Phân tích thành phần hóa học của lá mơ lông việt nam (paederia lanuginosa)

Kết quả định tính các nhóm chất hữu cơ thường gặp trong mẫu cao lá mơ bằng phản ứng hóa học 19 Bảng 3.2.. Nghiên cứu về các hợp chất hóa học có hoạt tính từ cây mơ lông là một trong nhữn

TỔNG QUAN

Tổng quan về cây mơ lông (Paederia lanuginosa)

Cây thuộc họ Cà phê (Rubiaceae) bao gồm các loại cây thân gỗ, cây bụi, nửa bụi, thậm chí là cây thân thảo hoặc dây leo Lá của chúng mọc đối xứng và đi kèm với nhiều hình dạng đa dạng Hoa thường được tập hợp thành cụm hình xim hoặc đôi khi hình đầu.

Đài và tràng thường hợp với nhau, trong đó tràng có thể có từ 4 đến 10 thùy Số nhị thường tương ứng với số thùy của tràng và nằm xen kẽ giữa các thùy, gắn vào ống tràng hoặc họng tràng Bộ nhụy gồm hai lá noãn dính vào nhau tạo thành bầu dưới với hai buồng, có vòi nhụy mảnh và đầu nhụy chia thành hai phần Mỗi buồng chứa một hoặc nhiều noãn, có thể là noãn đảo hoặc thẳng Quả có thể là quả mọng, hạch hoặc quả khô, với hạt thường có phôi thẳng và có thể có hoặc không có nội nhũ.

Họ Cà phê (Rubiaceae) là một trong năm họ thực vật có hoa đa dạng nhất trên thế giới, với khoảng 13.000 loài được phân bố rộng rãi.

620 chi, hơn 40 tông và được chia làm 3 phân họ: Cinchonoideae, Ixoroideae, Rubioideae [18]

Cà phê được tìm thấy trên tất cả các lục địa, bao gồm cả Nam Cực, với một số loài thuộc chi Coprosma, Galium và Sherardia Phần lớn các loài này phân bố chủ yếu ở vùng nhiệt đới và cận nhiệt đới Tại Việt Nam, theo các nghiên cứu gần đây, họ Cà phê có khoảng 93 chi và 450 loài, phân bố rộng rãi trên toàn quốc.

1.1.2 Vị trí, phân loại của chi Paederia

Vị trí của chi Paederia trong hệ thống phân loại thực vật của Takhtajan (1987) [27]:

Giới thực vật (Planta) Ngành Ngọc Lan (Magnoliophyta) Lớp Ngọc Lan (Magnoliopsida) Phân lớp Hoa Môi (Lamiidae)

Họ Cà Phê (Rubiaceae) Chi Paederia

Copyright @ School of Medicine and Pharmacy, VNU Ở Việt Nam, có hai loài là Paederia lanuginosa (Mơ lông) và Paederia foetida

Phân bố: Cây phân bố ở vùng Ấn Độ - Malaysia Ở Việt Nam, cây mọc ở lùm bụi và cũng được trồng làm cây dược liệu

Công dụng của cây này rất đa dạng, bao gồm việc chữa co thắt túi mật và dạ dày ruột, giảm tê đau do chấn thương, hỗ trợ trẻ em bị cam tích, tiêu hóa kém và suy dinh dưỡng Ngoài ra, nó còn có tác dụng trong điều trị viêm gan, vàng da, viêm ruột, lỵ, viêm khí quản, ho gà và lao phổi Cây cũng giúp giảm đau nhức do phong thấp, tổn thương do đòn ngã, và cải thiện tình trạng giảm bạch cầu do bức xạ Hơn nữa, nó có khả năng giải độc phốt pho hữu cơ trong nông nghiệp và được sử dụng ngoài da để trị viêm da, eczema, lở loét, áp xe, cũng như chữa vết thương do côn trùng độc cắn.

Dây leo có thân quấn, với lá hình trứng mọc đối, nếu mặt dưới lá có màu tím đỏ thì được gọi là mơ tam thể Hoa của cây có màu tím nhạt, nở thành xim ở kẽ lá, và quả có hình dẹt Toàn bộ cây phủ một lớp lông mềm và có mùi khó chịu.

Cây được tìm thấy ở một số quốc gia châu Á như Nhật Bản và Trung Quốc Tại Việt Nam, cây mọc hoang và thường được trồng vào mùa xuân và thu, chủ yếu ở các bờ rào, với mục đích sử dụng làm thuốc hoặc gia vị trong các bữa ăn.

Công dụng: Chữa lỵ trực trùng; kiết lỵ mới phát; tiêu chảy do nóng; sôi, đầy bụng, ăn khó tiêu; tiêu chảy ra máu; ho gà [18]

1.1.3 Đặc điểm thực vật cây mơ lông

Mơ lông còn có tên khác là dây mơ lông, dây mơ tròn, ngưu bì đống, rau mơ, dắm chó, ngũ hương đẳng [8]

Tên khoa học: Paederia lanuginosa

Thuộc họ Cà phê (Rubiaceae)

Dây leo là loại cây sống lâu năm với thân quấn, có màu xanh lục hoặc tím và nhiều lông cứng màu trắng Thân cây có tiết diện tròn ở phần già và hơi dẹt ở phần non Lá cây đơn, nguyên, mọc đối, mang mùi đặc trưng, có phiến lá hình tim với đỉnh nhọn, dài 9-11 cm và rộng 4-6 cm Mặt trên của lá có màu xanh lục, trong khi mặt dưới có màu tím và nhiều lông cứng màu trắng; gân lá hình lông chim nổi rõ ở mặt dưới với 6 cặp gân phụ Cuống lá hình lòng máng nông, dài 2-3 cm, màu xanh, cũng có nhiều lông trắng Ngoài ra, giữa hai cuống lá có hai lá kèm dạng vẩy tam giác hoặc hình tim, dài 0,3-0,5 cm và màu xanh Cụm hoa xim hai ngả rất phân nhánh xuất hiện ở nách lá hoặc ngọn cành, dài từ 10-50 cm, với hoa nhỏ, đều và lưỡng tính.

Bài viết mô tả đặc điểm của một loài thực vật với các chi tiết như sau: Hoa có 5-6 cánh rời, hình tam giác nhỏ, màu tím bên ngoài và trắng xanh bên trong, tạo thành ống tràng dài 0,4-0,5 cm Đài hoa có màu xanh hơi tím, cao 1 mm, với lông trắng Bộ nhị gồm 5-6 nhị rời, đính ở đáy ống tràng, với chỉ nhị màu hồng hoặc tím nhạt dài 0,2-0,25 cm Bao phấn màu trắng, thuôn dài, nứt dọc, trong khi hạt phấn mở, màu trắng, hình bầu dục Bộ nhụy có bầu dưới hình chuụng với 2 ụ, mỗi ụ chứa 1 noãn, và vòi nhụy ngắn màu hồng nhạt, dài 0,4-0,7 cm, có nhiều lông mịn màu trắng Đĩa mật hình khoen bao quanh gốc vòi nhụy.

Cây mọc hoang ở nhiều nước châu Á như Việt Nam, Trung Quốc, Nhật Bản và Philippines Tại Việt Nam, cây không chỉ mọc hoang mà còn được trồng xung quanh để làm thuốc và gia vị Thời điểm trồng cây thường rơi vào mùa xuân và mùa thu, thường ở các bờ rào, bờ ao hoặc những nơi có lùm bụi để cây có thể leo.

Bộ phận dùng: Lá, thân, rễ [4,8]

Copyright @ School of Medicine and Pharmacy, VNU

1.1.4 Tác dụng dược lý cây mơ lông 1.1.4.1 Tác dụng chống tiêu chảy

Nghiên cứu về hoạt tính chống tiết niệu của dịch chiết lá mơ lông trong ethanol đã chỉ ra rằng chiết xuất này có khả năng làm tăng thời gian tiềm ẩn của tiêu chảy ở chuột và giảm đáng kể khả năng vận động của đường tiêu hóa khi được thử nghiệm trên mô hình tiêu chảy do dầu thầu dầu và magie sulphate.

1.1.4.2 Tác dụng bảo vệ gan

Nghiên cứu đã chứng minh dịch chiết lá mơ lông trong methanol có tác dụng cải thiện tổn thương gan trên mô hình chuột Sprague Dawley Qua thí nghiệm, việc sử dụng dịch chiết đã giảm đáng kể nồng độ lipid peroxide gan (LPO) trong chuột nhiễm độc CCl4, khoảng 40% Đồng thời, sự gia tăng các enzyme hoạt động trong huyết thanh như GPT, GOT, ALP khi bị nhiễm độc CCl4 cũng được hạn chế đáng kể Kết quả này cho thấy lá mơ tam thể có thể làm giảm tổn thương tế bào gan bằng cách ức chế các chất oxy hóa.

1.1.4.3 Tác dụng tiêu diệt ký sinh trùng

Chiết xuất methanol từ lá mơ đã cho thấy hoạt tính chống sán lá đáng kể, đặc biệt là đối với Pheretima posthuma và Tubifex tubifex Ở nồng độ 100 mg/ml, chiết xuất này thể hiện hiệu quả tẩy giun sán cao hơn so với piperazine citrate (10 mg/ml) và nước cất được sử dụng làm mẫu chứng.

Nghiên cứu về hoạt tính chống viêm của dịch chiết lá mơ lông trong ethanol đã chỉ ra rằng nó có khả năng ức chế đáng kể sự hình thành mô hạt ở chuột cấy bông, mở ra tiềm năng ứng dụng cho các tác dụng sinh học của cây này.

Nó cũng ức chế sự gia tăng nồng độ orosomucoid trong huyết thanh ở chuột, cho thấy khả năng chống bệnh thấp khớp của dịch chiết [24]

Hoạt tính chống loét của cao chiết từ lá mơ được đánh giá qua hai phương pháp: thắt môn vị và loét do aspirin ở chuột Để đo lường khả năng chống loét, các chỉ số như thể tích axit dạ dày, tổng độ axit và độ axit tự do được kiểm tra Kết quả cho thấy dịch chiết lá mơ có tác dụng chống loét nhờ vào việc ức chế thụ thể H2, từ đó làm giảm bài tiết acid dạ dày.

1.1.4.6 Một số tác dụng dược lý khác

Tác dụng trị tiêu chảy: lá mơ có tác dụng chống tiêu chảy do ức chế sự vận động của hệ tràng vị [24]

ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

Đối tượng nghiên cứu

Mẫu nghiên cứu lá mơ lông được thu mua tại chợ Bưởi, Hà Nội vào tháng 9 năm 2018 Mẫu này đã được giám định thực vật học bởi TS Nghiêm Đức Trọng từ trường Đại học Dược Hà Nội Hiện tại, mẫu đang được lưu giữ tại Khoa Y Dược, Đại học Quốc gia Hà Nội, trong điều kiện nhiệt độ và độ ẩm của phòng thí nghiệm.

Phương tiện nghiên cứu

Các thiết bị, dụng cụ được sử dụng trong quá trình thực nghiệm bao gồm:

 Tủ sấy Memmert (Memmert-Đức)

 Máy cô quay chân không Rotavapor R-220, Rotavapor R-200 (Buchi, Thụy Sĩ)

 Máy siêu âm Power sonic 405 (Powersonic - Hàn Quốc)

 Cân kĩ thuật Precisa BJ 610C, cân phân tích Precisa 262SMA-FR (Precisa-Thụy Sĩ)

 Hệ thống sắc ký lỏng hiệu năng cao Agilent 1260 Infinity (Agilent Technologies, Mỹ)

 Bình chạy sắc ký lớp mỏng

 Các dụng cụ thường dùng trong quá trình thực nghiệm khác như: bình nón, ống đong, ống nghiệm, pipet, ống nhỏ giọt, cốc có mỏ…

 Dung môi dùng để chiết xuất: Etanol 80%

 Dung môi để chạy sắc ký lớp mỏng: Methanol, nước cất 2 lần

 Dung môi dùng để chạy HPLC: Acetolnitril, acid sulfuric 0,05%

 Dung môi để định lượng iridoid: Acid acetic, Đồng sunphat 0,2%, acid hidrocloric 1%

Chemical solvents and reagents used for qualitative analysis through chemical reactions include methanol, 0.05% CuSO4, 1% HCl, acetic acid, FeCl3, NaOH, H2SO4, acetic anhydride, chloroform, ammonia solution, Mayer's reagent, Bouchardat's reagent, and magnesium powder.

Phương pháp nghiên cứu

Mẫu lá mơ được sấy khô ở nhiệt độ 80℃ và vò nát, sau đó chiết 3 lần bằng cồn 80 độ, mỗi lần kéo dài 24 giờ Dịch chiết thu được được lọc qua phễu lọc Bucher và sau đó được cô quay chân không ở nhiệt độ 75℃ để lấy cao.

Lá mơ lông tươi (2 kg)

Cô quay chân không Ethanol 80 độ, 3 lần

2.2.2 Phương pháp định tính mẫu cao lá mơ bằng các phản ứng hóa học

Phương pháp định tính các nhóm chất hữu cơ phổ biến được thực hiện dựa trên các phản ứng được ghi chép trong sách Dược liệu và Thực tập dược liệu, do nhà xuất bản Y học phát hành.

2.2.2.1 Phương pháp định tính iridoid

 Phản ứng với thuốc thử Trim-Hill

Để phát hiện iridoid, người ta thường sử dụng thuốc thử Trim-Hill, bao gồm 10 ml acid acetic, 1 ml CuSO4 0,2% và 0,5 ml HCl 1% Quy trình thực hiện là cho 1-2 ml dịch chiết ethanol vào ống nghiệm, sau đó thêm 10 ml thuốc thử Sau vài phút, ống nghiệm sẽ xuất hiện màu xanh dương Tuy nhiên, cần lưu ý rằng một số iridoid có thể âm tính với thuốc thử này.

2.2.2.2 Phương pháp định tính flavonoid

Phản ứng Cyanidin là một phương pháp khử quan trọng để xác định sự hiện diện của các dẫn chất flavonoid Trong thí nghiệm, cho 2-3 ml dịch chiết ethanol vào ống nghiệm, thêm một ít bột magnesi kim loại và nhỏ 3-5 giọt HCl đậm đặc Sau 1-2 phút, màu sắc sẽ chuyển sang đỏ cam, đỏ thẫm hoặc đỏ tươi, tùy thuộc vào loại flavonoid như flavon, flavonol, flavanonol và flavanon Phản ứng này dựa vào khả năng chống oxi hóa của flavonoid, nhưng màu sắc có thể thay đổi theo loại và vị trí của nhóm thế, ví dụ như các dẫn chất methoxy flavon thường cho kết quả âm tính.

Cho dịch chiết vào ống nghiệm và thêm vài giọt dung dịch sắt (III) clorid 5%, sau đó lắc đều sẽ thấy xuất hiện màu sắc khác nhau Màu sắc này phụ thuộc vào nhóm flavonoid và số lượng nhóm OH trong phân tử, có thể là màu lục, xanh hoặc nâu Hầu hết các phân tử flavonoid đều chứa nhóm OH.

OH phenol, do đó nó có khả năng tạo phức màu với Fe 3+ [4,25]

Cho vào ống nghiệm nhỏ 1 ml dịch chiết Thêm vài giọt dung dịch NaOH 5%

Sẽ thấy xuất hiện kết tủa màu vàng Thêm 1 ml HCl, tủa sẽ tan và màu vàng của dung dịch sẽ tăng lên [25]

2.2.2.3 Phương pháp định tính saponin

Saponin là một hợp chất nổi bật với tính chất tạo bọt, nhờ vào cấu trúc phân tử có tính chất hoạt động bề mặt Phân tử saponin có phần aglycon thân dầu và phần đường thân nước, giúp giảm sức căng bề mặt và tạo bọt hiệu quả Khả năng tạo bọt của saponin phụ thuộc vào cấu trúc của nó, bao gồm phần genin, số lượng và chiều dài mạch đường, dẫn đến hiện tượng tạo bọt mạnh khi lắc với nước.

Dược liệu được chiết xuất bằng cồn 70%, sau đó dịch chiết được bốc hơi trong dung môi và hòa tan lại trong một ít nước Sau khi chuẩn bị dung dịch, cho vào ống nghiệm và thêm nước cất Cuối cùng, dùng ngón tay bịt miệng ống nghiệm và lắc mạnh để hòa trộn đều.

Dọc ống nghiệm trong 1 phút (0 lần lắc) Quan sát lớp bọt trong 15 phút, nếu ống nghiệm còn bọt trên bề mặt chứng tỏ có saponin [25]

2.2.2.4 Phương pháp định tính tanin

Phản ứng Braemer’s là một phản ứng kết tủa quan trọng giữa kim loại và tanin, cho ra tủa với các muối kim loại nặng như chì, thủy ngân, kẽm, sắt và đồng Đặc biệt, với muối sắt, các loại tanin khác nhau sẽ tạo ra màu xanh lá hoặc xanh đen với độ đậm khác nhau Màu sắc của tủa này có thể được sử dụng để xác định loại tanin trong vi phẫu.

Cách tiến hành: Cân 100 mg cao chiết, thêm 10ml ethanol, hòa tan Lấy 2ml dịch thử cho vào ống nghiệm, thêm 2 giọt dung dịch FeCl 3 5%

2.2.2.5 Phương pháp định tính steroid

Phản ứng Libermann-Burchardt được sử dụng để phân biệt giữa saponin triterpenoid và saponin steroid Để thực hiện, hòa tan vài miligram sapogenin trong 1 ml anhydride acetic, sau đó thêm 1 giọt H2SO4 đậm đặc Kết quả cho thấy nếu là dẫn chất steroid sẽ có màu lơ – xanh lá, trong khi dẫn chất triterpenoid sẽ xuất hiện màu hồng đến tía.

Cách tiến hành: Lấy 1 ml dịch chiết, thêm 1 ml chloroform, thêm 2-3 ml anhydride acetic và 1-2 giọt acid sunfuric đặc

2.2.2.6 Phương pháp định tính tinh dầu

Để tiến hành thử nghiệm, lấy 2 ml dịch thử và thêm 0,1 ml dung dịch NaOH 5% cùng một lượng nhỏ dung dịch HCl 5% Sự xuất hiện của kết tủa trắng cho thấy trong thành phần dược liệu có chứa tinh dầu.

2.2.2.7 Phương pháp định tính terpenoid

Cân 100 mg cao chiết, thêm 10 ml ethanol, lấy 2ml dịch thử cho vào ống nghiệm,hòa tan thêm 1 ml chloroform, 2- 3ml của acetic anhydride, 1-2 giọt axit sulfuric đậm đặc [25]

Cân 100 mg cao chiết lá mơ, thêm 10ml etanol, hòa tan Lấy 2 ml dịch thử cho vào ống nghiệm Thêm 2 ml cloroform và 3 ml sulfuric axit H 2 SO 4 [5]

2.2.2.8 Phương pháp định tính alkaloid Định tính alkaloid bằng các phản ứng tủa với một số thuốc thử Các alkaloid có khả năng tạo tủa ít tan trong nước với một số thuốc thử chung của alkaloid Tủa này sinh ra hầu hết một cation lớn là alkaloid với một anion lớn thường là anion phức hợp của thuốc thử [4,25]

Thuốc thử Mayer (K 2 HgI 4 - kalitetraodomercurat): cho tủa trắng hay màu vàng nhạt [25]

Thuốc thử Bouchardat (Iodo - Iodid): cho tủa nâu [25]

2.2.2.9 Phương pháp định tính anthraquinon

Các hợp chất anthraquinone khi phản ứng với kiềm như amoniac, natrihydroxyd hoặc kaki hydroxyd sẽ tạo ra các dẫn chất phenolat có màu đỏ sim tan trong nước, từ đó có thể định tính anthraquinone qua phản ứng Borntrager Để định tính dạng tự do, lấy 1 ml dịch chiết, thêm 1 ml dung dịch amoniac 10% và 2 ml chloroform, lắc nhẹ, lớp nước sẽ xuất hiện màu đỏ sim Nếu lớp chloroform có màu vàng, điều này cho thấy dược liệu chứa acid chrysophanic Khi thêm từng giọt dung dịch NaOH 10%, lớp dung môi hữu cơ sẽ chuyển sang màu vàng, trong khi lớp nước trở nên đỏ thẫm hơn Đối với việc định tính anthraquinon toàn phần (bao gồm cả dạng glycoside và dạng tự do), lấy 1 ml dịch chiết, thêm 1 ml dung dịch amoniac, lắc nhẹ, lớp nước sẽ có màu đỏ sim Nếu lớp chloroform xuất hiện màu vàng, tiếp tục nhỏ từng giọt dung dịch NH3 10%, lắc nhẹ, lớp chloroform sẽ mất màu và lớp nước sẽ có màu đỏ đậm hơn.

2.2.2.10 Phương pháp định tính đường khử

Phương pháp xác định đường khử dựa trên khả năng khử đồng (II) oxid thành đồng (I) oxid trong môi trường kiềm, với các loại đường như glucose, fructose, và maltose Để thực hiện quá trình này, chúng ta sử dụng thuốc thử Fehling 1 chứa CuSO4 và Fehling 2, là hỗn dịch của NaOH với muối tartrate của Na và K, có công thức NaOOC-CHOH-CHOH-COOK.

2.2.3 Phương pháp định tính bằng sắc ký lớp mỏng Định tính các nhóm chất bằng phương pháp TLC: Tiến hành thăm dò trên các hệ dung môi để chọn ra các hệ cho kết quả tách tốt nhất [11]

Mẫu nghiên cứu: Lá mơ lông được thu mua tại chợ Bưởi Hà Nội vào tháng 9 năm 2018

Dịch chấm sắc ký được thực hiện bằng cách chuẩn bị dịch chiết toàn phần từ dược liệu, sử dụng EtOH để ngâm và cô quay chân không nhằm thu được dịch chiết tổng Sau đó, dịch chiết tổng được hòa tan vào MeOH và lọc để thu được dịch chấm sắc ký Các điều kiện sắc ký cần được xác định rõ ràng để đảm bảo kết quả chính xác.

- Pha tĩnh: Bản mỏng TLC Silicagel pha đảo GF254 (Merck), kích thước 3×10 cm đã hoạt hóa

- Pha động: Khảo sát các hệ dung môi sau:

- Các vết chấm dài 0,8 cm, cách cạnh bên và cạnh dưới 1cm, chấm 3 vết cách nhau khoảng 1 cm

KẾT QUẢ THỰC NGHIỆM VÀ BÀN LUẬN

Chiết xuất

- Khối lượng dược liệu tươi: 2000 g

- Khối lượng dược liệu khô: 253,18 g

- Giá trị hàm ẩm của dược liệu khô: 10,81%

- Khối lượng cao thu được: 29,22 g

- Hiệu suất chiết được tính theo theo công thức:

H= 𝑎∗100∗100 𝑏∗(100−𝑥) Trong đó: a: Khối lượng cao b: Khối lượng dược liệu khô x: Giá trị hàm ẩm (10,81%)

Phân tích định tính các nhóm chất hữu cơ có trong cao lá mơ

Sử dụng các phản ứng thông thường để định tính các nhóm chất hữu cơ được trình bày trong các tài liệu [2,4], được kết quả trình bày ở bảng 3.1

Bảng 3.1 Kết quả định tính các nhóm chất hữu cơ thường gặp trong mẫu cao lá mơ bằng phản ứng hóa học

STT Nhóm chất Phản ứng Kết quả Nhận xét

1 Iridoid Thuốc thử Trim -Hill ++ Có

3 Saponin Phản ứng tạo bọt - Không

4 Tanin Phản ứng với FeCl 3 + Có

5 Steroid Phản ứng Libermann-Burchardt - Không

6 Tinh dầu Phản ứng với kiềm + Có

7 Đường khử Phản ứng với thuốc thử Fehling - Không

8 Terpennoid Phản ứng Salkowski ++ Có

9 Alkaloid Phản ứng với thuốc thử Mayer + Có

10 Anthraquinon Phản ứng với NaOH + Có

Ghi chú: (-): phản ứng âm tính, (+): phản ứng dương tính, (++): phản ứng dương tính rõ

Dựa vào phương pháp định tính qua các phản ứng hóa học, lá mơ lông được xác định chứa các nhóm chất như Iridoid, tanin, tinh dầu, terpennoid, alkaloid và anthraquinon Tuy nhiên, không phát hiện sự có mặt của các nhóm chất flavonoid, saponin, steroid và đường khử.

3.2.2 Kết quả phân tích định tính iridoid bằng sắc ký lớp mỏng

Hình 3.1 Sắc ký đồ pha đảo của mẫu cao lá mơ với hệ dung môi MeOH-H 2 O ở các tỷ lệ lần lượt là 1:2 (A), 2:1 (B), 1:1 (C)

Nhận xét: Dựa vào hình ảnh sắc ký đồ ở trên, ta chọn được hệ dung môi MeOH-H 2 O (1:2) cho kết quả tách các chất tốt nhất

Hình 3.2 Sắc ký đồ pha đảo của cao tổng với hệ dung môi MeOH-H 2 O (1:2)

Nhận xét: Sau khi phun thuốc thử H 2 SO 4 rồi hơ nóng bản mỏng, thấy xuất hiện màu xanh dương và màu nâu, đặc trưng cho thành phần iridoid [4]

3.2.3 Kết quả phân tích định tính bằng sắc ký lỏng hiệu năng cao HPLC

Ta có hình ảnh sắc ký đồ HPLC của mẫu cao

Hình 3.3 Sắc ký đồ HPLC của mẫu cao lá mơ

Hình ảnh sắc ký đồ cho thấy tín hiệu rõ nét với các chất trong mẫu cao được tách riêng rẽ, điều này chứng tỏ tính đặc hiệu của phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao.

Ta có một số hình ảnh về phổ UV của từng chất:

Hình 3.4 Phổ UV của chất có thời gian lưu 6,099 phút

Chất này hấp thụ tia UV cực đại ở bước sóng khoảng 325 nm, có thể sơ bộ xác định chất này thuộc nhóm chất flavonoid [4,13]

Chất này hấp thụ tia tử ngoại cực đại ở bước sóng khoảng 325 nm, có thể sơ bộ kết luận chất này thuộc nhóm chất flavonoid [4,13]

Chất này hấp thụ tia UV cực đại ở bước sóng khoảng 325 nm, có thể sơ bộ kết luận chất này thuộc nhóm chất flavonoid [4,13]

Chất này hấp thụ tia UV cực đại ở bước sóng khoảng 235 nm, có thể sơ bộ kết luận chất này thuộc nhóm chất iridoid [4,19]

Chất này hấp thụ tia UV cực đại ở bước sóng khoảng 260 nm, có thể sơ bộ xác định chất này thuộc nhóm chất anthraquinon [4]

Hình 3.9 Phổ UV của chất có thơi gian lưu 16,532 phút

Chất này hấp thụ tia UV cực đại ở bước sóng khoảng 265 nm, có thể sơ bộ xác định chất này thuộc nhóm chất anthraquinon [4]

Chất này hấp thụ tia UV cực đại ở bước sóng khoảng 235 nm, có thể sơ bộ xác định chất này thuộc nhóm chất iridoid [4,19]

Chất này hấp thụ tia UV cực đại ở bước sóng khoảng 330 nm, có thể sơ bộ xác định chất này thuộc nhóm chất flavonoid [4,13]

Dựa trên phổ UV của các chất tại từng thời gian lưu, có thể sơ bộ xác định rằng mẫu cao chứa các hợp chất thuộc nhóm anthraquinon, flavonoid và iridoid.

Định lượng iridoid toàn phần có trong mẫu cao lá mơ

Ta có kết quả dựng đường chuẩn của mẫu iridoid như bảng 3.2 và hình 3.11:

Bảng 3.2 Nồng độ và giá trị độ hấp thụ quang tương ứng của mẫu chuẩn iridoid

Hình 3.12 Đồ thi miêu tả tương quan tuyến tính giữa độ hấp thụ quang và nồng độ của mẫu chuẩn iridoid

Phương trình hồi quy tuyến tính cho iridoid toàn phần liên quan đến độ hấp thụ quang tại bước sóng 609 nm và nồng độ dung dịch được xác định là: y = 0,7631x – 0,0045 Hệ số này cho thấy mối quan hệ giữa nồng độ và độ hấp thụ quang của iridoid.

Dựa vào mật độ quang đo được của mẫu thử và dữ liệu đường chuẩn, nồng độ iridoid trong mẫu thử đã được tính toán, cho thấy hàm lượng iridoid trong mẫu cao đặc, như trình bày trong Bảng 3.3 Kết quả phân tích cho thấy phương trình hồi quy y = 0.7631x - 0.0045 với R² = 0.9995, cho thấy độ chính xác cao trong việc xác định nồng độ.

0 0.2 0.4 0.6 0.8 1 1.2 Độ hấ p thụ qua ng

Nồng độ (mg/ml) Đồ thị đường chuẩn của iridoid

Bảng 3.3 Hàm lượng iridoid trong mẫu cao tính được dựa vào độ hấp thụ quang của mẫu thử

Nồng độ mẫu thử (mg/ml)

Nồng độ iridoid trong mẫu thử (mg/ml)

Hàm lượng iridoid trong mẫu cao (%)

Hàm lượng iridoid trong mẫu cao được tính theo công thức:

Trong đó: a: Nồng độ iridoid trong mẫu thử tính được dựa vào phương trình đường chuẩn b: Nồng độ dung dịch mẫu thử

X: Hàm lượng iridoid trong mẫu cao (%)

Nhận xét: Như vậy hàm lượng iridoid trong mẫu cao lá mơ được xác định khoảng 2,5%.

Bàn luận

Mẫu lá mơ lông được thu mua tại chợ Bưởi, Hà Nội, đã được sấy khô và chiết xuất bằng phương pháp chiết lạnh với cồn 80 độ trong 3 lần, mỗi lần kéo dài 1 ngày Mặc dù phương pháp này đơn giản và tiết kiệm, hiệu suất chiết xuất vẫn chưa cao Từ 2000 g mẫu tươi, sau khi sấy khô, thu được 253,18 g mẫu khô và 29,22 g cao đặc, tương ứng với tỉ lệ 11,54% so với mẫu khô và hiệu suất chiết đạt 12,94%.

3.4.2 Về định tính mẫu cao lá mơ

Khóa luận đã thực hiện định tính mẫu cao lá mơ bằng phương pháp hóa học, theo hướng dẫn trong tài liệu Dược liệu học và Thực tập dược liệu Phương pháp này nổi bật với tính đơn giản, dễ thực hiện và cho kết quả nhanh chóng.

Chất lượng hóa chất, độ nhạy của phản ứng và thao tác thực nghiệm có thể ảnh hưởng đến kết quả Kết quả định tính cho thấy sự hiện diện của các nhóm chất iridoid, anthraquinon, alkaloid, terpennoid và tinh dầu trong cây mơ tam thể, phù hợp với tài liệu trong và ngoài nước Nhóm nghiên cứu đã áp dụng kỹ thuật sắc ký lớp mỏng để xác định nhóm chất iridoid trong mẫu cao.

Nhóm nghiên cứu đã sử dụng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC) để định tính mẫu cao, phát hiện không chỉ các chất thuộc nhóm iridoid và anthraquinon mà còn cả flavonoid Đây là một phát hiện quan trọng, tuy nhiên cần áp dụng thêm các kỹ thuật khác để xác minh tính chính xác của kết quả.

So với các nghiên cứu trước đây của PGS.TS Lê Ngọc Quang và cộng sự về cây mơ lông, đề tài khóa luận này đã áp dụng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao để định tính mẫu cao, tạo ra một điểm mới Tuy nhiên, để nâng cao độ chính xác trong việc định tính và định lượng các chất cụ thể trong mẫu cao, cần sử dụng thêm các chất chuẩn trong phương pháp này.

3.4.3 Về định lượng iridoid toàn phần

Nhóm nghiên cứu đã áp dụng phương pháp đường chuẩn để định lượng iridoid toàn phần trong mẫu cao lá mơ, đánh dấu một bước tiến mới trong nghiên cứu hóa học cây mơ lông tại Việt Nam Trước đây, chưa có nghiên cứu nào thực hiện định lượng các thành phần hóa học của cây này Mặc dù phương pháp thực hiện nhanh và đơn giản, kết quả định lượng vẫn phụ thuộc vào thao tác thực nghiệm và độ chính xác của máy đo độ hấp thụ quang Hàm lượng iridoid trong mẫu cao được xác định khoảng 2,5% Để có kết quả chính xác hơn về hàm lượng của nhóm chất iridoid, cần tách riêng và sử dụng chất chuẩn cho từng thành phần trong nhóm này.

KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Kết luận

Qua thời gian nghiên cứu đề tài, nhóm nghiên cứu đã thu được một số kết quả phù hợp với mục đích nghiên cứu ban đầu như sau:

Mẫu lá mơ lông đã được thu hoạch và chiết xuất bằng phương pháp chiết lạnh, từ 2000 g mẫu tươi thu được 253,18 g mẫu khô và 22,29 g cao đặc Lượng cao đặc chiếm 11,54% so với mẫu khô, với hiệu suất chiết đạt 12,94%.

Đã tiến hành định tính sơ bộ các nhóm chất có trong cây mơ lông bằng phản ứng hóa học và kỹ thuật sắc ký lớp mỏng Kết quả cho thấy sự hiện diện của các nhóm chất iridoid, anthraquinon, alkaloid, terpennoid và tinh dầu, phù hợp với tài liệu tham khảo về cây mơ tam thể Đặc biệt, kỹ thuật sắc ký lỏng hiệu năng cao còn phát hiện thêm nhóm chất flavonoid.

Hàm lượng iridoid toàn phần trong cây mơ lông đã được định lượng bằng phương pháp đường chuẩn, cho kết quả là khoảng 2,5% trong mẫu cao.

Mặc dù nghiên cứu đã được thực hiện, nhưng do thời gian hạn chế, phương pháp nghiên cứu còn đơn giản và thao tác thực nghiệm chưa hoàn toàn chính xác, nên kết quả vẫn tồn tại một số hạn chế nhất định.

 Do sử dụng phương pháp chiết xuất đơn giản nên hiệu suất chiết chưa cao

 Các phép định tính mới chỉ phát hiện được các nhóm chất chung chứ chưa đưa ra được các chất cụ thể

Hàm lượng iridoid toàn phần trong mẫu cao đã được phát hiện và định lượng, tuy nhiên, việc tách và định lượng các chất cụ thể trong nhóm iridoid vẫn chưa được thực hiện.

Nghiên cứu đầu tiên về thành phần hóa học của cây mơ tam thể đã cho ra những kết quả đáng chú ý, tuy nhiên vẫn còn nhiều hạn chế cần khắc phục Để nâng cao chất lượng nghiên cứu, đề tài cần tiếp tục thực hiện các bước cải thiện và mở rộng.

 Tiếp tục nghiên cứu tối ưu quy trình chiết hoặc sử dụng phương pháp chiết khác nhằm nâng cao hiệu suất chiết

Tiến hành chiết xuất phân đoạn mẫu cao toàn phần bằng các dung môi như ethyl acetat, butanol và n-hexan nhằm nghiên cứu chi tiết các thành phần hóa học của mẫu.

 Sử dụng kỹ thuật sắc ký cột, sắc ký khối phổ để tiến hành phân lập ra các hợp chất tinh khiết

 Sử dụng kỹ thuật sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC) để định lượng một số chất cụ thể thuộc nhóm chất iridoid có mẫu lá mơ

 Xây dựng một số mô hình sinh học để đánh giá thêm về tác dụng dược lý của lá mơ lông

1 Nguyễn Tiến Bân chủ biên (2003), Danh mục các loài thực vật Việt Nam, Tập

II, Nhà xuất bản Nông nghiệp, Hà Nội, tr 1063-1093

2 Bộ môn Dược liệu (2010), Thực tập Dược liệu, Trường Đại học Dược Hà Nội

3 Bộ Y Tế (2009), Dược điển Việt Nam IV, Nhà xuất bản Hà Nội

4 Bộ Y tế (2011), Dược liệu học, tập 1 và 2, Nhà xuất bản Y học, Hà Nội

5 Bộ Y tế, Viện Kiểm nghiệm thuốc Trung ương (2007), Đảm bảo chất lượng thuốc và một số phương pháp kiểm nghiệm thuốc, tr 107 – 113, tr 216-250

6 Bộ Y tế, Vụ khoa học và đào tạo (2005), Kiểm nghiệm dược phẩm, Nhà xuất bản Y học, tr 75-76

7 Nguyễn Văn Đàn, Nguyễn Viết Tựu (1985), Phương pháp nghiên cứu hoá học cây thuốc, Nhà xuất bản Y học, tr 8-99, 162-196, 234-242

8 Trần Ngọc Ninh (1987), “Góp phần vào việc thống kê những loài thực vật có ích thuộc họ cà phê (Rubiaceae Juss) ở Việt Nam”, Tạp chí Sinh học, 9(2), 40-

9 Nguyễn Kim Phi Phụng (2007), Phương pháp cô lập chất hữu cơ, Nhà xuất bản ĐHQG TP HCM, tr 151-451

10 Trần Nhật Phương (2008), Học phần kỹ thuật Công Nghệ Sinh Học Proteomic-

11 Trường Đại học Dược Hà Nội, Bộ môn hoá phân tích (2006), Hoá phân tích II, tr 17, 99-146, tr 173-222

12 Viện Dược liệu (2006), Nghiên cứu thuốc từ thảo dược, Nhà xuất bản khoa học và kỹ thuật, tr 199 – 222; 493 – 685

13 Ann E Stapleton, Virginia Walbot (2008), “Flavonoids Can Protect Maize DNA from the Induction of Ultraviolet Radiation Damage”, Plant Physiology,

14 Brison Guiide, Ch Erdenechimeg, B Dejidmaa (2017), “Total phenolic, flavonoid, alkaloid and iridoid content and preventive effect of Lider-7-tang on lipopolysaccsaride-induced acute lung injury in rats”, Brazilian Journal of Medical and Biological Research, 50, 591-595.

Tiêu đề	Phân Tích Thành Phần Hóa Học Của Lá Mơ Lông Việt Nam (Paederia Lanuginosa)
Tác giả	Đàm Việt Hùng
Người hướng dẫn	TS. Lê Thị Thu Hường, TS. Nguyễn Hữu Tùng
Trường học	Đại học Quốc gia Hà Nội
Chuyên ngành	Dược học
Thể loại	khóa luận tốt nghiệp
Năm xuất bản	2019
Thành phố	Hà Nội

Định dạng
Số trang	40
Dung lượng	1,32 MB