luận văn nghiên cứu khả năng nhân nhanh lan hài mốc hồng paphiopedilum micranthum bằng phương pháp in vitro

Trang 1 DƯƠNG THỊ THU HOÀI Tên đề tài: “NGHIÊN CỨU KHẢ NĂNG NHÂN NHANH LAN HÀI MỐC HỒNG PAPHIOPEDILUM MICRANTHUM BẰNG PHƯƠNG PHÁP IN VITRO” KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Hệ đào

ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM DƯƠNG THỊ THU HOÀI Tên đề tài: “NGHIÊN CỨU KHẢ NĂNG NHÂN NHANH LAN HÀI MỐC HỒNG (PAPHIOPEDILUM MICRANTHUM) BẰNG PHƯƠNG PHÁP IN VITRO” KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Hệ đào tạo : Chính quy Chuyên ngành : Công nghệ sinh học Khoa : CNSH-CNTP Khoá học : 2015-2019 Thái Nguyên, năm 2019 h ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC NƠNG LÂM DƯƠNG THỊ THU HỒI Tên đề tài “NGHIÊN CỨU KHẢ NĂNG NHÂN NHANH LAN HÀI MỐC HỒNG (PAPHIOPEDILUM MICRANTHUM) BẰNG PHƯƠNG PHÁP IN VITRO” KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Hệ đào tạo : Chính quy Chuyên ngành : Công nghệ sinh học Lớp : K47 - CNSH Khoa : CNSH-CNTP Khoá học : 2015-2019 Giảng viên hướng dẫn : ThS Nguyễn Thị Tình Thái Nguyên, năm 2019 h i LỜI CẢM ƠN Được sự đồng ý của Ban giám hiệu nhà trường, Ban chủ nhiệm khoa Công nghệ Sinh học và Công nghệ Thực phẩm, thời gian thực tập tốt nghiệp em đã thực hiện đề tài: “Nghiên cứu khả nhân nhanh lan Hài Mốc Hồng (Paphiopedilum micranthum) bằng phương pháp in vitro ” Trang đầu tiên của khoá luận này em xin gửi lời cảm ơn tới Ban giám hiệu nhà trường, Ban chủ nhiệm khoa Công nghệ Sinh học và Công nghệ Thực phẩm cùng các thầy cô giáo Khoa đã tạo điều kiện thuận lợi cho em hoàn thành đề tài nghiên cứu này Đặc biệt, em xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc, em xin gửi lời cảm ơn chân thành tới giáo ThS Ngũn Thị Tình, giảng viên khoa Công nghệ Sinh học và Công nghệ Thực phẩm đã tận tình chỉ bảo, giúp đỡ và hướng dẫn em thời gian thực hiện đề tài Đồng thời, em xin cám ơn ThS Ma Thị Hoàn đã giúp đỡ và tạo điều kiện tốt nhất cho em suốt quá trình thực tập tốt nghiệp Cuối cùng, em xin cảm ơn gia đình đã tạo điều kiện vật chất và là chỗ dựa tinh thần cho em suốt thời gian thực tập, cảm ơn bạn bè đã hết lòng động viên, giúp đỡ suốt thời gian qua Trong quá trình thực tập, cũng là quá trình làm báo cáo thực tập thời gian có hạn không tránh khỏi sai sót Em rất mong nhận được ý kiến đóng góp của thầy cô và các bạn để đề tài của em được hoàn thiện Lời cuối em xin kính chúc các thầy, cô giáo nhà trường, khoa Công nghệ Sinh học và Công nghệ thực phẩm, cùng các bạn đồng nghiệp sức khoẻ, thành công cuộc sống Em xin chân thành cảm ơn! Thái Nguyên, ngày 03 tháng năm 2019 Sinh viên thực hiện Dương Thị Thu Hoài h ii DANH MỤC BẢNG Bảng 2.1 Các nhóm lan Hài Việt Nam theo thứ hạng bảo tồn của Tổ chức Bảo tồn Thiên nhiên Quốc tế (IUCN) [1] .8 Bảng 3.1 Thiết bị, dụng cụ nghiên cứu 25 Bảng 4.1 Kết quả nghiên cứu ảnh hưởng của nồng độ, thời gian khử trùng của dung dịch HgCl2 đến khả tạo vật liệu vô trùng (sau ngày nuôi cấy) 35 Bảng 4.2 Kết quả nghiên cứu ảnh hưởng của một số môi trường đến khả tái sinh chồi lan Hài P micranthum (sau 40 ngày nuôi cấy) 37 Bảng 4.3 Kết quả nghiên cứu ảnh hưởng của NAA đến khả nhân nhanh chồi lan Hài P micranthum (sau 20 ngày nuôi cấy) 39 Bảng 4.4 Kết quả nghiên cứu ảnh hưởng của BA đến khả nhân nhanh lan Hài P micranthum (sau 20 ngày nuôi cấy) 41 Bảng 4.5 Kết quả nghiên cứu ảnh hưởng của BA kết hợp với Giberellin đến khả nhân nhanh chồi lan P micranthum ( sau 20 ngày nuôi cấy ) 44 Bảng 4.6 Kết quả nghiên cứu ảnh hưởng của dịch chiết chuối đến khả nhân nhanh lan Hài P micranthum (sau 20 ngày nuôi cấy) 47 Bảng 4.7 Kết quả nghiên cứu ảnh hưởng của IAA đến khả rễ tạo hoàn chỉnh của lan Hài P.micranthum (sau 40 ngày nuôi cấy ) .49 Bảng 4.8 Kết quả nghiên cứu ảnh hưởng của IBA đến khả rễ tạo hoàn chỉnh của lan Hài P micranthum (sau 40 ngày nuôi cấy) .51 h iii DANH MỤC HÌNH Hình 2.1 Hình ảnh về lan Hài Paphiopedilum micranthum tại nhà lưới khoa CNSH-CNTP 11 Hình 2.2 Sơ đờ q trình phân hóa phản phân hóa của tế bào thực vật Error! Bookmark not defined Hình 3.1 Sơ đồ nghiên cứu ảnh hưởng của một số chất kích thích sinh trưởng đến khả tái sinh, nhân nhanh chồi rễ của lan Hài P.micranthum 28 Hình 4.1 Biểu đồ kết quả nghiên cứu ảnh hưởng của nồng độ, thời gian của HgCl2 đến khả tạo vật liệu vô trùng (sau ngày nuôi cấy) .36 Hình 4.2 Mợt sớ hình ảnh tạo vật liệu vô trùng 37 Hình 4.3 Biểu đờ kết quả nghiên cứu ảnh hưởng của môi trường dinh dưỡng đến khả tái sinh đoạn thân mang mầm ngủ lan Hài P micranthum 38 Hình 4.4 Hình ảnh ảnh hưởng của mơi trường dinh dưỡng đến khả tái sinh chồi lan Hài P micranthum (sau 40 ngày nuôi cấy) 39 Hình 4.5 Biểu đồ kết quả nghiên cứu ảnh hưởng của nồng độ NAA đến khả nhân nhanh chồi lan Hài P micranthum (sau 20 ngày nuôi cấy) 40 Hình 4.6 Hình ảnh ảnh hưởng của nờng đợ NAA đến khả nhân nhanh chồi lan Hài P micranthum (sau 20 ngày nuôi cấy) 41 Hình 4.7 Biêu đồ ảnh hưởng của nồng độ BA đến khả nhân nhanh lan Hài P micranthum (sau 20 ngày nuôi cấy) 42 Hình 4.8 Hình ảnh ảnh nghiên cứu ảnh hưởng của BA đến khả nhân nhanh chồi lan hài P micranthum ( sau 20 ngày nuôi cấy ) 43 Hình 4.9 Biểu đồ ảnh hưởng của BA tốt nhất kết hợp với Giberellin đến khả nhân nhanh chồi lan Hài P micranthum (sau 20 ngày ni cấy) 45 Hình 4.10 Hình ảnh ảnh hưởng của BA kết hợp với Giberellin đến khả nhân nhanh chồi lan Hài P micranthum ( sau 20 ngày nuôi cấy ) 46 Hình 4.11 Biểu đờ ảnh hưởng của dịch chiết ch́i đến khả nhân nhanh chồi lan Hài P micranthum(sau 20 ngày nuôi cấy ) .47 h luan.van.nghien.cuu.kha.nang.nhan.nhanh.lan.hai.moc.hong.paphiopedilum.micranthum.bang.phuong.phap.in.vitroluan.van.nghien.cuu.kha.nang.nhan.nhanh.lan.hai.moc.hong.paphiopedilum.micranthum.bang.phuong.phap.in.vitroluan.van.nghien.cuu.kha.nang.nhan.nhanh.lan.hai.moc.hong.paphiopedilum.micranthum.bang.phuong.phap.in.vitroluan.van.nghien.cuu.kha.nang.nhan.nhanh.lan.hai.moc.hong.paphiopedilum.micranthum.bang.phuong.phap.in.vitro iv Hình 4.12 Hình ảnh ảnh hưởng của dịch chiết chuối đến khả nhân nhanh chồi lan Hài P micranthum (sau 20 ngày nuôi cấy) .48 Hình 4.13 Biểu đờ ảnh hưởng của IAA đến khả rễ tạo hoàn chỉnh của lan Hài P micranthum (sau 40 ngày nuôi cấy) .50 Hình 4.14 Hình ảnh ảnh hưởng của IAA đến khả rễ tạo hoàn chỉnh của lan Hài P micranthum (sau 40 ngày ni cấy ) 51 Hình 4.15 Biểu đồ ảnh hưởng của IBA đến khả rễ tạo hoàn chỉnh của lan Hài P micranthum(sau 40 ngày nuôi cấy ) .52 Hình 4.16 Hình ảnh ảnh hưởng của IBA đến khả rễ tạo hoàn chỉnh của lan Hài P micranthum (sau 40 ngày nuôi cấy ) 53 luan.van.nghien.cuu.kha.nang.nhan.nhanh.lan.hai.moc.hong.paphiopedilum.micranthum.bang.phuong.phap.in.vitroluan.van.nghien.cuu.kha.nang.nhan.nhanh.lan.hai.moc.hong.paphiopedilum.micranthum.bang.phuong.phap.in.vitroluan.van.nghien.cuu.kha.nang.nhan.nhanh.lan.hai.moc.hong.paphiopedilum.micranthum.bang.phuong.phap.in.vitroluan.van.nghien.cuu.kha.nang.nhan.nhanh.lan.hai.moc.hong.paphiopedilum.micranthum.bang.phuong.phap.in.vitro h luan.van.nghien.cuu.kha.nang.nhan.nhanh.lan.hai.moc.hong.paphiopedilum.micranthum.bang.phuong.phap.in.vitroluan.van.nghien.cuu.kha.nang.nhan.nhanh.lan.hai.moc.hong.paphiopedilum.micranthum.bang.phuong.phap.in.vitroluan.van.nghien.cuu.kha.nang.nhan.nhanh.lan.hai.moc.hong.paphiopedilum.micranthum.bang.phuong.phap.in.vitroluan.van.nghien.cuu.kha.nang.nhan.nhanh.lan.hai.moc.hong.paphiopedilum.micranthum.bang.phuong.phap.in.vitro v DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT B5 BAP CS CT CV Đ/C LSD : Gamborg cs, 1976 : 6-Benzyl amino purine : Cộng sự : Công thức : Coeficient of Variation – Hệ số biến động : Đối chứng : Least Singnificant DifferenceTest MS MT GA3 NAA : Murashighe Skoog, 1962 : Môi trường : Gibberellic acid : α-Napthalene acetic acid IAA IBA IUCN : Indole-3-acetic acid : Indole-3-butyric acid : International Union for Conservation of Nature and Natural Resources - Liên minh Bảo tồn Thiên nhiên Quốc tế : Paphiopedilum micranthum : Paphiopedilum malipones : Woody Plant Medium – Lioyd Mc Cown, 1980 P micranthum P malipoens WPM luan.van.nghien.cuu.kha.nang.nhan.nhanh.lan.hai.moc.hong.paphiopedilum.micranthum.bang.phuong.phap.in.vitroluan.van.nghien.cuu.kha.nang.nhan.nhanh.lan.hai.moc.hong.paphiopedilum.micranthum.bang.phuong.phap.in.vitroluan.van.nghien.cuu.kha.nang.nhan.nhanh.lan.hai.moc.hong.paphiopedilum.micranthum.bang.phuong.phap.in.vitroluan.van.nghien.cuu.kha.nang.nhan.nhanh.lan.hai.moc.hong.paphiopedilum.micranthum.bang.phuong.phap.in.vitro h luan.van.nghien.cuu.kha.nang.nhan.nhanh.lan.hai.moc.hong.paphiopedilum.micranthum.bang.phuong.phap.in.vitroluan.van.nghien.cuu.kha.nang.nhan.nhanh.lan.hai.moc.hong.paphiopedilum.micranthum.bang.phuong.phap.in.vitroluan.van.nghien.cuu.kha.nang.nhan.nhanh.lan.hai.moc.hong.paphiopedilum.micranthum.bang.phuong.phap.in.vitroluan.van.nghien.cuu.kha.nang.nhan.nhanh.lan.hai.moc.hong.paphiopedilum.micranthum.bang.phuong.phap.in.vitro vi MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN i DANH MỤC BẢNG ii DANH MỤC HÌNH iii DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT v MỤC LỤC vi Phần MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục đích nghiên cứu 1.3 Yêu cầu của đề tài 1.4 Ý nghĩa khoa học và thực tiễn của đề tài .3 1.4.1 Ý nghĩa khoa học của đề tài 1.4.2 Ý nghĩa thực tiễn .3 Phần TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Giới thiệu về lan Hài (Paphiopedilum) 2.1.1 Phân loại và nguồn gốc .4 2.1.2 Đặc điểm hình thái 2.1.3 Sinh thái 2.1.4 Hiện trạng lan Hài Việt Nam 2.2 Tổng quan về lan Hài P micranthum 10 2.2.1 Nguồn gốc và sự phân bố lan Hài P micranthum ở Việt Nam 10 2.2.2 Hình thái 10 2.2.3 Các điều kiện bản để nuôi trồng giống lan hài P micranthum 11 2.2.4 Các phương pháp nhân giống vô tính lan Hài Mốc Hồng 12 2.3 Khái quát về nuôi cấy mô tế bào thực vật Error! Bookmark not defined 2.3.1 Khái niệm nuôi cấy mô tế bào thực vật Error! Bookmark not defined 2.3.2 Cơ sở khoa học của phương pháp nuôi cấy mô tế bào thực vật Error! Bookmark not defined 2.3.3 Điều kiện và môi trường nuôi cấy mô tế bào thực vật 13 luan.van.nghien.cuu.kha.nang.nhan.nhanh.lan.hai.moc.hong.paphiopedilum.micranthum.bang.phuong.phap.in.vitroluan.van.nghien.cuu.kha.nang.nhan.nhanh.lan.hai.moc.hong.paphiopedilum.micranthum.bang.phuong.phap.in.vitroluan.van.nghien.cuu.kha.nang.nhan.nhanh.lan.hai.moc.hong.paphiopedilum.micranthum.bang.phuong.phap.in.vitroluan.van.nghien.cuu.kha.nang.nhan.nhanh.lan.hai.moc.hong.paphiopedilum.micranthum.bang.phuong.phap.in.vitro h luan.van.nghien.cuu.kha.nang.nhan.nhanh.lan.hai.moc.hong.paphiopedilum.micranthum.bang.phuong.phap.in.vitroluan.van.nghien.cuu.kha.nang.nhan.nhanh.lan.hai.moc.hong.paphiopedilum.micranthum.bang.phuong.phap.in.vitroluan.van.nghien.cuu.kha.nang.nhan.nhanh.lan.hai.moc.hong.paphiopedilum.micranthum.bang.phuong.phap.in.vitroluan.van.nghien.cuu.kha.nang.nhan.nhanh.lan.hai.moc.hong.paphiopedilum.micranthum.bang.phuong.phap.in.vitro vii 2.3.4 Môi trường dinh dưỡng 14 2.3.5 Các công đoạn của nuôi mô tế bào 18 2.4 Tình hình nghiên cứu về nuôi cấy mô lan Hài thế giới và nước .19 2.4.1 Trên thế giới 19 2.4.2 Trong nước 21 Phần ĐỐI TƯỢNG, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 25 3.1 Vật liệu, hoá chất và thiết bị nghiên cứu 25 3.1.1 Đối tượng, vật liệu nghiên cứu 25 3.1.2 Hoá chất sử dụng .25 3.1.3 Thiết bị, dụng cụ nghiên cứu 25 3.2 Phạm vi, địa điểm và thời gian nghiên cứu 26 3.2.1 Phạm vi nghiên cứu 26 3.2.2 Địa điểm nghiên cứu .26 3.2.3 Thời gian nghiên cứu 26 3.3 Nội dung nghiên cứu 26 3.3.1 Nội dung 1: Nghiên cứu ảnh hưởng của nồng độ, thời gian cuả dung dịch khử trùng HgCl2 đến khả tạo vật liệu vô trùng 26 3.3.2 Nội dung 2: Nghiên cứu ảnh hưởng của môi trường dinh dưỡng đến khả tái sinh mầm ngủ lan Hài P micranthum 26 3.3.3 Nội dung 3: Nghiên cứu ảnh hưởng của một số chất kích thích sinh trưởng hợp chất hữu đến khả nhân nhanh chồi lan Hài P micranthum từ đoạn thân mang mầm ngủ .26 3.3.4 Nội dung 4: Nghiên cứu môi trường rễ tạo hoàn chỉnh lan Hài P micranthum 27 3.4 Phương pháp nghiên cứu 27 3.4.1 Chuẩn bị môi trường nuôi cấy in vitro 27 3.4.2 Phương pháp nghiên cứu quy trình nhân giớng 28 3.4.3 Phương pháp bố trí thí nghiệm 28 3.5 Phương pháp đánh giá và xử lý số liệu 33 luan.van.nghien.cuu.kha.nang.nhan.nhanh.lan.hai.moc.hong.paphiopedilum.micranthum.bang.phuong.phap.in.vitroluan.van.nghien.cuu.kha.nang.nhan.nhanh.lan.hai.moc.hong.paphiopedilum.micranthum.bang.phuong.phap.in.vitroluan.van.nghien.cuu.kha.nang.nhan.nhanh.lan.hai.moc.hong.paphiopedilum.micranthum.bang.phuong.phap.in.vitroluan.van.nghien.cuu.kha.nang.nhan.nhanh.lan.hai.moc.hong.paphiopedilum.micranthum.bang.phuong.phap.in.vitro h luan.van.nghien.cuu.kha.nang.nhan.nhanh.lan.hai.moc.hong.paphiopedilum.micranthum.bang.phuong.phap.in.vitroluan.van.nghien.cuu.kha.nang.nhan.nhanh.lan.hai.moc.hong.paphiopedilum.micranthum.bang.phuong.phap.in.vitroluan.van.nghien.cuu.kha.nang.nhan.nhanh.lan.hai.moc.hong.paphiopedilum.micranthum.bang.phuong.phap.in.vitroluan.van.nghien.cuu.kha.nang.nhan.nhanh.lan.hai.moc.hong.paphiopedilum.micranthum.bang.phuong.phap.in.vitro viii 3.5.1 Thu thập số liệu .33 3.5.3 Phương pháp sử lý số liệu .34 Phần KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN .35 4.1 Kết quả nghiên cứu ảnh hưởng của nồng độ, thời gian của dung dịch khử trùng HgCl2 đến khả tạo vật liệu vô trùng 35 4.2 Kết quả nghiên cứu ảnh hưởng của môi trường dinh dưỡng đến khả tái sinh đoạn thân mang mầm ngủ lan Hài P micranthum 37 4.3 Kết qủa nghiên cứu của một số chất kích thích sinh trưởng hợp chất hữu tự nhiên đến khả nhân nhanh chồi lan Hài P micranthum từ đoạn thân mang mầm ngủ 39 4.3.1 Kết quả nghiên cứu ảnh hưởng cuả NAA đến khả nhân nhanh chồi lan Hài P micranthum 39 4.3.2 Kết quả nghiên cứu ảnh hưởng của BA đến khả nhân nhanh chồi lan Hài P micranthum 41 4.3.3 Kết quả nghiên cứu ảnh hưởng của BA kết hợp với Giberellin đến khả nhân nhanh chồi lan P micranthum 43 4.3.4 Kết quả nghiên cứu ảnh hưởng của dịch chiết chuối đến khả nhân nhanh chồi lan P micranthum .46 4.4 Kết quả nghiên cứu môi trường rễ tạo hoàn chỉnh của lan Hài P micranthum từ mầm ngủ 48 4.4.1 Kết quả nghiên cứu ảnh hưởng của IAA đến khả rễ tạo hoàn chỉnh của lan Hài P micranthum 49 4.4.2 Kết quả nghiên cứu ảnh hưởng của IBA đến khả rễ tạo hoàn chỉnh của lan Hài P.micranthum .51 Phần KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 54 5.1 Kết luận 54 5.2 Kiến nghị 54 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC luan.van.nghien.cuu.kha.nang.nhan.nhanh.lan.hai.moc.hong.paphiopedilum.micranthum.bang.phuong.phap.in.vitroluan.van.nghien.cuu.kha.nang.nhan.nhanh.lan.hai.moc.hong.paphiopedilum.micranthum.bang.phuong.phap.in.vitroluan.van.nghien.cuu.kha.nang.nhan.nhanh.lan.hai.moc.hong.paphiopedilum.micranthum.bang.phuong.phap.in.vitroluan.van.nghien.cuu.kha.nang.nhan.nhanh.lan.hai.moc.hong.paphiopedilum.micranthum.bang.phuong.phap.in.vitro h