Nghiên ứu sản xuất kháng huyết thanh rubella sử dụng ho kiểm định vắ xin tại việt nam

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA HÀ NỘI Formatted: Font: Times New Roman PHẠM THÀNH TRƯỜNG Formatted: Font: Times New Roman Formatted: Font: Times New Roman HIÊN CỨU SẢN XUẤT KHÁNG HUYẾT THANH RUBELLA SỬ DỤNG CHO KIỂM ĐỊNH VẮC XIN TẠI VIỆT NAM Formatted: Font: Times New Roman CHUYÊN NGHÀNH: CÔNG NGHỆ SINH HỌC LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC PGS.TS TRƯƠNG QUỐC PHONG TS NGÔ THU HƯỜNG Formatted: Font: Times New Roman Hà Nội - Năm 2018 Tai ngay!!! Ban co the xoa dong chu nay!!! 17057205065071000000 Luận văn thạc sĩ Khoa học Phạm Thành Trường- CB160060 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan, công trình nghiên cứu khoa học tơi cộng phòng Kiểm định vắc xin hướng dẫn PGS.TS Trương Quốc Phong TS Ngô Thu Hường Các số liệu, kết luận văn trung thực chưa công bố cơng trình khác Học viên Phạm Thành Trường Xác nhận quan (Trung tâm Nghiên cứu Sản xuất Vắc xin Sinh phẩm Y tế) LỜI CẢM ƠN Tơi xin bày tỏ lịng biết ơn chân thành tới: PGS TS Trương Quốc Phong, Trung tâm nghiên cứu phát triển công nghệ sinh học – Viện công nghệ sinh học công nghệ thực phẩm - Trường Đại học bách khoa Hà Nội TS Ngô Thu Hường – Trưởng phòng kiểm định, Trung tâm nghiên cứu, sản xuất Vắc xin sinh phẩm Y tế trực tiếp giảng dạy hướng dẫn thực đề tài Trong thời gian học tập nghiên cứu vừa qua, nhận giúp đỡ tạo điều kiện thầy cô Viện công nghệ sinh học công nghệ thực phẩm thầy Phịng Đào tạo - Trường Đại học bách khoa Hà Nội Tôi xin chân thành cảm ơn giúp đỡ q báu Tồn nội dung nghiên cứu khóa luận thực hồn thành phịng Kiểm định vắc xin, Trung tâm Nghiên cứu, sản xuất vắc xin sinh phẩm y tế (POLYVAC) Tôi xin chân thành cảm ơn giúp đỡ quý báu tập thể cán phịng Kiểm định tạo điều kiện nhiệt tình giúp đỡ thời gian thực đề tài Nhân xin gửi lời cảm ơn chân thành tới Ban lãnh đạo Trung tâm Nghiên cứu, sản xuất vắc xin sinh phẩm y tế (POLYVAC) cử nhân Nguyễn Xuân Hòa Trưởng phòng Sản xuất vắc xin Sởi bán thành phẩm, nơi công tác, tạo điều kiện thuận lợi cho suốt thời gian học tập nghiên cứu Cuối xin chân thành cảm ơn bạn bè đồng nghiệp gia đình ln quan tâm giúp đỡ động viên tơi suốt thời gian học tập hồn thành khóa luận Hà Nội, Ngày tháng năm 2018 Học viên Phạm Thành Trường Luận văn thạc sĩ Khoa học Phạm Thành Trường- CB160060 CÁC CHỮ VIẾT TẮT BHKCPE Baby hamster kidney: tế bào thận chuột đồng sơ sinh.Cytopathic Formatted Table effect (đám hoại tử tế bào) Formatted: Font: (Default) Times New Roman, 13 pt, Not Bold, Font color: Auto CPE Cytopathic effect (đám hoại tử tế bào) CR Mẫu chứng âm Formatted: Font: (Default) Times New Roman, 13 pt, Font color: Auto CFA Freund’s Complete Adjuvants (Ttá dược hoàn chỉnh) FBS Fetal Bovine Serum (hHuyết bê bào thai) FL Tế bào ung thư màng ối người GMP Good Manufacturing Practice (tThực hành sản xuất tốt) HI Haemagglutination Inhibition (Phản ứng ngăn trở ngưng kết hồng cầu) IFA Freund’s Incomplete Adjuvants (tTá dược khơng hồn chỉnh) IgA Imunoglobulin A IgG Imunoglobulin G IgM Imunoglobulin M LM Liquid Medium (môi trường lỏng) M33 Chủng virus Rubella MEM Minimum Essential Medium (mMôi trường cần thiết tối thiểu) MR Measles-Rubella (Mẫu vắc xin phối hợp sởi -– rubella) MS Master Seed (chủng giống gốc) OSS Out of specification (ngoài tiêu chuẩn) PB Phospate Buffer PBS Phosphate Buffered Saline (dung dịch đệm muối phốt phát) POLYVAC Trung tâm Nghiên cứu, sản xuất Vắc xin Sinh phẩm Y tế Rb Rubella RK13 Tế bào thận thỏ Newzealand (dòng tế bào thường trực) SCD Soybean Casein Digest SPF Specific Pathogen Free (không chứa tác nhân gây bệnh) TCMR Tiêm chủng mở rộng TGC TRYPSIN-EDTA Thioglycolate Trypsin-Ethylen Diamine Tetra Acetic acid Formatted: Font: (Default) Arial, 12 pt Formatted: Font color: Auto Formatted: Default Paragraph Font, Font: (Default) Times New Roman, 13 pt, Not Bold, Font color: Auto, Pattern: Clear Formatted: Default Paragraph Font, Font: (Default) Times New Roman, 13 pt, Not Bold, Font color: Auto, Pattern: Clear Formatted: Font color: Auto Luận văn thạc sĩ Khoa học Phạm Thành Trường- CB160060 Vero Tế bào thận khỉ xanh châu phi (dòng tế bào thường trực) WFI Water for injection (nước pha tiêm) WHO World Health Organization (Tổ chức y tế giới) WS Working Seed (chủng sản xuất) Luận văn thạc sĩ Khoa học Phạm Thành Trường- CB160060 DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 1.1 Hình ảnh cấu trúc virus rubella .44 Field Code Changed Hình 1.2 Cấu trúc virus Rubella kính hiển vi điện tử 55 Formatted: Font: Times New Roman, 13 pt, Font color: Auto Hình 1.3 Sự sâm nhập nhân lên virus .77 Hình 1.4 Phân tích vùng gen đảm nhiệm chức nhạy cảm với nhiệt độ virus Rubella .1111 Hình 1.5 Tạo virus thay vùng p150 virus rubella tính nhạy cảm với nhiệt độ 1212 Hình 2.1 Hình ảnh quy trình lấy máu tồn thu huyết lợn .3331 Hình 2.2 Hình ảnh quy trình tiêm thu hồi máu thỏ 3634 Hình 2.3 Đọc kết mycoplasma dựa màu sắc môi trường 3735 Hình 2.4 Hình ảnh chuẩn độ ngược kháng nguyên HA 3936 Hình 2.5 Hình ảnh chuẩn độ hiệu giá kháng thể HI 3937 Hình 2.6 Hình ảnh plaque giếng 4139 Hình 2.7 Hình ảnh đám hủy hoại virus rubella kính hiển vi huỳnh quang 4240 Hình 3.1 Hiệu giá kháng nguyên rubella quy trình nghiên cứu 4543 Hình 3.2 Hiệu giá kháng huyết thu nhóm lợn thử nghiệm 4745 Hình 3.3 Hiệu giá kháng huyết thu nhóm thỏ thử nghiệm 5451 Hình 3.4 Hình ảnh tế bào vero, PRK, RK13 mẫu có virus, mẫu virus trung hịa kháng huyết mẫu đối chứng 6157 Hình 3.5 Hình ảnh tế bào vero sử dụng kháng huyết Nhật Bản (A), POLYVAC sản xuất (B) tế bào đối chứng .6359 Hình 3.6 Hình ảnh tế bào FL sử dụng kháng huyết Nhật Bản (A), POLYVAC sản xuất (B) tế bào đối chứng .6460 Hình 3.7 Hình ảnh tế bào PRK sử dụng kháng huyết Nhật Bản (A), POLYVAC sản xuất (B) tế bào đối chứng .6561 Hình 3.8 Hình ảnh plaque virus rubella (đốm bắt màu đen) thử nghiệm hiệu giá ổn định nhiệt sử dụng kháng huyết Nhật Bản (A) POLYVAC sản xuất (B) Formatted: Font: Times New Roman, 13 pt Luận văn thạc sĩ Khoa học Phạm Thành Trường- CB160060 .6662 Hình 3.9 Hiệu giá trung bình loạt vắc xin mẫu chuẩn Rb-R0113 sử dụng kháng huyết Nhật Bản kháng huyết POLYVAC sản xuất .6763 Hình 3.10 Độ giảm hiệu giá trung bình thử nghiệm ổn định nhiệt loạt vắc xin mẫu chuẩn Rb-R0113 sử dụng kháng huyết Nhật Bản kháng huyết POLYVAC sản xuất 6964 Formatted: Font: Times New Roman, 13 pt, Font color: Auto Hình 3.11 Hình ảnh nhận dạng virus rubella (đám tế bào phát màu xanh sáng) sử dụng kháng huyết Nhật Bản (A) POLYVAC sản xuất (B) 7065 Formatted: Font: Times New Roman, 13 pt, Font color: Auto Hình 1.1 Hình ảnh cấu trúc virus rubella 44 Formatted Hình 1.2 Cấu trúc virus Rubella kính hiển vi điện tử 55 Formatted Hình 1.3 Sự sâm nhập nhân lên virus 77 Formatted Hình 1.4 Phân tích vùng gen đảm nhiệm chức nhạy cảm với nhiệt độ virus Rubella .1111 Formatted Hình 1.5 Tạo virus thay vùng p150 virus rubella tính nhạy cảm với nhiệt độ 1212 Formatted Hình 2.1 Hình ảnh quy trình lấy máu tồn thu huyết lợn 3131 Formatted Hình 2.2 Hình ảnh quy trình tiêm thu hồi máu thỏ 3434 Formatted Hình 2.3 Đọc kết mycoplasma dựa màu sắc môi trường 3535 Formatted Hình 2.4 Hình ảnh chuẩn độ ngược kháng nguyên HA 3636 Formatted Hình 2.5 Hình ảnh chuẩn độ hiệu giá kháng thể HI 3737 Formatted Hình 2.6 Hình ảnh plaque giếng 3939 Formatted Hình 2.7 Hình ảnh đám hủy hoại virus rubella kính hiển vi huỳnh quang 4040 Formatted Hình 3.1 Hiệu giá kháng nguyên rubella quy trình nghiên cứu 4343 Formatted Hình 3.2 Hiệu giá kháng huyết thu nhóm lợn thử nghiệm 4545 Formatted Hình 3.3 Hiệu giá kháng huyết thu nhóm thỏ thử nghiệm 5151 Formatted Hình 3.4 Hình ảnh tế bào vero, PRK, RK13 mẫu có virus, mẫu virus trung hịa kháng huyết mẫu đối chứng 5757 Formatted Hình 3.5 Hình ảnh tế bào vero sử dụng kháng huyết Nhật Bản (A), POLYVAC Formatted: Font: 13 pt, Font color: Auto Formatted: Font: Times New Roman, 13 pt Formatted: Font: Times New Roman, 13 pt Luận văn thạc sĩ Khoa học Phạm Thành Trường- CB160060 sản xuất (B) tế bào đối chứng .5959 Hình 3.6 Hình ảnh tế bào FL sử dụng kháng huyết Nhật Bản (A), POLYVAC sản xuất (B) tế bào đối chứng .6060 Hình 3.7 Hình ảnh tế bào PRK sử dụng kháng huyết Nhật Bản (A), POLYVAC sản xuất (B) tế bào đối chứng .6161 Hình 3.8 Hình ảnh plaque virus rubella (đốm bắt màu đen) thử nghiệm hiệu giá ổn định nhiệt sử dụng kháng huyết Nhật Bản (A) POLYVAC sản xuất (B) 6262 Hình 3.9 Hiệu giá trung bình loạt vắc xin mẫu chuẩn Rb-R0113 sử dụng kháng huyết Nhật Bản kháng huyết POLYVAC sản xuất .6363 Hình 3.10 Độ giảm hiệu giá trung bình thử nghiệm ổn định nhiệt loạt vắc xin mẫu chuẩn Rb-R0113 sử dụng kháng huyết Nhật Bản kháng huyết POLYVAC sản xuất 6464 Formatted: Font: Times New Roman, 13 pt Formatted: Font: Times New Roman, 13 pt Formatted: Font: 13 pt, Font color: Auto Formatted: Font: Times New Roman, 13 pt Formatted: Font: Times New Roman, 13 pt Formatted: Font: 13 pt, Font color: Auto Formatted: Font: Times New Roman, 13 pt Formatted: Font: Times New Roman, 13 pt Formatted: Font: 13 pt, Font color: Auto Formatted: Font: Times New Roman, 13 pt Formatted: Font: Times New Roman, 13 pt Formatted: Font: 13 pt, Font color: Auto Formatted: Font: Times New Roman, 13 pt Formatted: Font: Times New Roman, 13 pt Formatted: Font: 13 pt, Font color: Auto Formatted: Font: Times New Roman, 13 pt Hình 3.11 Hình ảnh nhận dạng virus rubella (đám tế bào phát màu xanh sáng) sử dụng kháng huyết Nhật Bản (A) POLYVAC sản xuất (B) 6565 Formatted: Font: Times New Roman, 13 pt Hình 1.1 Hình ảnh cấu trúc virus rubella Formatted: Font: Times New Roman, 13 pt Hình 1.2 Cấu trúc virus Rubella kính hiển vi điện tử Formatted: Font: 13 pt, Font color: Auto Formatted: Font: Times New Roman, 13 pt Formatted: Font color: Auto Formatted: Font color: Auto Hình 1.3 Sự sâm nhập nhân lên virus Formatted: Font color: Auto Hình 2.1 Hình ảnh quy trình lấy máu tồn thu huyết lợn 28 Formatted: Font color: Auto Hình 2.2 Hình ảnh quy trình tiêm thu hồi máu thỏ 31 Formatted: Font color: Auto Hình 2.3 Đọc kết mycoplasma dựa màu sắc môi trường 32 Formatted: Font color: Auto Hình 2.4 Hình ảnh chuẩn độ ngược kháng nguyên HA .34 Formatted: Font color: Auto Hình 2.5 Hình ảnh chuẩn độ hiệu giá kháng thể HI .34 Formatted: Font color: Auto Hình 2.6 Hình ảnh plaque giếng 36 Formatted: Font color: Auto Hình 2.7 Hình ảnh đám hủy hoại virus rubella kính hiển vi huỳnh quang .37 Formatted: Font color: Auto Hình 3.1 Hiệu giá kháng nguyên rubella quy trình nghiên cứu 40 Formatted: Font color: Auto Hình 3.2 Hiệu giá kháng huyết thu nhóm lợn thử nghiệm 42 Formatted: Font color: Auto Hình 3.3 Hiệu giá kháng huyết thu nhóm thỏ thử nghiệm .48 Formatted: Font color: Auto Luận văn thạc sĩ Khoa học Phạm Thành Trường- CB160060 Hình 3.4 Hình ảnh tế bào vero sử dụng kháng huyết Nhật Bản (A), POLYVAC sản xuất (B) tế bào đối chứng 55 Formatted: Font color: Auto Hình 3.5 Hình ảnh tế bào FL sử dụng kháng huyết Nhật Bản (A), POLYVAC sản xuất (B) tế bào đối chứng 56 Formatted: Font color: Auto Hình 3.6 Hình ảnh tế bào PRK sử dụng kháng huyết Nhật Bản (A), POLYVAC sản xuất (B) tế bào đối chứng 57 Formatted: Font color: Auto Hình 3.7 Hình ảnh plaque virus rubella (đốm bắt màu đen) thử nghiệm hiệu giá ổn định nhiệt sử dụng kháng huyết Nhật Bản (A) POLYVAC sản xuất (B) .58 Formatted: Font color: Auto Hình 3.8 Hiệu giá trung bình loạt vắc xin mẫu chuẩn Rb-R0113 sử dụng kháng huyết Nhật Bản kháng huyết POLYVAC sản xuất 59 Formatted: Font color: Auto Hình 3.9 Độ giảm hiệu giá trung bình thử nghiệm ổn định nhiệt loạt vắc xin mẫu chuẩn Rb-R0113 sử dụng kháng huyết Nhật Bản kháng huyết POLYVAC sản xuất 60 Formatted: Font color: Auto Hình 3.10 Hình ảnh nhận dạng virus rubella (đám tế bào phát màu xanh sáng) sử dụng kháng huyết Nhật Bản (A) POLYVAC sản xuất (B) .61 Formatted: Font color: Auto Luận văn thạc sĩ Khoa học Phạm Thành Trường- CB160060 DANH MỤC CÁC BẢNG, BIỂU ĐỒ Bảng 1.1 Các đường tiêm sử dụng không sử dụng tá dược 1717 Bảng 1.2 Thể tích tiêm tối đa hỗn hợp kháng nguyên/tá dược vị trí tiêm loài động vật khác .1818 Bảng 2.1 Quy trình tiêm lợn tạo kháng huyết nhóm thử nghiệm 2726 Bảng 2.2 Quy trình tiêm thỏ tạo kháng huyết nhóm thử nghiệm 3432 Bảng 3.1 Tối ưu hoá thời điểm thay mơi trường quy trình sản xuất kháng ngun rubella 4442 Bảng 3.2 Kết hiệu giá kháng huyết lợn nhóm thử nghiệm 4644 Bảng 3.3 Kết hiệu giá kháng huyết thỏ nhóm thử nghiệm 5350 Bảng 3.4 Kết kiểm tra chất lượng kháng huyết thỏ lợn .5855 Bảng 3.5 Kết hiệu giá loạt vắc xin mẫu chuẩn Rb-R0113 sử dụng kháng huyết Nhật Bản kháng huyết POLYVAC sản xuất 6662 Bảng 3.6 Kết ổn định nhiệt loạt vắc xin mẫu chuẩn Rb-R0113 sử dụng kháng huyết Nhật Bản kháng huyết POLYVAC sản xuất 6864 Bảng 1.1 Các đường tiêm sử dụng không sử dụng tá dược 1717 Bảng 1.2 Thể tích tiêm tối đa hỗn hợp kháng ngun/tá dược vị trí tiêm lồi động vật khác .1818 Bảng 2.1 Quy trình tiêm lợn tạo kháng huyết nhóm thử nghiệm 2626 Bảng 2.2 Quy trình tiêm thỏ tạo kháng huyết nhóm thử nghiệm 3232 Bảng 3.1 Tối ưu hố thời điểm thay mơi trường quy trình sản xuất kháng nguyên rubella 4242 Bảng 3.2 Kết hiệu giá kháng huyết lợn nhóm thử nghiệm 4444 Bảng 3.3 Kết hiệu giá kháng huyết thỏ nhóm thử nghiệm 5050 Bảng 3.4 Kết kiểm tra chất lượng kháng huyết thỏ lợn .5555 Bảng 3.5 Kết hiệu giá loạt vắc xin mẫu chuẩn Rb-R0113 sử dụng kháng huyết Nhật Bản kháng huyết POLYVAC sản xuất 6262 Field Code Changed Formatted: Font color: Auto