Báo Cáo Thực Hành Khoa Học Môi Trường.pdf

Chuẩn bị dụng cụ, thiết bị, hoá chất, môi trường - Nước kiểm nghiệm: đã được đóng chai lấy sẵn ở phòng thí nghiệm - Chuẩn bị mẫu và môi trường đồng thời: + Ðun thạch dinh đưỡng cho tan

TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y HÀ NỘI VIỆN Y HỌC DU PHONG VA Y TE TONG CONG KHOA Y TE CONG CONG

BÙI THỊ BÍCH PHƯƠNG

HÀ NỘI - 2022

MỤC LỤC

BÀI 1 XÉT NGHIỆM VI SINH VẬT TRONG KHÔNG KHÍ 2522212222222 crerrerree 1 BÀI 2 VI SINH TRONG NƯỚC 22 2222222222222222222222222122222222 221 cei 4 BÀI 3 CẦY CHUYỂN COLIFORM Q222222222222 2222222222222 eo 7 BÀI 4 XÉT NGHIỆM NƯỚC THÁI 2 52 221 2212221122121221212212212222222222222 re II BÀI 5 XÉT NGHIỆM NƯỚC 2221222222222 2112222222222 rerere 14 BÀI 6 XÉT NGHIỆM TRỨNG VẢ ÂU TRÙNG GIUN TRONG ĐẤT - S2 rerrre 24 BÀI 7 QUẢN LÝ CHẤT THÁI Y TẾ TRONG PHẠM VI KHUÔN VIÊN CƠ SỞ Y TẾ 27

BÀI 8 QUẢN LÝ NƯỚC THÁI

BÀI 1 XÉT NGHIỆM VI SINH VẬT TRONG KHÔNG KHÍ

Phương pháp đếm vi khuẩn trong không khí

Phương pháp để lăng bụi của Koch

=629 Tông số nắm mốc trong không khí:

=1415

Tổng số lạc khuẩn trong không khí:

= 629 Tổng số vi khuẩn tan máu trong không khí:

=393 Tổng số nắm mốc trong không khí:

=393

; / _ BAI2 VISINH TRONG NƯỚC

A XAC DINH VI KHUAN HIEU KHi

I Phuong pháp nuôi cấy xác định vi khuẩn hiếu khí

Ba phương pháp: Phương pháp rót thạch, phương pháp dàn trên thạch và phương pháp màng lọc Phương pháp rót thạch là đơn giản, rẻ tiên, dé thực hiện và cũng cho kết quả chính xác Nguyên tắc: Nuôi cấy vi khuân trên môi trường thạch dinh dưỡng ở điêu kiện nhiệt độ Dùng phương pháp pha loãng nước xét nghiệm

II Chuẩn bị dụng cụ, thiết bị, hoá chất, môi trường

- Nước kiểm nghiệm: đã được đóng chai lấy sẵn ở phòng thí nghiệm

- Chuẩn bị mẫu và môi trường đồng thời:

+ Ðun thạch dinh đưỡng cho tan chảy, mỗi mẫu cân khoảng 100ml thạch

+ Pha loãng nước kiểm nghiệm

+ Mỗi mẫu cân 4 hộp lồng đề cấy hai đậm độ khác nhau, mỗi đậm độ 2 hộp lồng

- Ghi nhãn, ký hiệu mẫu, đậm độ pha loãng và thé tich cay

+ Pha loãng mẫu để có độ pha loãng, „,

+ Chọn 2 nồng độ pha loãng thích hợp, hút mỗi nồng độ 2 ml, mở hé hộp, cho vào mỗi đĩa Petri

vô trùng Iml, mỗi nông độ cây 2 đĩa

+ Rót thạch đã đun chảy, để nguội vào từng hộp lồng, đậy nắp và xoay tròn nhẹ nhàng từ phải sang trái rồi ngược lại

+ Để thạch đông, lập úp đĩa thạch và đem ủ ở tủ ấm /24 giờ

IV Đọc kết quả

Hình ảnh: vi khuẩn hiếu khí sau 24h ủ của 3 loại dung dịch khác nhau

- Số lượng vi khuân ở dung dịch nguyên chất khá nhiều: khoảng trên 29 ví khuân

- Số lượng vi khuân ở dung dịch được pha (_): 9 vi khuẩn

- Vi khuân hiểu khí xuất hiện ở dung dịch được pha loãng Q: 5 vi khuân

=> Chất lượng nước chưa được đảm bảo an toàn sức khỏe và an toàn vệ sinh cho cộng đồng

B XÁC ĐỊNH CLOSTRIDIUM PERFRINGENS

I Nguyên tác

- _ Cấy các phân mẫu thử đã được pha loãng hoặc không pha loãng theo thê tích khác nhau vào một dãy

ống nghiệm chứa một môi trường nuôi cấy chon loc Thach Wilson Blair co Natri sulfit va dung dich

phèn sắt II

- _ Sau khi diệt tạp khuẩn nuôi cấy ở nhiệt độ 370C trong vòng 34 h Kiểm tra các ống thử, nếu có

Clostridium perfringens sé sinh ra H2S tao ra cac khuẩn lạc đen to bằng hạt đậu xanh do tạo thành

FeS

IL Chuẩn bị

- Tuam 37°C

- Néi cach thuy

-_ Giá đựng ống nghiệm có nhiều lễ

- Pipet chia dé 10“(-1)ml v6 tring

- Dung dich sunfat sat II 5% v6 khuan

- Dung dich nuéc muỗi sinh lý 8,5%o đóng ống 9ml, tiệt trùng & 121°C/15 phut

- Thạch Wilson-Blar đóng ông I0ml

IH Cách tiến hành

- _ Chuẩn bị mẫu: mẫu nước được cách thuỷ 80°C /5 phút đề diệt tạp khuẩn

- - Thạch ống Wilson- Blair đun chảy hoàn toàn, ghi rõ địa điểm, thời gian lấy mẫu, thê tích mẫu, để nguội 50-60°C, thêm vô trùng 5 giọt sunfat sắt II 5%

- Tuy theo dự tính mức độ sạch ban cia mau nước mà cay 10ml, 5ml hay Iml

- _ Dùng pipet hút mẫu nước rồi cấy xuống tận đáy ống nghiệm Cần tránh tạo bọt khi cấy bằng cách vừa thả mẫu từ từ vừa xoay nhẹ pipet và rút pipet lên dân dân

- Trộn đều mẫu với môi trường Làm lạnh nhanh trong vòi nước cho đông thạch

- Quan giay trên đầu ông thạch Mỗi mẫu cấy ở 2-3 đậm độ khác nhau

- U mau trong 37°C /34 giờ, lay ra đọc kết qua:

IV Cách tính kết quả

- Đếm tất cả các khuẩn lạc đen, to bằng hạt đậu xanh tạo thành sunfua sắt

- _ Tính toán số khuẩn lạc nuôi cấy trong 10ml mẫu nước

- Kiêm tra chứng âm tính và dương tính với môi loại môi trường mới được pha chê

V Kết quả

Sau khi để ủ mẫu trong điều kiện thích hợp trong vòng 24h thì không phát hiện thấy khuẩn lạc den nao

BAI 3 CAY CHUYEN COLIFORM

1 Nguyên tac

- Cây các phần mẫu thử đã được pha loãng hoặc không pha loãng vào một dãy ống nghiệm chứa một môi trường môi cấy chọn lọc đạng lỏng có lactosa

- Kiểm tra các ống thử sau 24h và 48h muôi ở nhiệt độ hoặc

- Cây chuyên tiếp từ mỗi ống có biểu hiện đục kèm theo sinh khí vào một môi trường khẳng định chọn

loc hon dé tim Coliform

- Nuôi các môi trường khăng định nay cho tới 48h ở nhiệt độ hoặc dé phát hiện các vi khuan coliform

IL Môi trường nuôi cấy

1 Canh thang lactosa đặc

- Sau đóng ống, sấy hấp tiệt trùng ở /15ph sao cho pH = 6,9 + 0,2

2 Canh thang lac(osa loãng

- Cách 1: Pha loãng canh thang lactosa đặc với một thê tích nước cất tương

đương

- Cách 2: Pha chế riêng băng cách giảm một nửa lượng các chất trong thành

phân, đóng ống 5ml, có ống sinh hơi

+ Sau khi đóng ống sấy hấp /15ph sao cho pH = 6,9 + 0,2

II Môi trường khắng định (Khắng định sự có mặt của vi khuẩn Coliform)

Canh thang BGBL (Brilliant Green Bile lactosa )

- Công thức:

+ Pepton: 10g

+ Lactosa: 10g

+ Mudi mat: 1,5¢

+ Brilliant Green: 0,0133g

+ Nước cất: 1000ml

- Đóng ống 5ml, có ống sinh hơi

- Sau khi đóng éng, say hap 10ph sao cho pH = 7,2 + 0,2

IV Thiét bi, dung cu

- Ta say hoi nong dé khir tring khô và nỗi hấp áp lực

- Tủ ấm hoặc bể điều nhiệt có thể điều chỉnh được nhiệt độ hoặc + hoặc +

- pH mét

- Pipet khắc vạch 10ml —Iml vô khuân hoặc micropipet và các đâu típ vô khuân tương ứng

- Que cay, dén côn

- Các ống nghiệm vô khuân

V Cách tiến hành

1 Chuẩn bị mẫu

Phương pháp cấy 7 ống gồm: 5 ống canh thang lacosa đặc và 2 ống canh thang

lactosa mẫu

2 Pha loãng mẫu

Pha loãng băng cách hút vô khuẩn 1ml nước nguyên cho vào ống chứa 9ml

dung dich pha loãng mẫu để có đậm độ pha loãng

- 1 ống canh thang lactosa loãng, cấy 1 ml nước nguyên

- 1 ống canh thang lactosa loãng cấy Iml nước ở đậm độ pha loãng hoặc 0,Im] nước nguyên Đọc kết quả bước 1:

Sau 24h nuôi cấy:

+ Đối với 5 ống canh thang lactosa đặc cấy 10ml nguyên chất : Cá 5 ống đều có biểu hiện đục, màu ban đâu từ tím giờ chuyên sang màu vàng và sinh hơi trong ông sinh hơi

+ Đối với ống canh thang lactosa loãng cây Im] nguyên chất : ống có hiện tượng đục, màu ban đầu từ tím giờ chuyên sang vàng( vàng nhạt) và sinh hơi trong ống sinh hoi

+ Đối với ống canh thang lactosa loãng cấy 1 ml : ống có hiện tượng đục, màu ban dau từ tím đậm trong giờ chuyên sang hơi vàng( hơi vàng có ánh tím) và sinh hơi trong ống sinh hơi (it)

Tông kết:

® 5 ống canh thang lactosa đặc, cấy 10ml nguyên chất (+) 5

® 1 ống canh thang lactosa loãng, cấy Iml nguyên chất(+) 5

® l ống canh thang lactosa loãng, I ml (+) 5

+ Mỗi ống cân khử trùng kỹ que cấy trước khi cây vào ống mới

+ Để tủ ấm hoặc trong vòng 24 giờ

- Đọc kết quả bước 2:

+Ca7 éng đều đều có hiện tượng đục hơn ban đầu và màu dẫn nhạt hơn

+ Trong đó 2 ống cấy mẫu từ ống thanh canh lactosa loãng không có hiện tượng

sinh hơi ở ống sinh hơi

+ Trong đó 5 ống cấy từ những ống canh thang lactosa đặc có hiện tượng sinh hơi ở ống sinh hơi Tông kết:

® 5 ống lấy mẫu từ 5 canh thang lactosa đặc, cấy 10ml nguyên chất (+) 5

® 1 ống lấy mẫu từ l canh thang lactosa loãng, cấy Iml nguyên chất(-) 0

® | éng lấy mẫu từ l canh thang lactosa loãng, I ml (-) 0

BÀI 4 XÉT NGHIỆM NƯỚC THÁI

I Cách lây mẫu để xét nghiệm nước thải

1 Dụng cụ lấy mẫu

1.1 Bình chúa mẫu

Yêu câu: chống được su mat mat chat do hap thu, bay hoi, 6 nhiễm bởi các chất lạ

> Binh thuy tinh, binh nhywa PET

1.2 Thiết bị lấy mẫu

* Thiết bị lấy mẫu thủ công

Đơn giản nhất là xô, muôi hoặc bình rộng miệng buộc vảo một cải cán có độ dài thích hợp Thể tích không được nhỏ hơn I00ml

* Yêu câu đối với thiết bị lầy mẫu

- _ Làm bằng vật liệu trơ, không gây ảnh hưởng đến phân tích sau này

*Lấy mẫu ở công, rãnh và hồ ga

- Dia diém lay mau cân phải đại điện cho dòng nước thai

- Dọn sạch để loại bỏ cặn, bùn, các lớp vi khuẩn ở trên thành

- Chú ý bảo đảm những điều kiện kiện lây mầu đông đều:

+ chọn địa điểm có dòng xoáy mạnh đề đảm bảo pha trộn tốt

+ không có điều kiện chảy rối thì tự tạo bằng cách thu hẹp đòng chảy băng vách ngăn + Điểm lấy mẫu phải ở chỗ hạ lưu của chỗ thu hẹp

- _ Quy tắc, điểm lấy mẫu năm ở chiều sâu 1⁄3 đưới bề mặt nước

*Các trạm xử lý nước thải

- _ Cân ghi nhớ mục tiêu của chương trình lay mau:

+ Kiêm tra hiệu quả của trạm xử lý về tông thê—› cân lấy ở đầu vào chính va dau ra chính + Kiêm tra hiệu quả xử lý của từng công đoạn hoặc một nhóm công đoạn

— Cac mau can lay ở đầu vào, đầu ra của bộ phân cần kiểm tra

- _ Cân hết sức chú ý khắc phục hoặc giảm thiêu:

+ Sự không đồng đều do các chất rắn lơ lửng

11

+ Sự phân tâng do nhiệt ở các dòng thải công nghiệp

—> Phải dùng các biện pháp tăng cường khuấy trộn dòng chảy

*Lay mẫu trên bề mặt nước

- Khi cần lấy mẫu lớp nước trên bề mặt

—> hớt để thu thập thông tin về các chất nội và nhũ hoá

- _ Cần dùng bình miệng rộng

3 Số mẫu và thơi gian lấy mẫu

*Số mẫu

- Phân tích nước thai dựa trên các mẫu lấy ở những khoảng thời gian đều đặn trong một chu kỳ

- Số mẫu cân lây phải dựa trên kỹ thuật thông kê

*Thời gian lay mau:

- _ Chú ý những nguyên nhân thay đôi chất lượng:

+ Thay đổi hàng ngày, giữa các ngay trong tuân, giữa các tuần lễ

+ Thay đổi giữa các tháng và các mùa, phát hiện xu hướng

—>Từ đó xác định thời gian lay mau

*Bảo quản, vận chuyền và lưu giữ mẫu

-_ Phụ thuộc vào yêu câu xét nghiệm của từng chỉ số

- Mẫu phân tích trong ngày phải được bảo quản lạnh

- _ Các loại khác cho thêm hoá chat dé bao quản và lưu giữ mẫu

* An toàn lẫy mẫu

- _ Tránh nguy cơ nhiễm bệnh do vi khuẩn gây bệnh và một số nguy cơ khác

II Định lượng oxy hòa tan trong nước

- Trong môi trường axit, hợp chất này có khả năng oxy hoá Iodua dé tạo ra lode

- _ lode sinh ra được chuẩn độ bằng dung dich Natri thiosunfat chuẩn Từ đó tính được ham lượng

Oxy hoà †an trong mẫu nước

2 Chuẩn bị

Chai thuỷ tình nút mai, dung tich 100-300 ml Cac dung dich co dinh oxi: Dung dich A; Dung

12

- _ Mẫu phải đại diện cho môi trường nước cần nghiên cứu, không được sục bọt khí

- _ Cân phân tích ngay sau khi lay mau

- Nếu không phải thực hiện tại chỗ bước có định Oxy

4 Cách tiễn hành

*Đối với nước kiêm nghiệm l ngày

Trong I chai thủy tinh nut mài dung tích 100-300ml:

- Lay gáo múc nước kiểm nghiệm vào chat rót từ từ tránh sục bọt.Đỗ đây tran khoang 100ml roi

dimg lai day nap

- _ Cho Iml dung dịch oxy A(cho thằng pipet chứa hóa chất xuống đáy chai rồi từ từ thả hóa chất rút

pIpet lên)

- Dùng pipet khác cho Iml dung dịch oxy B(cho thẳng pipet chứa hóa chất xuống đáy chai rồi từ từ

thả hóa chất rút pipet lên)

- Day nút chai tránh có bọt khí

- Lắc lộn chai nhiều lần.Đẻ yên cho kết tủa lăng xuống đề chỗ mát.tối khoảng 30 phút

- Cho them 5ml dung dịch axit HCI 2:1(cho thang pipet co hóa chat xuong gan day chai roi tr tir

thả hóa chất rút pipet lên)

- Day nút chai lắc lộn vòng chai nhiều lần cho đến khi kết tủa tan hết

- Lấy 50ml dung dịch trong chai cho vào bình nón dung tích 250ml để chuẩn độ

- Từ buret chuẩn độ bằng dung dich 0,02N(N/50) dung dịch chuyén mau vàng nhạt

- Cho Iml dung dich hồ tinh bột 0,5% vào bình non dung dịch chuyên mau xanh nhat

- Từ buret chuân độ tiếp cho đến khi dung dịch từ màu xanh nhạt bắt đầu mất màu thì dung lại

Gii lại kết quả lượng 0,02N (N/50) đã chuẩn độ 2 lần và tính kết quả theo công thức

VOL

N: Nồng độ đương lượng của dung dich Natri thiosulfate

n: Số ml Natri thiosulfate tiêu thụ

*Đối với nước kiêm nghiệm đã được để ủ trong 5 ngày

- _ Tiến hành các bước thêm hóa chất y như đối với mẫu nước kiêm nghiệm l ngày

- Tính toán kết quả theo công thức trên

5 Kết quả thí nghiệm

*Tính toán và kết luận

-Số ml đã được sử dụng đề chuẩn độ đối với thí nghiệm xác định oxy hòa tan trong nước(DO) là 2,4ml

13

-Số ml đã được sử dụng đề chuẩn độ đối với thí nghiệm xác định oxy hòa tan trong mẫu nước đã được ủ 5

Chí số DO của mẫu nước để l ngày là 7,68 mpg/1

Chí số DO của mẫu nước để 5 ngày là 1,6 mg/l

2.Tài liệu trong quá trình tiễn hành thí nghiệm

-Sau khi cho 2 dung dich oxy A va B vào hai bình đựng nước kiêm nghiệm l ngày và 5 ngày ~ a

-Sau khi lây 50ml dung dịch trong mỗi bình nước kị

lêm nghiệm để mang đi chuẩn độ

BÀI 5 XÉT NGHIỆM NƯỚC

I Cách lây mẫu nước xét nghiệm

Đề đảm bảo kết quả xét nghiệm chính xác cân phải thực hiện đúng các quy định lấy mẫu nước Điều kiện:

- Nước trong dụng cụ lay mau phải đại diện được cho nước nơi lay mau

- Néng dé các chất được xác định không được thay đỗi kê từ khi lẫy mẫu đến khi phân tích

Dụng cụ chữa mẫu:

- Pam bao mẫu không bị hấp phụ hay bay hơi hoặc không bị nhiễm bắn bởi chất lạ

Tiêu chuẩn lựa chọn bình chứa mẫu:

- Hạn chế tối thiểu khả năng gây ô nhiễm: vật liệu bình, nút => Tro về hóa học, sinh vật học

- — Dễ làm sạch

- _ Sai số do hấp phụ các chất cần xác định

- Bên với nhiệt, khó vỡ, dễ đóng mở, khả năng dùng lại

Dụng cụ , ~ Chai PET lay mau

| Chai thiy tinh y )

borosilicate

ñ = 1

- Dung cu thu công: Ca, xô,

- Quang chai hoac dung cu lay mẫu ở những độ sâu khác nhau

- Binh chan khong

- Thiet bi lay mau ty dong

Thiét bi lay mau:

Thao tac lay mau:

- Có nhãn phi địa điểm, thời gian lấy mẫu

-_ Tùy thuộc vào nguồn nước => Thao tác khác nhau

- Có vòi nước: Nước máy, giếng lắp bơm,

+ Mở nước chảy hết 2-3 phút, điều chỉnh vừa đủ

- Không có vòi nước: giếng khơi, ao, hé,

+ Dùng xô, ca hoặc dụng cụ lay mẫu: dưới mặt nước khoảng 50cm hoặc ở các độ sâu khác nhau

- - Bê chứa:

+ Lấy từ ống vào và ống ra của bê, cảng gân bê càng tốt

16

+ Xá 2-3 phút nước chảy tự đo nước cũ (không có van thì múc tir bé dang ding)

- Nơi có dòng chảy: sông, suối,

+ Dùng xô, ca

+ Mẫu nước đưới bề mặt 50cm hướng về dòng chảy

Địa điểm, số lượng và thời gian lấy mẫu:

*Nước ao hỗ:

-_ Lấy xung quanh và giữa trung tâm

- Điểm cung cấp nước cho người đùng

*Nước sông, SUÔI:

- Lấy hai bờ, giữa dòng

- _ Không lấy quá gân bờ, đáy

*Số lượng:

- _ Xét nghiệm các chỉ số thông thường: I-2 lít

- _ Xét nghiệm chất lượng tổng thé: 3-5 lit

Đưa mẫu nước đến phòng thí nghiệm:

- Đưa ngay đến phòng thí nghiệm, phân tích trong ngày

- _ Nếu không: bảo quản lạnh, tối (chat bao quan néu can)

Bao cao lay mau:

- Dia diém, toa dé

- Diém lay mau

- Dữ liệu khai thắc hiện trường

TI Nguyên tắc, cách tiến hành xét nghiệm một số chỉ số hóa học của nước

1 Xác định chỉ số Permanganat

- Chỉ số hóa học này đánh giá mức độ ô nhiễm của các chất hữu cơ hòa tan trong nước cấp dùng

cho sinh hoạt

- Phương pháp: chuẩn độ KMnO4

- Nguyên tắc:

+ Trong môi trường acid, các chất hữu cơ/chất khử bị oxy hóa bởi KMnO4 Lượng oxy tiều thụ

tương ứng với lượng KMnO4 phản ứng => Chuẩn độ

+ Trong môi trường kiêm, KMnO4 oxy hóa các chất hữu cơ có nguồn gốc động vật => Chuân độ

- Chuan bi:

17