TẠO DÒNG CÂY LẠC (ARACHIS HYPOGAEA L ) CHỊU HẠN BẰNG CÔNG NGHỆ TẾ BÀO VÀ PHÂN LẬP GEN CYSTATIN LIÊN QUAN ĐẾN TÍNH CHỊU HẠN Ở CÂY LẠC - Full 10 điểm

B Ộ GIÁO D Ụ C VÀ Đ ÀO T Ạ O ĐẠ I H Ọ C THÁI NGUYÊN V Ũ TH Ị THU TH Ủ Y T Ạ O DÒNG CH Ị U H Ạ N B Ằ NG CÔNG NGH Ệ T Ế BÀO VÀ PHÂN L Ậ P GEN CYSTATIN LIÊN QUAN ĐẾ N TÍNH CH Ị U H Ạ N Ở CÂY L Ạ C ( Arachis hypogaea L ) LU Ậ N ÁN TI Ế N S Ĩ SINH H Ọ C Thái Nguyên - 2011 B Ộ GIÁO D Ụ C VÀ Đ ÀO T Ạ O ĐẠ I H Ọ C THÁI NGUYÊN V Ũ TH Ị THU TH Ủ Y T Ạ O DÒNG CH Ị U H Ạ N B Ằ NG CÔNG NGH Ệ T Ế BÀO VÀ PHÂN L Ậ P GEN CYSTATIN LIÊN QUAN ĐẾ N TÍNH CH Ị U H Ạ N Ở CÂY L Ạ C ( Arachis hypogaea L ) LU Ậ N ÁN TI Ế N S Ĩ SINH H Ọ C Chuyên ngành: DI TRUY Ề N H Ọ C Mã s ố : 62 42 70 01 H ướ ng d ẫ n khoa h ọ c: 1 PGS TS CHU HOÀNG M Ậ U 2 PGS TS NGUY Ễ N TH Ị TÂM Thái Nguyên - 2011 i L Ờ I CAM Đ OAN Tôi xin cam đ oan b ả n lu ậ n án là công trình nghiên c ứ u c ủ a tôi d ướ i s ự h ướ ng d ẫ n c ủ a PGS TS Chu Hoàng M ậ u và PGS TS Nguy ễ n Th ị Tâm, s ự giúp đỡ c ủ a các cán b ộ Khoa Sinh – Tr ườ ng Đạ i h ọ c S ư ph ạ m, Khoa Khoa h ọ c S ự s ố ng- Tr ườ ng Đạ i h ọ c Khoa h ọ c, Đạ i h ọ c Thái Nguyên Các s ố li ệ u nêu trong lu ậ n án là trung th ự c M ộ t s ố k ế t qu ả đ ã đượ c công b ố riêng ho ặ c đồ ng tác gi ả , ph ầ n còn l ạ i ch ư a đượ c ai công b ố trong b ấ t k ỳ các công trình nào khác Tôi xin hoàn toàn ch ị u trách nhi ệ m v ề nh ữ ng s ố li ệ u trong lu ậ n án này Tác gi ả V ũ Th ị Thu Th ủ y ii L Ờ I C Ả M Ơ N Tr ướ c h ế t, tôi xin đượ c bày t ỏ lòng bi ế t ơ n sâu s ắ c t ớ i PGS TS Chu Hoàng M ậ u và PGS TS Nguy ễ n Th ị Tâm, nh ữ ng ng ườ i th ầ y đ ã nhi ệ t tình h ướ ng d ẫ n tôi trong nghiên c ứ u khoa h ọ c, đ ã h ế t lòng giúp đỡ tôi c ả v ề v ậ t ch ấ t và tinh th ầ n trong su ố t th ờ i gian tôi làm nghiên c ứ u sinh để tôi hoàn thành b ả n lu ậ n án này Tôi xin chân thành c ả m ơ n Ban ch ủ nhi ệ m Khoa Sinh-KTNN, Ban giám hi ệ u Tr ườ ng Đạ i h ọ c S ư Ph ạ m – Đạ i h ọ c Thái Nguyên và các b ạ n đồ ng nghi ệ p đ ã ủ ng h ộ , t ạ o m ọ i đ i ề u ki ệ n thu ậ n l ợ i giúp tôi hoàn thành lu ậ n án Tôi xin chân thành c ả m ơ n TS Nguy ễ n V ũ Thanh Thanh, Tr ườ ng Đạ i h ọ c Khoa h ọ c, Đạ i h ọ c Thái Nguyên; TS Lê V ă n S ơ n và phòng Công ngh ệ t ế bào th ự c v ậ t- Vi ệ n Công ngh ệ Sinh h ọ c Xin c ả m ơ n Vi ệ n Khoa h ọ c S ự s ố ng thu ộ c Đạ i h ọ c Thái Nguyên, Ban Giám đố c Trung tâm chi ế u x ạ Qu ố c Gia (T ừ Liêm-Hà N ộ i) và gia đ ình bà Ngô Th ị Th ườ ng, t ổ R ừ ng V ầ u, ph ườ ng Quang Vinh, thành ph ố Thái Nguyên đ ã t ạ o đ i ề u ki ệ n để tôi hoàn thành lu ậ n án L ờ i c ả m ơ n sau cùng xin dành cho gia đ ình và nh ữ ng ng ườ i thân đ ã luôn độ ng viên, giúp đỡ , t ạ o m ọ i đ i ề u ki ệ n thu ậ n l ợ i cho tôi trong su ố t quá trình làm nghiên c ứ u sinh Tác gi ả lu ậ n án V ũ Th ị Thu Th ủ y iii M Ụ C L Ụ C Trang L ờ i cam đ oan i L ờ i c ả m ơ n ii M ụ c l ụ c iii Danh m ụ c các ký hi ệ u, ch ữ vi ế t t ắ t vi Danh m ụ c b ả ng viii Danh m ụ c hình x M Ở ĐẦ U 1 Ch ươ ng 1 T Ổ NG QUAN TÀI LI Ệ U 4 1 1 Cây l ạ c và đặ c tính ch ị u h ạ n c ủ a cây l ạ c 4 1 1 1 Ngu ồ n g ố c và đặ c đ i ể m nông sinh h ọ c c ủ a cây l ạ c 4 1 1 2 Đặ c tính ch ị u h ạ n c ủ a th ự c v ậ t và c ủ a cây l ạ c 8 1 2 Nghiên c ứ u nâng cao kh ả n ă ng ch ị u h ạ n c ủ a cây tr ồ ng b ằ ng công ngh ệ t ế bào th ự c v ậ t 15 1 2 1 Ch ọ n dòng t ế bào soma trong ch ọ n gi ố ng cây tr ồ ng 16 1 2 2 Phát sinh bi ế n d ị trong quá trình nuôi c ấ y 19 1 2 3 Các ph ươ ng pháp ch ọ n dòng t ế bào 20 1 2 4 M ộ t s ố thành t ự u trong ch ọ n dòng ch ố ng ch ị u y ế u t ố b ấ t l ợ i c ủ a ngo ạ i c ả nh 21 1 3 Phân tích, đ ánh giá các dòng ch ọ n l ọ c có ngu ồ n g ố c t ừ nuôi c ấ y mô s ẹ o 23 1 3 1 Đ ánh giá kh ả n ă ng ch ị u m ấ t n ướ c c ủ a mô, t ế bào th ự c v ậ t 23 1 3 2 Đ ánh giá kh ả n ă ng ch ị u h ạ n ở giai đ o ạ n h ạ t n ả y m ầ m và giai đ o ạ n cây non 24 1 3 3 K ỹ thu ậ t RAPD trong đ ánh giá h ệ gen c ủ a các dòng ch ọ n l ọ c 26 iv 1 4 Gen liên quan đế n tính ch ị u h ạ n ở cây l ạ c 28 1 4 1 Các gen liên quan đế n kh ả n ă ng ch ị u h ạ n c ủ a cây l ạ c 28 1 4 2 Nhóm gen mã hóa protein đ i ề u khi ể n ho ạ t độ ng phiên mã c ủ a các gen ch ị u h ạ n 29 1 5 Cystatin và vai trò c ủ a cystatin ở th ự c v ậ t 30 1 5 1 Đặ c đ i ể m c ấ u t ạ o và phân lo ạ i cystatin 30 1 5 2 C ấ u trúc không gian và c ơ ch ế ứ c ch ế c ủ a cystatin 33 1 5 3 Ch ứ c n ă ng c ủ a cystatin 37 1 5 4 Gen mã hóa cystatin 38 Ch ươ ng 2 V Ậ T LI Ệ U VÀ PH ƯƠ NG PHÁP NGHIÊN C Ứ U 43 2 1 V ậ t li ệ u th ự c v ậ t 43 2 2 Hoá ch ấ t và thi ế t b ị 45 2 3 Ph ươ ng pháp nghiên c ứ u 45 2 3 1 Ph ươ ng pháp nuôi c ấ y in vitro 46 2 3 2 Ph ươ ng pháp nghiên c ứ u đồ ng ru ộ ng 49 2 3 3 Ph ươ ng pháp sinh lý, hoá sinh 50 2 3 4 Ph ươ ng pháp sinh h ọ c phân t ử 52 2 3 5 Ph ươ ng pháp phân tích s ố li ệ u 55 2 4 Đị a đ i ể m nghiên c ứ u 56 Ch ươ ng 3 K Ế T QU Ả NGHIÊN C Ứ U VÀ TH Ả O LU Ậ N 57 31 K ế t qu ả t ạ o dòng ch ị u h ạ n b ằ ng k ỹ thu ậ t x ử lý mô s ẹ o trong h ệ th ố ng nuôi c ấ y in vitro 57 3 1 1 Sàng l ọ c dòng mô s ẹ o ch ị u tác độ ng c ủ a th ổ i khô 57 3 1 2 Ả nh h ưở ng c ủ a tia gamma k ế t h ợ p v ớ i th ổ i khô đế n t ỷ l ệ s ố ng sót và tái sinh cây c ủ a gi ố ng l ạ c L18 66 3 1 3 Đặ c đ i ể m nông sinh h ọ c c ủ a các qu ầ n th ể l ạ c R 0 và RM 0 69 3 2 K ế t qu ả phân tích nh ữ ng dòng l ạ c ch ọ n l ọ c qua các th ế h ệ 74 v 3 2 1 Đặ c đ i ể m nông sinh h ọ c các dòng l ạ c ch ọ n l ọ c ở th ế h ệ th ứ Nh ấ t và th ứ Ba 74 3 2 2 Đ ánh giá các dòng ch ọ n l ọ c ở th ế h ệ th ứ N ă m 78 3 2 3 Đặ c đ i ể m c ủ a m ộ t s ố dòng l ạ c ư u vi ệ t 94 3 3 Phân l ậ p và xác đị nh trình t ự gen cystatin t ừ cây l ạ c 97 3 3 1 Khuy ế ch đạ i gen cystatin t ừ DNA h ệ gen c ủ a cây l ạ c 97 3 3 2 K ế t qu ả tách dòng và xác đị nh trình t ự gen cystatin 98 3 3 3 K ế t qu ả so sánh trình t ự gen và protein cystatin 102 K Ế T LU Ậ N 111 CÁC CÔNG TRÌNH CÔNG B Ố LIÊN QUAN ĐẾ N LU Ậ N ÁN 113 TÀI LI Ệ U THAM KH Ả O 114 PH Ụ L Ụ C vi DANH M Ụ C CÁC KÝ HI Ệ U, CH Ữ VI Ế T T Ắ T ABA : absicis acid AhNCED : Arachis hypogaea 9-cis-epoxycarotenoid dioxygenase AhSP : Arachis hypogaea serine proteinase BAP : 6 Benzyl amino purin bp : base pair CC : Corn Cystatin CHP : cây h ồ i ph ụ c CKH : cây không héo CTAB : Cetyltrimethylammonium bromide CYS : cystatin DNA : Deoxyribose nucleic acid đ tg : đồ ng tác gi ả EDTA : Ethylene diamine tetraacetic acid HSP : heat shock protein HvCPI : Hodeum vulgare cysteine proteinase inhibitor IPTG : Isopropyl β -D-1 thiogalactopyranoside kb : kilo base kDa : kilo dalton KLK : kh ố i l ượ ng khô krad : kilorad LB : Luria- Bertani LEA : late embryogenesis abudant LTPs : lipid transfer proteins MS : Murashige- Skoog mRNA : messenger Ribonucleic acid vii OC : Oryza Cystatin OD : Optical Density PCR : Polymerase chain reaction PEG : Polyethylene glycol PLD α : Phospholipase D α RAPD : Random amplified polymorphic DNA SDS : Sodium Dodesyl Sulphate TAE : Tris Acetate EDTA TTC : 2,3,5 Trichlo tetrazolium chlorit VuC : Vigna unguiculata cystatin X-gal : 5- Bromo- 4 Cloro- 3 indolyl D galactopyranoside WC : Wheat cystatin 2,4-D : 2 4 Dichlorphenoxyacetic acid α - NAA : α - Naphthaleneacetic acid viii DANH M Ụ C B Ả NG Trang B ả ng 1 1 Di ệ n tích, n ă ng su ấ t và s ả n l ượ ng l ạ c c ủ a Vi ệ t Nam giai đ o ạ n 2005-2009 5 B ả ng 1 2 Gen cystatin liên quan v ớ i kh ả n ă ng ch ố ng ch ị u h ạ n ở m ộ t s ố loài th ự c v ậ t 41 B ả ng 2 1 M ộ t s ố đặ c đ i ể m c ủ a 10 gi ố ng l ạ c nghiên c ứ u 43 B ả ng 3 1 T ỷ l ệ t ạ o mô s ẹ o và kh ố i l ượ ng mô s ẹ o c ủ a 10 gi ố ng l ạ c 58 B ả ng 3 2 Độ m ấ t n ướ c c ủ a mô s ẹ o sau x ử lý b ằ ng k ỹ thu ậ t th ổ i khô 59 B ả ng 3 3 K ế t qu ả ki ể m tra kh ả n ă ng ch ị u m ấ t n ướ c c ủ a mô s ẹ o 10 gi ố ng l ạ c b ằ ng ph ươ ng pháp nhu ộ m TTC 61 B ả ng 3 4 T ỷ l ệ s ố ng sót c ủ a mô s ẹ o b ị x ử lý b ằ ng th ổ i khô sau 4 tu ầ n nuôi ph ụ c h ồ i 63 B ả ng 3 5 T ỷ l ệ tái sinh cây c ủ a mô s ẹ o s ố ng sót sau 6 tu ầ n 65 B ả ng 3 6 Ả nh h ưở ng c ủ a chi ế u x ạ k ế t h ợ p v ớ i th ổ i khô 9 gi ờ đế n t ỷ l ệ s ố ng sót và tái sinh cây c ủ a mô s ẹ o ở gi ố ng l ạ c L18 66 B ả ng 3 7 Đặ c đ i ể m nông h ọ c c ủ a qu ầ n th ể R 0 , RM 0 tái sinh t ừ mô s ẹ o m ấ t n ướ c 70 B ả ng 3 8 Đặ c đ i ể m nông sinh h ọ c các dòng l ạ c ch ọ n l ọ c ở th ế h ệ th ứ Nh ấ t 75 B ả ng 3 9 Đặ c đ i ể m nông h ọ c các dòng l ạ c ch ọ n l ọ c th ế h ệ th ứ Ba 77 B ả ng 3 10 Đặ c đ i ể m nông sinh h ọ c và ch ấ t l ượ ng h ạ t các dòng ch ọ n l ọ c ở th ế h ệ th ứ N ă m 79 B ả ng 3 11 T ươ ng quan gi ữ a ho ạ t độ c ủ a α -amylase và hàm l ượ ng đườ ng ở giai đ o ạ n h ạ t n ả y m ầ m 84 B ả ng 3 12 T ỷ l ệ cây s ố ng, cây ph ụ c h ồ i và ch ỉ s ố ch ị u h ạ n t ươ ng đố i c ủ a các dòng ch ọ n l ọ c ở th ế h ệ th ứ N ă m 86

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN

VŨ THỊ THU THỦY

TẠO DÒNG CHỊU HẠN BẰNG CÔNG NGHỆ TẾ BÀO VÀ PHÂN LẬP GEN CYSTATIN LIÊN QUAN ĐẾN TÍNH

CHỊU HẠN Ở CÂY LẠC (Arachis hypogaea L.)

LUẬN ÁN TIẾN SĨ SINH HỌC

Thái Nguyên - 2011

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN

VŨ THỊ THU THỦY

TẠO DÒNG CHỊU HẠN BẰNG CÔNG NGHỆ TẾ BÀO VÀ PHÂN LẬP GEN CYSTATIN LIÊN QUAN ĐẾN TÍNH

CHỊU HẠN Ở CÂY LẠC (Arachis hypogaea L.)

LUẬN ÁN TIẾN SĨ SINH HỌC

Chuyên ngành: DI TRUYỀN HỌC

Mã số: 62 42 70 01

Hướng dẫn khoa học: 1 PGS.TS CHU HOÀNG MẬU

2 PGS TS NGUYỄN THỊ TÂM

i

LỜI CAM ĐOAN

Tôi xin cam đoan bản luận án là công trình nghiên cứu của tôi dưới sự hướng dẫn của PGS.TS Chu Hoàng Mậu và PGS.TS Nguyễn Thị Tâm, sự giúp đỡ của các cán bộ Khoa Sinh – Trường Đại học Sư phạm, Khoa Khoa học Sự sống- Trường Đại học Khoa học, Đại học Thái Nguyên Các số liệu nêu trong luận án là trung thực Một số kết quả đã được công bố riêng hoặc đồng tác giả, phần còn lại chưa được ai công bố trong bất kỳ các công trình nào khác

Tôi xin hoàn toàn chịu trách nhiệm về những số liệu trong luận án này

Tác giả

Vũ Thị Thu Thủy

LỜI CẢM ƠN

Trước hết, tôi xin được bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới PGS.TS Chu Hoàng Mậu và PGS.TS Nguyễn Thị Tâm, những người thầy đã nhiệt tình hướng dẫn tôi trong nghiên cứu khoa học, đã hết lòng giúp đỡ tôi cả về vật chất và tinh thần trong suốt thời gian tôi làm nghiên cứu sinh để tôi hoàn thành bản luận án này

Tôi xin chân thành cảm ơn Ban chủ nhiệm Khoa Sinh-KTNN, Ban giám hiệu Trường Đại học Sư Phạm – Đại học Thái Nguyên và các bạn đồng nghiệp đã ủng hộ, tạo mọi điều kiện thuận lợi giúp tôi hoàn thành luận án

Tôi xin chân thành cảm ơn TS Nguyễn Vũ Thanh Thanh, Trường Đại học Khoa học, Đại học Thái Nguyên; TS Lê Văn Sơn và phòng Công nghệ tế bào thực vật- Viện Công nghệ Sinh học

Xin cảm ơn Viện Khoa học Sự sống thuộc Đại học Thái Nguyên, Ban Giám đốc Trung tâm chiếu xạ Quốc Gia (Từ Liêm-Hà Nội) và gia đình bà Ngô Thị Thường, tổ Rừng Vầu, phường Quang Vinh, thành phố Thái Nguyên

đã tạo điều kiện để tôi hoàn thành luận án

Lời cảm ơn sau cùng xin dành cho gia đình và những người thân đã luôn động viên, giúp đỡ, tạo mọi điều kiện thuận lợi cho tôi trong suốt quá trình làm nghiên cứu sinh

Tác giả luận án

Vũ Thị Thu Thủy

iii

MỤC LỤC

Trang

MỞ ĐẦU 1

Chương 1 TỔNG QUAN TÀI LIỆU 4

1.1 Cây lạc và đặc tính chịu hạn của cây lạc 4

1.1.1 Nguồn gốc và đặc điểm nông sinh học của cây lạc 4

1.1.2 Đặc tính chịu hạn của thực vật và của cây lạc 8

1.2 Nghiên cứu nâng cao khả năng chịu hạn của cây trồng bằng công nghệ tế bào thực vật 15

1.2.1 Chọn dòng tế bào soma trong chọn giống cây trồng 16

1.2.2 Phát sinh biến dị trong quá trình nuôi cấy 19

1.2.3 Các phương pháp chọn dòng tế bào 20

1.2.4 Một số thành tựu trong chọn dòng chống chịu yếu tố bất lợi của ngoại cảnh 21

1.3 Phân tích, đánh giá các dòng chọn lọc có nguồn gốc từ nuôi cấy mô sẹo 23

1.3.1 Đánh giá khả năng chịu mất nước của mô, tế bào thực vật 23

1.3.2 Đánh giá khả năng chịu hạn ở giai đoạn hạt nảy mầm và giai đoạn cây non 24

1.3.3 Kỹ thuật RAPD trong đánh giá hệ gen của các dòng chọn lọc 26

1.4 Gen liên quan đến tính chịu hạn ở cây lạc 28

1.4.1 Các gen liên quan đến khả năng chịu hạn của cây lạc 28

1.4.2 Nhóm gen mã hóa protein điều khiển hoạt động phiên mã của các gen chịu hạn 29

1 5 Cystatin và vai trò của cystatin ở thực vật 30

1.5.1 Đặc điểm cấu tạo và phân loại cystatin 30

1.5.2 Cấu trúc không gian và cơ chế ức chế của cystatin 33

1.5.3 Chức năng của cystatin 37

1.5.4 Gen mã hóa cystatin 38

Chương 2 VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 43

2.1 Vật liệu thực vật 43

2.2 Hoá chất và thiết bị 45

2.3 Phương pháp nghiên cứu 45

2.3.1 Phương pháp nuôi cấy in vitro 46

2.3.2 Phương pháp nghiên cứu đồng ruộng 49

2.3.3 Phương pháp sinh lý, hoá sinh 50

2.3.4 Phương pháp sinh học phân tử 52

2.3.5 Phương pháp phân tích số liệu 55

2.4 Địa điểm nghiên cứu 56

Chương 3 KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 57

31 Kết quả tạo dòng chịu hạn bằng kỹ thuật xử lý mô sẹo trong hệ thống nuôi cấy in vitro 57

3.1.1 Sàng lọc dòng mô sẹo chịu tác động của thổi khô 57

3.1.2 Ảnh hưởng của tia gamma kết hợp với thổi khô đến tỷ lệ sống sót và tái sinh cây của giống lạc L18 66

3.1.3 Đặc điểm nông sinh học của các quần thể lạc R0 và RM0 69

3.2 Kết quả phân tích những dòng lạc chọn lọc qua các thế hệ 74

v

3.2.1 Đặc điểm nông sinh học các dòng lạc chọn lọc ở thế hệ thứ Nhất

và thứ Ba 74

3.2.2 Đánh giá các dòng chọn lọc ở thế hệ thứ Năm 78

3.2.3 Đặc điểm của một số dòng lạc ưu việt 94

3.3 Phân lập và xác định trình tự gen cystatin từ cây lạc 97

3.3.1 Khuyếch đại gen cystatin từ DNA hệ gen của cây lạc 97

3.3.2 Kết quả tách dòng và xác định trình tự gen cystatin 98

3.3.3 Kết quả so sánh trình tự gen và protein cystatin 102

KẾT LUẬN 111

CÁC CÔNG TRÌNH CÔNG BỐ LIÊN QUAN ĐẾN LUẬN ÁN 113

TÀI LIỆU THAM KHẢO 114

PHỤ LỤC

DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT

ABA : absicis acid

AhNCED : Arachis hypogaea 9-cis-epoxycarotenoid dioxygenase AhSP : Arachis hypogaea serine proteinase

BAP : 6 Benzyl amino purin

bp : base pair

CC : Corn Cystatin

CHP : cây hồi phục

CKH : cây không héo

CTAB : Cetyltrimethylammonium bromide

CYS : cystatin

DNA : Deoxyribose nucleic acid

đtg : đồng tác giả

EDTA : Ethylene diamine tetraacetic acid

HSP : heat shock protein

HvCPI : Hodeum vulgare cysteine proteinase inhibitor

IPTG : Isopropyl β-D-1 thiogalactopyranoside

kb : kilo base

kDa : kilo dalton

KLK : khối lượng khô

krad : kilorad

LB : Luria- Bertani

LEA : late embryogenesis abudant

LTPs : lipid transfer proteins

MS : Murashige- Skoog

vii

OC : Oryza Cystatin

OD : Optical Density

PCR : Polymerase chain reaction

PEG : Polyethylene glycol

PLDα : Phospholipase Dα

RAPD : Random amplified polymorphic DNA

SDS : Sodium Dodesyl Sulphate

TAE : Tris Acetate EDTA

TTC : 2,3,5 Trichlo tetrazolium chlorit

VuC : Vigna unguiculata cystatin

X-gal : 5- Bromo- 4 Cloro- 3 indolyl D galactopyranoside

WC : Wheat cystatin

2,4-D : 2.4 Dichlorphenoxyacetic acid

α- NAA : α- Naphthaleneacetic acid

DANH MỤC BẢNG

Trang

Bảng 1.1 Diện tích, năng suất và sản lượng lạc của Việt Nam giai

đoạn 2005-2009 5 Bảng 1.2 Gen cystatin liên quan với khả năng chống chịu hạn ở

một số loài thực vật 41 Bảng 2.1 Một số đặc điểm của 10 giống lạc nghiên cứu 43 Bảng 3.1 Tỷ lệ tạo mô sẹo và khối lượng mô sẹo của 10 giống lạc 58 Bảng 3.2 Độ mất nước của mô sẹo sau xử lý bằng kỹ thuật thổi khô 59 Bảng 3.3 Kết quả kiểm tra khả năng chịu mất nước của mô sẹo 10

giống lạc bằng phương pháp nhuộm TTC 61 Bảng 3.4 Tỷ lệ sống sót của mô sẹo bị xử lý bằng thổi khô sau 4

tuần nuôi phục hồi 63 Bảng 3.5 Tỷ lệ tái sinh cây của mô sẹo sống sót sau 6 tuần 65 Bảng 3.6 Ảnh hưởng của chiếu xạ kết hợp với thổi khô 9 giờ đến

tỷ lệ sống sót và tái sinh cây của mô sẹo ở giống lạc L18 66 Bảng 3.7 Đặc điểm nông học của quần thể R0, RM0 tái sinh từ mô

sẹo mất nước 70 Bảng 3.8 Đặc điểm nông sinh học các dòng lạc chọn lọc ở thế hệ

thứ Nhất 75 Bảng 3.9 Đặc điểm nông học các dòng lạc chọn lọc thế hệ thứ Ba 77 Bảng 3.10 Đặc điểm nông sinh học và chất lượng hạt các dòng

chọn lọc ở thế hệ thứ Năm 79 Bảng 3.11 Tương quan giữa hoạt độ của α-amylase và hàm lượng

đường ở giai đoạn hạt nảy mầm 84 Bảng 3.12 Tỷ lệ cây sống, cây phục hồi và chỉ số chịu hạn tương