B Ộ GIÁO D Ụ C VÀ Đ ÀO T Ạ O ĐẠ I H Ọ C THÁI NGUYÊN V Ũ TH Ị THU TH Ủ Y T Ạ O DÒNG CH Ị U H Ạ N B Ằ NG CÔNG NGH Ệ T Ế BÀO VÀ PHÂN L Ậ P GEN CYSTATIN LIÊN QUAN ĐẾ N TÍNH CH Ị U H Ạ N Ở CÂY L Ạ C ( Arachis hypogaea L ) LU Ậ N ÁN TI Ế N S Ĩ SINH H Ọ C Thái Nguyên - 2011 B Ộ GIÁO D Ụ C VÀ Đ ÀO T Ạ O ĐẠ I H Ọ C THÁI NGUYÊN V Ũ TH Ị THU TH Ủ Y T Ạ O DÒNG CH Ị U H Ạ N B Ằ NG CÔNG NGH Ệ T Ế BÀO VÀ PHÂN L Ậ P GEN CYSTATIN LIÊN QUAN ĐẾ N TÍNH CH Ị U H Ạ N Ở CÂY L Ạ C ( Arachis hypogaea L ) LU Ậ N ÁN TI Ế N S Ĩ SINH H Ọ C Chuyên ngành: DI TRUY Ề N H Ọ C Mã s ố : 62 42 70 01 H ướ ng d ẫ n khoa h ọ c: 1 PGS TS CHU HOÀNG M Ậ U 2 PGS TS NGUY Ễ N TH Ị TÂM Thái Nguyên - 2011 i L Ờ I CAM Đ OAN Tôi xin cam đ oan b ả n lu ậ n án là công trình nghiên c ứ u c ủ a tôi d ướ i s ự h ướ ng d ẫ n c ủ a PGS TS Chu Hoàng M ậ u và PGS TS Nguy ễ n Th ị Tâm, s ự giúp đỡ c ủ a các cán b ộ Khoa Sinh – Tr ườ ng Đạ i h ọ c S ư ph ạ m, Khoa Khoa h ọ c S ự s ố ng- Tr ườ ng Đạ i h ọ c Khoa h ọ c, Đạ i h ọ c Thái Nguyên Các s ố li ệ u nêu trong lu ậ n án là trung th ự c M ộ t s ố k ế t qu ả đ ã đượ c công b ố riêng ho ặ c đồ ng tác gi ả , ph ầ n còn l ạ i ch ư a đượ c ai công b ố trong b ấ t k ỳ các công trình nào khác Tôi xin hoàn toàn ch ị u trách nhi ệ m v ề nh ữ ng s ố li ệ u trong lu ậ n án này Tác gi ả V ũ Th ị Thu Th ủ y ii L Ờ I C Ả M Ơ N Tr ướ c h ế t, tôi xin đượ c bày t ỏ lòng bi ế t ơ n sâu s ắ c t ớ i PGS TS Chu Hoàng M ậ u và PGS TS Nguy ễ n Th ị Tâm, nh ữ ng ng ườ i th ầ y đ ã nhi ệ t tình h ướ ng d ẫ n tôi trong nghiên c ứ u khoa h ọ c, đ ã h ế t lòng giúp đỡ tôi c ả v ề v ậ t ch ấ t và tinh th ầ n trong su ố t th ờ i gian tôi làm nghiên c ứ u sinh để tôi hoàn thành b ả n lu ậ n án này Tôi xin chân thành c ả m ơ n Ban ch ủ nhi ệ m Khoa Sinh-KTNN, Ban giám hi ệ u Tr ườ ng Đạ i h ọ c S ư Ph ạ m – Đạ i h ọ c Thái Nguyên và các b ạ n đồ ng nghi ệ p đ ã ủ ng h ộ , t ạ o m ọ i đ i ề u ki ệ n thu ậ n l ợ i giúp tôi hoàn thành lu ậ n án Tôi xin chân thành c ả m ơ n TS Nguy ễ n V ũ Thanh Thanh, Tr ườ ng Đạ i h ọ c Khoa h ọ c, Đạ i h ọ c Thái Nguyên; TS Lê V ă n S ơ n và phòng Công ngh ệ t ế bào th ự c v ậ t- Vi ệ n Công ngh ệ Sinh h ọ c Xin c ả m ơ n Vi ệ n Khoa h ọ c S ự s ố ng thu ộ c Đạ i h ọ c Thái Nguyên, Ban Giám đố c Trung tâm chi ế u x ạ Qu ố c Gia (T ừ Liêm-Hà N ộ i) và gia đ ình bà Ngô Th ị Th ườ ng, t ổ R ừ ng V ầ u, ph ườ ng Quang Vinh, thành ph ố Thái Nguyên đ ã t ạ o đ i ề u ki ệ n để tôi hoàn thành lu ậ n án L ờ i c ả m ơ n sau cùng xin dành cho gia đ ình và nh ữ ng ng ườ i thân đ ã luôn độ ng viên, giúp đỡ , t ạ o m ọ i đ i ề u ki ệ n thu ậ n l ợ i cho tôi trong su ố t quá trình làm nghiên c ứ u sinh Tác gi ả lu ậ n án V ũ Th ị Thu Th ủ y iii M Ụ C L Ụ C Trang L ờ i cam đ oan i L ờ i c ả m ơ n ii M ụ c l ụ c iii Danh m ụ c các ký hi ệ u, ch ữ vi ế t t ắ t vi Danh m ụ c b ả ng viii Danh m ụ c hình x M Ở ĐẦ U 1 Ch ươ ng 1 T Ổ NG QUAN TÀI LI Ệ U 4 1 1 Cây l ạ c và đặ c tính ch ị u h ạ n c ủ a cây l ạ c 4 1 1 1 Ngu ồ n g ố c và đặ c đ i ể m nông sinh h ọ c c ủ a cây l ạ c 4 1 1 2 Đặ c tính ch ị u h ạ n c ủ a th ự c v ậ t và c ủ a cây l ạ c 8 1 2 Nghiên c ứ u nâng cao kh ả n ă ng ch ị u h ạ n c ủ a cây tr ồ ng b ằ ng công ngh ệ t ế bào th ự c v ậ t 15 1 2 1 Ch ọ n dòng t ế bào soma trong ch ọ n gi ố ng cây tr ồ ng 16 1 2 2 Phát sinh bi ế n d ị trong quá trình nuôi c ấ y 19 1 2 3 Các ph ươ ng pháp ch ọ n dòng t ế bào 20 1 2 4 M ộ t s ố thành t ự u trong ch ọ n dòng ch ố ng ch ị u y ế u t ố b ấ t l ợ i c ủ a ngo ạ i c ả nh 21 1 3 Phân tích, đ ánh giá các dòng ch ọ n l ọ c có ngu ồ n g ố c t ừ nuôi c ấ y mô s ẹ o 23 1 3 1 Đ ánh giá kh ả n ă ng ch ị u m ấ t n ướ c c ủ a mô, t ế bào th ự c v ậ t 23 1 3 2 Đ ánh giá kh ả n ă ng ch ị u h ạ n ở giai đ o ạ n h ạ t n ả y m ầ m và giai đ o ạ n cây non 24 1 3 3 K ỹ thu ậ t RAPD trong đ ánh giá h ệ gen c ủ a các dòng ch ọ n l ọ c 26 iv 1 4 Gen liên quan đế n tính ch ị u h ạ n ở cây l ạ c 28 1 4 1 Các gen liên quan đế n kh ả n ă ng ch ị u h ạ n c ủ a cây l ạ c 28 1 4 2 Nhóm gen mã hóa protein đ i ề u khi ể n ho ạ t độ ng phiên mã c ủ a các gen ch ị u h ạ n 29 1 5 Cystatin và vai trò c ủ a cystatin ở th ự c v ậ t 30 1 5 1 Đặ c đ i ể m c ấ u t ạ o và phân lo ạ i cystatin 30 1 5 2 C ấ u trúc không gian và c ơ ch ế ứ c ch ế c ủ a cystatin 33 1 5 3 Ch ứ c n ă ng c ủ a cystatin 37 1 5 4 Gen mã hóa cystatin 38 Ch ươ ng 2 V Ậ T LI Ệ U VÀ PH ƯƠ NG PHÁP NGHIÊN C Ứ U 43 2 1 V ậ t li ệ u th ự c v ậ t 43 2 2 Hoá ch ấ t và thi ế t b ị 45 2 3 Ph ươ ng pháp nghiên c ứ u 45 2 3 1 Ph ươ ng pháp nuôi c ấ y in vitro 46 2 3 2 Ph ươ ng pháp nghiên c ứ u đồ ng ru ộ ng 49 2 3 3 Ph ươ ng pháp sinh lý, hoá sinh 50 2 3 4 Ph ươ ng pháp sinh h ọ c phân t ử 52 2 3 5 Ph ươ ng pháp phân tích s ố li ệ u 55 2 4 Đị a đ i ể m nghiên c ứ u 56 Ch ươ ng 3 K Ế T QU Ả NGHIÊN C Ứ U VÀ TH Ả O LU Ậ N 57 31 K ế t qu ả t ạ o dòng ch ị u h ạ n b ằ ng k ỹ thu ậ t x ử lý mô s ẹ o trong h ệ th ố ng nuôi c ấ y in vitro 57 3 1 1 Sàng l ọ c dòng mô s ẹ o ch ị u tác độ ng c ủ a th ổ i khô 57 3 1 2 Ả nh h ưở ng c ủ a tia gamma k ế t h ợ p v ớ i th ổ i khô đế n t ỷ l ệ s ố ng sót và tái sinh cây c ủ a gi ố ng l ạ c L18 66 3 1 3 Đặ c đ i ể m nông sinh h ọ c c ủ a các qu ầ n th ể l ạ c R 0 và RM 0 69 3 2 K ế t qu ả phân tích nh ữ ng dòng l ạ c ch ọ n l ọ c qua các th ế h ệ 74 v 3 2 1 Đặ c đ i ể m nông sinh h ọ c các dòng l ạ c ch ọ n l ọ c ở th ế h ệ th ứ Nh ấ t và th ứ Ba 74 3 2 2 Đ ánh giá các dòng ch ọ n l ọ c ở th ế h ệ th ứ N ă m 78 3 2 3 Đặ c đ i ể m c ủ a m ộ t s ố dòng l ạ c ư u vi ệ t 94 3 3 Phân l ậ p và xác đị nh trình t ự gen cystatin t ừ cây l ạ c 97 3 3 1 Khuy ế ch đạ i gen cystatin t ừ DNA h ệ gen c ủ a cây l ạ c 97 3 3 2 K ế t qu ả tách dòng và xác đị nh trình t ự gen cystatin 98 3 3 3 K ế t qu ả so sánh trình t ự gen và protein cystatin 102 K Ế T LU Ậ N 111 CÁC CÔNG TRÌNH CÔNG B Ố LIÊN QUAN ĐẾ N LU Ậ N ÁN 113 TÀI LI Ệ U THAM KH Ả O 114 PH Ụ L Ụ C vi DANH M Ụ C CÁC KÝ HI Ệ U, CH Ữ VI Ế T T Ắ T ABA : absicis acid AhNCED : Arachis hypogaea 9-cis-epoxycarotenoid dioxygenase AhSP : Arachis hypogaea serine proteinase BAP : 6 Benzyl amino purin bp : base pair CC : Corn Cystatin CHP : cây h ồ i ph ụ c CKH : cây không héo CTAB : Cetyltrimethylammonium bromide CYS : cystatin DNA : Deoxyribose nucleic acid đ tg : đồ ng tác gi ả EDTA : Ethylene diamine tetraacetic acid HSP : heat shock protein HvCPI : Hodeum vulgare cysteine proteinase inhibitor IPTG : Isopropyl β -D-1 thiogalactopyranoside kb : kilo base kDa : kilo dalton KLK : kh ố i l ượ ng khô krad : kilorad LB : Luria- Bertani LEA : late embryogenesis abudant LTPs : lipid transfer proteins MS : Murashige- Skoog mRNA : messenger Ribonucleic acid vii OC : Oryza Cystatin OD : Optical Density PCR : Polymerase chain reaction PEG : Polyethylene glycol PLD α : Phospholipase D α RAPD : Random amplified polymorphic DNA SDS : Sodium Dodesyl Sulphate TAE : Tris Acetate EDTA TTC : 2,3,5 Trichlo tetrazolium chlorit VuC : Vigna unguiculata cystatin X-gal : 5- Bromo- 4 Cloro- 3 indolyl D galactopyranoside WC : Wheat cystatin 2,4-D : 2 4 Dichlorphenoxyacetic acid α - NAA : α - Naphthaleneacetic acid viii DANH M Ụ C B Ả NG Trang B ả ng 1 1 Di ệ n tích, n ă ng su ấ t và s ả n l ượ ng l ạ c c ủ a Vi ệ t Nam giai đ o ạ n 2005-2009 5 B ả ng 1 2 Gen cystatin liên quan v ớ i kh ả n ă ng ch ố ng ch ị u h ạ n ở m ộ t s ố loài th ự c v ậ t 41 B ả ng 2 1 M ộ t s ố đặ c đ i ể m c ủ a 10 gi ố ng l ạ c nghiên c ứ u 43 B ả ng 3 1 T ỷ l ệ t ạ o mô s ẹ o và kh ố i l ượ ng mô s ẹ o c ủ a 10 gi ố ng l ạ c 58 B ả ng 3 2 Độ m ấ t n ướ c c ủ a mô s ẹ o sau x ử lý b ằ ng k ỹ thu ậ t th ổ i khô 59 B ả ng 3 3 K ế t qu ả ki ể m tra kh ả n ă ng ch ị u m ấ t n ướ c c ủ a mô s ẹ o 10 gi ố ng l ạ c b ằ ng ph ươ ng pháp nhu ộ m TTC 61 B ả ng 3 4 T ỷ l ệ s ố ng sót c ủ a mô s ẹ o b ị x ử lý b ằ ng th ổ i khô sau 4 tu ầ n nuôi ph ụ c h ồ i 63 B ả ng 3 5 T ỷ l ệ tái sinh cây c ủ a mô s ẹ o s ố ng sót sau 6 tu ầ n 65 B ả ng 3 6 Ả nh h ưở ng c ủ a chi ế u x ạ k ế t h ợ p v ớ i th ổ i khô 9 gi ờ đế n t ỷ l ệ s ố ng sót và tái sinh cây c ủ a mô s ẹ o ở gi ố ng l ạ c L18 66 B ả ng 3 7 Đặ c đ i ể m nông h ọ c c ủ a qu ầ n th ể R 0 , RM 0 tái sinh t ừ mô s ẹ o m ấ t n ướ c 70 B ả ng 3 8 Đặ c đ i ể m nông sinh h ọ c các dòng l ạ c ch ọ n l ọ c ở th ế h ệ th ứ Nh ấ t 75 B ả ng 3 9 Đặ c đ i ể m nông h ọ c các dòng l ạ c ch ọ n l ọ c th ế h ệ th ứ Ba 77 B ả ng 3 10 Đặ c đ i ể m nông sinh h ọ c và ch ấ t l ượ ng h ạ t các dòng ch ọ n l ọ c ở th ế h ệ th ứ N ă m 79 B ả ng 3 11 T ươ ng quan gi ữ a ho ạ t độ c ủ a α -amylase và hàm l ượ ng đườ ng ở giai đ o ạ n h ạ t n ả y m ầ m 84 B ả ng 3 12 T ỷ l ệ cây s ố ng, cây ph ụ c h ồ i và ch ỉ s ố ch ị u h ạ n t ươ ng đố i c ủ a các dòng ch ọ n l ọ c ở th ế h ệ th ứ N ă m 86
BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN VŨ THỊ THU THỦY TẠO DÒNG CHỊU HẠN BẰNG CÔNG NGHỆ TẾ BÀO VÀ PHÂN LẬP GEN CYSTATIN LIÊN QUAN ĐẾN TÍNH CHỊU HẠN Ở CÂY LẠC (Arachis hypogaea L.) LUẬN ÁN TIẾN SĨ SINH HỌC Thái Nguyên - 2011 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN VŨ THỊ THU THỦY TẠO DÒNG CHỊU HẠN BẰNG CÔNG NGHỆ TẾ BÀO VÀ PHÂN LẬP GEN CYSTATIN LIÊN QUAN ĐẾN TÍNH CHỊU HẠN Ở CÂY LẠC (Arachis hypogaea L.) LUẬN ÁN TIẾN SĨ SINH HỌC Chuyên ngành: DI TRUYỀN HỌC Mã số: 62 42 70 01 Hướng dẫn khoa học: PGS.TS CHU HOÀNG MẬU PGS TS NGUYỄN THỊ TÂM Thái Nguyên - 2011 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan luận án cơng trình nghiên cứu tơi hướng dẫn PGS.TS Chu Hồng Mậu PGS.TS Nguyễn Thị Tâm, giúp đỡ cán Khoa Sinh – Trường Đại học Sư phạm, Khoa Khoa học Sự sống- Trường Đại học Khoa học, Đại học Thái Nguyên Các số liệu nêu luận án trung thực Một số kết cơng bố riêng đồng tác giả, phần cịn lại chưa công bố cơng trình khác Tơi xin hồn tồn chịu trách nhiệm số liệu luận án Tác giả Vũ Thị Thu Thủy i LỜI CẢM ƠN Trước hết, tơi xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc tới PGS.TS Chu Hoàng Mậu PGS.TS Nguyễn Thị Tâm, người thầy nhiệt tình hướng dẫn tơi nghiên cứu khoa học, hết lòng giúp đỡ vật chất tinh thần suốt thời gian tơi làm nghiên cứu sinh để tơi hồn thành luận án Tôi xin chân thành cảm ơn Ban chủ nhiệm Khoa Sinh-KTNN, Ban giám hiệu Trường Đại học Sư Phạm – Đại học Thái Nguyên bạn đồng nghiệp ủng hộ, tạo điều kiện thuận lợi giúp tơi hồn thành luận án Tôi xin chân thành cảm ơn TS Nguyễn Vũ Thanh Thanh, Trường Đại học Khoa học, Đại học Thái Ngun; TS Lê Văn Sơn phịng Cơng nghệ tế bào thực vật- Viện Công nghệ Sinh học Xin cảm ơn Viện Khoa học Sự sống thuộc Đại học Thái Nguyên, Ban Giám đốc Trung tâm chiếu xạ Quốc Gia (Từ Liêm-Hà Nội) gia đình bà Ngô Thị Thường, tổ Rừng Vầu, phường Quang Vinh, thành phố Thái Nguyên tạo điều kiện để hoàn thành luận án Lời cảm ơn sau xin dành cho gia đình người thân động viên, giúp đỡ, tạo điều kiện thuận lợi cho tơi suốt q trình làm nghiên cứu sinh Tác giả luận án Vũ Thị Thu Thủy ii MỤC LỤC Trang Lời cam đoan i Lời cảm ơn ii Mục lục iii Danh mục ký hiệu, chữ viết tắt vi Danh mục bảng viii Danh mục hình x MỞ ĐẦU Chương TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Cây lạc đặc tính chịu hạn lạc 1.1.1 Nguồn gốc đặc điểm nông sinh học lạc 1.1.2 Đặc tính chịu hạn thực vật lạc 1.2 Nghiên cứu nâng cao khả chịu hạn trồng công nghệ tế bào thực vật 15 1.2.1 Chọn dòng tế bào soma chọn giống trồng 16 1.2.2 Phát sinh biến dị trình ni cấy 19 1.2.3 Các phương pháp chọn dòng tế bào 20 1.2.4 Một số thành tựu chọn dòng chống chịu yếu tố bất lợi ngoại cảnh 21 1.3 Phân tích, đánh giá dịng chọn lọc có nguồn gốc từ ni cấy mơ sẹo 23 1.3.1 Đánh giá khả chịu nước mô, tế bào thực vật 23 1.3.2 Đánh giá khả chịu hạn giai đoạn hạt nảy mầm giai đoạn non 24 1.3.3 Kỹ thuật RAPD đánh giá hệ gen dòng chọn lọc 26 iii 1.4 Gen liên quan đến tính chịu hạn lạc 28 1.4.1 Các gen liên quan đến khả chịu hạn lạc 28 1.4.2 Nhóm gen mã hóa protein điều khiển hoạt động phiên mã gen chịu hạn 29 Cystatin vai trò cystatin thực vật 30 1.5.1 Đặc điểm cấu tạo phân loại cystatin 30 1.5.2 Cấu trúc không gian chế ức chế cystatin 33 1.5.3 Chức cystatin 37 1.5.4 Gen mã hóa cystatin 38 Chương VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 43 2.1 Vật liệu thực vật 43 2.2 Hoá chất thiết bị 45 2.3 Phương pháp nghiên cứu 45 2.3.1 Phương pháp nuôi cấy in vitro 46 2.3.2 Phương pháp nghiên cứu đồng ruộng 49 2.3.3 Phương pháp sinh lý, hoá sinh 50 2.3.4 Phương pháp sinh học phân tử 52 2.3.5 Phương pháp phân tích số liệu 55 2.4 Địa điểm nghiên cứu 56 Chương KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 57 31 Kết tạo dòng chịu hạn kỹ thuật xử lý mô sẹo hệ thống nuôi cấy in vitro 57 3.1.1 Sàng lọc dịng mơ sẹo chịu tác động thổi khơ 57 3.1.2 Ảnh hưởng tia gamma kết hợp với thổi khô đến tỷ lệ sống sót tái sinh giống lạc L18 66 3.1.3 Đặc điểm nông sinh học quần thể lạc R0 RM0 69 3.2 Kết phân tích dịng lạc chọn lọc qua hệ 74 iv 3.2.1 Đặc điểm nơng sinh học dịng lạc chọn lọc hệ thứ Nhất thứ Ba 74 3.2.2 Đánh giá dòng chọn lọc hệ thứ Năm 78 3.2.3 Đặc điểm số dòng lạc ưu việt 94 3.3 Phân lập xác định trình tự gen cystatin từ lạc 97 3.3.1 Khuyếch đại gen cystatin từ DNA hệ gen lạc 97 3.3.2 Kết tách dịng xác định trình tự gen cystatin 98 3.3.3 Kết so sánh trình tự gen protein cystatin 102 KẾT LUẬN 111 CÁC CƠNG TRÌNH CƠNG BỐ LIÊN QUAN ĐẾN LUẬN ÁN 113 TÀI LIỆU THAM KHẢO 114 PHỤ LỤC v DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT ABA : absicis acid AhNCED : Arachis hypogaea 9-cis-epoxycarotenoid dioxygenase AhSP : Arachis hypogaea serine proteinase BAP : Benzyl amino purin bp : base pair CC : Corn Cystatin CHP : hồi phục CKH : không héo CTAB : Cetyltrimethylammonium bromide CYS : cystatin DNA : Deoxyribose nucleic acid đtg : đồng tác giả EDTA : Ethylene diamine tetraacetic acid HSP : heat shock protein HvCPI : Hodeum vulgare cysteine proteinase inhibitor IPTG : Isopropyl β-D-1 thiogalactopyranoside kb : kilo base kDa : kilo dalton KLK : khối lượng khô krad : kilorad LB : Luria- Bertani LEA : late embryogenesis abudant LTPs : lipid transfer proteins MS : Murashige- Skoog mRNA : messenger Ribonucleic acid vi OC : Oryza Cystatin OD : Optical Density PCR : Polymerase chain reaction PEG : Polyethylene glycol PLDα : Phospholipase Dα RAPD : Random amplified polymorphic DNA SDS : Sodium Dodesyl Sulphate TAE : Tris Acetate EDTA TTC : 2,3,5 Trichlo tetrazolium chlorit VuC : Vigna unguiculata cystatin X-gal : 5- Bromo- Cloro- indolyl D galactopyranoside WC : Wheat cystatin 2,4-D : 2.4 Dichlorphenoxyacetic acid α- NAA : α- Naphthaleneacetic acid vii DANH MỤC BẢNG Trang Bảng 1.1 Diện tích, suất sản lượng lạc Việt Nam giai Bảng 1.2 đoạn 2005-2009 Bảng 2.1 Gen cystatin liên quan với khả chống chịu hạn Bảng 3.1 Bảng 3.2 số loài thực vật 41 Bảng 3.3 Một số đặc điểm 10 giống lạc nghiên cứu 43 Bảng 3.4 Tỷ lệ tạo mô sẹo khối lượng mô sẹo 10 giống lạc 58 Bảng 3.5 Bảng 3.6 Độ nước mô sẹo sau xử lý kỹ thuật thổi khô 59 Bảng 3.7 Kết kiểm tra khả chịu nước mô sẹo 10 Bảng 3.8 giống lạc phương pháp nhuộm TTC 61 Bảng 3.9 Tỷ lệ sống sót mơ sẹo bị xử lý thổi khô sau Bảng 3.10 tuần nuôi phục hồi 63 Bảng 3.11 Tỷ lệ tái sinh mơ sẹo sống sót sau tuần 65 Bảng 3.12 Ảnh hưởng chiếu xạ kết hợp với thổi khô đến tỷ lệ sống sót tái sinh mơ sẹo giống lạc L18 66 Đặc điểm nông học quần thể R0, RM0 tái sinh từ mô sẹo nước 70 Đặc điểm nông sinh học dòng lạc chọn lọc hệ thứ Nhất 75 Đặc điểm nông học dòng lạc chọn lọc hệ thứ Ba 77 Đặc điểm nông sinh học chất lượng hạt dòng chọn lọc hệ thứ Năm 79 Tương quan hoạt độ α-amylase hàm lượng đường giai đoạn hạt nảy mầm 84 Tỷ lệ sống, phục hồi số chịu hạn tương đối dòng chọn lọc hệ thứ Năm 86 viii