEG
- Ảnh hưởng của chất hóa dẻo:
Hình 3.1 Đồ thị giải phóng MGF từ các mẫu bào chế theo công thức CT1, CT2, CT3 và
CT4 sử dụng thiết bị kiểu buồng dòng chảy (n=3) Ảnh hưởng của chất hóa dẻo: Kết quả khảo sát hình 3.1 cho thấy hai mẫu bào chế theo công thức CT 1 và CT 2 (chứa glycerin và PEG 400, tương ứng) có đường biểu thị sự giải phóng dược chất theo thời gian cao hơn rất nhiều so với sự giải phóng MGF từ hai mẫu bào chế chứa DBP hoặc Span 80 Sau 24h, % MGF được giải phóng từ CT 1
25 và CT 2 là khoảng 25%, trong khi giá trị này của CT 3 và CT 4 là < 5% Nguyên nhân có thể do các chất hóa dẻo thân dầu có tương tác với cốt EC không tan, làm hạn chế sự hòa tan và khuếch tán dược chất khỏi hệ cốt.
- Ảnh hưởng của tác nhân điều khiển giải phóng: Đối với các mẫu bào chế sử dụng glycerin và thay đổi các chất điều khiển giải phóng (hình 3.2 a), CT 5 sử dụng HPC EF có tỷ lệ giải phóng MGF cao nhất Đối với các mẫu bào chế cùng sử dụng HPC EF và thay đổi các chất hoá dẻo (hình 3.2 b), CT 5 sử dụng chất hoá dẻo là glycerin cho tỷ lệ giải phóng MGF cao nhất HPC EF là một polyme thân nước, có khả năng trương nở tạo lớp gel kiểm soát giải phóng thuốc từ hệ cốt mang thuốc [38] Việc kết hợp giữa glycerin với HPC EF có thể giúp tạo các kênh thân nước để dung môi thấm vào, hòa tan dược chất và dược chất khuếch tán ra khỏi cốt, tỉ lệ giải phóng sau 24h giờ đạt 35% cao nhất trong số các công thức khảo sát Glycerin và HPC EF được lựa chọn để điều khiển khả năng giải phóng MGF từ cốt khuếch tán chứa EC N7 a b
Hình 3.2 Ảnh hưởng của tác nhân điều khiển giải phóng (a) và chất hóa dẻo (b) đến khả năng giải phóng MGF từ hệ cốt (n=3) 3.1.3 Ảnh hưởng của chống oxy hóa
Do MGF là một chất chống oxy hóa nên có thể nhạy cảm với sự phân hủy bởi oxy, đặc biệt ở nhiệt độ cao [25], [45] Tiến hành đánh giá ảnh hưởng của biện pháp chống oxy hóa đến độ bền hóa học và đặc tính sợi đùn
3.1.3.1 Ảnh hưởng của chất chống oxy hoá đến sự phân hủy dược chất
Kết quả giản đồ hình 3.3 cho thấy, khi gia nhiệt ở nhiệt độ dưới 160 o C, mẫu MGF và CT 12 (MGF + HPC EF + EC N7 + glycerin, bảng 3.3) không có sự thay đổi khối lượng quá 10% khi thực hiện gia nhiệt trong điều kiện không có oxy và có oxy (hình 3.3 A) Thêm vào đó, so với mẫu không chứa chất chống oxy hóa (CT 12), giản đồ TGA của mẫu chứa các chất chống oxy hóa (hình 3.3 B) như Na2EDTA + BHA (CT
13, CT 14); Na2EDTA + Na2S2O3 (CT 15) không có sự thay đổi khối lượng nào > 10% được ghi nhận Các kết quả này cho phép nhận định MGF tương đối bền ở trạng thái rắn khi gia nhiệt đến nhiệt độ < 160 o C, ngay cả khi có oxy
Hình 3.3 Phổ phân tích nhiệt trọng lượng của A MGF (a, b) và CT 12 (c, d) khi không có oxy (a, c) và có oxy (b, d) B MGF (N 2 ); (b) CT12; (c) CT13; (d) CT14; (e) CT15 trong điều kiện không có oxy Bảng 3.3 Thành phần công thức CT 12 - CT 16 có thay đổi chất chống oxy hóa
Công thức Chất chống oxy hoá
Thành phần khác BHA Na2EDTA Natri metabisulfit Na2S2O3
CT 16 - 1% 5% - Để khẳng định điều này, chúng tôi đã phân tích sắc ký các mẫu đã được tiếp xúc với nhiệt để đánh giá sự xuất hiện của các tạp phân hủy và tỉ lệ diện tích píc tạp/ píc MGF Các mẫu được đánh giá gồm công thức CT 12 (bào chế bằng phương pháp cán nhiệt và đùn nóng chảy, không sử dụng biện pháp chống oxy hóa), đồng thời phân tích mẫu bào chế công thức CT 13 bằng phương pháp đùn nóng chảy (phụ lục 2) Ở 3 bước sóng phân tích (258 nm, 320 nm và 370 nm), không có píc khác được ghi nhận ngoài píc của dược chất Khi thay đổi điều kiện sắc ký (tỉ lệ pha động, pH pha động), không có píc lạ xuất hiện bên cạnh píc dược chất, điều này củng cố việc MGF bền ở điều kiện đã khảo sát và các phương pháp bào chế sử dụng không làm tăng phân hủy MGF Kết quả này cho thấy quá trình bào chế không xảy ra sự tương tác dược chất - tá dược ghi nhận được Tuy vậy, việc áp dụng biện pháp chống oxy hoá bằng cách thêm chất chống oxy hoá vào thành phần công thức hệ cốt đặt tại mắt giúp hạn chế ảnh hưởng của sự tương tác của hệ cốt với oxy không khí, đảm bảo độ bền của dược chất trong điều kiện bảo quản lâu dài
3.1.3.2 Ảnh hưởng của chất chống oxy hoá đến quá trình bào chế và đặc tính sợi đùn
Khi sử dụng chất chống oxy hoá là natri metabisulfit và natri thiosulfat, quá trình bào chế tạo mùi khó chịu, ngoài ra bề mặt sợi tạo thành không mịn, có hiện tượng nổ bề mặt, do vậy không được khảo sát Đối với BHA, quá trình bào chế thuận lợi hơn, tạo sợi có thể chất đẹp, bề mặt sợi đùn mịn, đồng nhất Kết quả đánh giá cũng cho thấy sự có mặt của các chất chống oxy hóa làm tăng độ cứng của sợi Kết quả chi tiết được trình bày trong phụ lục 3
3.1.3.3 Ảnh hưởng của chất chống oxy hoá đến khả năng giải phóng dược chất
Tiến hành khảo sát khả năng giải phóng dược chất in vitro của công thức CT 12,
CT 13 và CT 14 chứa các chất chống oxy hóa ở nồng độ khác nhau và được bào chế bằng phương pháp đùn nóng chảy, sử dụng thiết bị đánh giá giải phóng kiểu buồng dòng chảy Kết quả được trình bày ở hình 3.4
Hình 3.4 Đồ thị giải phóng MGF từ các mẫu bào chế theo các công thức CT 12, CT 13 và
CT 14 sử dụng thiết bị kiểu buồng dòng chảy (n=3)
Khảo sát phương pháp đánh giá khả năng giải phóng dược chất in vitro
Bào chế hệ đặt tại mắt theo hai công thức CT 12 (bảng 3.3) và CT 17 (bảng 3.5) sử dụng phương pháp cán nhiệt đã nêu ở mục 2.3.1.1, sản phẩm tạo ra được dự đoán có khả năng giải phóng khác nhau Tiến hành đánh giá khả năng giải phóng của MGF theo hai phương pháp đã nêu ở mục 2.3.7 (đối với phương pháp kiểu buồng dòng chảy lựa chọn tốc độ dòng v = 0,18 mL/phút).
Bảng 3.5 Thành phần công thức CT 17, CT 18
3.2.1 Khả năng giải phóng khi thử trên thiết bị kiểu buồng dòng chảy
Hình 3.5 Đồ thị giải phóng MGF từ các mẫu bào chế theo công thức CT 12 và CT 17 sử dụng thiết bị kiểu buồng dòng chảy (n=3)
Nhận xét: Khi thử giải phóng sử dụng thiết bị kiểu buồng dòng chảy, hai mẫu bào chế theo công thức CT 12 và CT 17 có đường biểu thị sự giải phóng dược chất theo thời gian khác nhau rõ rệt Sự khác biệt về khả năng giải phóng dược chất ra khỏi hệ cốt giữa hai mẫu bào chế tăng dần theo thời gian Tại thời điểm 0,5 giờ, tỉ lệ dược chất giải phóng ở 2 công thức CT 12 và CT 17 lần lượt là 3% và 22% lượng MGF trong cốt Giá trị tương ứng tại thời điểm 24 giờ của 2 công thức lần lượt là 38% và 100% Sự khác biệt về mức độ giải phóng MGF này là do có sự khác nhau về tỷ lệ các thành phần trong công thức Cụ thể, mẫu bào chế theo công thức CT 17 chứa lượng MGF (5%) ít hơn so với lượng MGF có trong mẫu bào chế theo công thức CT 12 (10%) Kết quả trên cho thấy phương pháp buồng dòng chảy có thể giúp phân biệt động học giải phóng thuốc từ mẫu bào chế theo các công thức khác nhau
3.2.2 Khả năng giải phóng khi thử trên thiết bị kiểu khuấy
Hình 3.6 Đồ thị giải phóng MGF từ các mẫu bào chế theo công thức CT 12 và CT 17 sử dụng thiết bị kiểu khuấy (n=3)
Nhận xét: Khi thử giải phóng sử dụng thiết bị kiểu khuấy, hai mẫu bào chế theo công thức CT 12 và CT 17 có đường biểu thị sự giải phóng dược chất theo thời gian khác nhau rõ rệt Sự khác biệt về khả năng giải phóng dược chất ra khỏi hệ cốt giữa hai mẫu bào chế tăng dần theo thời gian và cùng xu hướng khi thử bằng phương pháp buồng dòng chảy: mẫu bào chế từ CT 17 giải phóng nhanh hơn so với mẫu bào chế từ CT 12
30 Kết quả trên cho thấy phương pháp thử giải phóng sử dụng thiết bị kiểu khuấy cũng có thể giúp phân biệt động học giải phóng thuốc từ mẫu bào chế theo các công thức khác nhau Mặc dù vậy sự dao động giữa các lần thí nghiệm là lớn hơn so với phương pháp kiểu buồng dòng chảy Căn cứ vào điều kiện phòng thí nghiệm và mong muốn phát triển phương pháp thử giải phóng sử dụng thiết bị kiểu buồng dòng chảy, khoá luận lựa chọn phương pháp kiểu buồng dòng chảy là phương pháp đánh giá tốc độ giải phóng dược chất của hệ cốt khuếch tán chứa MGF Phương pháp buồng dòng chảy cũng mô phỏng được hoạt động sinh lý như tiết nước mắt khiến cho môi trường thử luôn được làm mới; ngoài ra phương pháp còn giúp hạn chế việc hòa tan khí trong quá trình thử
3.2.3 Đánh giá ảnh hưởng của tốc độ dòng trong phương pháp thử giải phóng kiểu buồng dòng chảy
Tiến hành khảo sát khả năng giải phóng dược chất in vitro các công thức CT 12,
CT 17 bào chế bằng phương pháp đã nêu ở mục 2.3.1.1 trên thiết bị kiểu buồng dòng chảy theo phương pháp đã nêu ở mục 2.3.7.1, tốc độ dòng 0,18; 0,36; 0,54 (mL/phút) a b c
Hình 3.7 Đồ thị giải phóng MGF từ các mẫu bào chế theo công thức CT 12, CT 17 với các tốc độ dòng a 0,18 mL/phút; b 0,36 mL/phút; c 0,54 mL/phút (n=3)
Nhận xét: tốc độ giải phóng MGF từ hệ cốt được bào chế theo công thức CT 12 và
CT 17 là thấp nhất khi tốc độ dòng là 0,18 mL/phút và tăng lên khi tăng tốc độ dòng Kết quả khảo sát cũng cho thấy đồ thị giải phóng MGF từ 2 công thức có sự khác biệt rõ rệt nhất khi thử với tốc độ 0,18 mL/phút và sự khác biệt giảm khi thử ở tốc độ 0,36 và 0,54 mL/phút Ví dụ, ở tốc độ 0,18 mL/ phút, sau 10 giờ công thức CT 17 có 70% dược chất được giải phóng trong khi tỉ lệ này ở CT 12 là khoảng 20% Khi tăng tốc độ lên 0,36 mL/phút, tỉ lệ giải phóng của 2 công thức CT 17 và CT 12 tại 10 giờ lần lượt là 90% và 60% Ở tốc độ 0,54 mL/phút, tỉ lệ giải phóng của 2 công thức là 90% và 70% Kết quả này có thể được giải thích dựa trên các giai đoạn trong quá trình giải phóng thuốc của phương pháp thử giải phóng sử dụng thiết bị kiểu buồng dòng chảy Quá trình giải phóng thuốc trong phương pháp này bao gồm hai giai đoạn: (a) môi trường thấm vào cốt thông qua các kênh hoặc lỗ xốp dẫn tới hòa tan dược chất, (b) dược chất được hòa tan, khuếch tán ra khỏi cốt vào môi trường thử và bị rửa trôi theo dòng chảy Giai đoạn thành phần có tốc độ chậm sẽ quyết định tốc độ chung của quá trình giải phóng
31 dược chất ra khỏi hệ cốt Với hệ cốt không tan được khảo sát, HPC EF có thể trương nở và cùng với glycerin được hòa tan, tạo lớp gel bao quanh hệ cốt, dược chất được hòa tan cần khuếch tán qua lớp gel này để ra môi trường Tốc độ giải phóng dược chất thấp nhất khi tốc độ dòng là 0,18 mL/phút, điều này cho thấy ở tốc độ 0,18 mL/phút, giai đoạn dược chất khuếch tán ra khỏi hệ cốt là giai đoạn chậm và có vai trò quyết định động học quá trình giải phóng Tốc độ giải phóng tăng đáng kể khi tăng tốc độ dòng lên 0,36 và 0,54 mL/phút do tốc độ này có thể làm mất/mỏng lớp gel HPC EF và glycerin bao quanh hệ cốt, do đó dược chất được khuếch tán ra khỏi hệ cốt nhanh hơn Ngoài ra, việc khuếch tán của HPC EF và glycerin nhanh sẽ làm tăng kích thước lỗ xốp, giúp hình thành các kênh mới và các lỗ xốp mới trong hệ cốt, từ đó tăng khả năng giải phóng dược chất Căn cứ vào kết quả khảo sát trên, lựa chọn tốc độ dòng 0,18 mL/phút cho phương pháp thử giải phóng sử dụng thiết bị kiểu buồng dòng chảy
3.3 Lựa chọn phương pháp bào chế
Trong hai kỹ thuật có thể được dùng để bào chế hệ đặt tại mắt, phương pháp cán nhiệt có ưu điểm là áp dụng tốt với quy mô nhỏ (khoảng 1 gam 1 lần cán nhiệt và đùn tạo hình), dễ tiến hành thao tác vệ sinh thiết bị Ngoài ra, thiết bị này còn phù hợp để sàng lọc polyme, chất hóa dẻo, đánh giá khả năng mềm hóa của hỗn hợp dược chất - tá dược Tuy nhiên, nhược điểm của phương pháp là khó nâng cấp quy mô thí nghiệm và nhiệt có thể thất thoát khi bào chế
Phương pháp đùn nóng chảy sử dụng máy đùn trục đơn có thể khắc phục những nhược điểm của phương pháp cán nhiệt nói trên Các thông số thiết bị có thể được tùy chỉnh để phù hợp với đặc tính hỗn hợp dược chất - polyme Để bào chế được hệ cốt khuếch tán chứa MGF, lựa chọn phương pháp sử dụng máy đùn trục vít đơn Tốc độ xoay trục vít được lựa chọn là 60 vòng/ phút; tốc độ cấp bột 0,5 g/ phút; nhiệt độ đùn
115 o C; kích thước lỗ đùn 1,5 mm.
3.4 Đánh giá ảnh hưởng của các thành phần đến độ trương nở và khả năng giải phóng dược chất in vitro của hệ đặt tại mắt chứa MGF
3.4.1 Thiết kế và tiến hành thí nghiệm Để đánh giá ảnh hưởng của các thành phần có trong công thức đến đặc điểm hệ cốt chứa MGF, tiến hành thiết kế thí nghiệm sử dụng phần mềm MODDE 12.0 Qua các thí nghiệm khảo sát, có 3 biến đầu vào ảnh hưởng đến khả năng giải phóng dược chất từ hệ cốt đặt tại mắt, gồm có tỉ lệ MGF, tỉ lệ HPC EF, tỉ lệ glycerin; tỉ lệ BHA và tỉ lệ
Na2EDTA là biến cố định; tỉ lệ EC N7 là biến bù Khoảng biến thiên của các biến đầu vào được trình bày trong bảng 3.6
Bảng 3.6 Các biến đầu vào và khoảng biến thiên tương ứng
Tên biến Ký hiệu Đơn vị Loại biến Mức thấp
MGF (%) MGF % Biến định lượng 5 10 15
HPC EF (%) HPC % Biến định lượng 10 15 20
Glycerin (%) Gly % Biến định lượng 5 10 15
Các biến đầu ra được lựa chọn là tỷ lệ giải phóng của dược chất ra khỏi hệ cốt được đánh giá trên thiết bị kiểu buồng dòng chảy ở các thời điểm 0,5; 1; 1,5; 2; 4; 6; 8; 10; 24 giờ và độ trương nở của hệ cốt sau 45 phút Các biến đầu ra này được ký hiệu lần lượt là Y1, Y2, Y3, Y4, Y5, Y6, Y7, Y8, Y9, Y10
Các công thức bào chế hệ đặt tại mắt chứa MGF được thiết kế theo mô hình Box - Behnken Có 15 công thức được thiết kế, trong đó công thức trung tâm được tiến hành lặp lại 3 lần (bảng 3.7)
Bảng 3.7 Các công thức thiết kế thí nghiệm theo mô hình Box – Behnken
Hình 3.8 Mẫu bào chế theo công thức N9
Các công thức được bào chế theo phương pháp đã nêu ở mục 2.3.1.2, sau đó được xác định khả năng giải phóng dược chất MGF và độ trương nở theo các phương pháp
33 đã nêu ở mục 2.3.7.1 và mục 2.3.8.1 Mỗi thí nghiệm đều được tiến hành 3 lần Kết quả được trình bày trong bảng 3.8
Bảng 3.8 Kết quả giá trị thực nghiệm các biến đầu ra (n=3)
Nhận xét: Tại thời điểm 30 phút, lượng MGF giải phóng từ hệ cốt có sự dao động trong khoảng từ 1% đến 18%; tại thời điểm 24 giờ, lượng MGF giải phóng từ hệ cốt có sự dao động lớn từ 17% đến 81% Điều này cho thấy có sự khác biệt về khả năng giải phóng thuốc in vitro giữa các công thức đã thiết kế Trong khi đó, khả năng trương nở của hệ cốt đã bào chế sau 45 phút không quá lớn (< 15%)
3.4.2 Kết quả phân tích hồi quy của các biến đầu ra
Mối quan hệ giữa các biến đầu vào và các biến đầu ra được mô tả bởi các phương trình hồi quy được thiết lập trên phần mềm MODDE 12.0 Kết quả các tham số thống kê của mô hình được trình bày trong bảng 3.9
Bảng 3.9 Các tham số thống kê trong mô hình hồi quy của các biến đầu ra
R2 R2 hiệu chỉnh Q2 P hồi quy P lack of fit
Nhận xét: Các mô hình hồi quy của biến đầu ra từ Y3 đến Y9 đều có R2 > 0,8; p hồi quy < 0,05 chứng tỏ mô hình có ý nghĩa thống kê, mô tả tốt các kết quả đã thực hiện và đáng tin cậy trong việc mô tả tương quan giữa các biến đầu vào và các biến đầu ra là khả năng giải phóng dược chất in vitro tại các thời điểm 1,5; 2; 4; 6; 8; 10; 24 giờ Các mô hình của biến đầu ra từ Y5 đến Y9 có Q2 > 0,5 cho thấy mô hình có thể giúp dự đoán giá trị của các thí nghiệm trong tương lai Các biến đầu ra Y1, Y2 và Y10 có R2 hiệu chỉnh < 0,8 và p hồi quy > 0,05 chứng tỏ mô hình tương quan yếu và không có ý nghĩa thống kê; Q2 < 0,5 cho thấy mô hình ít có ý nghĩa trong việc dự đoán kết quả các thí nghiệm trong tương lai Giá trị p lack of fit > 0,05 cho tất cả các mô hình với các biến cũng cho thấy mô hình đưa ra là phù hợp để mô tả dữ liệu
Đánh giá ảnh hưởng của các thành phần đến độ trương nở và khả năng giải phóng dược chất in vitro của hệ đặt tại mắt chứa MGF
3.4.1 Thiết kế và tiến hành thí nghiệm Để đánh giá ảnh hưởng của các thành phần có trong công thức đến đặc điểm hệ cốt chứa MGF, tiến hành thiết kế thí nghiệm sử dụng phần mềm MODDE 12.0 Qua các thí nghiệm khảo sát, có 3 biến đầu vào ảnh hưởng đến khả năng giải phóng dược chất từ hệ cốt đặt tại mắt, gồm có tỉ lệ MGF, tỉ lệ HPC EF, tỉ lệ glycerin; tỉ lệ BHA và tỉ lệ
Na2EDTA là biến cố định; tỉ lệ EC N7 là biến bù Khoảng biến thiên của các biến đầu vào được trình bày trong bảng 3.6
Bảng 3.6 Các biến đầu vào và khoảng biến thiên tương ứng
Tên biến Ký hiệu Đơn vị Loại biến Mức thấp
MGF (%) MGF % Biến định lượng 5 10 15
HPC EF (%) HPC % Biến định lượng 10 15 20
Glycerin (%) Gly % Biến định lượng 5 10 15
Các biến đầu ra được lựa chọn là tỷ lệ giải phóng của dược chất ra khỏi hệ cốt được đánh giá trên thiết bị kiểu buồng dòng chảy ở các thời điểm 0,5; 1; 1,5; 2; 4; 6; 8; 10; 24 giờ và độ trương nở của hệ cốt sau 45 phút Các biến đầu ra này được ký hiệu lần lượt là Y1, Y2, Y3, Y4, Y5, Y6, Y7, Y8, Y9, Y10
Các công thức bào chế hệ đặt tại mắt chứa MGF được thiết kế theo mô hình Box - Behnken Có 15 công thức được thiết kế, trong đó công thức trung tâm được tiến hành lặp lại 3 lần (bảng 3.7)
Bảng 3.7 Các công thức thiết kế thí nghiệm theo mô hình Box – Behnken
Hình 3.8 Mẫu bào chế theo công thức N9
Các công thức được bào chế theo phương pháp đã nêu ở mục 2.3.1.2, sau đó được xác định khả năng giải phóng dược chất MGF và độ trương nở theo các phương pháp
33 đã nêu ở mục 2.3.7.1 và mục 2.3.8.1 Mỗi thí nghiệm đều được tiến hành 3 lần Kết quả được trình bày trong bảng 3.8
Bảng 3.8 Kết quả giá trị thực nghiệm các biến đầu ra (n=3)
Nhận xét: Tại thời điểm 30 phút, lượng MGF giải phóng từ hệ cốt có sự dao động trong khoảng từ 1% đến 18%; tại thời điểm 24 giờ, lượng MGF giải phóng từ hệ cốt có sự dao động lớn từ 17% đến 81% Điều này cho thấy có sự khác biệt về khả năng giải phóng thuốc in vitro giữa các công thức đã thiết kế Trong khi đó, khả năng trương nở của hệ cốt đã bào chế sau 45 phút không quá lớn (< 15%)
3.4.2 Kết quả phân tích hồi quy của các biến đầu ra
Mối quan hệ giữa các biến đầu vào và các biến đầu ra được mô tả bởi các phương trình hồi quy được thiết lập trên phần mềm MODDE 12.0 Kết quả các tham số thống kê của mô hình được trình bày trong bảng 3.9
Bảng 3.9 Các tham số thống kê trong mô hình hồi quy của các biến đầu ra
R2 R2 hiệu chỉnh Q2 P hồi quy P lack of fit
Nhận xét: Các mô hình hồi quy của biến đầu ra từ Y3 đến Y9 đều có R2 > 0,8; p hồi quy < 0,05 chứng tỏ mô hình có ý nghĩa thống kê, mô tả tốt các kết quả đã thực hiện và đáng tin cậy trong việc mô tả tương quan giữa các biến đầu vào và các biến đầu ra là khả năng giải phóng dược chất in vitro tại các thời điểm 1,5; 2; 4; 6; 8; 10; 24 giờ Các mô hình của biến đầu ra từ Y5 đến Y9 có Q2 > 0,5 cho thấy mô hình có thể giúp dự đoán giá trị của các thí nghiệm trong tương lai Các biến đầu ra Y1, Y2 và Y10 có R2 hiệu chỉnh < 0,8 và p hồi quy > 0,05 chứng tỏ mô hình tương quan yếu và không có ý nghĩa thống kê; Q2 < 0,5 cho thấy mô hình ít có ý nghĩa trong việc dự đoán kết quả các thí nghiệm trong tương lai Giá trị p lack of fit > 0,05 cho tất cả các mô hình với các biến cũng cho thấy mô hình đưa ra là phù hợp để mô tả dữ liệu
Hệ số phương trình hồi quy mô tả ảnh hưởng của biến đầu vào đến biến đầu ra được trình bày trong phụ lục 7 Các tham số có giá trị p < 0,05 cho thấy biến đầu vào tương ứng có ảnh hưởng có ý nghĩa thống kê đến biến đầu ra với độ tin cậy 95% Kết quả phân tích hồi quy cho thấy, với các biến đầu ra là khả năng giải phóng dược chất in vitro tại các thời điểm (Y3 - Y9) thì tỉ lệ HPC và Gly trong công thức ảnh hưởng đến các biến đầu ra này có ý nghĩa thống kê với độ tin cậy 95% Ngoài ra, tỷ lệ MGF trong công thức cũng ảnh hưởng tới biến đầu ra Y4 có ý nghĩa thống kê với độ tin cậy 95% Với biến đầu ra là khả năng trương nở của hệ cốt sau 45 phút, tỉ lệ HPC trong công thức ảnh hưởng có ý nghĩa thống kê với độ tin cậy 95% Giá trị p của các biến đầu vào còn lại và tương tác giữa các biến đều lớn hơn 0,05 cho thấy tương tác chéo giữa các biến MGF - glycerin - HPC EF ít có ảnh hưởng có ý nghĩa thống kê đến khả năng giải phóng dược chất in vitro và độ trương nở của hệ cốt Vì vậy, các biến này được đưa ra khỏi phương trình hồi quy, và lặp lại việc phân tích hồi quy Kết quả các tham số thống kê sau khi tái phân tích được trình bày trong bảng 3.10
Nhận xét: Các biến đầu ra từ Y3 đến Y9 đều có R2 > 0,8; Q2 > 0,5; p hồi quy 0,05 chứng tỏ mô hình tương quan yếu và không có ý nghĩa thống kê Các hệ số của phương trình hồi quy mô tả ảnh hưởng của các biến đầu vào và các biến đầu ra được trình bày trong phụ lục 8 Nhận thấy giá trị p của các biến đầu vào (tỉ lệ HPC, tỷ lệ Gly) đến biến đầu ra và giá trị p của tỷ lệ MGF đến Y3, Y4, Y5 < 0,05 cho thấy ảnh hưởng của từng biến đầu vào là có ý nghĩa thống kê ở mức tin cậy 95%.
Bảng 3.10 Các tham số thống kê trong mô hình hồi quy của các biến đầu ra sau hiệu chỉnh
R2 R2 hiệu chỉnh Q2 P hồi quy P lack of fit
Phương trình hồi quy mô tả tương quan giữa các biến đầu vào (tỷ lệ mangiferin, HPC EF và glycerin) với các biến đầu ra là khả năng giải phóng dược chất in vitro tại các thời điểm được trình bày trong bảng 3.11
Bảng 3.11 Phương trình hồi quy mô tả tương quan giữa khả năng giải phóng dược chất tại các thời điểm với các biến đầu vào
3.4.3 Phân tích ảnh hưởng của các biến đầu vào đến biến đầu ra
3.4.3.1 Phân tích ảnh hưởng của các biến đầu vào đến khả năng giải phóng dược chất in vitro của các mẫu bào chế được Đồ thị sự giải phóng MGF từ các mẫu bào chế theo công thức bảng 3.7 được biểu diễn trên hình 3.9
Hình 3.9 Đồ thị giải phóng các mẫu bào chế theo 15 công thức (n=3)
Nhận xét: Ở tất cả các thời điểm thử giải phóng đều có sự khác biệt về tỷ lệ % MGF giải phóng giữa 15 công thức bào chế Do vậy, chọn một thời điểm thể hiện sự khác biệt rõ nhất về tỷ lệ % dược chất giải phóng (thời điểm 10 giờ) để phân tích ảnh hưởng của biến đầu vào Sử dụng đồ thị các đường đồng mức để phân tích ảnh hưởng của mangiferin, HPC EF và glycerin đến biến đầu ra, mỗi đồ thị đường đồng mức thể hiện ảnh hưởng của 2 biến đầu vào ở 3 mức giá trị (cao, trung bình và thấp) của biến còn lại đến giá trị biến đầu ra
Hình 3.10 A Đồ thị đường đồng mức thể hiện ảnh hưởng của tỷ lệ HPC EF và glycerin ở các tỷ lệ MGF tương ứng: a 5%; b 10%; c 15% B Đồ thị đường đồng mức thể hiện ảnh hưởng của tỷ lệ HPC EF và MGF ở các tỷ lệ glycerin tương ứng: a 5%; b 10%; c 15%
C Đồ thị đường đồng mức thể hiện ảnh hưởng của tỷ lệ glycerin và MGF ở các tỷ lệ HPC
Từ các đồ thị đường đồng mức trong hình 3.10.A cho thấy ở bất cứ tỷ lệ MGF nào thì tỷ lệ HPC EF và glycerin đều có ảnh hưởng thuận biến đến giá trị đầu ra Khi tăng tỷ lệ HPC EF và glycerin trong công thức thì giá trị biến đầu ra tăng và ngược lại Từ các đồ thị đường đồng mức hình 3.10.B và 3.10.C cho thấy ở mức tỷ lệ thấp nhất của glycerin (5%) và mức tỷ lệ cao nhất của HPC EF (20%), lượng MGF giải phóng ở thời điểm 10 giờ của mẫu bào chế đạt trên 40% Ngược lại, ở mức tỷ lệ cao nhất của glycerin (15%) và mức tỷ lệ thấp nhất của HPC EF (10%), lượng MGF giải phóng ở thời điểm
Đánh giá một số đặc tính hệ đặt tại mắt chứa mangiferin
3.5.1 Độ đồng đều kích thước
Tiến hành đánh giá đồng đều kích thước với mẫu bào chế theo các công thức trong bảng 3.7 theo phương pháp đã nêu ở mục 2.3.8.5 Kết quả đánh giá được trình bày trong phụ lục 9 Đường kính của các đơn vị mẫu bào chế dao động từ 1,53 đến 1,61 mm với sai số nhỏ (RSD < 4%) cho thấy được quá trình đùn có khả năng tạo ra hệ cốt đồng nhất về mặt kích thước
3.5.2 Độ đồng đều khối lượng, độ đồng đều hàm lượng
Tiến hành đánh giá đồng đều khối lượng, đồng đều hàm lượng với mẫu bào chế theo công thức N2 theo phương pháp đã nêu ở mục 2.3.8.6 Kết quả đánh giá được trình bày trong bảng 3.12 Các kết quả chi tiết được trình bày trong phụ lục 10.
Bảng 3.12 Kết quả đánh giá kích thước, độ đồng đều khối lượng và độ đồng đều hàm lượng của hệ cốt theo công thức N2 (n), TB ± SD Độ dài (mm) Đường kính (mm) Khối lượng (mg) Hàm lượng MGF (mg)
Nhận xét: Đường kính của các đơn vị mẫu bào chế khoảng 1,56 mm với sai số nhỏ (RSD < 2%) cho thấy được quá trình đùn có khả năng tạo ra hệ cốt đồng nhất về mặt
39 kích thước % chênh lệch khối lượng giữa các đơn vị hệ đặt tại mắt không quá 4% chứng tỏ khả năng trộn đều tốt của dược chất và tá dược trong quá trình trộn cũng như trong quá trình bào chế % chênh lệch hàm lượng giữa các đơn vị hệ đặt tại mắt trong cùng một công thức không quá 4% gợi ý rằng sự phân bố của dược chất trong các đơn vị hệ đặt là đồng đều.
3.5.3 Đánh giá công gây biến dạng sợi đùn
Tiến hành đánh giá công gây biến dạng sợi đùn với mẫu bào chế theo các công thức trong bảng 3.7 theo phương pháp đã nêu ở mục 2.3.8.7 Kết quả đánh giá được trình bày trong bảng 3.13.
Bảng 3.13 Kết quả công gây gãy sợi theo phương vuông góc
STT Công thức Công gây gãy sợi (mJ) STT Công thức Công gây gãy sợi (mJ)
Kết quả khảo sát cho thấy thành phần công thức bào chế có ảnh hưởng trực tiếp đến khả năng chịu lực của sản phẩm Các công thức N5, N6, N9, N10 có công gây gãy sợi cao (~ 3 mJ) trong khi các công thức N8, N11, N12 có công gây gãy sợi thấp (~0,3 mJ) Điều này có thể cho phép suy luận rằng sự có mặt của glycerin ảnh hưởng tới khả năng chịu lực của sợi và tá dược Glycerin đóng vai trò là chất hoá dẻo, ngoài ra có tính hút ẩm mạnh làm tăng sự mềm của sợi đùn, giảm công gây gãy sợi Khi giảm tỷ lệ glycerin trong công thức, sợi bào chế được trở nên cứng hơn, công gây gãy sợi tăng Tỉ lệ MGF và HPC EF trong công thức ít có ảnh hưởng rõ ràng đến công gây gãy sợi Trong quá trình sử dụng hệ đặt tại mắt, chế phẩm có độ cứng phù hợp (đủ mềm) sẽ ít gây kích ứng cho mắt hơn những chế phẩm có độ cứng cao Việc đánh giá độ cứng của sợi có thể giúp sàng lọc công thức trong quá trình nghiên cứu sản phẩm
3.5.4 Ảnh hưởng đến pH
Tiến hành thí nghiệm với mẫu bào chế công thức N3 và N9 theo phương pháp đã nêu ở mục 2.3.8.8 pH của dịch môi trường giải phóng đo được tại các thời điểm đều có giá trị trong khoảng từ 7,32 đến 7,40 Điều này chứng tỏ sự giải phóng dược chất từ mẫu có tốc độ giải phóng nhanh (công thức N3) và mẫu có tốc độ giải phóng chậm (công thức N9) đều ít ảnh hưởng đến pH môi trường giải phóng
Hình 3.11 a Đồ thị sự thay đổi pH của môi trường giải phóng theo thời gian (n=3); b Đồ thị sự thay đổi áp suất thẩm thấu của môi trường giải phóng theo thời gian (n=3) 3.5.5 Ảnh hưởng đến áp suất thẩm thấu
Tiến hành thí nghiệm với mẫu bào chế công thức N15 theo phương pháp đã nêu ở mục 2.3.8.9 Áp suất thẩm thấu của dịch môi trường giải phóng đo được tại các thời điểm đều có giá trị trong khoảng từ 299 đến 309 mosmol/kg Giá trị áp suất thẩm thấu không thay đổi nhiều và gần với giá trị áp suất thẩm thấu ban đầu Điều này chứng tỏ phần hoà tan của mẫu bào chế được giải phóng một cách từ từ và có kiểm soát Bên cạnh đó, cốt mang thuốc được sử dụng là polyme không tan nên lượng chất hoà tan vào dịch giải phóng là ít và được rửa trôi liên tục, nhanh chóng cùng với dòng chuyển động của môi trường thử giải phóng Kết quả này gợi ý rằng mẫu bào chế ít ảnh hưởng đến áp suất thẩm thấu của dịch môi trường giải phóng.
Các kết quả khảo sát cho phép nhận định rằng hệ cốt đặt tại mắt chứa MGF ít ảnh hưởng đến pH và áp suất thẩm thấu của dịch nước mắt Điều đó giúp dự đoán khả năng hạn chế sự kích ứng mắt khi ứng dụng hệ cốt chứa MGF để điều trị các bệnh về mắt
3.5.6 Dạng thù hình của MGF trong hệ cốt
3.5.6.1 Phương pháp quét nhiệt lượng vi sai (DSC)
Quét phổ DSC các mẫu: nguyên liệu MGF, nguyên liệu EC N7, hỗn hợp tá dược, hỗn hợp vật lý và mẫu bào chế theo công thức trung tâm N15 (tỷ lệ dược chất trong công thức là 10%) Kết quả được trình bày ở hình 3.12
Nhận xét: giản đồ nhiệt DSC của MGF xuất hiện một píc thu nhiệt duy nhất có đỉnh ở ~ 268oC gợi ý rằng nguyên liệu MGF tồn tại ở trạng thái tinh thể và nhiệt độ nóng chảy của nguyên liệu là ~ 268oC Trên phổ đồ của EC N7 xuất hiện hiệu ứng thu nhiệt nhẹ ở khoảng 130oC, có thể là nhiệt độ tương đương với nhiệt độ Tg của polymer Ngoài ra, giản đồ DSC của EC N7 còn có các píc thu nhiệt ở vị trí khoảng 170oC; 200oC và 230oC gợi ý EC N7 tồn tại một phần ở những cấu trúc tinh thể khác nhau Những píc thu nhiệt của EC N7 xuất hiện sớm hơn trên giản đồ nhiệt của mẫu hỗn hợp tá dược,
41 thêm vào đó píc ở vị trí 230oCcó hiệu ứng nhiệt rõ hơn, cho thấy việc phối hợp với glycerin và BHA đã làm thay đổi đặc tính nóng chảy của polymer Trong hỗn hợp vật lý, sự có mặt của MGF ở nhiệt độ nóng chảy cao hơn đã làm dịch chuyển nhẹ píc thu nhiệt của hỗn hợp tá dược sang vị trí 233oC Đặc biệt, trên phổ đồ của hỗn hợp vật lý không còn píc thu nhiệt của MGF cho thấy hỗn hợp tá dược nóng chảy đã hòa tan MGF trong quá trình gia nhiệt
Hình 3.12 Phổ quét nhiệt vi sai của (a) nguyên liệu MGF; (b) nguyên liệu EC N7; (c) hỗn hợp tá dược; (d) hỗn hợp vật lý; (e) mẫu bào chế N15
Trên phổ đồ của sợi đùn theo công thức N15 xuất hiện các píc thu nhiệt ở vị trí tương tự nhưng rõ hơn so với các píc thu nhiệt của hỗn hợp vật lý, ngoài ra xuất hiện một đỉnh thu nhiệt yếu ở khoảng 250oC Kết quả này cho thấy quá trình tạo sợi đùn bằng công nghệ đùn trục vít đơn ở nhiệt độ cao đã có thể hòa tan dược chất hoặc chuyển dược chất thành dạng vô định hình, một phần tồn tại ở cấu trúc tinh thể khác với nguyên liệu
3.5.6.2 Phương pháp nhiễu xạ tia X (XRD)
Phổ nhiễu xạ tia X của từng mẫu MGF nguyên liệu, hỗn hợp vật lý N15, công thức N15 và placebo được trình bày trong phụ lục 11
