Nghiên cứu thành phần hóa học phân đoạn dịch chiết ethylacetat của lá cây khôi đốm (sanchezia nobilis hook f)

Vì vậy chúng tôi triển khai đề tài “Nghiên cứu thành phần hóa học phân đoạn dịch chiết ethylacetat của lá cây Khôi đốm Sanchezia nobilis Hook.f‟‟ với mục tiêu: Trang 8 Copyright @ Scho

TỒNG QUAN

Tổng quan về chi Sanchezia

Theo “Hệ thống phân loại về ngành Ngọc lan (Magnoliophyta)” [5, 29] của tác giả A.Takhtajan, chi Sanchezia có vị trí phân loại như sau:

Giới Thực vật: Plantae Ngành Ngọc lan: Magnolipphyta Lớp Cỏ tháp bút: Equisetopsida C Agardh Phân lớp Mộc lan: Magnoliidae Novák ex Takht

Họ Ô rô: Acanthaceae Chi: Sanchezia

1.1.2 Đặc điểm thực vật và phân bố chi Sanchezia 1.1.2.1 Đặc điểm thực vật

Cây bụi hay cây cỏ xanh nửa mùa

Rễ cây không có lông

Thân cây trơn màu xanh lá cây tươi sáng với màu tím

Lá dài, lớn đến 26cm, màu xanh đậm có vân trắng kem hoặc vàng, hình mác

Hoa có thể mọc đơn độc hoặc thành chùm, với hình ống màu vàng, cam, đỏ hoặc tím Hoa thường xuất hiện ở ngọn, có lá bắc màu đỏ dài khoảng 5cm Đài hoa có 5 thùy và tràng hoa cũng có 5 cánh dính nhau tạo thành hình ống Trong hoa có 4 nhị, trong đó 2 nhị lép và 2 nhị thò ra, bao phấn gồm 2 ô.

Qủa nang, 6-8 hạt, hạt hình cầu [9,17]

Môi trường sống tự nhiên: Trên cạn (rừng mưa nguyên sinh, rừng nhiệt đới thứ sinh) [35]

Khí hậu ưu tiên: nhiệt đới

Copyright @ School of Medicine and Pharmacy, VNU

Trung tâm của sự đa dạng loài có nguồn gốc từ Peru và Ecuador, với phần lớn phân bố ở phía Tây Nam Mỹ Một số ít loài còn xuất hiện ở vùng phía Bắc và Đông Bắc Bắc Mỹ, Trung Mỹ, vùng biển Caribbean, cũng như một số đảo ở Thái Bình Dương.

Chi Sanchezia lần đầu được mô tả bởi Ruiz và Pavon vào đầu thế kỷ 18 với 2 loài Đến năm 1964, Leonard và Smith xác định có 59 loài và công bố khóa phân loại cho chúng Năm 2015, Tripp và Koenemann đã thống kê lại, lập danh mục 55 loài thuộc chi này Hiện nay, các nhà khoa học đã xác định được 75 loài, trong đó có 54 tên khoa học được công nhận, 9 tên đồng nghĩa và 12 tên chưa được xác định, theo dự án The Plant List, bao gồm các loài như: Sanchezia lambra, Sanchezia speciosa, Sanchezia nobilis, Sanchezia oblonga, Sanchezia ovata, Sanchezia parviflora, Sanchezia peruviana, và Sanchezia putumayensis.

Tại Việt Nam, cây Xăng sê hay Ngũ sắc, có tên khoa học là Sanchezia speciosa hoặc Sanchezia nobilis, chủ yếu phân bố ở các vùng miền núi như Tây Giang - Quảng Nam, Hòa Vang - Đà Nẵng, và Chiêm Hóa, Na Hang - Tuyên Quang, cũng như tỉnh Nam Định.

Tổng quan về loài Khôi đốm

Tên khoa học: Sanchezia nobilis Hook F.hay

Sanchezia speciosa Leonard Tên Việt Nam: Khôi đốm, Xăng sê, Ngũ sắc [5]

1.2.1 Đặc điểm về loài Khôi đốm

Cây bụi lớn, xanh nửa mùa, mọc lên cao khoảng 3m với thân màu xanh lá cây và gân chính của lá màu trắng không lông [9]

Lá có hình dạng đơn giản, đối diện, lưỡi hình elip với phiến thon, to, màu lục, đỏ hoặc vàng, có gân trắng và đầu nhọn Bìa lá có thể nguyên hoặc có răng tà, cuống ngắn, lá mọc đối hình chữ thập, dài từ 10-25 cm và rộng 3-7 cm Mép lá hơi lượn sóng, mặt trên có màu xanh đậm, trong khi mặt dưới màu xanh nhạt, với hệ gân lông chim có từ 9-12 đôi gân bê.

Hoa liên tục quanh năm, được bọc trong các cụm trên một cành dựng đứng, đôi khi ở dưới đáy Phát hoa ở chót nhánh, mọc thành cụm hoa ,bông

Cây thuộc họ thực vật có từ 3 bông hoa nhỏ trở lên với cuống ngắn, lá bắc màu lục hoặc đỏ Vành hoa hình ống tròn, có màu vàng như sáp, đỉnh tù và nhẵn, ôm lấy một cụm hoa cao từ 4-5cm Hoa có tai đều, tiểu nhị thò dài, với cấu trúc thụ 2 và nép 2, tạo thành nang chứa 8 hạt Hoa lưỡng tính, mang mùi thơm nhạt đặc trưng Đài hoa có nhiều hình vảy, dài từ 1,5-1,8cm và rộng 3-5mm, với đỉnh tròn.

Tràng hoa có hình ống tròn, màu vàng sáp, dài từ 4,5 đến 5,5 cm và rộng 7-8 cm ở phần trên, với 5 thành thùy tròn, thu hẹp dần xuống dưới còn 3 mm Các

Quả nang có nơ hình trụ, có 8 hạt [9]

1.2.2 Đặc điểm vi học cây Khôi đốm 1.2.2.1 Thân

Thân non vi phẫu hình tròn, với cấu trúc từ ngoài vào trong gồm lớp biểu bì là hàng tế bào có lông che chở đơn bào Tiếp theo là mô dày với 6-8 hàng tế bào xếp thành hình tròn khép kín Mô mềm bên trong có 5-7 lớp tế bào chứa tinh thể calcioxalat hình kim và hạt tinh bột đơn Lớp libe gần như hình tròn khép kín, với libe ở ngoài và gỗ ở trong, đôi khi bị gián đoạn bởi một số tế bào mô mềm Mô mềm ruột cấu tạo từ nhiều lớp tế bào có thành mỏng, to, hình đa giác xếp lộn xộn với nhau.

Thân già vi phẫu hình vuông Cấu tạo tương tự thân non, ngoại trừ có thêm lớp bần bên ngoài cùng

Hình 1.1 Đặc điểm vi phẫu thân [6]

Chú thích: 1- Biểu bì; 2- Mô dày; 3- Mô mềm; 4- Sợi 5- Libe; 6- Gỗ; 7- Tinh thể calci oxalat hình kim ; 8- Mô mềm ruột

Vi phẫu gân lá có cấu trúc đặc trưng với biểu bì trên và dưới được tạo thành từ một hàng tế bào đa giác xếp đều Mô dày ở cả hai mặt có nhiều lớp tế bào thành dày lên ở các góc Mô mềm chứa các tế bào thành mỏng, gần tròn, bên trong có tinh thể canxi oxalat và hạt tinh bột, kèm theo các bó mạch phụ Libe và gỗ sắp xếp thành hình vòng cung, với libe ở phía ngoài và gỗ ở phía trong Ngoài ra, một số tế bào biểu bì có lông che chở và lông tiết, góp phần bảo vệ và hỗ trợ chức năng của lá.

Vi phẫu phiến lá bao gồm hai lớp biểu bì: biểu bì trên và biểu bì dưới, mỗi lớp được cấu tạo bởi một hàng tế bào đa giác sắp xếp đều đặn Mô giậu nằm ngay dưới biểu bì trên, đóng vai trò quan trọng trong quá trình quang hợp và trao đổi khí của lá.

2 hàng tế bào hình chữ nhật sắp xếp đều đặn nhau Mô khuyết cấu tạo bởi các tế bào hình gần tròn xếp lộn xộn

Vi phẫu cuống lá hình chén, có các đặc điểm tương tự gân lá, tuy nhiên có thêm lớp mô dày sát lớp biểu bì [1, 12]

Hình 1.2 Đặc điểm vi phẫu lá [6]

Chú thích: 1- Biểu bì trên; 2- Mô dày trên; 3- Gỗ; 4- Libe; 5- Mô mềm; 6- Mô dày dưới; 7- Biểu bì dưới; 8- Mô giậu; 9- Mô khuyết

1.2.3 Đặc điểm vi học bột dƣợc liệu 1.2.3.1 Bột thân

Bột có màu xanh lá hơi vàng và vị đắng, khi soi dưới kính hiển vi, ta thấy các đặc điểm như mảnh bần màu nâu, mảnh biểu bì có lông che chở, mảnh mạch xoắn và mạch điểm, cũng như tinh thể calci oxalat hình kim, sợi, tinh bột và lông che chở.

Hình 1.3 Đặc điểm vi phẫu bột thân [6]

Chú thích: 1- Mảnh mô mềm; 2- Mảnh mô mềm chứa hạt tinh bột;

3- Mô dày 4- Mạch xoắn; 5,6- Mạch điểm; 7- Tinh thể calci oxalat hình kim;

8- Sợi; 9- Hạt tinh bột; 10- Lông che chở

Bột lá có màu xanh nhạt và vị hơi đắng, khi quan sát dưới kính hiển vi, ta thấy các đặc điểm như mảnh biểu bì, mảnh biểu bì có lông tiết, mảnh biểu bì có lỗ khí và lông che chở Ngoài ra, còn có mảnh mô mềm và mảnh mô khuyết.

The article discusses various components related to plant anatomy and physiology, including thick tissue fragments, spiral vessels, and point vessels It also mentions needle-shaped calcium oxalate crystals, protective and secretory hairs, and starch.

Hình 1.4 Đặc điểm vi phẫu bột lá [6]

Chú thích: 1- Lỗ khí; 2-Mảnh mô mềm; 3- Mảnh mô dày; 4- Mảnh mạch xoắn; 5,6-Mảnh mạch điểm; 7-Tinh thể calci oxalat hình kim;

Cây Khôi đốm được trồng phổ biến ở Hà Nội và Huế, phát triển mạnh trong khí hậu mát mẻ và trong lành Loại cây này chủ yếu phân bố ở các huyện miền núi cao như Tây Giang, tỉnh Quảng Nam, huyện Hòa Vang thành phố Đà Nẵng, cùng một số huyện miền núi Chiêm Hóa tỉnh Tuyên Quang.

1.2.5 Thành phần hóa học của lá Khôi đốm

Nghiên cứu về hóa thực vật cho thấy cây Khôi đốm có hàm lượng flavonoid và glycosid cao Năm 2016, tiến sĩ Vũ Đức Lợi và các cộng sự đã cô lập được 4 hợp chất từ chiết xuất lá Khôi đốm.

Năm 2015, Md Abu Shuaib Rafshanjani và cộng sự đã nghiên cứu và phát hiện rằng dịch chiết từ lá cây Khôi đốm chứa nhiều hợp chất quý giá, bao gồm alkaloid, glycoside, flavonoid, triterpenoid, carbohydrate, steroid, hợp chất phenolic, saponin và tannin Đặc biệt, phân đoạn ethyl acetat chiết xuất từ lá cây này cho thấy tiềm năng ứng dụng cao trong các lĩnh vực y học và dược phẩm.

Copyright @ Trường Đại học Y Dược, VNU cho thấy rằng tất cả các chất hóa học được thử nghiệm đều cho kết quả dương tính, trong khi phân đoạn n-hexan lại cho kết quả âm tính đối với flavonoid và các hợp chất phenolic.

Từ các bộ phận khác nhau của cây, đã có 14 hợp chất được phân lập:

Vào năm 2013, Ahmed E Abd Ellah cùng các cộng sự đã phân lập thành công 5 chất từ các bộ phận trên mặt đất của cây Khôi đốm, bao gồm 1 hợp chất matsutake alcohol và 4 hợp chất alcohol glycosid.

 3-O-β-arabinopyranosyl-(1-6)-β-glucopyranosyl-(1-6)-β- glucopyranosyl-1-octen-3-ol (5)

Nghiên cứu rễ và vỏ cây cho thấy sự hiện diện của alkaloid, glycosid, steroid, terpenoid và tannin [24]

Từ dịch chiết methanol của lá và rễ cây Khôi đốm, Ahmed E đã phân lập được 6 hợp chất khác nhau:

 9-O-β-xylopyranosyl-(1→6)-O-β-glucopyranosyl-(1→6)-O-β- glucopyranosyltrans-cinnamyl alcohol (7)

 Một hợp chất neolignan glucosid: 4-O-β -glucopyranosyl dehydrodiconiferyl alcohol (9)

 Hai hợp chất benzyl alcohol glycosid: 7-O- β -glucopyranosyl benzyl alcohol (10) và 7-O- β -apiofuranosyl-(1→6)-O- β -glucopyranosyl benzyl alcohol (11)

Từ dịch chiết methanol lấy từ hoa của cây Khôi đốm, nhóm nghiên cứu cũng phân lập được 3 hợp chất flavonoid: apigenin-7-O-β–glucopyranoside

1.2.6 Tác dụng dƣợc lý 1.2.6.1 Tác dụng gây độc tế bào ung thƣ

Năm 2013, Paydar M và các nhà nghiên cứu đã áp dụng phương pháp MTT để đánh giá tính độc của tế bào, bao gồm tế bào ung thư vú MCF-7, tế bào ung thư da SK-MEL-5 và tế bào nội mô mạch rốn HUVEC Kết quả cho thấy dịch chiết methanol từ lá cây có hoạt tính gây độc tế bào cao nhất đối với MCF-7, trung bình với SK-MEL-5 và thấp nhất trên HUVEC.

ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

Phương pháp nghiên cứu

Mẫu lá cây Khôi đốm sau khi rửa sạch, phơi khô và thái nhỏ được ngâm chiết bằng dung môi ethanol 80% trong ba lần, mỗi lần 8 L, sử dụng thiết bị chiết siêu âm ở 40 độ C trong 3 giờ Sau đó, các dịch chiết ethanol được lọc qua giấy lọc, gộp dịch lọc và cất loại dung môi dưới áp suất giảm để thu được cao chiết tổng ethanol.

Phân tán cao chiết ethanol được thực hiện trong nước cất, sau đó chiết phân bố bằng n-hexan và ethyl acetat qua ba lần Các phân đoạn n-hexan và ethyl acetat được cất để loại bỏ dung môi dưới áp suất giảm, nhằm thu được các phân đoạn tương ứng.

Lựa chọn các phân đoạn tiềm năng để xử lý và phân lập là bước quan trọng trong nghiên cứu Phương pháp sắc ký cột được sử dụng chủ yếu để phân lập hợp chất từ các phân đoạn đã chọn Quá trình này được theo dõi bằng sắc ký lớp mỏng và sắc ký lớp mỏng điều chế để đảm bảo hiệu quả và độ chính xác.

Sắc ký cột (CC) sử dụng silicagel pha thường và pha đảo làm chất hấp phụ, kết hợp với hệ dung môi có độ phân cực tăng dần Silicagel pha thường có kích thước hạt từ 0,063-0,200 mm (Merck) và 0,040-0,063 mm, giúp tối ưu hóa quá trình tách chiết các hợp chất.

(Merck) với các loại cột sắc ký có kích cỡ khác nhau

Sắc ký lớp mỏng (TLC) được thực hiện trên bản mỏng nhôm tráng silicagel 60 F 254 (Merck) với độ dày 0,2 mm và RP-18 F 254s, độ dày 0,25 mm (Merck) Sau khi triển khai sắc ký, bản mỏng được kiểm tra bằng đèn tử ngoại ở bước sóng 254 nm và 365 nm, sau đó được phun thuốc thử là dung dịch.

H 2 SO 4 10% trong ethanol và đốt nóng trên bếp điện từ

Sắc ký lớp mỏng điều chế (pTLC) được thực hiện trên bản mỏng nhôm tráng silicagel 60G F254 với độ dày 1,0 mm (Merck) Sau khi triển khai sắc ký, bản mỏng được kiểm tra bằng đèn tử ngoại ở bước sóng 254 nm và 365 nm Ngoài ra, có thể cắt rìa bản mỏng để phun thuốc thử là dung dịch H2SO4 10% trong ethanol, sau đó đốt nóng trên bếp điện từ và ghép lại bản mỏng để xác định vùng chất bằng dung môi thích hợp.

2.2.2 Phương pháp xác định cấu trúc hợp chất

Xác định cấu trúc các hợp chất phân lập được bằng phương pháp đo nhiệt độ nóng chảy, phổ khối (MS), phổ cộng hưởng từ hạt nhân ( 1 H-NMR,

13C-NMR, DEPT) và so sánh các dữ liệu thu được từ thực nghiệm với các dữ liệu đã công bố a Phổ khối lượng (MS)

Phổ khối lượng cung cấp thông tin về khối lượng của các ion từ phân tử bằng cách xác định tỷ lệ giữa khối lượng (m) và điện tích (z) của ion (m/z) Để xác định khối lượng phân tử (M), cần phải biết số điện tích của ion.

Trong điều kiện ion hóa nhất định, sự phân mảnh của ion mẹ thành các ion con tuân theo các quy luật cụ thể Các chất có cấu trúc tương tự sẽ tạo ra những phân mảnh giống nhau, cho phép xác định cấu trúc của chất chưa biết thông qua khối lượng các phân mảnh và các phương pháp phổ khác Việc so sánh phổ khối của chất chưa biết với phổ khối của chất đã biết sẽ giúp định danh chất đó một cách dễ dàng và chính xác Phổ cộng hưởng từ hạt nhân (NMR) cũng là một công cụ quan trọng trong việc phân tích cấu trúc hóa học.

Khi đặt chất có hạt nhân với số spin lẻ (như 1H, 13C) trong từ trường ngoài (B0), các spin hạt nhân sắp xếp theo hai hướng: thuận và ngược chiều từ trường, đạt trạng thái cân bằng với tỉ lệ xác định Khi chiếu bức xạ điện từ có tần số thích hợp, các spin hấp thu năng lượng và chuyển lên mức năng lượng cao Sau khi ngưng chiếu xạ, các spin giải phóng năng lượng để trở về trạng thái cân bằng Phổ cộng hưởng từ hạt nhân được xác định thông qua năng lượng hấp thu hoặc giải phóng của các hạt nhân cùng loại Có hai phương pháp xác định năng lượng cộng hưởng: phương pháp quét tần số cộng hưởng và phương pháp biến đổi Fourier (FT-NMR), hiện đang được sử dụng phổ biến.

Phổ cộng hưởng từ hạt nhân ban đầu là tần số cộng hưởng của các hạt nhân trong phân tử, nhưng tần số này thay đổi theo từ trường ngoài B0 Để loại bỏ ảnh hưởng của B0, người ta chia sự chênh lệch tần số cộng hưởng của hạt nhân so với một chất chuẩn, thường là trimethyl silan (TMS), cho tần số cộng hưởng của chất chuẩn đó Kết quả thu được rất nhỏ, thường được thể hiện bằng ppm, gọi là chuyển dịch hoá học Giá trị chuyển dịch hoá học của các proton thường nằm trong khoảng 0-14 ppm, trong khi của carbon-13 là từ 0.

Tần số cộng hưởng của hạt nhân phụ thuộc vào cường độ từ trường của máy Cường độ từ trường càng cao, dải tần số kích thích hạt nhân càng mở rộng, dẫn đến phép đo trở nên nhạy bén và chính xác hơn, đồng thời cải thiện độ phân giải.

Do vậy, ta thường gọi phổ kế cộng hưởng từ hạt nhân 200 MHz, 300 MHz hay 500 MHz là theo tần số dùng để kích thích các proton [3]

Tùy thuộc vào mục đích và độ phức tạp của cấu trúc, có thể đo một hoặc nhiều loại phổ khác nhau Việc xác định phổ của cùng một loại hạt nhân, chẳng hạn như 1H, là rất quan trọng trong phân tích hóa học và nghiên cứu vật liệu.

13C) như trong các phổ một chiều ( 1 H-NMR, 13 C-NMR, DEPT) hay các mối tương quan giữa các loại hạt nhân trong các phổ hai chiều (COSY)

Phổ proton (1H-NMR) cung cấp thông tin về môi trường hóa học của proton trong phân tử Các proton trong các môi trường hóa học khác nhau sẽ có sự dịch chuyển hóa học khác nhau, và phổ proton của một proton hoặc một nhóm proton có cùng môi trường hóa học sẽ hiển thị dưới dạng một đỉnh Đỉnh này có thể là đỉnh đơn, đôi, ba, hoặc nhiều hơn Diện tích của mỗi đỉnh tỷ lệ với số lượng proton tương ứng, cho phép xác định số proton của đỉnh đó dựa vào diện tích.

Phổ cộng hưởng từ hạt nhân carbon-13 (13C-NMR) cung cấp thông tin quan trọng về môi trường hóa học của carbon Các carbon lai hóa sp3 không liên kết với dị tố có chuyển dịch trong khoảng 0-60 ppm, trong khi carbon liên kết đơn với oxy (như alcol, ether) chuyển dịch từ 45-85 ppm Đối với carbon lai hóa sp2, chuyển dịch nằm trong khoảng 100-150 ppm, và nếu có liên kết đôi với oxy, có thể dịch chuyển tới 240 ppm Kỹ thuật đo phổ hiện tại cho thấy phổ NMR của carbon xuất hiện dưới dạng các vạch đơn, mỗi vạch tương ứng với một carbon trong phân tử, trừ trường hợp nhiều carbon có cùng môi trường hóa học.

Các kỹ thuật xác định số lượng proton trên carbon cho biết số lượng proton liên kết trên mỗi carbon, gián tiếp cho biết số C và H trong phân tử

Kỹ thuật hiện thường sử dụng là DEPT (Detortionless Enhancement by Polarization Transfer)

Các kỹ thuật phổ hai chiều cung cấp thông tin quan trọng về tương tác giữa các proton của carbon gần gũi, bao gồm phổ COSY, và tương tác giữa proton và carbon qua phổ HETCOR, với HSQC là phương pháp phổ biến hiện nay Ngoài ra, các kỹ thuật long-range HETCOR như HMBC cũng được sử dụng để nghiên cứu tương tác giữa các proton và carbon xa hơn, cùng với các phương pháp NOESY và ROESY để phân tích các proton gần nhau trong không gian.

KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN

3.1 Kết quả chiết xuất và phân lập hợp chất

Lá Khôi đốm được rửa sạch, phơi khô và xay nhỏ Sau đó, cân 2,5 kg lá đã chế biến và ngâm chiết với 8L dung môi EtOH 80% ở nhiệt độ phòng trong 3 ngày để thu được dịch chiết lần một Tiếp theo, bổ sung thêm dung môi ngập dược liệu 2-3cm (8L/lần) và thực hiện chiết thêm hai lần nữa, thu được dịch chiết lần hai và lần ba.

Gộp dịch chiết ethanol sau ba lần chiết xuất, lọc qua giấy lọc và cất ethanol dưới áp suất giảm, thu hồi được khoảng 150 g cao chiết tổng hợp từ ethanol.

Hòa tan 100g cao đặc trong nước nóng với tỷ lệ 1:1 để thu được dịch chiết nước Dịch chiết này được lắc với các dung môi n-hexan và ethyl acetat, mỗi dung

Hình 3.1 Sơ đồ chiết xuất phân đoạn lá cây Khôi đốm

Tiến hành phân tích cắn EtOAc (25,0 g) trên cột sắc ký silica gel với hệ dung môi có độ phân cực tăng dần, bao gồm n-hexan- EtOAc (tỷ lệ 5:1 đến 1:1, v/v, mỗi phân đoạn 600 mL) và CHCl3 - MeOH (tỷ lệ 10:1 đến 1:1, v/v, mỗi phân đoạn 500 mL), thu được tổng cộng 6 phân đoạn được ký hiệu từ E1 đến E6.

Phân tán trong nước cất Lắc với n-hexan

Dịch chiết nước Thu hồi n-hexan

Thu hồi ethyl acetat Dịch chiết nước

Từ phân đoạn E1 (8,1g), chạy sắc ký cột silicagel (Φ45 mm × 350 mm) với hệ pha động EtOAc - MeOH (5:1, v/v, 2,5L) thu được 6 phân đoạn nhỏ hơn là E1.1~ E1.6

Phân đoạn E1.1 (0,9 g) tiếp tục tiến hành sắc ký cột silicagel pha thường với hệ dung môi rửa n-hexan:etylacetat 4/1, thu được chất X1 (21 mg)

Từ phân đoạn E1.2 (1,1 g) tiến hành sắc ký trên cột silica gel với hệ dung môi n-hexan/ethyl acetat (8/1, v/v) thu được hợp chất X2 (15mg)

Phân đoạn E1.3 (1,2 g) được chạy sắc ký trên cột silica gel với hệ dung môi n-hexan:CH2Cl2 (2:1, v/v) thu được hợp chất X3 (16 mg)

Hình 3.2: Sơ đồ phân lập các hợp chất từ phân đoạn ethyl acetat

Silica gel pha thuận n hexan: EtOAc CHCl 3 : MeOH hexan- EtOAc n-hexan- EtOAc (5:1→1:1),

3.2 Kết quả xác định cấu trúc hợp chất 3.2.1 Hợp chất X1

Tính chất: kết tinh hình phiến, không màu [α] D 25 = - 187,0 (c=0,15; CHCl 3 )

R f = 0,51 (TLC silica gel, n-hexan/ EtOAc, 7:3, v/v)

ESI-MS cho pic ion phân tử proton hóa ở m/z 277 [M+H] + ứng với công thức phân tử (C 16 H 20 O 4 ), M= 276

Hình 3.3 Cấu trúc của hợp chất X1

Phổ 1 H-NMR (CDCl3,500MHz), 13 C-NMR (CDCl3,125MHz) của chất X1 được trình bày ở bảng 3.1 Bảng 3.1 Số liệu phổ NMR và DEPT của hợp chất X1 và chất tham khảo

Phổ NMR 1H và 13C của chất tham khảo được ghi chú với giá trị δH và δC tính bằng ppm, trong đó δH và δC được đo trong dung môi CDCl3 với tần số 500MHz và 125MHz tương ứng Hằng số tương tác spin-spin (J) giữa các proton cũng được chỉ ra, có đơn vị là Hz.

Biện luận công thức cấu tạo:

Chất X1 là một hợp chất tinh thể hình phiến, không màu, với nhiệt độ nóng chảy từ 238-239 °C Giá trị Rf của nó là 0,5 khi sử dụng hệ dung môi n-hexan/ethyl acetat theo tỉ lệ 7/3 (v/v) Phổ ESI-MS cho thấy pic ion phân tử proton hóa tại m/z=277 [M+H]+, tương ứng với khối lượng phân tử 276 Các dữ liệu phổ khối và phổ 13C-NMR xác nhận rằng chất X1 có công thức phân tử là C16H20O4, với DBE bằng 7.

Phân tích dữ liệu phổ 1 H-NMR, 13 C-NMR và DEPT của chất X1 cho thấy chất này có cấu trúc tương đồng với Chloranthalacton B, bao gồm nhóm α, β-ethylen-γ-lacton tại δ C 156,3; 128,0 và 171,0 ppm Ngoài ra, có sự hiện diện của vòng cyclopropan với một nhóm methylen tạo tín hiệu ở δH 0,67 (1H, dt, J = 3,9).

5,3 Hz), 0,82 (1H, dt, J = 5,3, 8,7 Hz); δ C 15,7 (C-2) và 2 nhóm methin ở δH

2,11 (1H, br, dt, J = 3,9; 8,7 Hz ); δ C 22,8 (C-1) và δH 1,96 (1H, m); δ C 23,6 (C-3) Tín hiệu của nhóm >C=CH2 cũng được quan sát thấy trên phổ 1 H- NMR, 13 C-NMR ở δC152,2; 106,0 và δH 4,70 (1H, br, t); 5,01 (1H, m, OH)

Trong Chloranthalacton B, nhóm oxiran được thay thế bằng nhóm -CH-OH và một nhóm methoxy trong X1, điều này được thể hiện rõ ràng qua phổ 13C-NMR và 1H-NMR với δC 79,6 (C-9) và δH 3,83.

(1H, d, J =7,4 Hz, H-9), 3,41 (1H, d, J = 7,4 Hz, OH) δC 50,3 (OCH3) và δ H 3,22 (3H, s, OCH3)

Phân tích dữ liệu phổ 1 H- NMR, 13 C-NMR và các phổ 2D-NMR của chất X1 cho thấy sự tương đồng rõ rệt với các thông tin trong tài liệu [15] Qua đó, chúng ta có thể khẳng định rằng chất X1 chính là 9-hydroxyheterogorgiolid.

Tinh thể màu vàng, tan trong cloroform

Nhiệt độ nóng chảy t nc = 178-180 o C Phổ khối lượng HR-ESI-MS (+) m/z: 252,08 [M+H] + , ứng với CTPT

Hình 3.4 Cấu trúc của hợp chất X2

Phổ 1 H-NMR (CDCl3,500MHz), 13 C-NMR (CDCl3,125MHz) của chất X2 được trình bày ở bảng 3.2

Bảng 3.2 Số liệu phổ NMR và DEPT của hợp chất X2 và chất tham khảo Q

Biện luận công thức cấu tạo:

Hợp chất X2 là một tinh thể màu vàng, tan trong cloroform, có nhiệt độ nóng chảy từ 178-180 °C và phản ứng với thuốc thử Dragendorff Phổ HR-ESI-MS của X2 cho thấy sự xuất hiện của peak ion giả phân tử tại m/z 252,08 [M+H]+.

Công thức phân tử của X2, với khối lượng phân tử 251, đã được xác định là C15H10N2O2 thông qua phân tích phổ 13C-NMR.

Phổ 1 H-NMR của X2 cho tín hiệu doublet đặc trưng của proton H-4 tại δ 7,98 và H-5 tại δ 6,93 với hằng số tương tác J = 9,5 Hz; một cặp proton vicinal H-1 tại δ 7,80 và H-2 tại δ 8,74 với J = 5,0 Hz Ngoài ra, còn xuất hiện tín hiệu của một nhân thơm ABX với ba proton tại δ 8,16 (1H, d,

Sự hiện diện của nhóm methoxy được xác định tại δ 56,0 (C-17) và δ 3,98 (3H, s, H-17), cho thấy nhóm này liên kết với C-9 thông qua tương tác H-17/C-9 trong phổ HMBC Dựa trên các dữ liệu phổ của X2 và việc so sánh với tài liệu [16, 28], chúng tôi khẳng định rằng X2 là 9-methoxycanthin-6-on, một loại

Chất bột màu trắng, vô định hình

[α] D 25 = -80,5(c=0,1, MeOH) Phổ ESI-MS: m/z 263,2 [M+H] + Công thức phân tử: C 16 H 22 O 3 M= 262

Hình 3.5 Cấu trúc của hợp chất X3 Phổ 1 H-NMR (CDCl3,500MHz), 13 C-NMR (CDCl3,125MHz) của chất X3

Phổ 13 C-NMR (CDCl 3 , 125 MHz) δ(ppm): 169,7(C-2); 117,2(C-3);

Phổ 1 H-NMR (CDCl 3 , 500 MHz) δ(ppm): 5,81(1H, s, H-3); 1,68(1H, m, H-4a); 1,16 (1H, m, H-5α)/1,68 (1H, m, H=5β); 1,97(1H, m, H-6); 5,36(1H, d, J=5.0Hz, H-8); 2,77(1H, m, H-8a); 1,52 (1H, dd, J.5, 13.5Hz, H-9α)/2,34 (1H, dd, J=3.5, 13.5Hz, H-9β); 1,37(1H, s, H-10); 1,24(1H, s, H-11); 1,62(1H, s, H-12); 3,17(1H, s, OMe)

Hợp chất X3 là bột vô định hình màu trắng với phổ khối lượng ESI-MS cho thấy pic ion giả phân tử tại m/z 263,2 [M+H]+, tương ứng với công thức phân tử C16H22O3 (M = 262).

Phổ 1 H-NMR thấy xuất hiện tín hiệu của 2 proton olefin tại δH 5,36 (d,

J=5,0 Hz) và 5,81 (s); 1 methoxy tại δ H 3,17 (s); và 3 methyl tại δH 1,24 (s), 1,37 (s) và 1,62 (s) 1 nhóm carbonyl tại δC 169,5; 4 carbon bậc 4 tại δC 38,7, 107,5, 134,2 và 173,0; 4 methin tại δC 30,1, 47,7, 117,2 và 123,5; 3 methylen tại δ C 18,4, 30,9 và 40,2; và 4 methyl tại δC 23,1; 25,2; 25,7 và 50,3

Dữ liệu phổ 1D-NMR của X3 gợi ý cấu trúc tương tự hợp chất O-methyl furodysinin lacton Phân tích tương tác trên phổ HSQC cho phép xác định tín hiệu proton liên kết trực tiếp với carbon Trong phổ HMBC, có sự tương tác giữa H-10 (δH 1,37)/H-11 (δH 1,24) với C-3a (δC 173,0), C-4 (δC 38,7) và C-4a (δC 47,7), cùng với H-3 (δH 5,81) và C-2 (δC).

Tiêu đề	Nghiên Cứu Thành Phần Hóa Học Phân Đoạn Dịch Chiết Ethylacetat Của Lá Cây Khôi Đốm (Sanchezia Nobilis Hook F)
Tác giả	Vũ Thị Mây
Người hướng dẫn	TS. Vũ Đức Lợi - Chủ Nhiệm Bộ Môn Dược Liệu - Dược Học Cổ Truyền, ThS. Bùi Thị Xuân - Giảng Viên Khoa Y Dược
Trường học	Đại học Quốc gia Hà Nội
Chuyên ngành	Dược học cổ truyền
Thể loại	khóa luận
Năm xuất bản	2018
Thành phố	Hà Nội

Định dạng
Số trang	42
Dung lượng	1,24 MB